용인대학교 대학원 박사과정,

■

김미선, 김일현

, 황병용

, 김중환

■

용인대학교 대학원 박사과정,

용인대학교 재활보건과학대학원 석사과정,

용인대학교 보건복지대학 물리치료학과

The Activity of Protein Kinases on the Endothelin-1-induced Muscle Contraction and the relationship of Physical Therapy

Mi-Sun Kim, PT, MS; Il-Hyun Kim

, PT; Byong-Yong Hwang

, PT, PhD; Jung-Hwan Kim

, PT, PhD

Department of Physical Therapy, the Graduate School, Doctoral Course, Yongin University;

Department of Physical Therapy, the Graduate School of Rehabilitation and Health Science, Master Course, Yongin University;

Department of Physical Therapy, College of Health & Welfare, Yongin University

Purpose: The non-receptor-type protein tyrosine kinase Syk (636 amino acids, 72 kDa) is ubiquitously expressed in hematopoietic stem cells and has been widely studied as a regulator and effector of B cell receptor signaling that occurs in processes such as differentiation, proliferation and apoptosis. However, the mechanism relating Syk and p38 mitogen-activated protein kinases (p38MAPK) by endothelin-1 (ET-1, 21 amino acids) stimulation in muscle cells, especially in the volume-dependent hypertensive state, remains unclear.

Methods: In this study, we investigated the relationship between Syk and p38MAPK for isometric contraction and enzymatic activity by ET-1 from rat aortic smooth muscle cells and aldosterone-analogue deoxycorticosterone acetate (DOCA) hypertensive state rats (ADHR).

Results: The systolic blood pressure was significantly increased in ADHR than in a control group of animals. ET-1 induced isometric contraction and phosphorylation of p38MAPK, which was increased in muscle strips from ADHR.

Increased vasoconstriction and phosphorylation of p38MAPK induced by treatment with 30 nM ET-1 were inhibited by the use of 10μM SB203580, an inhibitor of p38MAPK from ADHR. Furthermore, ET-1 induced isometric contraction and phosphorylation of Syk and p38MAPK, which were increased in the aortic smooth muscle cells.

Increased tension and phosphorylation of Syk and p38MAPK induced by ET-1 were inhibited by SB203580 from rat aortic smooth muscle cells.

Conclusion: These results, suggest that the Syk activity affects ET-1-induced contraction through p38MAPK in smooth muscle cells and that the same pathway directly or indirectly is associated with volume dependent hypertension. The findings suggest the need to develop cardiovascular disease-specialized physical therapy.

Key Words: protein tyrosine kinase Syk, Endothelin-1, p38 mitogen-activated protein kinase, physical therapy 논문접수일: 2008년 5월 22일

수정접수일: 2008년 8월 26일 게재승인일: 2008년 9월 21일

교신저자: 김중환, [email protected]

물리치료의 상관성

The Journal Korean Society of Physical Therapy

I. 서론

635개의 아미노산 잔기로 구성된 분자량 72kDa의 단백질 타 이로신 부활효소 Syk(protein tyrosine kinase Syk, Syk)는 비 수용체 타이로신 부활효소(non-receptor tyrosine kinases)의 하

나로써 조혈세포에 광범위하게 발현되어 세포의 증식과 분열

및 세포의 자연사에 중요한 역할을 담당하는 효소로 알려져 있

다 (Yanagi 등, 1995). 이러한 Syk가 혈관평활근을 비롯한 기관

지 평활근에서 발현되며 , 그 생리-병리적 기능 특히 고혈압의

유발 및 악화기전에 있어서 중요한 역할을 담당한다는 내용이

보고되어 있어 주목을 받고 있다 (Lee 등, 2007, 2008a, 2008b).

특히 고혈압의 병리적 위험인자로 중요한 것이 혈관평활근의 과도한 수축이므로 Syk의 근수축반응에 대한 상관성 여부가 매 우 중요함을 시사해 준다 (Kim 등, 2004, 2005, 2006). 또한 고혈압은 뇌졸중 및 심근경색과 같은 심혈관질환의 이환 및 이 를 위한 심혈관전문물리치료 영역의 측면에서 매우 중요한 위 험인자 혹은 반드시 해결해야할 과제로서 주목을 받고 있다(천 기영 등 , 2004; Chi와 Jaff, 2008; Kim 등, 2004). 한편 강력 한 근수축 물질이면서 고혈압의 병리기전에 중요한 촉발효소 및 위험인자로 작용하는 것으로 endothelin-1(ET-1)이 주목을 받고 있다(Ishihata 등, 2002; Kim 등, 2004). 이러한 ET-1은 21개의 아미노산 잔기로 구성되어 있는 단백질로서 ET-1과 ET-2, ET-3의 아형이 존재하며, 혈관평활근의 수축증가를 비 롯한 세포증식 , 신경전달물질 및 알도스테론과 같은 호르몬 분 비의 자극 등으로 세포활성을 조절해 주는 인자로서의 역할을 담당하여 그 중요성이 인정받고 있다 (Yanagisawa 등, 1988;

Inoue 등, 1989; Kim 등, 2004). 또한 ET-1 유도 평활근의 수축기전에는 고전적 경로인 ET-1 수용체 연관 Ca

의존성 MLCK를 활성화시키는 경로와 함께 단백질 부활효소 C(Protein kinase C, PKC)의 활성화가 관여하는 PKC 경로와 유사분열-활 성 단백질부활효소 (mitogen-activated protein kinases, MAPKs) 가 관여하는 MAPK 경로, 저분자량 단량체 GTP 결합단백질 (small molecular monomeric GTP binding protein)이 관여 하는 Rho-Associated Protein Kinase (ROCK) 경로 및 이노시 톨 인산화 부활효소 (phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)의 활성 유무가 관여하는 PI3K 경로 등이 ET-1 유도 평활근 수 축기전에 관여한다고 보고되었다(Karaki 등, 1997; Kim 등, 2004) (Figure 1). 그러나 혈관평활근에서 유도되는 근수축-연 관 Syk의 활성에 대한 연구보고는 미비한 상태에 있다(Lee 등, 2007). 더욱이 용량 의존성 고혈압에 대한 ET-1의 역할과 Syk 및 MAPKs의 상관성 및 심혈관질환-물리치료 영역의 측면에서 접근한 보고는 전무한 상태에 있다 . 본 연구에서 사용한 알도스 테론 -유도체로 유도되는 고혈압은 신장의 세뇨관에서 Na

이 온의 재흡수와 연관성이 있는 알도스테론의 과도한 역할로 혈 액의 양이 증가하여 유발되는 고혈압으로 용량 의존성 고혈압 으로 알려져 있다 (Bae 등, 2007; Kim 등, 2004). 따라서 본 연구자들은 ET-1 자극으로 유도되는 반응기전에 관여하는 Syk 의 관여와 MAPK 특히 p38MAPK의 상관성과 고혈압과의 상 관성 및 물리치료 영역에서 접근 가능한 내용 등을 살펴봄으로 써 심혈관질환 전문물리치료 연구의 기초자료로 도움이 되고자 하였다.

Figure 1. The schematic representation of vascular responses through ET-1-induced signal transduction in mammalian cells.

Syk: Syk protein tyrosine kinase, ET-1: endothelin-1, ET

R:

endothelin

receptor, ET

R: endothelin

receptor, CAM:

calmodulin, MLCK: myosin light chain kinase, MLCP:

myosin light chain phosphatase, MLC

: 20-kD myosin light chain, MLC

: phosphorylated 20-kD myosin light chain, PKC: protein kinase C, PI3K: phosphatidylinositol 3-kinase, ROCK: Rho-associated protein kinase, ROS:

reactive oxygen species, PKB/Akt: protein kinase B/Akt, MAPK: mitogen-activated protein kinase, NO: nitric oxide, cGMP: cyclic guanosine monophosphate, EC: endothelial cell, VSMC: vascular smooth muscle cell.

II. 연구방법

1. 연구방법

1) 용량-의존성 고혈압 모델 쥐 작성

체중 190∼200g, 웅성의 흰쥐 30두를 본 실험에 사용하였다.

랫드를 1주일간 환경에 적응시킨 후 오른쪽 신장제거수술을 시

행하였다 . 수술시행 후 1주일간 회복기간을 거쳐 알도스테론-유

도체 deoxycorticosterone acetate (DOCA) 200mg kg

을 피

하에 이식하고 봉합술을 20두에 실시하였다. 대조군인 정상혈

압군 (normotensive sham-operated rat, NSR군)은 DOCA를

이식하지 않고 피부절개 수술을 10두에 실시하였다(Kim 등,

2004). 알도스테론-유도체 DOCA 적용군(aldosterone-analo- gue DOCA hypertensive rat, ADHR군)에는 0.9% NaCl과 0.2% KCl 혼합음료와 함께 실험동물 전용사료(대한바이오링 크 , 충북음성소재)를 공급하였으며 대조군에는 정상 음료와 함 께 사료를 무제한 공급하였다. 본 실험은 DOCA를 이식한 4 주에 실시하였다 (Kim 등, 2004).

2) 실험동물의 혈압측정

수술 후 4주에 NSR군과 ADHR군의 모델동물을 전신마취제 로 마취를 실시한 후 , 수술용 고정판에 위치시키고 전 경부를 절개하였다. 좌총경동맥을 확인한 후 한쪽 끝이 장력변환기 (Force Displacement Transducer, FT.03, Grass, USA)에 연 결된 혈압 측정기를 삽입하여 수축기 혈압을 측정하였다 (Kim 등 , 2004).

3) 근 장력 측정

본 연구에서는 ET-1 적용으로 유발될 수 있는 근 수축반응을 관찰하기 위해 근장력 측정을 실시하였다 (Kim 등, 2004). 즉, 흰쥐의 흉대동맥을 적출하여 생리적 식염수가 든 용기에 옮긴 후 결합조직과 지방을 제거하였다 . 혈관조직은 윤상근(circular muscle) 방향으로 폭 2 mm, 길이 10 mm가 되도록 절단하여 한쪽은 근육 고정기에 다른 한쪽 끝은 장력변환기 (Force Dis- placement Transducer, FT 03, Grass, USA)에 연결하여 생리 현상기록기 (Physiograph, 7WC, Grass, USA)로 기록하였다.

4) 세포배양

본 실험에 사용한 혈관평활근세포 (rat aorta smooth muscle cell, RASMC)는 생후 6주된 흰쥐의 흉대동맥에서 효소분산법 (enzyme dispersion method)으로 분리한 후, 일차 세포배양법 (primary culture)으로 배양하였다(Lee 등, 2007). Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)에 10% fetal bovine serum (FBS)과 100U/ml penicillin과 100㎍/ml streptomycin 및 200mM glutamine을 혼합한 배양액을 이용하여 3∼9세대 까지 배양한 세포를 본 실험에 사용하였다 . 세포 배양은 5%

CO2, 95% 공기가 공급되는 37℃ 배양기를 사용하였다(Lee 등 , 2007).

5) MAPK의 발현과 인산화 측정

MAPK의 발현과 인산화를 측정하기 위해 Kim 등(2005)이 실 시한 내용과 동일한 과정으로 본 연구를 실시하였다 . 근 장력 측정과 동일한 방법으로 조직을 준비하여 조직분쇄용 균질화 용액에서 파쇄하였다 . 표본을 14,000×G에서 10분간 원심-분리 하여 상층액을 취하였다. SDS-PAGE 겔을 작성한 후 전기영동

용 수조에 장착하여 전기영동과 전사를 실시하였다 . 전사된 PVDF (polyvinylidene fluoride) 막은 5% 탈지분유로 진탕한 후 , 1차와 2차 항체에 반응시키고 ECL Kit를 이용하여 면역활 성 밴드를 확인하였다 . X-ray 필름에 나타난 밴드는 이미지 분 석기 (Bioprofil, Vilber Lourmat, France)로 정량화하였다(Kim 등 , 2005).

6) 면역침강법(Immunoprecipitation)을 이용한 Syk 단백질 타 이로신 부활효소의 활성측정

준비된 RASMC를 추출용액으로 소화시킨 후, 수확된 lysate 500μg의 단백질에 4μg/ml의 항체(monoclonal anti-Syk, Santa Cruz, Santa Cruz, CA, USA)를 5시간 동안 실온에서 반응시 켰다 . 이렇게 반응시킨 면역복합체는 A-agarose beads(Sigma, st. Louis, MO, USA)를 사용하여 4℃에서 24시간 침전반응을 유도하였다 . 이렇게 침전된 bead는 PBST(phosphate-buffered saline with Tween-20)로 세척과정을 거친 후, SDS sample buffer과 혼합하여 5분간 단백질 변성과정을 실시하였다. 준비 된 단백질표본은 immunoblotting 방법을 이용하여 anti-phospho tyrosine (Upstate, Lake Placid, NY, USA)과 반응시켜 Syk 단백질 타이로신 부활효소의 활성을 측정하였다 (Lee 등, 2007).

2. 분석방법

본 연구결과에 대한 자료 분석은 SAS 통계프로그램 ver. 6.12 를 사용하여 평균과 표준편차를 산출하였으며 , 유의수준 α는 .05로 설정하여 Student's t-test로 검정하였다.

III. 결과

1. 용량-의존성 고혈압 이환 시 유도되는 조직 반응성의 특성 1) 혈압의 특성

고혈압 모델작성을 위한 수술조작 후 4주에 ADHR군과 NSR 군에 해당하는 쥐의 혈압을 직접 혈압법 (Kim 등, 2004)으로 측정하였다 . 결과 NSR군(124.2±1.9mmHg)에 비해 ADHR군 (181.3±3.5mmHg)에서 혈압의 유의한 증가를 나타냈다(Figure 2A-a).

2) 고혈압에 대한 ET-1-적용 근장력과 p38MAPK-인산화의 변동 및 상관성

용량 -의존성 고혈압 혈관조직에 조직에 적용한 ET-1 적용의 결과 ET-1의 농도 의존적(ET-1: 300pM; 14.6±3.3%, 1nM;

72.3±11.1%, 30nM; 94.4±12.7%, 100nM; 88.6±15.4%) 및

Figure 2. The difference of the pathophysiological responses between sham-treated (NSR) and aldosterone-analogue DOCA-salt-treated rats (ADHR) and the effects of endothelin-1 on isometric tension, Syk activity, and phosphorylation of p38MAPK from rat aortic smooth muscle and RASMC.

NSR: normotensive sham-operated rats, ADHR: aldosterone-analogue DOCA-salt hypertensive rats, KCl:

potassium chloride, WO: wash out, ET-1: endothelin-1, SB203580: a selective p38MAPK inhibitor, piceatannol: a selective protein tyrosine kinase Syk inhibitor, IP: immunoprecipitation, IB:

Immunoblotting, pTyr: phosphorylated tyrosine, p38MAPK: p38 mitogen-activated protein kinase.

*p<.05.

단일 농도(30 nM) 적용에 대한 시간 의존적(5min; 39.2±

5.0%, 10min; 72.6±7.6%, 15min; 92.3±8.6%, 20min;

101.2±9.4%, 25min; 106.4±9.6%, 30min; 110.4±9.6%)으로 수축반응이 증가함을 관찰할 수 있었다(Figure 2A-c, 2A-d, 2A-e). 이러한 고혈압 모델의 혈관조직에 ET-1으로 유도된 수 축 증가는 p38MAPK의 선택적 억제제인 SB203580(10μM;

11.0±9.4%)으로 유의하게 억제되는 양상을 확인할 수 있었다 (Figure 2A-f). 또한 단일농도의 ET-1(30nM)을 시간 의존적으 로 적용한 결과 p38MAPK 인산화의 증가와 함께 단일농도로 적용한 ET-1으로 증가한 p38MAPK의 인산화(310.8±40.3%) 가 SB203580(10μM)의 적용으로 유의한 감소(166.0±26.7%) 를 관찰할 수 있었다(Figure 2A-g, 2A-h).

3) ET-1-적용 근장력 기전에 관여하는 Syk

고혈압 모델 쥐의 혈관조직에 적용한 ET-1을 동일한 방법으로

일반 쥐의 혈관조직에 적용하여 근수축 반응과 수축기전에 관

여할 수 있는 Syk의 상관성을 관찰하였다. 결과 ET-1-적용 수

축반응이 농도 의존적으로 증가함 (ET-1: 10nM; 39.0±14.7%,

30nM; 103.8±14.4%, 100nM; 133.9±8.1%)을 관찰할 수 있

었다 (Figure 2B). 특히, ET-1으로 증가된 근장력은 Syk의 선

택적 억제제인 piceatannol(10μM)의 적용으로 통계적으로 유

의한 수준의 감소(67.0±9.1%)를 확인할 수 있었다(Figure

2C-a, 2C-b). 또한 농도 및 시간 의존적으로 적용한 ET-1으로

Syk의 활성이 증가되는 것과 증가된 Syk의 활성이 piceatannol

의 농도 의존적으로 감소함을 관찰할 수 있었다 (Figure 2D-a,

2D-b, 2D-c). 또한 고혈압 모델 쥐의 혈관에 나타난 결과와 동일한 양상으로 ET-1으로 증가한 수축반응이 SB203580(10 μM)으로 유의한 수준의 억제(78.0±7.2%)가 나타남과 동시에 증가한 p38MAPK의 인산화가 각각 SB203580과 piceatannol 의 적용으로 감소함을 확인할 수 있었다(Figure 2C-c, 2D-d, 2D-e).

Figure 3. The schematic representation of ET-1-induced contraction through Syk protein tyrosine kinase in mammalian cells.

Syk: Syk protein tyrosine kinase, ET-1: endothelin-1, ET

R: endothelin

receptor, p38 MAPK: p38 mitogen-activated protein kinase, VSMC: vascular smooth muscle cell, -: inhibition.

IV. 고찰

Syk은 최소 9종류 이상의 비-수용체형 단백질 타이로신 부활효 소 [nonreceptor protein tyrosine kinase, nonreceptor PTK:

Src family, Abl과 Arg family, Fes/Fps 및 Fer family, Src family, focal adhesion kinase (FAK), spleen tyrosine kinase family (Syk, ZAP-70), c-Src kinase (CSK), Janus kinase family (JAK1, JAK2, JAK3, TYK2), Ack와 BTK family

(BTK, ITK, TEC)]의 하나로써 비만세포와 B-세포 및 T-세포 를 포함한 거의 모든 조혈세포에 발현되어 세포의 분열과 세포 의 자연사 등에 중요한 역할을 담당하는 효소로 알려져 있다 (Yanagi 등, 1995). 이러한 Syk가 혈관평활근을 비롯한 기관지 평활근에서도 발현되며 , 그 생리-병리적 기능 특히 동맥경화 유 발기전에 필수요소인 평활근 세포의 유주와 고혈압의 유발 및 악화기전에 중요한 상관성이 있음을 보고하여 그 중요성을 인정 받고 있다 (Lee 등, 2007, 2008a, 2008b). 특히, 고혈압을 비롯 한 심근경색 , 뇌혈관경련(cerebrovasospasm), 월경통-연관 자궁 수축 (uterine contraction), 천식 및 기능적 혈관경련성 과민반 응과 통증을 동반하는 레이노드병 (Raynaud‘s disease) 등의 발 병 혹은 악화기전에 중요한 중추적 역할을 하는 것이 과도한 평 활근의 수축으로써 그 중요성이 인정받고 있다 (Choi 등, 2005;

Kim 등, 2003, 2004, 2005, 2006; Lee 등, 2006; Park 등,

2003). 또한 Syk 단백질의 N-말단에는 두 개의 Src-homology

2(SH2) 부분이 존재하며, C-말단에 존재하는 타이로신 잔기가

자극을 받았을 때 자가-인산화(auto-phosphorylation)되는 특징

을 나타내며 , tubulin과 myelin basic protein(MBP) 및 H2B

histone을 인산화시키는 등의 특성을 가지고 있어서 근-단백질

을 비롯한 세포골격의 배열에 영향을 미칠 수 있음을 알 수 있

다 (Yanagi 등, 1995). 이러한 내용을 근거로 본 연구에서 도출

된 ET-1-유도 근 긴장력의 증가가 Syk의 억제제로 억제된 내용

은 근수축 -Syk의 밀접한 상관성이 존재함을 시사해준다(Figure

3). 한편, ET-1은 혈관내피세포와 혈관평활근세포, 상피세포 및

신경원 등에 풍부히 존재하면서 강한 근수축의 생리적 기능을

갖고 있으며 (Josko 등, 2000), 고혈압을 비롯한 심혈관질환의

유발 및 악화 기전에 중요한 역할의 자극원으로 관여함이 보고

되어 주목을 받고 있다 (Kim 등, 2004; Ko 등, 2007; Lee 등,

2007). 또한 ET-1은 단백질의 생성 및 분비 자체가 유전자 수준

에서 조절되는 특징을 나타내며 (Ortega Mateo와 de Artiñano,

1997), 저산소와 허혈 상태 및 안지오텐신 II, 종양괴사인자-알

파 (tumor necrosis factor-α), 고혈압-유도 혈관 벽의 신장

(pulsatile stretch), 노르에피네프린 등에 의해서 생성 및 유리되

는 것으로 보고 되어있다 (Haynes와 Webb, 1998; Mayes,

2003; Ortega Mateo와 de Artiñano, 1997). 특히, 정상적 상

태하에서 혈장 내 존재하는 농도가 낮은 농도의 분포를 보이지

만 , 고혈압이나 심근경색 및 당뇨에 이환된 환자의 경우, 혈장

ET-1 수준이 증가되어 있는 내용으로 미루어 심혈관질환의 중

요지표로서의 중요성을 알 수 있다 (Attinà 등, 2005; Omland

등 , 1994; Morise 등, 1995). ET-1-유도 근 수축기전에는 고전

적 경로인 MLCK의 활성화 경로 이외에도 PKC 경로와

MAPK 경로, ROCK 경로 및 PI3K 경로가 관여함이 보고되고

있으며 (Karaki 등, 1997; Kim 등, 2004), 이를 근거로 본 연구

에서 ET-1 적용 근수축 반응에 관여하는 Syk 연관 MAPK 특 히 p38MAPK 활성증감의 파악은 중요한 근거자료라 사료된다.

그러나 본 연구에서 제시한 Syk 활성 연관 과도한 근수축에 대 한 결과 외에 Syk 연관 수축반응에 대한 이전의 연구보고가 거 의 전무한 이유로 그 중요성이 통증 -염증 및 고혈압과 밀접한 상관성이 존재함에도 불구하고 과도수축 -연관 임상의학적 연구 보고가 상당수 이루지고 있지 않다. 더욱이 물리치료 영역에서 경혈자극 -유도 호르몬의 변동 등을 자극할 수 있는 전기침자극 혹은 레이져광선의 자극 및 통증경감을 주목적으로 적용되고 있 는 경피신경저빈도주파수 전기자극 등에 대한 물리치료학적 접 근의 연구보고는 전무한 상태에 있다. 따라서 물리치료적 접근 의 연구가 성공적으로 이루질 경우 , 심혈관질환 영역의 물리치 료 발전에 도움을 줄 수 있을 것으로 사료된다.

V. 결론

본 연구는 심혈관질환 전문물리치료의 연구 및 활성에 기초자 료로 활용하기 위해 endothelin-1(ET-1) 자극으로 유도되는 근 -수축 반응에 관여하는 단백질 타이로신 부활효소 Syk(protein tyrosine kinase Syk)의 활성유무와 p38MAPK(p38 mitogen- activated protein kinase)의 공동-활성에 대한 연구를 수행하였 으며 , 다음과 같은 결론을 얻을 수 있었다.

1. 용량-의존성 고혈압 모델 쥐의 혈관조직에 조직에 적용한 ET-1의 농도 및 시간 의존적으로 근-수축반응이 유의한 수 준으로 증가함을 관찰할 수 있었다 .

2. 용량-의존성 고혈압 모델 쥐의 혈관조직에 적용한 단일농도 의 ET-1으로 근수축과 p38MAPK의 인산화가 유의한 수준 으로 증가하고 각각 p38MAPK의 선택적 억제제(SB203580, 10μM)에 의해 유의한 수준으로 억제됨을 관찰할 수 있 었다 .

3. 일반 정상 혈압 쥐의 혈관조직에 적용한 ET-1의 농도 의존 적으로 근 -수축반응이 유의한 수준으로 증가함을 관찰할 수 있었다. 또한 이러한 ET-1 유도 근수축 반응은 SB203580 (10μM)과 농도 의존적으로 적용한 Syk의 선택적 억제제인 piceatannol에 의해 유의한 수준으로 억제됨을 관찰할 수 있 었다 .

4. 흰쥐의 혈관평활근 세포를 배양하여 ET-1을 적용한 결과 ET-1의 농도와 시간 의존적으로 Syk의 활성과 p38MAPK 의 인산화가 증가함을 확인할 수 있었다. 또한 ET-1으로 증가된 p38MAPK와 Syk의 활성이 Syk의 억제제의 적용으 로 감소하는 결과를 관찰할 수 있었다.

이러한 본 연구를 통하여 ET-1 유도 혈관평활근의 수축기 전에 Syk과 p38MAPK의 활성증감이 관여한다는 내용과 이러 한 신호전달경로가 용량 -의존성 고혈압의 혈관반응에 직, 간접 적으로 작용함을 이해할 수 있었다 (Figure. 3). 그러나 심혈관 질환 전문물리치료의 영역 (운동치료 및 전기치료 등)에서 이에 대한 조절 및 그 효과 , 기전 등에 대한 연구보고는 거의 전무한 상태이다 . 따라서 향후, 보다 객관적이면서 체계적이고 심도 있 는 기초물리치료학적 측면에서 연구가 성공적으로 이루어질 경 우 , 물리치료의 발전에 기여할 수 있을 것으로 사료된다.

참고문헌

천기영 , 김임술, 최경규 등. 소금염-의존성 고혈압의 유해성과 고혈압-관련 교감신경전달물질의 변동에 대한 물리적 자극 의 효과 —노인종합복지회관 내 물리치료시설의 활용을 중 심으로— . 한국노년학. 2004;24(3):1-11.

Attinà T, Camidge R, Newby DE et al. Endothelin antago- nism in pulmonary hypertension, heart failure, and beyond. Heart. 2005;91(6):825-31.

Bae YM, Kim A, Lee YJ et al. Enhancement of receptor-operated cation current and TRPC6 expression in arterial smooth muscle cells of deoxycorticosterone acetate-salt hypertensive rats. J Hypertens. 2007;25(4):

809-17.

Chi YW, Jaff MR. Optimal risk factor modification and medical management of the patient with peripheral arterial disease. Catheter Cardiovasc Interv. 2008;71(4):

475-89.

Choi WH, Kim J, Lee YR et al. Cdc42 contributes to phorbol ester-induced Ca

-independent contraction of pulmonary artery smooth muscle. J Vet Med Sci. 2005;

67(8):787-93.

Haynes WG, Webb DJ. Endothelin as a regulator of cardiovascular function in health and disease. J Hypertens.

1998;16(8):1081-98.

Inoue A, Yanagisawa M, Kimura S et al. The human endothelin family: three structurally and pharmacolo- gically distinct isopeptides predicted by three separate genes. Proc Natl Acad Sci USA. 1989;86(8):2863-7.

Ishihata A, Tasaki K, Katano Y. Involvement of p44/42

mitogen-activated protein kinases in regulating angioten-

sin II- and endothelin-1-induced contraction of rat

thoracic aorta. Eur J Pharmacol. 2002;445(3):247-56.

Josko J, Hendryk S, Jedrzejowska-Szypulka H et al. Effect of endothelin-1 receptor antagonist BQ-123 on basilar artery diameter after subarachnoid hemorrhage (SAH) in rats. J Physiol Pharmacol. 2000;51(2):241-9.

Karaki H, Ozaki H, Hori M et al. Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle. Pharmacol Rev. 1997;49(2):157-230.

Kawanabe Y, Okamoto Y, Nozaki K et al. Molecular mecha- nism for endothelin-1-induced stress-fiber formation:

analysis of G proteins using a mutant endothelin(A) receptor. Mol Pharmacol. 2002;61(2): 277-84.

Kim B, Kim J, Bae YM et al. p38 mitogen-activated protein kinase contributes to the diminished aortic con- traction by endothelin-1 in DOCA-salt hypertensive rats.

Hypertension. 2004;43(5):1086-91.

Kim B, Kim YS, Ahn J et al. Conventional-type protein kinase C contributes to phorbol ester-induced inhibition of rat myometrial tension. Br J Pharmacol. 2003;

139(2):408-14.

Kim J, Lee CK, Park HJ et al. Epidermal growth factor induces vasoconstriction through the phosphatidylinositol 3-kinase-mediated mitogen-activated protein kinase pathway in hypertensive rats. J Pharmacol Sci. 2006;

101(2):135-43.

Kim J, Lee YR, Lee CH et al. Mitogen-activated protein kinase contributes to elevated basal tone in aortic smooth muscle from hypertensive rats. Eur J Pharmacol.

2005;514(2-3):209-15.

Ko EA, Amiri F, Pandey NR et al. Resistance artery remodeling in deoxycorticosterone acetate-salt hyper- tension is dependent on vascular inflammation: evidence from m-CSF-deficient mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007;292(4):H1789-95.

Lee CK, Kim J, Won KJ et al. Phorbol ester-induced contraction through p38 mitogen-activated protein kinase is diminished in aortas from DOCA-salt hypertensive rats. Arch Pharm Res. 2006;29(11):

1024-31.

Lee HM, Kim HJ, Won KJ et al. Contribution of soluble intercellular adhesion molecule-1 to the migration of vascular smooth muscle cells. Eur J Pharmacol. 2008a;

579(1-3):260-8.

Lee HM, Kim HJ, Won KJ et al. Soluble form of vascular cell adhesion molecule 1 induces migration and proliferation of vascular smooth muscle cells. J Vasc Res. 2008b;45(3):259-68.

Lee HM, Won KJ, Kim J et al. Endothelin-1 induces contraction via a Syk-mediated p38 mitogen-activated protein kinase pathway in rat aortic smooth muscle. J Pharmacol Sci. 2007;103(4):427-33.

Mayes MD. Endothelin and endothelin receptor antagonists in systemic rheumatic disease. Arthritis Rheum. 2003;

48(5):1190-9.

Morise T, Takeuchi Y, Kawano M et al. Increased plasma levels of immunoreactive endothelin and von Willebrand factor in NIDDM patients. Diabetes Care. 1995;18(1):

87-9.

Omland T, Lie RT, Aakvaag A et al. Plasma endothelin determination as a prognostic indicator of 1-year mortality after acute myocardial infarction. Circulation.

1994;89(4):1573-9.

Ortega Mateo A, de Artiñano AA. Highlights on endo- thelins: a review. Pharmacol Res. 1997;36(5):339-51.

Park S, Kim B, Kim J et al. Tamoxifen induces vasorelaxation via inhibition of mitogen-activated protein kinase in rat aortic smooth muscle. J Vet Med Sci.

2003;65(11):1155-60.

Puchtler H, Waldrop FS. On the mechanism of Verhoeff's elastica stain: a convenient stain for myelin sheaths.

Histochemistry. 1979;62(3):233-47.

Yanagi S, Kurosaki T, Yamamura H. The structure and function of nonreceptor tyrosine kinase p72SYK expressed in hematopoietic cells. Cell Signal. 1995;7(3):

185-93.

Yanagisawa M, Kurihara H, Kimura S et al. A novel potent

vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial

cells. Nature. 1988;332(6163):411-5.