ADVIA Centaur에 의한 Homocysteine 검사의 평가; 혈청 검사에 대한 적용 가능성 및 혈장과 혈청 분리 전 보관 조건에
따른 영향
서울의과학연구소(SMSI)․서울임상병리검사센터(SCL)
이무주․김용하
Study of Homocysteine Assays on ADVIA Centaur; The Affects of Pre-analytical Sample Storage Conditions, and the Comparison of Results
between EDTA Plasma and Serum Samples.
Lee, Moo Joo., Kim, Young Ha
Seoul Medical Science Institute(SMSI)․Seoul Clinical Laboratories(SCL)
We studied Homocysteine assays on ADVIA Centaur (Bayer Co., USA) to evaluate the usefulness of the assay in the clinical laboratory. In this study we tested how pre-analytical sample storage conditions affect results and compared the differences of results between EDTA plasma and serum samples. We evaluated the usefulness of the Bayer Immunology reagents with the ADVIA Centaur autoanalyzer. Two clinical immunology items were analyzed in this study. EDTA plasma samples from 20 healthy subjects were assayed to set reference ranges of the method and commercialized bi-levels of QC materials (low: 7.2μ mol/L, high: 28.9 μmol/L). Two different concentrations of patient samples (24.7μmol/L and 40.0μmol/L) were used for within and between day precision tests of the assays. The 52 EDTA plasma sample results were used to review correlations with HPLC results. To see the affects of pre-analytical sample storage conditions, the samples of four healthy peoples were collected in EDTA and SST tubes then stored at 4℃
and 18℃ without centrifuging. Homocysteine concentrations were measured after 3 hours, 6 hours, 12 hours, and 24 hours following the collection for both EDTA and SST tube samples. CV values of within run, within day, and between day precision tests were 3.6-3.8%, 3.7-4.8% and 4.0-6.3% respectively. The results display a correlation with the HPLC method (r=0.9780). There is no clinical significance observed in the reference range of plasma and serum samples. The concentrations of homocysteine increased over time for the stored samples without centrifuge and the rate of increase in EDTA plasma is higher than in serum. The concentrations of EDTA plasma samples stored in room temperature without centrifuging are much higher than that of centrifuged EDTA plasma samples stored within 1 hour. The concentrations are 37%, in 3 hours, 50% in 6 hours, 100% in 12 hours, and 150% in 24 hours. This study shows that homocysteine assays on ADVIA Centaur has advantages in measuring concentrations faster and has acceptable precision
임상병리검사과학회지 : 35권 제1호, 52-56, 2003
1)
교신저자 : 이무주, (우)140-809 서울특별시 용산구 동빙고동 7-14 서울의과학연구소 면역팀
Tel : 02-790-6500 E-mail : [email protected]
and good correlations versus the HPLC method. Same reference ranges may be used for both EDTA plasma and serum samples if the serum is separated within one hour from collection. The concentration of homocysteine tends to increase by time after sample collection so it is highly recommended to separate the serum as soon as samples are collected.
Key Words: Homocysteine, HPLC, Precision, Lineality
I. 서 론
호모시스테인(Homocysteine)은 McCully(1969)가 혈장 호모시스테인이 증가된 호모시스테인 뇨증 환자에서 광 범위한 동맥경화를 보고한 이래 많은 연구가 있었으며 최 근에는 관상동맥질환의 위험인자로 대두되고 있다 (Stampfer 등, 1992; Mayer 등, 1996). 혈장 호모시스테인 농도는 나이, 성별, 유전적 요인, 지역적 요인에 따라 차 이가 있으며 고호모시스테인 혈증은 호모시스테인 대사 의 유전적 결함 또는 호모시스테인 대사에 필요한 비타민 보조 인자들(엽산, 비타민 B
12와 비타민 B
6)의 영양결핍, 그 외에 다양한 질병 상태나 약물에 의해 발생되는 것으 로 알려져 있다(Welch와 Loscalzo, 1998). Cystathionine β -synthase의 결함에 의한 호모시스테인 뇨증은 심한 고호 모시스테인 혈증을 유발하며(Mudd 등, 1964), 그 수가 적 지만, MTHFR(methylene tetrahydrofolate reductase)의 변이 를 일으키는 유전질환이나 비타민 부족으로 발생하는 (Frosst 등, 1995) 경한 고호모시스테인 혈증은 일반인의 약 5～7% 정도로 높은 빈도로 관찰되고 있다(Ueland와 Refsum, 1989; Kang 등, 1992; Stampfer 등, 1992). 그러나 유전적으로 효소의 활성이 저하된 경우라도 비타민 보조 인자들을 투여하는 식이 요법으로 호모시스테인을 감소 시킬 수 있으며(Ma 등, 1996; Van Bockxmeer 등, 1997) 이 러한 치료는 관상동맥질환의 고전적인 위험인자로 알려 져 있는 고혈압이나 고지혈증의 치료에 비해 비교적 안전 하고 저렴하면서 관상동맥질환의 위험율을 감소시키고 관상동맥질환으로 인한 사망을 감소시킬 가능성이 제시 되고 있어(Boushey 등, 1995; Stampfer와 Malinow, 1995) 호모시스테인의 측정은 관상동맥 질환의 예방 및 치료에 중요할 것으로 생각된다. 본 실험실에서는 최근 개발된 화학발광면역분석기 ADVIA Centaur(Bayer Co., USA)를 이용한 homocysteine 검사의 유용성 평가와 더불어,
EDTA 혈장 외에도 혈청 검체에 대한 적용가능성 여부를 파악하고, 혈장과 혈청의 분리 전 검체 보관조건에 따른 영향을 평가하고자 하였다.
II. 대상 및 방법
두 농도의 상용화된 정도관리 물질(평균 농도 7.2와 28.9μmol/L)과 두 농도의 혼주 혈청(평균 농도 24.7과 40.0μmol/L)을 이용하여 검사일 내 및 검사일간 정밀도 를 평가하였고, 52건의 EDTA 혈장에 대한 homocysteine 의 참고치를 구하였다. 혈청과 혈청의 분리 시간 및 분리 전 보관 조건에 따른 영향을 평가하기 위하여 건강인 4인 에서 각각 EDTA 및 SST tube에 검체 채취 후 각각 냉장 및 실온에 방치한 뒤, 채혈 후 3시간, 6시간, 12시간 및 24 시간에 원심분리를 실시하여 혈장 및 혈청의 homocys- teine 농도를 검사하였다.
III. 결 과
1. 정밀도(Precision) 평가
Within run(n=20), Within day(n=10) 및 Between Day
Within run(n=20) Within day(n=10) Between day(n=40) Mean±SD CV(%) Mean±SD CV(%) Mean±SD CV(%)
Low Level High Level
6.83±0.24 27.19±1.05
3.6 3.8
6.54±0.24 26.29±1.30
3.7 4.8
7.16±0.45 28.94±1.17
6.3 4.0 Table 1. Within-run, Within-day and Between-day Precision by
CLIA*
* CLIA : Chemiluminescence immunoassay
(n=40)의 정밀도 평가에서 변이계수(CV%)는 3.6～3.8%, 3.7～4.8% 및 4.0～6.3%을 나타내었다(Table 1).
2. 건강 성인의 혈장과 혈청의 정상 참고치(Normal range) 검증
건강 성인의 혈장 참고치는 3.24-16.96μmol/L을 나타 내었고, 건강 성인의 혈청 참고치는 3.54-16.98μmol/L 을 보였다. 혈청 Homocysteine 검사의 참고범위와 혈장 검체 간 결과에 대해 유의한 차이를 보이지 않았다. 그러나 자 체 내 참고치는 Insert 참고치와 비교해 약간 높게 나타났 다(Table 2).
Specimen type Reference range(n=40) 혈청(자체 참고치 검증)
혈장(자체 참고치 검증) Serum & Plasma(Insert 참고치)
3.54-16.98μmol/L 3.24-16.96μmol/L 5.00-13.90μmol/L
Table 2. Reference range of plasma and serum homocysteine specimens
3. 직선성(Linearity) 평가
검사 종목에 대한 직선성 평가에서 결정계수(r
2)가 0.9970으로 매우 우수하였다(P<0.001)(Fig. 1).
Fig. 1. Linearity of homocysteine by CLIA.
4. 혈장과 혈청 분리 전 보관 조건 및 시간에 따른 결 과 변이와 검체 종류에 따른 결과 비교
혈장과 혈청을 원심분리 하지 않고 실온 및 냉장 온도 에서 방치 할 경우 시간이 경과함에 따라 SST 및 EDTA 튜브에 채혈된 검체 모두 homocysteine 농도가 지속적으 로 상승하였고, 그 상승정도는 혈청에 비하여 EDTA 혈장
보관 조건 실온 3hrs 6hrs 12hrs 24hrs
검체 종류
EDTA 결과 14.53 18.27 21.48 26.74 SST 결과 14.22 15.64 19.11 23.96
보관 조건 냉장 3hrs 6hrs 12hrs 24hrs
검체 종류 EDTA 결과 8.20 6.19 7.39 8.78 SST 결과 7.43 7.27 7.34 8.59 Table 3. The affects of pre-analytical sample storage conditions,
and the comparison of results between EDTA plasma and serum samples
Fig. 2. The affects of pre-analytical sample storage conditions, and the comparison of results between EDTA plasma and serum samples.
이 다소 큰 것으로 나타났다. 실온 상태에서 방치된 경우 EDTA 혈장의 경우 검체 채취 후 1시간 이내에 원심분리 를 실시하여 분리된 혈장에 비해 3시간에는 37%, 6시간 에는 50%, 12시간에는 100%, 24시간에는 150%까지 homocysteine 농도가 증가하였다(Table 3, Fig. 2).
5. 기존시약과의 상관성(Comparision study) 평가
Bayer 시약과 기존의 HPLC 방법간에 상관관계 평가에서 각 검사 항목에서 상관계수는 0.9780으로 우수 한 상관계수를 보였다(P<0.001)(Fig. 3).
Fig. 3. Correlation between HPLC and CLIA for homocysteine.
assay.
