총대장균군– 그람염색/현미경검경(2주차) (ES 05703.1a)
김 재 건 교수
그람염색
목차
1. 개요
1.1 목적
1.2 적용범위 2. 용어정의
3. 분석기기 및 기구 4. 분석절차
4.1 표본제작 4.2 그람염색 5. 결과보고
그람염색
1.1 목적
그람염색 - 1. 개요
1.2 적용범위
• 먹는물, 샘물 및 염지하수에 존재하는 총대장균군을
분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함
• 먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙 제2조의
규정에 의한 먹는물의 수질기준에 규정된 먹는물, 샘물 및
염지하수의 수질검사에 적용
2. 용어정의
• 그람염색
: - 1884년 덴마크의 Christian Gram에 의해 고안된 감별염색법 - 단염색법에서 관찰 가능한 균의 크기, 형태, 배열상태 구분가능 - 그람음성 ∙그람양성 으로 구분
그람염색 – 2. 용어정의
1. Crystal violet : 1차 염색
2. Gram’s iodine : 매염제 - Crystal violet와 결합, 염색능력을 향상시킴 3. 95% Alcohol : 염색액 탈색 – 그람양성 : 탈색 X / 그람음성 : 탈색 O 4. Safranin : 대조 염색
3. 분석기기 및 기구
그람염색 – 3. 분석기기 및 기구
4.1 표본제작
1. 세균 배양액을 부유시킴
2. 백금이를 화염멸균함
3. 마개를 열고
시험관 입구 멸균
4. 균을 취함
그람염색 – 4. 분석절차
5. 시험관 입구 멸균함
6. 마개를 닫음
7. 지름 1.0~1.5㎝
로 도말
8. 백금이를 멸균함
4.1 표본제작
그람염색 – 4. 분석절차
1. Crystal violet으로
60초간염색 – 1차염색 2. 수세 3. Gram’s iodine 으로 60초간 처리
4.2 그람염색
그람염색 – 4. 분석절차
4. 수세 5. 95% Alcohol로
10~20초간 탈색 6. 수세
4.2 그람염색
그람염색 – 4. 분석절차
7. Safranin으로 45초간 염색 - 대조염색
8. 수세 9. 건조
4.2 그람염색
그람염색 – 4. 분석절차
5. 결과보고
• 그람양성인 경우 : 보라색, 청색, 자주색 계통 (탈색 X)
• 그람음성인 경우 : 붉은색, 핑크색 계통 (탈색 O)
그람염색 – 5. 결과보고
현미경검경
목차
1. 개요
1.1 목적
1.2 적용범위 2. 용어정의
3. 분석기기 및 기구 4. 분석절차
5. 결과보고
현미경검경
1.1 목적
현미경검경 - 1. 개요
1.2 적용범위
• 먹는물, 샘물 및 염지하수에 존재하는 총대장균군을
분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해 필요한 제반사항에 대하여 규정함
• 먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙 제2조의
규정에 의한 먹는물의 수질기준에 규정된 먹는물, 샘물 및
염지하수의 수질검사에 적용
• 현미경검경
: - 확대 관찰
(미생물의 크기가 작아 눈으로 관찰하기 힘들기 때문) - 종류에 따라 해상능과 사용 목적이 다름
2. 용어정의
현미경검경 – 2. 용어정의
• 광학현미경
3. 분석기기 및 기구
현미경검경 – 3. 분석기기 및 기구
① 수평하며 진동이 없는 실험테이블에 현미경 준비하여 전원을 연결시키고 광원 켜기
② 재물대 중앙에 clip을 당겨 슬라이드 글라스를 고정시킨 후 대물렌즈의 저배율부터 초점 조정
4. 분석절차
현미경검경 – 4. 분석절차
③ 현미경 옆면에 조동나사를 이용하여 대물렌즈와
표본(슬라이드글라스)의 거리조절 후 미동나사로 정확하게 초점을 맞추기
※ 최상의 조건을 위하여 조리개와 집광기를 조절하여 관찰
④ 대안렌즈의 경우 관찰자의 눈 간격과 같게 조절
4. 분석절차
현미경검경 – 4. 분석절차
⑤ 관찰 후 재물대를 아래로 내린 후 조리개 조절 및
광원 전원을 끄고 현미경 정리(현미경 커버를 씌워 제자리에)
⑥ 현미경 검경 후 판정(그람음성, 단간균) - 핑크색, 붉은색 계통 - 그람음성
- 청색, 보라색, 자주색 계통 - 그람양성 판정
4. 분석절차
현미경검경 – 4. 분석절차
• 그람양성인 경우 : 보라색, 청색, 자주색 계통 (탈색 X)
• 그람음성인 경우 : 붉은색, 핑크색 계통 (탈색 O)
5. 결과보고
현미경검경 – 5. 결과보고
