임앙병리검마과악외 711
:
깨132뀐 머13보，287-291, 2000.
Genta 염색을 이용한 위점막 장형화생 부위의
Helicobacter pylori~ 검 출
충북대학교병원 병리과 · 임상병라과 대전보건대학 임상병리과** 김천대학 임상병리과***
이광주 · 황석연 이명환** 김성인***
Detection of Helicobacter pylori to Areas of Gastric Intestinal Metaplasia by the Genta stain
Lee, Kwang Ju., Hwang, Seock Yeon*., Lee, Myung Hwan**., Kim., S lUl g, In***
De [X1 rtment cf Pathology and CI띠iml Pathology ~ α따ngb띠{Nαt'l 다1iv. Hospital,
α1eon밍U， Korea
De [X1 rtment cf αiniml Pathology , Taζ;on Health Sciences Co llege , Taξ;on， Korea **
De [X1 rtment cf αiniml Pathology , Kimcheon Health Sciences Co llege , Kimcheon , Korea***
Inf ection with Helicobacter pylori is the most important cause of chronic active gastritis.
On e mean of evolution of chronic active gastritis is the development of atrophic gastritis , a condition almost universally associated with extensive intestinal metaplasia. Th e study was conducted on 69 gastric biopsy specimens with intestinal metaplasia. S1ide from each specimens were stained using the Genta stain to identify the detection of bacteria and types of intestinal metaplasia. In 56 (81 %) of 96 patients ,
incompletεintestinal metaplasia was found. In 9 (16 % ) of 56 patients with incomplete intestinal metaplasia.But in all of the intestinal metaplasia H. pylori was not detection in the area of intestinal metaplasia. Th e common subtype of intestinal metaplasia was incomplete metaplasia. Al though in small case , H. pylori was detection only to the area of the incomplete type of intestinal metaplasia.
Key Words: Incomplete intestinal metaplasia , Helicobacter pylori , Genta stain
1 . 서
를‘- 된 이후 만성 위염 및 소화성 궤양， 위암 등과 H. pylori와의 관련성을 규명하기 위한 연구가
Helicobacter pylori (H pylo띠는 1983년 뼈rshall 지금도 계속 진행중이며， 현재로서는 H. pylori
등 (Marshall et a l., 1983) 에 의하여 분리 동정 가 소화기 질환과의 연관성에 대하여 원인중의
하나로 지적되고 있지만 아직까지 그 기전은 거하고 함수 한 다음에 1 % aqueous uranyl niσate 분명하지 않다. 그러나 최근에는 H pylo매가 만 에 3분간 방치하고 수세한 후 절편을 10%
성소화기 질환의 원인 중 하나로 규명되어졌으 silver nitrate에 넣고 microwave oven에서 끓기 며， 이러한 기전은 만성 활동성 위축성 위염이 전까지 열을 가한 다음 증류수로 세 번 수세하 장형화생으로 발전하게 되고 이들 불완전한 장 였다. 이후 절편을 95% 와 100% 의 알코올에서 형화생이 위의 이형성을 거쳐 위암으로 발전하 탈수한 후 2.5% 맹m mastic에 5분간 방치한 다 는 것으로 알려져 있다 (Correa, 1988). 한편 H 음 공기 중에서 1 분간 말린 후에 다시 증류수로 pylori는 장형 화생 부위 에 서 잘 관찰되 지 않는 두 번 수세 처 리 한 후 reducing solution (10 ml
다는 보고가 있었으나 (Craanen et al" 1994), of 2.5% gum mastic, 25 ml of 2% hydroquinone, 그러나 최근 한국사람에 있어서 Genta 염색에 5 ml of absolute alcoh이， 2.5 ml of 0.04% silver 의하여 불완전 장형화생 지역에서 많은 수의 nitrate) 에 담구어 45
0C 수조에서 10분에서 15 분 H. pylori를 관찰하였다는 보고 (Genta et al. , 간 방치하였다. 이때 H. pylori가 검거나 암갈
1996, Huang et al. , 1998) 와 함께 혈청학적 양 색이고 주변이 노란색으로 변할 때 절편을
상과 위암과의 밀접한 관계가 있다는 주장이 reducing solution에서 꺼내어 물로 닦은 다음 보고되고 있다 (Correa, 1992). 이에 저자 등은 절편을 alcian blue pH 2.5 에서 10분간 염색한 내시경을 통하여 장형화생이 의심되는 환자에 후 흐르는 수돗물로 닦고 Harris hematoxylin에
게서 Genta 염색을 통하여 H pylori의 감염이 5분간 염색한 다음에 다시 흐르는 물에 수세를
위염과 위궤양 그리고 위암으로 전이되는 기전 한 다음 암모니아수 2.5% 에서 청색이 나타날 에 대한 예비 연구로 완전 장형화생 부위와 불 때까지 닦은 후 다시 흐르는 수돗물로 닦는다.
완전 장형화생부위에서 H pylori의 검출빈도를 마지막으로 절편을 eosin에 5 분간 염색하고 다 알아보고자 하였다.
II. 재료 및 발법
1. 대 상
1998 년 2월부터 1998년 10월까지 충북대학 교병원에 내원 환자들 중 내시경검사시 육안적 으로 장형화생이 의심되는 82 명의 환자 중에서 조직검사 상 장형화생으로 진단된 69명의 환자 를 대상으로 하였다.
2. 실험방법
1) Genta 염색 및 조직표본제작
위 내시경 생검 조직을 10% 완충 포르말린 용액에서 고정한 뒤에 파라핀 포매한 조직을 4 따l 두께로 박절한 다음 절편에서 파라핀을 제
시 수돗물로 닦은 뒤 에 95% , 100% 알코올에 차례로 담구어 탈수한 다음에 자rlene으로 세 번 닦은 후에 봉입하여 겸경하였다.
2) 조직병리학적 방법
Genta 염색을 시행 한 후 조직학적으로 장형
화생을 2가지로 즉 완전 장형화생과 불완전 장
형화생으로 분류하였다. 완전 장형화생은 상피
가 쇄자연(brush border)을 뚜렷하게 형성하는
흡수세포로 이루어져 있고 흡수세포사이에 배
상세포와 와 (fovea) 의 기저부에서 Paneth 세포
가 보이는 것을 완전 장형세포라고 하고， 불완
전 장형화생의 상피세포는 세포질에 mucin을
갖고 있으며， 이러한 상피세포 사이로 배세포가
존재하며， 흡수세포와 Paneth 세포는 없거나 가
끔씩 나타나기도 한다고 보고하였다 (Dixon et
al. , 1996).
pylori가 위암의 직접적인 원인이라고 발표하였 지만 반대로 H. pylo디가 위암의 직접적인 원인 조직학적으로 장형화생이 확인된 환자는 69 이 아니라는 의견 또한 꾸준히 제시되고 있다 명이었으며， 이들의 성별분포는 남자가 56명 (Crespi and Citarda , 1996). 위축성 위염이나 장 여자가 13 명이었다. 69명의 대상 환자 중 불완 형화생 (intestinal metaplasia)은 흔히 위암의 전 전 장형화생이 56명이고 완전 장형화생은 13 명 구 병변으로 알려지고 있으나 (Correa , 1988) , 이었다. Genta 염색 시 69명의 대상환자 중 장 반대로 H. pylori에 감염되더라도 대부분의 사 형화생 부위 내에서 H. pylori의 검출의 빈도는 람에게서는 질병이 발생하지 않으나 일부에서 불완전 장형화생이 16% (9/ 56) 이었고 (Fig. 1. 는 십이지장궤양， 위궤양 또는 위암에 이완되 A) 완전 장형화생에서는 H. pylori를 검출할 수 는 현상을 설명하기 위하여 H. pylori의 병독성 가 없었다 (Fig. 1. B). 에 의한 차이일 것이라는 의견도 제시되고 있
m. 결 과
N. 고 를 화
위암은 전 세계적으로 호발하는 악성 종양 중의 하나이며， 최근 들어 위암의 발현율과 진 단율이 증가하고 있다. 위암의 발생에는 여러 단계에서 H. pylori , 고 염식， 담즙의 역류， N-
Nitroso compound 같은 여러 원인이 작용할 것
으로 생각되며， 대부분의 위암환자에서 암 형 성의 단계로 만성 위염을 거쳐 위의 위축， 장 형화생， 위의 이형성을 거쳐 위암으로 발생한 다고 알려져 있다 (Corea , 1992). IARC (In terna- tional Agency for Research on Cancer) 에 서 는 H.
으나 아직까지 일치하는 결과는 없다고 보고하 였다 (W ebb et a l., 196θ. H pylori는 전정부 또 는 전정부와 체부를 침범하는 만성 활동성 위 염의 95% , 휴식기 위염의 65% 에서 H pylori가 관찰되며 ， H pylori는 비침습성 세균으로 위점 막에 머물러 있으면서 In terleukin-8 , In terleukin-1 등을 분비하고 다형핵 백혈구와 단핵구의 수명 을 연장시키며， 이들 세포들의 다른 전 염증성 효현제 (proinflammatory agonist) 에 대 한 반응을 증강시켜 염증반응이 증폭되어 위염을 유발하 는 것 으로 알려 져 있다 (Marshall et al. , 1983).
또한 염증성 위점막의 상피세포 재생을 촉진시 켜 위 점막의 상피세포의 돌연변이의 원인이
Fig. 1. (A)
πleGenta stain cannot reveal any other H. pylori bacilli on the intestinal metaplastic
epithelium. (B) Genta stain reveals many silver stained H pylori on the intestinal metaplastic
epithelium
veηwell.
되며， 또한 위암에서 흔히 발견되는 p53 돌연 확인하였다는 점과 H. pylori가 위 점막에 떠다 변이 유전자를 만드는 것으로 알려진 nitric 니는 것뿐만 아니라 와 (fovea) 의 갚숙한 곳과 oxide에 영향을 주어 위암 형성에 한 역할을 배상세포 내부 및 점액질 내에서도 관찰되었으 하는 것으로 생각되어져 있다 (Cr뻐len et a l., 며， 특히 불완전한 장형화생에서만 H. pylori를
1998). H. pylori는 장형화생 주위의 염증 병변 관찰하였다는 것이며， 불완전 장형화생은 쇄자
에서는 많은 수가 관찰되나 장형화생 부위나 연이 없으며， 다양한 종류의 sulfomucin 생성세 암 발생의 부위에서는 거의 발견되지 않았다. 포를 포함하고 있어 H. pylori가 살기에 적합한 이러한 이유로 장형화생 부위에서는 H. pylori 환경을 만들고 있는 반면， 완전 장형화생은 성 가 살기에 부적합한 환경을 만들며， 또한 위 숙한 배상세포와 잘 구분된 쇄자연을 특정으로 점액질의 흐름에 의해서 씻겨서 나간다는 보고 하며， sialomucin을 분비하므로 H. pylori가 부착 가 있었다 (Genta , 1995). 이러한 H. pylori의 검 하지 못하도록 한다고 생각되며， 이러한 여러 출을 확인하기 위한 방법으로 Hematoxylin & 가지 사실을 통하여 볼 때 불완전 장형화생은 Eo sine (H&E) 염색과 Gimsa 염색，Gram 염색 위암으로의 전이에 있어서 H. pylori가 기존의 방법이 있는데 H&E 염색은 H. pylori가 잘 염 여러 보고와 마찬가지로 일정부분의 역할을 할 색되지 않으며， 배상세포가 빈 공간의 원형으 것으로 생각되며. 향후 연구에서는 H. pylori와 로 염색되어 H. pylori와 배상세포 등 위 점막 장형화생과의 관계를 규명하기 위하여 H. pylori 과의 관계를 알 수가 없고 Gimsa 염색과 Gram 의 검출이 확인된 좀더 많은 환자를 대상으로 염색은 H. pylori가 염색은 되지만 위 점막의 주기적인 생검과 이들 환자에게서 불완전 장형 형태와 배상세포의 구조가 대조염색에서 보이 화생으로 발전하는지의 여부를 추적， 관찰하는 지 않는 단점을 가지고 있어， 장형화생 지역에 것이 필요하다고 하겠다.
서 H. pylori를 관찰하기 어 렵 고 (Genta and Graham , 1994) , 그 외에 면역조직화학 염색법이
있으나 이는 H. pylori를 발견하는데는 좋은 방 법으로 알려져 있으나 비용이 고가여서 보편적 으로 사용하기는 어렵다는 단점을 가지고 있다
V •
켜 를흩 로장형화생 부위에서 H. pylori의 검출율을 확 인하기 위하여 본 연구를 시행하게 되었으며，
(Morin et a l., 1991). 조직학적으로 장형화생이 확인된 69명을 대상
최근 Genta 등은 이러한 단점을 보완하기 위 으로 각 환자의 조직 슬라이드에 Genta 염색을
하여 정상점막， 장형화생 점막 그리고 H. pylori 시행하여 불완전 또는 완전 장형화생으로 분류 를 동시에 관찰 할 수 있는 3중 염색법을 개발 하였으며， 각각의 H. pylori의 검출 빈도를 확 하였으며， 특히 Ge nta 염색에서는 pH 2.5의 인하였다. 69명의 대상환자 중 장형화생 부위
alcian blue 염색에 의해 배상세포가 하늘색으 내에서 불완전 장형화생이 16% (아56) 이었고
로 염색되어 H. pylori와 위 점막세포들의 형태 완전 장형화생에서는 H. pylori를 검출할 수가 를 동시에 관찰 할 수 있다고 보고하였다 (Gen ta 없었다. 환자의 예는 적었지만 불완전 장형화
et a l., 1996). 본 연구에서도 Genta 염색을 시행 생에서 H. pylori의 검출이 되었음을 확인 할
하여 H. pylori와 위 점막세포， 특히 장형화생 스 이어다
!
λλλλ-1세포와의 연관 관계를 볼 수 있었다. 본 연구
에서는 이제까지 보고된 연구와는 다르게 (Ge nta
et a l., 1994) 불완전 장형 화생 에 서 H. pylori를
칩고문흰
1. Corr ea P.
αrronicgastritis; A
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