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(1)

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(2)

2016년 2월 석사학위 논문

유해 녹조 제어를 위한

2,4-thiazolidinedione 유도체 합성 및 활성평가

조선대학교 대학원

신재생에너지융합학과

(3)

유해 녹조 제어를 위한

2,4-thiazolidinedione 유도체 합성 및 활성평가

Synthesis and activity evaluation of

2,4-thiazolidinedion derivative as algicaides against harmful green algal species

2016년 2월 25일

조선대학교 대학원

신재생에너지융합학과

이 연 웅

(4)

유해 녹조 제어를 위한

2,4-thiazolidinedione 유도체 합성 및 활성평가

지도교수 조 훈

이 논문을 공학 석사학위신청 논문으로 제출함

2015년 10월

조선대학교 대학원

신재생에너지융합학과

이 연 웅

(5)

이연웅의 석사학위논문을 인준함

위원장 조선대학교 교수 유지강 (인)

위 원 조선대학교 교수 최재곤 (인)

위 원 조선대학교 교수 조 훈 (인)

2015년 11월

조선대학교 대학원

(6)

목 차

Li stofTabl es

···ⅲ

Li stofSchemes

···ⅳ

Li stofFi gur es

···ⅴ

초록

···ⅵ

Ⅰ.서론

^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·1

Ⅱ.재료 및 방법

···7

1 .재료 2 .조류 3 .Mi c r opl at ea s s a y 4 .Me a s ur e me ntofLC₅₀ val ue 5 .Dani or er i o( z e br af i s h)독성시험 6 .Daphni ama gna급성독성시험 7 .TD 유도체 합성

1.1.화합물 (1-7)의 합성 ···11

1.2.화합물 (8-11)의 합성 ···14

1.3.화합물 (12-21)의 합성 ···16

1.4.화합물 (23-28)의 합성 ···20

1.5.화합물 (29-57)의 합성 ···24

1.6.화합물 (58-64)의 합성 ···34

(7)

Ⅲ.결과 및 고찰

···38

1 .TD 화합물의 살조능력 테스트 결과

···38

2 .Da ni or er i o( z e br af i s h)독성평가

···45

3 .Da ph ni ama gna급성독성평가

···46

4 .최종후보물질에 의한 유해조류의 형태변화

···46

Ⅳ.결론

^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·^·48

참고문헌

···50

1

H NMR Spect r a

···53

(8)

Li stofTabl es

Table1.AlgaeRelatedtotheGreentide···3

Table2.Algicidaleffectsofcompound1-7···38

Table8.Acuteecotoxicitytestofthevarioussyntheticsagainstdaniorerio···44

(9)

Li stofSchemes

Scheme1.Reagentsandconditions;piperidine,aceticacid,tolueme,80℃,18h···11

(10)

Li stofFi gur es

Figure1.Harmfulalgalbloom inNakdongriver,SouthKorea.Sources:from http:

//m.hani.co.kr/arti/society/environment/696535.html,이정아/hankyoreh,2015.···1 Figure2.Acuteecotoxicitytestoftheconpounds2and22againstdaniorerio···45 Figure3.Acuteecotoxicitytestoftheconpound2againstdaphniamagna···46 Figure4.Cpmpound21μM 처리 후 microcystisaeruginosa의 형태관찰 (a:2day,

b:3day,c:4day,d:5day)···47 Figure5.Algicidalactivityofcompound2atdifferentintialconcentrarion(perliter)

againstmicrocystisaeruginosa···47

(11)

초 록

Synt he s i sanda c t i vi t ye va l uat i onof2, 4 -Thi a z ol i di ne di on de r i vat i veasa l gi c i de sa ga i ns thar mf ulgr e e nal gals pe c i e s

YeonWoongLee

AcademicAdvisor:Prof.ChoHoon,Ph.D.

DepartmentofEnergyConvergence

GraduateSchoolofChosunUniversity,SouthKorea

Theharmfulalgaespecieshaveoften caused algaebloom in theNakdong River and other parts ofKorea recently,and itleads to greateconomic loss due to decliningvalueofwaterresourcesandincreasingcostofwatertreatment.

Therefore,thisstudy intendedtosynthesizetheenvironment-friendly algicidethat ishighly effectivein eliminating algaeand yetnottoxictootherspecies.64new derivatives of2,4-thiazolidinedione,which was used as the derivatives ofmany compounds and proven to be safe,were synthesized,and the change ofactivity according to the structure was measured using the SAR (structure activity relationship). To select the most active compound among the synthesized derivatives, the algicidal effects against the microcystis aeruginosa, anabaena flos-aquae and aphnizomenon flos-aquae wereevaluated and an ecotoxicology test using the zebra fish (daphnia magna)and an acute ecotoxicology testusing the waterflea(daniorerio)wereconductedtoassessthebiologicalstability.

(12)

Although the mostnew derivatives were highly active againstthe microcystis aeruginosa,they werenotactiveagainsttheanabaenaflos-aquaeoraphnizomenon flos-aquae. The compound that showed the most algicidal efficient against microcystisaeruginosa wasthecompound 52 which had theLC₅₀ valueof0.318 μM. The compounds generally showed higher algicidal efficiency when the exchange reagents were applied. However, the compounds with the halogen substituentsshowedhightoxicitytozebrafishandwaterfleawhilethecompounds withthehydroxylandalkoxysubstituentsshowedlowertoxicity.

Therefore,thecompound2,5-(2-hydroxy-3-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dio ne,whichshowedoutstandingalgicidalcapabilityandyetmuchlowertoxicitythan thecompound52,wasfinallyselected.

Thecompound2developedinthisstudyisjudgedtobetheenvironment-friendly algicidethatislesstoxicto ecosystem and can effectively and selectively control microcystisaeruginosa.

(13)

Ⅰ.서론

남조류(cyanobacteria)는 30∼35억년 전 지층에서 발견되는 최초의 광합성 생물중 하 나이다.^[¹^]현재에는 약 150종 2000종이 존재하며 주로 섬유형태나 둥근 형태로 군체를 이뤄 대규모로 성장한다.^[²^]이러한 남조류가 수계의 부영양화로 인해 과대 번식하는 것 을 녹조현상이라고 하며 수화현상(algaebloom)이라고도 한다.

Figure 1.Harmfulalgalbloom in Nakdong river,South Korea.Sources:from http://m.hani.co.kr/arti/society/environment/696535.html,이정아/hankyoreh,2015.

최근의 수생태계는 인간의 활동이 활발해짐으로써 질소,인 등의 영양성분농도가 증 가하여 부영양화 현상이 수질오염의 가장 큰 원인 중 하나가 되었으며 부영양화 된 수 계에서 대량으로 발생한 녹조는 착색이나 스컴을 형성하여 시각적 불쾌감과 악취를 유 발할 뿐 아니라 사멸한 조류에 의해 수중의 용존산소가 감소하여 수중생물이 폐사하고

[3]

수질의 pH와 탁도를 높여 수자원의 가치를 떨어뜨리고 있다.그 중에서 가장 심각 하고 민감한 문제 중 하나는 수돗물 정수처리장에서의 조류에 의한 처리장애 문제라고

(14)

할 수 있다.대량으로 조류가 번식한 물을 상수원으로 사용할 경우 조류에 의해 여과 지 폐쇄,응집침전장애,조류 기원성 유해물질로 인한 처리 수질 저하와 보건학적 안정 성 위험^[⁴^],수계 내 유기물 증가로 인한 소독 부산물 증가^[^5]등 많은 문제를 유발시킨 다.이러한 녹조 현상을 발생시키는 부영양화한 담수계의 비율은 WHO 보고에 따르면 아시아-태평양권 54%,유럽권 53%,아프리카권 28%,북아메리카권 48%,남아메리카 권 41%에 이른다고 조사되었다.^[^6]

남조류의 일부 종에서 발생하는 독성물질은 식수나 어류,수생새물 등을 오염키며^[⁷^] 발생되는 독소의 종류 화학구조 상으로는 펩티드계,알칼로이드계,리포다당계 등으로 분류되고 독성 측면에서는 간장독소,피부독소,신경독소 등으로 분류된다.그 중 펩티 드계 간장독소는 전세계적으로 가장 검출빈도와 농도가 높으며 현재까지 60여개의 유 도체가 발견되었다.펩티드계 간장독소는 Microcystis, Anabaena, Anabaenopsism, Nostoc,Oscillatoria등에서 검출되는 microcystin,Nodulariaspumigena에서 분리된 nodularin과 Cylindrospermopsisrachiborski에서 분리된 cylindrospermopsin 등이 있 다.남조류의 독소생산은 형태적으로 같은 종으로 분류되더라도 균주에 따라 유독성에 서 무독성까지 매우 다양하며 종의 성장시기와 인,질소 등의 환경요인에 따라 독성의 정도가 다르다고 보고되고 있다.^[⁸^]수화현상을 빈번히 일으키는 종으로는 Anabaena, Aphanizomenon, Aphanothece, Cylindrospermopsis, Lyngbya, Microcystis, Nodularia,Nostoc,Phormidium,Oscillatoria속 등이 있다.수화를 일으키는 경우 대 체적으로 단일 종으로 존재하기 보다는 다양한 종들로 구성된다.

(15)

Table1.AlgaeRelatedtotheGreen tide^[^9,^10]

Cyanobacteria Green Algae Diatoms

Microcystisaerusinosa M.wesenbergii M.viridis M.ichithioblabe Anabaenamacrospora A.apiroides

Aphanizomenonsp.

Oscillatoriasp.

Phormidium sp.

Clostridium sp.

Chlamydomonassp.

Scenedesmussp.

Fragilariasp.

Melosirasp.

Synedrasp.

일반적으로 녹조현상은 부영양화 된 호수나 하천에서 발생하며 수온이 높고 광량이 상승하는 여름과 초가을에 주로 발생된다. 이들 중 남조류 수화의 주요 원인인 microcystissp.는 여름철에 다른 조류보다 부영양화 수계에서 쉽게 수화를 이루는데, 이는 생리·생태적 특성에서 찾을 수 있다.^[¹¹^]microcystis.sp는 수온이 30℃ 전후,pH 10정도에서 최대성장을 나타낼 정도로 높은 수온과 pH에 잘 적응하고 다른 조류보다 인,철,망간 등의 흡수가 빠르며 세포에 과잉으로 축척할 수 있어 영양분이 부족한 시 기에도 생육을 유지 할 수 있다.또 한, 강한 광조건에서도 성장에 영향을 받지 않아 여름철에 수화를 쉽게 형성한다.또 한,세포 내 기포로 부력을 조절하여 생육에 필요 한 영양분과 빛을 쉽게 얻을 수 있으며 microcystissp.를 직접 섭취하는 동물플랑크톤 이 적은 것도 쉽게 수화를 이루는 조건이라 할 수 있다.^[¹²^]

녹조현상에 따른 피해를 줄이기 위해 우리나라의 경우 “조류경보제”를 시행하고 있 으며 녹조 발생을 관계기관 등에 신속하게 보고해 취수,정수장의 정화처리 능력을 강 화하는 등 조류를 원인으로 하는 피해를 최소화 하고 안정성을 확보하기 위해 노력하 고 있다.“조류경보제”는 1998년부터 대청호를 시범으로 실시하여 현재 공산댐,광교 지,남강호,동북호,사연호,섬진강댐,안계호,영찬호,용담호,운문호,주암호,진전지, 춘천호,충주호,한강상류,한강하류 등에서 실시하고 있다.이렇듯 녹조현상을 억제하 기 위해 우리나라뿐만 아니라 세계각국에서 여러 방법들이 적용되고 있으나 대부분의

(16)

방법이 경제적,기술적 측면에서 제약을 받고 있는 실정이다.

담수계의 녹조현상을 제어하는 가장 근본적 방법은 호수에 유입되는 영양염류를 차 단하여 조류의 성장을 억제하는 외부부하 차단법과 이미 유입된 영양염류의 제거,유 입된 영양염류를 조류가 이용할 수 없도록 차단하는 내부부하 차단법 등으로 나눌 수 있다.^[¹³^]이러한 방법들은 다음과 같이 생물학적,기계·물리학적,화학적 방법과 복합적 방법으로 분류할 수 있다.생물학적 방법은 녹조를 섭식하여 제거하는 미생물이나 어 패류를 투여하여 제거하는 방법과 특정 생물을 이용한 영양염류 제거,유기물로 산화 시켜 분해시는 방법 등이 있으며^[¹^4]물리학적 제어 방법은 녹조생물의 기계적수거,태 양광 차단^[¹^5],점토를 통한 흡착처리^[¹^6,1^7],초음파^[^18],필터,산소공급/대류,전기분해 등 의 물리적 방법을 주체로 사용하고,화학적 방법으로는 염소처리^[¹⁹^],오존 (_)처리^[²⁰^], 수중의 인 제거^[²¹^,2²^],황산구리,스테롤계 계면활성제,차아염소산나트륨,수산화마그네 슘 등의 화학물질을 첨가하여 녹조를 제거하는 방법이다.^[²³^]

현재 국내에서 가장 일반적으로 녹조제어에 사용하는 방법은 화학적 처리 방법으로 응집제,살조제 처리와 퇴적층의 불활성화 또는 포장(capping)으로 분류 할 수 있다.

응집제 처리는 황토,알루미늄,철염 등의 응집제를 살포하는 방법이며 응집제의의 콜 로이드 입자가 녹조생물,영양염류를 응집/흡착 시켜 제거하는 방법이다.^[²⁴^{, 2}⁵^]하지만 이는 근본적인 대책이 아니며 저서생물의 호흡을 방해할 수 있으며 미세조류 뿐만 아 니라 플랑크톤 등의 다른 생물들도 같이 침전시키므로 분해에 많은 산소가 소모되며 생태계 교란의 원인이 될 수 있다.^[²⁶^]그리고 알루미늄 및 철염의 응집제 살포는 비용 이 고가이며 2차 오염의 가능성이 있다.

살조제 처리는 황산구리,염소화물 기타 유기수온체가 있으며 호수 같은 정체수계에 는 황산구리가 많이 사용된다.황산구리는 조류에 특히 활성이 좋고 지속성이 있으며 염소화물에 비해 취급상 안전하고 처리방법이 용이한 장점^[²⁷^]이 있으나 비용이 고가이 며 일시적 효과와 고농도로 살포할 경우 수생생물에 대한 유해성을 나타낼 가능성이 있다.^[²⁸^]

퇴적층의 불활성화 또는 포장(capping)방법은 화학물질을 이용하여 침전·탈염소화·

중화 등의 반응으로 처리하는 방법을 말하며 대표적으로 퇴적층의 발생하는 인을 제거 하기 위해 alum이나 lime을 살포하는 방법이 있으며 이는 새롭게 형성된 퇴적층 표면 의 인을 침전시키거나 플럭을 형성한다.^[²⁹^]

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이러한 화학물질들은 수중에서 다음과 같이 인과 반응하여 알루미늄과 철의 수화물 을 형성한다.

-Aluminum sulfate:Al_(SO_)_ +2H_PO_ ↔ 2AlPO_ ↓ +3H_SO_ -Ferricsulfate:Fe_(SO_)_ +2H_PO_ ↔ 2FePO_ ↓ +3H_SO_ -FerricChloride:FeCl_ +H_PO_ ↔ FePO_ ↓ +3HCl

또한 이러한 알루미늄염과 철염은 수화 과정에서 다음과 같은 수중의 알칼리도를 소 비한다.

-M_(SO_)_ +OH ↔ M(OH)²⁺ +H⁺ +n(SO_) -M(OH)²⁺ +OH ↔ M(OH)_⁺ +H⁺

-M(OH)²⁺ +OH ↔ M(OH)_ +H⁺ (formationoffloc) -M(OH)_ +OH ↔ M(OH)_⁻ +H⁺

※ M =Aluminum orIron(III)

그러나 이러한 화학적 처리방식의 단점에도 불구하고 새로운 화학적 처리방법이 지 속적으로 요구 되는 이유는 녹조제어방법 중 가장 빠르고 우수한 녹조제어 효과를 보 인다는 장점을 가지기 때문이다.^[³⁰^,3¹^]또 한,취급의 용이성,높은 경제성,주변 환경에 영향을 받지 않으며 높은 살조능력을 유지할 수 있다는 장점을 가지므로 높은 상업적 가치를 가진다.따라서 유해조류에 따른 선택적인 살조능력을 가지며 해양 생태계에 영향을 주지 않는 친환경적인 녹조제어물질 개발이 필요하다.

Thiazolidinediones(TD)는 1990년대 후반에 도입된 당뇨병 및 관련질환에 보조적인 요법으로 사용된 유도체로 항암효과,항관절염 효과,면역력 증가 등의 효과를 가지며 많은 약물로 개발되고 있으며 생리학적 과정에 관련되어 있기 때문에 폭넓은 연구 대 상이 되고 있다.^[³²^,3³^]또 한,의약품뿐만 아니라 항곰팡이제, 항세균제 등에도 다양하 게 활용 되고 있다.^[³⁴^-3⁶^]이러한 인체에 무해하며 살균능력을 보인다는 점을 감안할 때 TD 유도체가 유해조류 제어에도 효과가 있을 것이라 판단하였다.따라서 본 연구에서 는 TD 골격을 기반으로 하는 다양한 신규 유도체를 합성하고 유해조류에 접종하여 LC50- 120h 값을 측정해 조류 제어 능력을 평가 했으며 제어능력이 우수한 화합물

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들의 안정성을 평가하기 위해 어독성 테스트와 물벼룩을 이용한 급성생태독성 평가를 시행하였다.

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Ⅱ.재료 및 방법

1.재료

합성을 위하여 사용되어진 모든 화학물질들은 Sigma-Aldrich,TCI,Junsei,Merck사 의 시약을 사용하였으며 수분에 민감한 화합물들은 N₂분위기에서 반응하였다.

각 화합물의 ¹H Nuclearmagneticresonance(이하 NMR)범위는 300MHz,296K 에서 YH 300(Oxford,Japan)을 사용하여 측정하였다.NMR 범위에 사용되는 표준시 료는 CDCl₃또는 DMSO의 TMS를 사용되었다.¹H NMR의 화학적 이동량 (δ 등급)은 partspermillion(ppm,백만 분율)으로 표시하였으며,J-coupling결합상수는 Hz단위 로 측정하였다.

컬럼 크로마토그래피는 혼합물 용리제와 슬러리를 함께 준비하고 컬럼 안에 실리카 겔로 충진 후 사용하였다.시료의 모아진 부분은 얇은 막 크로마토그래피 (ThinLayer Chromatography:TLC)에서 확인하였다.

2.조류

본 실험에 사용된 남조류 (cyanobacteria)인 Microcystisaeruginosa(KMMCC-973) 와 녹조류 (cyanophyceae)인 Anabaena flos-aquae (AG10026), Aphanizomenon flos-aquae (AG40091)는 한국해양미세조류은행(Korea Marine Microalgae Culture Center,KMMCC)과 한국생명공학연구원 미생물자원센터(Korean Collection forType Cultures,KCTC)에서 분양받아 사용하였다.

녹조류 및 녹조류는 pH 7과 pH 9 사이로 조절된 100 mL의 BG-11 Medium (UnipathLtd.wadeRoad,Basingstocke,HantsRG240PW,UK)에서 25℃,50μM photonsm⁻²s⁻¹,12:12cycle(light:dark),정치조건으로 배양되고,20일에 한번 씩 신 선한 배지로 계대 배양(serialtransfer)하였다.

(20)

3.Mi cr opl at eassay

조류 대발생 수준 의 microcystisaeruginosa를 배양액 200μL를 96-wellplate에 준 비하고 합성된 TD종의 화합물을 다양한 농도로 접종하여 최종농도가 각각 0.1,0.2, 0.5,1,2,5,10,100 μM이 되도록 처리하였다.처리조건은 접종 후 microcystis aeruginosa의 최적 배양조건 하에서 5일 동안 배양하며 5일째 되는 날에 10μL를 분 취하여 neubauer hemocytometer (Superior, Germany)에 올리고 CX31 inverted microscope(×400magnification)(Olympus,Japan)하에서 온전한 형태의 조류 세포수 를 계수 하였다.이 때,각 농도별 대조구 대비 세포의 감소율,살조활성(Algicidal activity)은 식 1)을 사용해 계산하였다.

Algicidalactivity(%)=(1－Tt/Ct)×100 1)

이 때 T(처리구)와 C(대조구)는 각각 TD화합물이 접종되었을 때와 접종되지 않았을 때의 조류밀도를 세포수로 표현하며,t는 접종 후 일(day)수를 나타내었다.향후 추가 선별실험을 위해 접종농도 5μM에서 microcystisaeruginosa를 90% 제거할 수 있었 던 TD 유도체를 1차 선발하였다.

본 실험은 3회 반복(triplicate)하여 수행되었으며,결과의 raw data는 평균과 표준편 차(themeanandstandarddeviation)로 표현되었다.

4.Measur ementofLC₅₀ val ue

앞선 실험에서 5μM에서 microcystisaeruginosa의 세포수를 90% 이상 제거할 수 있었던 TD 유도체를 대상으로 microcystisaeruginosa배양액 (1 × 10⁶ cells/mL)이 포함된 96-wellplate에 접종 후 0.1,0.2,0.5,1,2,5,10,100μM의 농도가 되도록 처 리하고 남조 최적 배양조건에서 5일간 정치 배양하였으며 상기에 기술한 방법으로 각 농도 별 대조구 대비 살조활성을 구하였다.TD 유도체가 접종되고 120시간 경과 후 상기조류 세포수를 50% 제어할 수 있는 농도 (LC₅₀ - 120 h)를 standard curve인 fourparameterlogisticcurve를 사용해 sigmaplotversion11.2softerware로 계산하였

(21)

다.

    



^{ }



^





^



   

2)

Y는 화합물 각각의 접종농도에 따른 살조활성 (%)를 나타내며,A는 접종농도에 따 른 최대 살조활성 (%),D는 접종농도에 따른 최소 살조활성 (%),C는 접종농도 범위 내의 LC₅₀-120h 값,B는 – Hillslope(-기울기)값을 의미한다.따라서 상기 식을 사 용해 접종농도 별 살조활성의 LC₅₀ 값을 구하였다.

5.Dani or er i o( Zebr af i sh)독성시험

Daniorerio(zebrafish)는 우리나라를 비롯하여 전 세계적으로 분포하며 국제적으로 신뢰성 있는 표준시험법의 공시어종으로 생태독성평가에 널리 사용되는 생물종이다.

본 실험은 어류를 대상으로 급성생태독성을 평가하여 생태계 내 적용 가능한 최적의 살조물질을 선택하기 위한 목적으로 실험을 수행하였다.

급성독성시험에 사용된 어류 daniorerio(zebrafish)는 유리 및 플라스틱수조의 유 수식 배양 시스템을 이용하여 6,60 L로 각각 나누어 25 ± 1 ℃,pH 7.5 ± 0.2, dissolvedoxygen7∼8mg/L 및 광주기 12:12cycle(light:dark)조건으로 사육하 였으며,먹이로는 colorcharasin을 이틀에 한번 씩 공급하였다.배양수는 수돗물을 일 반 필터로 1차 여과한 후,carbon 필터로 2차 여과하여 순치시킨 후 활성탄으로 탈염 하여 사용하였다.부화 후 3개월 이상 된 2± 1cm 크기의 개체를 이틀간 절식시킨 후 시험을 수행하였다.시험시작 전 14일 동안 0%의 사망률을 확인하고 순응 시킨 뒤, 2± 1cm 크기의 danio rerio (zebra fish)를 선별하여 준비하고 최적의 살조 물질로 선별된 TD 화합물을 농도별로 접종하여 각각 0.5,1,3,5,10,15,20μM이 되도록 하 였으며 시험 기간 동안에는 시험액을 교환하지 않는 지수식 방법 (staticnonrenewal test)으로 진행 하였다.

시험조건은 녹조의 최적 배양조건과 동일하게 설정하여 수행하였으며 24시간 간격으 로 10일 동안 지표생물의 사망률과 기형율 변화를 관찰하였다.

(22)

6.Daphni amagna급성독성 시험

동물플랑크톤 급성독성 시험 생물로는 지표생물로 사용되는 담수산 물벼룩 daphnia magna를 사용하여 실험을 수행하였으며 시험용 daphnia magna는 국립환경과학원으 로부터 분양 받아 실험실에서 6개월 이상 배양하여 시험에 사용하였다.배양은 20℃, 50μM photon m⁻²s⁻¹,12:12cycle(light:dark)조건으로 배양되었으며 먹이로는 단세포 녹조류인 selenastrum capricornutum (KCTC,AG1009)을 공급하였다.실험에 사용되는 daphniamagna는 moderately hard water에서 24시간 동안 폭기시킨 후 사 용하였으며 계대사육한 생후 2주 이상의 물벼룩 암컷 성체를 시험 전날에 준비한 용기 에 옮기고 그 다음날까지 생산한 생후 24시간미만의 어린개체를 사용하였다.최적의 살조 물질로 선별된 TD 화합물을 농도별로 접종하여 각각 0.5,1,2,5,10μM이 되도 록 하였으며 시험 기간 동안에는 시험액을 교환하지 않는 지수식 방법(satic nonrenewaltest)으로 진행 하였다.노출 기간은 48시간으로 노출기간 동안에는 먹이를 공급하지 않았으며 배양수 20mL에 5마리씩 넣고 각 농도별로 4개의 반복 실험구를 두어 실험하였다. 실험조건은 배양조건과 동일하게 진행되었으며, 24, 48 시간에 daphniamagna를 자극한 후 약 15초 후에 관찰하여 일부기관 (촉각,후복부 등)은 움 직이나 유영은 하지 않는 유해저해(immobilization)농도를 반수영향농도(EC₅₀,median effective concentration)으로 나타내었다.(OECD standard peocedure guideline 202, daphnia,acutetoxicitytestmethod2004)

(23)

7.TD 유도체 합성

S

NH O

O R₁

CHO R₁

R₂

R3

R₄

R5

R₂

R3

R₄

R5

S NH O

O

Scheme1.Reagentsandconditions;piperidine,aceticacid,tolueme,80℃,18h

Scheme1은 1- 64까지의 화합물을 합성방법을 도식화 하였으며 구체적인 실험방 법은 1번 화합물에 나타내었다.이후의 실험방법은 모두 동일하므로 생략하였다.

1. 1화합물 ( 1-7) 의 합성

1.1.15-(2-Hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(1)

S

NH O

O CHO

piperidine, acetic acid 2,4-thiazolidinedione

OH OH

Dean-stark trap이 설치된 둥근 플라스크에 2-hydroxybenzaldehyde (1.043 g,8.54 mmol)와 2,4-thiazolidinedion (1 g,8.54 mmol)을 넣고 toluene (20 mL)에 녹인 후 piperidine(0.42mL,4.27mmol),aceticacid(0.18mL,4.27mmol)을 넣어 80℃에서

(24)

18시간 이상 환류시켰다.반응의 진행정도는 TLC로 확인하였으며 반응이 더 이상 진 행되지 않을 경우 반응물은 상온에서 냉각시킨 후 이 때 형성된 침전물을 감압여과로 회수하여 노란색 고체인 화합물 1을 1.67g(88%)얻었다.

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.51(s,1H),δ 10.52(s,1H),δ 8.02(s,1H),δ 7.34(m,2H),δ 6.97(m,2H)

1.1.25-(2-Hydroxy-3-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(2)

S

NH O

O CHO

H₃CO H₃CO

OH OH

Yield:92%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.52(s,1H),δ 9.72(s,1H),δ 8.04(s,1H),δ 7.12(dd,J=6.96and2.58Hz,1H),δ 6.96(m,J=2.58,1H),δ 3.89(s, 3H)

S

NH O

O CHO

OH OH

H₃CO H₃CO

Yield:91%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.38(s,1H),δ 10.64(s,1H),δ 7.97(s,1H),δ 7.27 (d,J=8.79 Hz,1H),δ 6.59 (dd,J=8.79and 2.19 Hz,1H),δ 6.50 (d,2.19 Hz, 1H),δ 3.76(s,3H)

(25)

S

NH O

O CHO

OH OH

OCH₃ OCH₃

Yield:92%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 9.89(s,1H),δ 7.87(s,1H),δ 6.91(m,3H),δ 3.27(s,3H)

S

NH O

O CHO

OH OH

OCH₃ OCH₃

Yield:89%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.22(s,1H),δ 10.56(s,1H),δ 7.92(s,1H),δ 7.27(t,J=8.43Hz,1H),δ 6.54(d,J=8.43Hz,2H),δ 3.19(s,3H)

1.1.65-(2-Hydroxy-3,4-dimethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(6)

(26)

S

NH O

O CHO

OH OH

H₃CO

Yield:81%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.44(s,1H),δ 9.93(s,1H),δ 9.96(s,1H),δ 7.09(d,J=8.79Hz,1H),δ 6.74(d,J=8.79Hz,1H),δ 3.84(s,3H),δ 3.69(s,3H)

1.1.75-(6-Bromo-2-hydroxy-3-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(7)

S

NH O

O CHO

OH OH

H₃CO H₃CO

Br Br

Yield:85

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.45(s,1H),δ 10.26(s,1H),δ 7.69(s,1H),δ 7.16(d,J=8.43Hz,1H),δ 7.01(d,J=8.43Hz,1H),δ 3.83(s,3H)

1. 2화합물 ( 8-11) 의 합성

1.2.15-(3-Hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(8)

(27)

S

NH O

O CHO

HO HO

Yield:87%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.59(s,1H),δ 9.83(s,1H),δ 7.68(s,1H),δ 7.34(t,J=8.04and7.71Hz,1H),δ 7.04(d,J=7.71Hz,1H),δ 6.97(s,1H),δ 6.89 (dd,J=8.04Hz,1H)

1.2.25-(2-Chloro-3-hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(9)

S

NH O

O CHO

Cl Cl

HO HO

Yield:90%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.71(s,1H),δ 10.60(s,1H),δ 7.93(s,1H),δ 7.33(t,J=8.07and7.68Hz,1H),δ 7.09(dd,J=8.07Hz,1H),δ 7.02(d,J=7.68Hz, 1H)

1.2.35-(2-Chloro-3-hydroxy-4-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(10)

S

NH O

O CHO

Cl Cl

HO HO

H₃CO H₃CO

Yield:79%

(28)

1.2.45-(2-Bromo-5-hydroxy-4-methoxy-benzylidene)thiazolidine-2,4-dione(11)

S

NH O

O CHO

H3CO H3CO

Br Br

OH OH

Yield:87%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.64(s,1H),δ 9.91(s,1H),δ 7.81(s,1H),δ 7.32(s,1H),δ 7.03(s,1H),δ 3.84(s,3H)

1. 3화합물 ( 12-21) 의 합성

1.3.15-(4-Hydroxy-benzylidene)thiazolidine-2,4-dione(12)

S

NH O

O CHO

HO HO

Yield:98%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.46(s,1H),δ 10.32(s,1H),δ 7.69(s,1H),δ 7.46(d,J=8.43Hz,2H),δ 6.92(d,J=8.43Hz,2H)

(29)

1.3.25-(4-Hydroxy-2-methoxy-benzylidene)thiazolidine-2,4-dione(13)

S

NH O

O CHO

OCH₃ OCH₃

HO HO

Yield:85%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.36(s,1H),δ 10.38(s,1H),δ 7.92(s,1H),δ 7.26(d,J=8.43Hz,1H),δ 6.54(m,2H),δ 3.83(s,3H)

S

NH O

O CHO

HO HO

H₃CO H₃CO

Yield:87%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.47(s,1H),δ 9.97(s,1H),δ 7.71(s,1H),δ 7.17(d,J=1.83Hz,1H),δ 7.08(dd,J=8.04and1.83Hz,1H),δ 6.93(d,J=8.84Hz, 1H),δ 3.81(s,3H)

1.3.45-(3-Ethoxy-4-hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(15)

S

NH O

O CHO

HO HO

H₃CH₂CO H3CH2CO

(30)

Yield:77%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.46(s,1H),δ 9.88(s,1H),δ 7.69(s,1H),δ 7.15(d,J=1.83Hz,1H),δ 7.07(dd,J=8.43and1.83Hz,1H),δ 6.94(d,J=8.43Hz, 1H),δ 4.10(m,J=6.96Hz,2H),δ 1.37(t,J=6.96Hz,3H)

1.3.55-(4-Hydroxy-3-methylbenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(16)

S

NH O

O CHO

HO HO

H₃C H3C

Yield:76%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.41(s,1H),δ 10.22(s,1H),δ 7.64(s,1H),δ 7.31(s,1H),δ 7.29(dd,J=8.04and2.19Hz,1H),δ 6.93(d,J=8.04Hz,1H),δ 2.15 (s,3H)

1.3.65-(3-Fluoro-4-hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(17)

S

NH O

O CHO

HO HO

F F

Yield:74%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.67(s,1H),δ 10.91(s,1H),δ 7.67(s,1H),δ 7.43(dd,J=1.83Hz,1H),δ 7.27(dd,J=8.79and1.83Hz,1H),δ 7.11(t,J=8.79Hz, 1H)

1.3.75-(3-Chloro-4-hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(18)

(31)

S

NH O

O CHO

HO HO

Cl Cl

Yield:74%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 11.97(s,1H),δ 11.50(s,1H),δ 7.65(s,1H),δ 7.62(d,J=2.22Hz,1H),δ 7.41(d,J=8.43and 2.22Hz,1H),δ 7.11(d,J=8.43Hz, 1H)

1.3.85-(3-Bromo-4-hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(19)

S

NH O

O CHO

HO HO

Br Br

Yield:69%

¹H NMR (300 MHz,DMSO-_) δ 12.54 (s,1H),δ 11.16 (s,1H),δ 7.78 (d, J=2.19 Hz,1H),δ 7.69 (s,1H),δ 7.45 (dd,J=8.79 and 2.19 Hz,1H),δ 7.10 (d, J=8.79Hz,1H)

1.3.95-(4-Hydroxy-3-nitrobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(20)

S

NH O

O CHO

HO HO

O2N O2N

(32)

Yield:74%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.28(s,1H),δ 8.15(d,J=2.19Hz,1H),δ 7.78 (s,1H),δ 7.76(dd,J=8.79,2.19Hz,1H),δ 7.27(dd,J=8.79Hz,1H)

1.3.105-(3-Bromo-4-hydroxy-5-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(21)

S

NH O

O CHO

HO HO

Br Br

OCH₃ OCH₃

Yield:75%

1.3.115-(3-Bromo-5-chloro-4-hydroxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(22)

S

NH O

O CHO

HO HO

Br Br

Cl Cl

Yield:88%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.59(s,1H),δ 11.09(s,1H),δ 7.74(d,J=1.83 Hz,1H),δ 7.69(s,1H),δ 7.63(d,J=1.83Hz,1H)

1. 4화합물 ( 23-28) 의 합성

(33)

1.4.15-(3-Methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(23)

S

NH O

O CHO

H3CO H3CO

Yield:95%

¹H NMR (300MHz,DMSO-)δ 12.64(s,1H),δ 7.77(s,1H),δ 7.48(t,J=8.04 Hz,1H),δ 7.17(m,J=2.55Hz,2H),δ 7.08(dd,J=8.04and2.55Hz,1H),δ 3.80(s, 3H)

1.4.25-(3,5-Dimethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(24)

S

NH O

O CHO

H3CO H3CO

OCH₃ OCH₃

Yield:93%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.64(s,1H),δ 7.72(s,1H),δ 6.75(d,J=1.83 Hz,2H),δ 6.63(t,J=1.83Hz,1H),δ 3.81(s,6H)

1.4.35-(3,4,5-Trimethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(25)

(34)

S

NH O

O CHO

H₃CO H3CO

OCH3 OCH3

H₃CO H₃CO

Yield:97%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.62(s,1H),δ 7.73(s,1H),δ 6.92(s, 2H),δ 3.82(s,6H),δ 3.71(s,3H)

1.4.45-(4-Methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(26)

S

NH O

O CHO

H₃CO H₃CO

Yield:95%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.52(s,1H),δ 7.75(s,1H),δ 7.58(d,J=8.79 Hz,2H),δ 7.11(d,J=8.79Hz,2H),δ 3.82(s,3H)

1.4.55-(4-Ethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(27)

S

NH O

O CHO

H₃CH₂CO H₃CH₂CO

Yield:90%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.50(s,1H),δ 7.74(s,1H),δ 7.56(d,J=8.79 Hz,2H),δ 7.09(d,J=8.79Hz,2H),δ 4.13(m,J=6.60Hz,2H),δ 1.36(t,J=6.60Hz,

(35)

3H)

1.4.65-(4-Propoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(28)

S NH O

O CHO

H₃CH₂CH₂CO H₃CH₂CH₂CO

Yield:92%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.49(s,1H),δ 7.74(s,1H),δ 7.56(d,J=8.76 Hz,2H),δ 7.10(d,J=8.76Hz,2H),δ 4.02(t,J=6.60Hz,2H),δ 1.77(m,J=6.96and 7.35,2H),δ (t,J=7.35Hz,3H)

1. 5화합물 ( 29-57) 의 합성

1.5.15-(4-Methylbenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(29)

S

NH O

O CHO

H₃C H₃C

Yield:98%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.57(s,1H),δ 7.74(s,1H),δ 7.49(d,J=8.40 Hz,2H),δ 7.35(d,J=8.40Hz,2H),δ 2.35(s3H)

1.5.25-(4-Fluorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(30)

(36)

S

NH O

O CHO

F F

Yield:71%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 13.02(s,1H),δ 8.02(m,2H),δ 7.41(m, 2H)

S

NH O

O CHO

F F

Yield:70%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.70(s,1H),δ 7.79(s,1H),δ 7.62(m,J=8.43 Hz,1H),δ 7.47(m,J=8.43Hz,2H),δ 7.36(m,J=8.43)

S

NH O

O CHO

F F

Yield:73%

¹H NMR (300MHz,DMSO- )δ 12.73(s,1H),δ 7.78(s,1H),δ 7.59(m,2H),δ

(37)

7.41(m,2H)

1.5.55-(3,4-Difluorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(33)

S

NH O

O CHO

F

Yield:80%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.69(s,1H),δ 7.78(s,1H),δ 7.75(m, 1H), δ 7.66(m,1H),δ 7.48(m,1H)

1.5.6.5-(2,4-Difluorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(34)

S

NH O

O CHO

F F F F

Yield:80%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.74(s,1H),δ 7.71(s,1H),δ 7.63(m,J=6.60 Hz,1H),δ 7.51(m,J=6.60Hz,1H),δ 7.31(m,1H)

1.5.75-(2,6-Difluorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(35)

(38)

S

NH O

O CHO

F F

Yield:95%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.69(s,1H),δ 7.64(s,1H),δ 7.62(m,J=8.76 Hz,1H),δ 7.29(m,J=8.76Hz,2H),δ 7.08(dd,J=8.04and2.55Hz,1H),δ 3.80(s, 3H)

1.5.85-(3-Chlorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(36)

S

NH O

O CHO

Cl Cl

Yield:95%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.70(s,1H),δ 7.77(s,1H),δ 7.67(s, 1H),δ 7.58(m,3H)

1.5.105-(4-Chlorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(37)

S

NH O

O CHO

Cl Cl

Yield:95%

(39)

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.67(s,1H),δ 7.79(s,1H),δ 7.65(m, 4H)

1.5.115-(3,4-Dichlorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(38)

S

NH O

O CHO

Cl Cl

Yield:81%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.76(s,1H),δ 7.91(d,J=1.83Hz,1H),δ 7.81 (d,J=8.04Hz,2H),δ 7.56(dd,J=8.04and1.83Hz,1H)

1.5.125-(2-Bromobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(39)

S

NH O

O CHO

Br Br

Yield:73%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.77(s,1H),δ 7.87(s,1H),δ 7.82(d,J=7.71 Hz,1H),δ 7.59(m,J=7.71and4.02Hz,2H),δ 7.45(m,J=4.02Hz, 1H)

(40)

S

NH O

O CHO

Br Br

Yield:85%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.71(s,1H),δ 7.82(s,1H),δ 7.78(s, 1H),δ 7.69(d,J=7.68Hz,2H),δ 7.59(d,J=7.68Hz,1H),δ 7.51(t,J=7.68Hz,1H)

S

NH O

O CHO

Br Br

Yield:85%

¹H NMR (300MHz,DMSO-)δ 12.65(s,1H),δ 7.76(s,1H),δ 7.75(m,J=8.79 Hz,2H),δ 7.56(m,J=8.79Hz,2H)

1.5.155-(4-Iodobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(42)

S

NH O

O CHO

I I

Yield:81%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.64(s,1H),δ 7.91(d,J=8.43Hz,2H),δ 7.72 (s,1H),δ 7.38(d,J=8.43Hz,2H)

(41)

1.5.165-(4-Nitrobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(43)

S

NH O

O CHO

O₂N O₂N

Yield:72%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.81(s,1H),δ 8.35(d,J=8.76Hz,2H),δ 7.88 (s,1H),δ 7.86(d,J=8.76Hz,2H)

1.5.175-(4-Dimethylaminobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(44)

S

NH O

O CHO

(H3C)2N (H3C)2N

Yield:79%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.33(s,1H),δ 7.66(s,1H),δ 7.43(d,J=8.79 Hz,2H),δ 6.82(d,J=8.79Hz,2H),δ 3.01(s,6H)

1.5.185-(2-Chloro-4-fluorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(45)

S

NH O

O CHO

F F

Cl Cl

(42)

Yield:91%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.76(s,1H),δ 7.86(s,1H),δ 7.71(dd,J=8.79 and2.55Hz,1H),δ 7.65(m,J=8.79Hz,1H),δ 7.45(m,J=2.55Hz,1H)

1.5.195-(4-Fluoro-3-methylbenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(46)

S

NH O

O CHO

F F

CH₃ CH₃

Yield:99%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.61(s,1H),δ 7.74(s,1H),δ 7.54(m, 2H), δ 7.34(t,1H),δ 2.29(s,3H)

1.5.205-(4-Nitro-2-trifluoromethylbenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(47)

S

NH O

O CHO

F CF3 F CF3

Yield:71%

¹H NMR (300 MHz,DMSO-_)δ 12.82 (s,1H),δ 7.85 (dd,J= 9.15 and 2.55, 1H),δ 7.78(m,2H)

1.5.215-(4-Fluoro-3-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(48)

(43)

S

NH O

O CHO

F F

OCH₃ OCH₃

Yield:70%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.64(s,1H),δ 7.78(s,1H),δ 7.43(m,2H),δ 7.18(m,1H),δ 3.88(s,3H)

1.5.225-(4-Bromo-2-fluorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(49)

S

NH O

O CHO

Br Br

F F

Yield:75%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.77(s,1H),δ 7.79(dd,J=8.43and 1.83Hz, 1H),δ 7.70(s,1H),δ 7.62(dd,1H),δ 7.51(t,J=8.43Hz,1H)

S

NH O

O CHO

Cl Cl

F F

Yield:78%

¹H NMR (300 MHz,DMSO-_) δ 12.75 (s,1H),δ 7.69 (s,1H),δ 7.60 (m,

(44)

J=8.43and1.47Hz,2H),δ 7.43(m,J=8.43and1.47Hz,1H)

1.5.245-(2-Fluoro-5-iodobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(51)

S

NH O

O CHO

F F

I I

Yield:89%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.79(s,1H),δ 7.89(m,J=2.19Hz,1H),δ 7.77 (dd,J=6.96and2.19Hz,1H),δ 7.65(s,1H),δ 7.25(t,J=6.96Hz,1H)

S

NH O

O CHO

F F

Cl Cl

Yield:95%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.73(s,1H),δ 7.78(m,J=8.04,3H),δ 7.45(d, J=8.04Hz,1H)

1.5.265-(3-Fluoro-4-methylbenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(53)

(45)

S

NH O

O CHO

F F

H₃C H₃C

Yield:99%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.74(s,1H),δ 7.75(s,1H),δ 7.48(d,J=8.04 Hz,1H),δ 7.42(m,J=1.47Hz,1H),δ 7.33(dd,J=8.04and1.47Hz, 1H),δ 2.28(s, 3H)

1.5.275-(2-Bromo-4-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(54)

S

NH O

O CHO

Br Br

H₃CO H₃CO

Yield:71%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.58(s,1H),δ 7.84(d,J=1.83,1H),δ 7.73(s, 1H),δ 7.60(dd,J=8.79and1.83Hz,1H),δ 7.28(d,J=8.79Hz,1H),δ 3.91(s,3H)

1.5.285-(2-Bromo-5-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(55)

S

NH O

O CHO

Br Br

OCH₃ OCH₃

Yield:80%

(46)

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.78(s,1H),δ 7.80(s,1H),δ 7.70(dd,J=6.60 Hz,1H),δ 7.04(m,J=6.60Hz,2H),δ 3.80(s,3H)

1.5.295-(3-Chloro-4-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(56)

S

NH O

O CHO

Cl Cl

H₃CO H₃CO

Yield:88%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.60(s,1H),δ 7.74(s,1H),δ 7.71(d,J=2.22 Hz,1H),δ 7.57(dd,J=8.79and2.22Hz,1H),δ 7.33(d,J=8.79Hz, 1H),δ 3.92(s, 3H)

1.5.305-(3-Iodo-4-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(57)

S

NH O

O CHO

I I

H3CO H3CO

Yield:70%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.55(s,1H),δ 8.01(d,J=2.22,1H),δ 7.70(s, 1H),δ 7.61(dd,J=8.79and2.22Hz,1H),δ 7.16(d,J=8.79Hz, 1H),δ 3.89(s,3H)

1. 6화합물 ( 58-64) 의 합성

1.6.15-(3-Chloro-4,5-dimethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(58)

(47)

S

NH O

O CHO

H₃CO H₃CO

H3CO H3CO

Cl Cl

Yield:94%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.67(s,1H),δ 7.73(s,1H),δ 7.27(d,J=1.83 Hz,1H),δ 7.24(d,J=1.83Hz,1H),δ 3.88(s,3H),δ 3.81(s,3H)

1.6.25-(2-Bromo-4,5-dimethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(59)

S

NH O

O CHO

H₃CO H₃CO

H3CO Br H3CO Br

Yield:97%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.68(s,1H),δ 7.82(s,1H),δ 7.35(s, 1H),δ 7.00(s,1H),δ 3.85(s,3H),δ 3.81(s,3H)

1.6.35-(3-Iodo-4,5-dimethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(60)

S

NH O

O CHO

H3CO H3CO

H₃CO H₃CO

I I

(48)

Yield:91%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.65(s,1H),δ 7.71(s,1H),δ 7.56(d,J=2.22 Hz,1H),δ 7.28(d,J=2.22Hz,1H),δ 3.86(s,3H),δ 3.76(s,3H)

1.6.45-(5-Iodo-2,4-dimethoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(61)

S

NH O

O CHO

H₃CO H₃CO

I I

OCH₃ OCH₃

Yield:65%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.53(s,1H),δ 7.80(s,1H),δ 7.67(s, 1H),δ 6.77(s,1H),δ 3.94(s,6H)

1.6.55-(2-Bromo-4-fluoro-5-methoxybenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(62)

S

NH O

O CHO

Br Br

H3CO H3CO

F F

Yield:69%

¹H NMR (300MHz,DMSO-_)δ 12.79(s,1H),δ 7.83(m,2H),δ 7.23(d,J=8.79 Hz,1H),δ 3.90(s,3H)

1.6.65-(3-Chloro-2,6-difluorobenzylidene)thiazolidine-2,4-dione(63)