Malus huphensis, Ophiorrhiza cantonensis, Psychotria rubra 에탄올 추출물의 항산화 및 항염증 활성
진경숙1, 권현주1,2, 김병우1,2*
1동의대학교블루바이오소재개발및실용화지원센터
2동의대학교생명응용학과
Received: April 28, 2014 / Revised: August 6, 2014 / Accepted: August 12, 2014
서 론
활성산소종
(Reactive Oxygen Species, ROS)
은호흡을통 해체내로유입된산소에의해생체대사과정에서끊임없이 발생하게되며산화적스트레스(oxidative stress)
를유발하 여세포손상을일으킬뿐아니라,
염증유발인자를활성화 시킴으로써세포및조직에염증을초래한다[9, 24].
이러한 산화적스트레스는다양한질병의원인이되며,
노화를일으키는직
·
간접적원인물질로작용한다[14, 24].
그러므로세포 는항상적정수준의항산화물질의보호를필요로하며,
인 체에발생하는수많은질병에대응하기위해서는강한항산 화능을보유한생리활성소재의개발이매우중요하다[17, 18, 26].
대표적인
cellular defensive phase 2 detoxifying anti- oxidant enzyme
으로알려진heme oxygenase (HO)-1
의유 도는산화적스트레스를방어하는중요한기전중하나로car-
cinogen
등의외부자극으로부터세포를보호하는chemo-
prevention
에서중요한역할을한다[5, 35].
특히천연유래 의 다양한dietary phytochemical
은nuclear factor E2- related factor 2 (Nrf2)
에의해조절되는phase 2 detoxify- ing antioxidant enzyme
의발현증가를통해chemopreven- Anti-Oxidative and Anti-Inflammatory Effects of Malus huphensis, Ophiorrhiza cantonensis, and Psychotria rubra Ethanol Extracts
Kyong-Suk Jin
1, Hyun Ju Kwon
1,2, and Byung Woo Kim
1,2*
1
Blue-Bio Industry Regional Innovation Center,
2Department of Life Science and Biotechnology, College of Natural Science, Dong-Eui University, Busan 614-714, Republic of Korea
This study was orchestrated with the purpose of uncovering new nutraceutical resources possessing biological activities in the plant kingdom. To fulfill our objective, we analyzed several Chinese plants and selected three possessing powerful anti-oxida- tive activities. The anti-oxidative and anti-inflammatory effects these three Chinese plants, Malus hupehensis, Ophiorrhiza can- tonensis, and Psychotria rubra ethanol extracts were then evaluated. First of all, they possessed potent scavenging activity against 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl, similar with that of ascorbic acid, used as a positive control. Moreover, they inhibited lipo- polysaccharide (LPS)- and hydrogen peroxide-induced reactive oxygen species, in a dose-dependent manner, in RAW 264.7 cells. Also, they induced the expression of an anti-oxidative enzyme, heme oxygenase 1, and its upstream transcription factor, nuclear factor-E2-related factor 2. Furthermore, they suppressed LPS-induced nitric oxide (NO) formation, without cytotoxicity.
The inhibition of NO formation was the result of the down regulation of inducible NO synthase (iNOS). The suppression of NO and iNOS by the three extracts might be the result of modulation by the upstream transcription factors, nuclear factor κB and activator protein-1. Taken together, these results indicate that these three Chinese plants possess potent anti-oxidative and anti-inflammatory activities. Therefore, they might be utilized as promising materials in the field of nutraceuticals.
Keywords: Three Chinese plants, anti-oxidative activity, anti-inflammatory activity, upstream transcription factors
*Corresponding author
Tel: +82-51-890-2900, Fax: +82-51-890-2914 E-mail: bwkim@deu.ac.kr
© 2014, The Korean Society for Microbiology and Biotechnology
tive function
을 나타낸다[19].
이러한chemoprevention
은 항산화활성을기초로하여암,
염증,
뇌및심혈관계질환,
노화등의예방및치료기전과도상호작용하는것으로알 려지고있어그중요성이매우크다[3, 15, 27, 33].
염증은외부자극에대한생체조직의방어기전중하나이 나지속적인염증반응의발생은조직의손상을일으켜암
을비롯한각종질병을유발한다
[4, 7].
생체내염증반응은대식세포
(macrophage)
에서 과량생산되는염증 매개인자(inflammatory mediators)
로부터유래되며,
이러한염증매 개인자로는inducible nitric oxide synthase (iNOS)
에의해 생산되는nitric oxide (NO)
와cyclooxygenase 2 (COX-2)
로 부터생산되는prostaglandin E2 (PGE2)
등이알려져있다.
이러한 염증 매개인자는tumor necrosis factor
α, inter-
leukin 1
β등과같은사이토카인의생산을유도하여염증반응을일으킨다
[15, 16].
염증반응의대표적인세포실험계중하나인
RAW 264.7 murine macrophage
에염증유발인 자인lipopolysaccharide (LPS)
를처리하면iNOS
및COX-2
의발현유도에의해
NO
와PGE2
등의염증매개인자가과량생성되며이는사이토카인분비량증가를유도한다
.
이러 한일련의반응은염증상위신호전달기전인nuclear factor (NF)-
κB
와activator protein (AP)-1
에의해조절되는것으로알려져있다
[21, 28].
그러므로염증매개인자와그상위신호전달기전을효과적으로제어할수있는물질의개발에 많은연구가집중되고있다
.
이에본연구에서는천연에서유래한항산화및항염증생 리활성보유신소재개발의일환으로중국자생식물백종의 생리활성을분석하여그중높은항산화능을보이는
3
종의 식물,
즉Malus hupehensis, Ophiorrhiza cantonensis,
그 리고Psychotria rubra
를선별하였다. M. hupehensis
는장미과
(Rosaceae)
에속하는낙엽수로일본및타이완을원산지로하며
,
동아시아지역에널리분포한다.
일반적인높이는 약7 m
이고,
개화시기는4-5
월이며, 10
월에씨를맺는다.
열 매는식용가능하며,
일반적으로는차의형태로복용한다.
열 매가약용으로알려져있으나구체적인효능에대해서는알 려진바가없다. O. cantonensis
는꼭두서니과(Rubiaceae)
에속하는아관목으로일반적으로Rubiaceae
과의식물이아 시아전역에널리분포하는데반해O. cantonensis
는중국에만분포하는것으로알려져있다
.
일반적인높이는1-2 m
이고
,
겨울과봄사이에개화하며,
봄에서여름사이에씨를맺 는다.
잎이식용가능한것으로알려져있으나구체적인효능 에대해서는알려진바가없다. P. rubra
또한Rubiaceae
에 속하는하부층관목으로동아시아지역,
특히중국,
일본및타 이완에분포한다.
일반적인높이는0.5-3 m
이고,
개화시기는4-11
월이며, 7-12
월사이에열매를맺는다. P. rubra
의식용및약용에대해서는알려진바가없으며
,
특히상기세소재 의항산화및항염증효과에대해서는전혀알려진바없다.
이에본연구에서는M. hupehensis, O. cantonensis,
그리고P. rubra
의95%
에탄올 추출물(
이하MHEE, OCEE,
PREE)
이보유한항산화및항염증활성을분석함으로써각소재의기능성자원으로서의활용가능성을확인해보고자 하였다
.
재료 및 방법
추출물의 제조
본연구에서사용한
M. hupehensis, O. cantonensis,
그 리고P. rubra
의95%
에탄올추출물(
이하MHEE, OCEE,
PREE)
은한국생명공학연구원,
해외생물소재허브센터에서구입
(
분양번호FBM123-027, 077, 100)
하여사용하였으며추출과정은 다음과같다
. MHEE
와PREE
는줄기부위를
, OCEE
는 줄기를 포함한전초를 건조하여 분쇄하고,
95%
에탄올을용매로하여45
oC
에서3
일간추출을수행하였 다.
추출이끝난시료를filter
로여과하여고형물을없애고감 압농축(N-1000SW, EYELA, Japan)
및동결건조(FDU2100, EYELA, Japan)
하여사용전까지4
oC
에보관하였다.
DPPH radical 소거능 측정을 통한 항산화능 분석각추출물의항산화능보유유무및그정도를알아보기 위해항산화능의주요지표로활용되고있는
1,1-diphenyl- 2-picryl hydrazyl (DPPH) radical
소거능분석을수행하였 다[6]. DPPH
는 비교적 안정한free radical
로써, ascorbic acid, tocopherol, polyhydroxy
방향족화합물,
방향족아민 류등에의해환원되어짙은자색이탈색되며이러한원리 를이용하여항산화활성을간단히측정할수있는동시에 식물체의항산화활성과도연관성이매우높기때문에많이 이용되고있다[13].
DPPH radical
소거능 측정을 위해 각 시료를 농도별(0.512-12.8
μg/ml)
로메탄올에녹여준비하고96 well plate
에 메탄올에용해된1.5 × 10
−4M DPPH 40
μl
와각 시료160
μl
를 분주한 혼합액을 실온에서30
분간 반응시킨 후,
multi-plate reader (Paradigm, Beckman, CA, USA)
를이용하여
520 nm
에서흡광도를측정하였다.
시료를첨가하지않은음성대조군과대비하여
free radical
소거정도를백분 율로 나타내고, 50%
저해 농도(Inhibitory Concentration,
IC
50)
를계산하였다.
대표적인항산화제로DPPH radical
소 거능측정시양성대조군으로주로사용되는ascorbic acid
를함께비교분석하였으며측정값은3
회반복실험의평균 값으로나타내었다.
RAW 264.7 murine macrophage의 배양
항산화 및 항염증 활성의 세포 실험 모델계로
murine
macrophage cell line
인RAW 264.7
을American Type Tissue Collection (ATCC
®, TIB-71
TM, Manassas, VA, USA)
로부터 구입하여10% fetal bovine serum (FBS)
및penicillin/streptomycin (Pen/Strep)
이포함된DMEM
배지 에서배양하였다[23].
세포생존율 분석
활성분석수행전시료가세포생존율에미치는영향을확 인하고
,
세포독성을유발하지않는시료의처리농도를결 정하기위해각추출물에의한세포독성유발유무를WST assay
를 통해 수행하였다. 1.0
×10
5cell
을24-well tissue culture plate
에분주하여24
시간동안부착시키고,
농도별시료처리
24
시간경과후WST
시약이든배지로교체하여한시간동안반응시킨다음
multi-plate reader
를이용하여450 nm
에서흡광도를측정하였다.
측정값은3
회반복실험의평균값으로나타내었으며독성을유발하지않는농도범 위에서이후실험을수행하였다
.
Reactive oxygen species (ROS) 소거능 분석
ROS
는과량생산시핵산,
단백질,
지질등의생체내고 분자에산화적스트레스를유발하여다양한질병의원인이 되므로이러한ROS
의소거능은항산화력의중요한지표가 된다[20]. Hydrogen peroxide (H
2O
2)
는 대표적인ROS
중 하나로소재의항산화능을규명하기위한많은연구에서ROS
유도제로사용되고있다[29, 31, 34].
또한그람음성박테리 아의세포외벽구성인자인lipopolysaccharide (LPS)
는대 표적인염증유발인자로산화적스트레스또한유발하는것 으로알려져있어항산화능및항염증활성을규명하기위한많은연구에서스트레스유도제로사용되고있다
[1, 22].
본연구에서는각소재가보유한항산화능을
H
2O
2및LPS
로유도한
ROS
생성에시료가미치는영향을통해분석하였다
.
이를위해RAW 264.7 cell
에cell permeable fluorescent dye
인50
μM
의dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)
를2
시간동안전처리한후제거하고500
μM
의H
2O
2혹은1
μg/ml
의LPS
를농도별시료와함께처리한후시료에의한ROS
생성억제능을multiplate reader
를이용한fluorescence
측정을통해분석하였다.
측정값은3
회반복실험의평균값 으로나타내었다.
항산화 효소 HO-1 및 상위전사인자 Nrf2의 발현 조절능 분석 각소재의항산화활성기전을알아보기위해대표적인항
산화효소인
HO-1
과그상위전사인자인Nrf2
의시료처리에의한단백질발현변화를
Western blot hybridization
으로분석하였다
. HO-1
의 일차항체는Cell Signaling Technology (MA, USA)
로부터구입하였고, Nrf2
그리고Actin
의일차항 체와anti-goat, anti-rabbit
등의 이차항체는Santa Cruz Biotechnology (CA, USA)
에서구입하여사용하였다.
시료처리가 끝난 배양 세포에서 단백질을추출하여
Bradford
assay
로 단백질농도를 결정한후50
μg
의단백질을10%
sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
로전기영동하고nitrocellulose membrane
에blotting
한후1:1,000
으로희석한대상단백질의일차항체 와hybridization
하였다. Membrane
수세 후horse radish peroxidase (HRP)
가부착된이차항체(1:1,000)
로한시간동 안반응시키고chemiluminescence detection system (Fluo- Chem
®FC2, AlphaInnotech, USA)
을이용하여단백질발 현을분석하였다.
실험의결과는3
회반복실험을통해유의 적인단백질발현변화를확인한후대표적인데이터를제 시하였다.
NO 생성 억제능 분석
대표적인
free radical
중하나인NO
는중요한세포신호 전달물질로서작용하나과잉생산시산화적스트레스의유발 을통해염증및세포손상의원인이된다[12].
이러한NO
생 성억제능의분석은Park
등[23]
의방법을변형하여다음과같 이 수행하였다. RAW 264.7 cell
을24-well tissue culture plate
에well
당1.0
×10
5cell
을분주하여부착시킨후1
μg/
ml
의LPS
를처리하여NO
생성을유도하고식물추출물에의한
NO
생성저해능을Griess reaction
을통해분석하였으 며측정값은3
회반복실험의평균값으로나타내었다.
항염증 활성 기전 분석
각소재가보유한
NO
생성억제능의기전을밝히기위해NO
생성유전자인iNOS
의단백질발현을분석하였다.
또한각추출물에의한
NO
생성및iNOS
의발현저해능이NF-
κB
및AP-1
에의해조절될가능성을알아보기위해LPS
로 유도된NF-
κB p65
와inhibitory
κB
α(I
κB
α),
그리고AP-1
의subunit
인c-Jun
의인산화에각추출물이미치는영향을 분석하였다. Western blot hybridization
을위한iNOS, p- p65, p-I
κB
α,
그리고p-c-Jun
의일차항체는Cell Signaling Technology (MA, USA)
로부터구입하여사용하였다.
시료처리가 끝난 배양 세포에서 단백질을추출하여
Bradford
assay
로 단백질농도를 결정한후50
μg
의단백질을10%
SDS-PAGE
로 전기영동하고nitrocellulose membrane
에blotting
한후대상단백질의항체와hybridization
하였다.
Membrane
수세후HRP
가tagging
된이차항체로한시간 동안 반응시키고chemiluminescence detection system
을 이용하여단백질발현을분석하였다.
실험의결과는3
회반복실험을통해유의적인단백질발현변화를확인한후대 표적인데이터를제시하였다
.
통계 분석
실험의결과는평균
(mean)
± 표준편차(standard deviation, SD)
로 나타내었고,
각 데이터의 통계 분석은SPSS 20.0 software
를이용한unpaired Student’s t-test
를통해p
값 이0.05
미만( p < 0.05)
인경우유의성이있는것으로판단하 였다.
결과 및 고찰
추출물의 항산화능 분석
3
종소재의항산화능보유유무및그정도를알아보기위해먼저항산화능의주요지표중하나인
DPPH radical
소 거능을분석하였다.
그결과Table 1
에 제시된바와 같이MHEE, OCEE,
그리고PREE
모두농도증가에따른강한radical
소거능을 보여12.8
μg/ml
의 시료 처리에 의해DPPH radical
소거능이각각97.32, 95.42, 95.01%
로나타 나양성대조군으로 사용한ascrobic acid,
즉vitamin C
의97.49%
와유사한정도의활성을보여매우강한항산화능을보유함을확인하였다
.
각소재의DPPH radical
에대한50%
소거농도를나타내는
IC
50값은MHEE, OCEE, PREE
가 각각1.10, 1.49, 1.38
μg/ml
으로나타났다.
이에각소재가 보유한항산화능의정도및기전을세포수준에서확인하고 자하였다.
추출물의 ROS 소거능 분석
DPPH radical
소거능분석에의해각소재가보유한높은항산화능이확인됨에따라그작용기전을좀더자세히
알아보기위해먼저
RAW 264.7 cell
에대표적인산화적스트레스유도인자인
H
2O
2와LPS
를각각처리하여각소재의ROS
소거능을분석하였다.
그결과Fig. 1
과Fig. 2
에제시 한바와같이H
2O
2와LPS
에의해각각유도된ROS
생성이 소재의농도별처리에의해효과적으로저해되는것으로나타나세소재가
DPPH radical
뿐만아니라세포수준에서H
2O
2와LPS
에의해유도된산화적스트레스또한효과적으 로감소시킴을확인하였다.
Table 1. DPPH radical scavenging activity of MHEE, OCEE, and PREE.
Reagent Concentration ( µg/ml)
Inhibition rate (%)
MHEE 10.512 38.10 ± 0.19
12.56 79.86 ± 0.37
*12.8 97.32 ± 0.29
*OCEE 10.512
12.56 12.8
33.58 ± 0.27 67.84 ± 0.46
*95.42 ± 0.25
*PREE 10.512
12.56 12.8
33.14 ± 0.23 73.13 ± 0.62
*95.01 ± 0.10
*Ascorbic acid
(Positive control)
10.512 30.10 ± 0.15 12.56
12.8
96.68 ± 0.18
*97.49 ± 0.06
**Significantly different from the inhibition rate of each reagent’s first concentration, 0.512 µg/ml (p < 0.05).
Fig. 1. Effect of MHEE (A), OCEE (B), and PREE (C) on H
2O
2-
induced ROS scavenging activity in RAW 264.7 cells. Values
are represented as the mean ± SD (n = 6). *, #Significantly different
from the vehicle control [Con (−)] and H
2O
2-induced control [Con
(+)], respectively (p < 0.05).
각 추출물이 항산화 효소 HO-1 및 상위 전사인자 Nrf2의 발현에 미치는 영향
강한항산화능을보유한천연소재들이
Nrf2
에의한항산 화효소계의발현유도를통해활성을나타낸다는것이여 러연구를통해밝혀짐에따라각소재가보유한항산화능 의작용기작을알아보고자하였다[11, 27].
이를위해각소재가대표적인항산화효소인
HO-1
과그상위전사인자인Nrf2
의단백질발현에미치는영향을분석하였다.
그결과Fig. 3
에제시된바와같이10-50
μg/ml
의시료처리에의해HO-1
및상위전사인자인Nrf2
의단백질발현이증가되는Fig. 2. Effect of MHEE (A), OCEE (B), and PREE (C) on LPS- induced ROS scavenging activity in RAW 264.7 cells. Values are represented as the mean ± SD (n = 6). *, #Significantly different from the vehicle control [Con ( −)] and LPS-induced control [Con (+)], respectively (p < 0.05).
Fig. 3. Modulation of an anti-oxidative enzyme, HO-1, and its
upstream transcription factor, Nrf2 protein expression in RAW
264.7 cells by MHEE (A), OCEE (B), and PREE (C). Actin was
used as an internal control. *Significantly different from the vehicle
control (0) (p < 0.05).
것으로나타나각소재에의한
HO-1
의발현유도가Nrf2
의 발현증가에서기인할것으로판단되었다[2, 5].
추출물의 세포생존율 및 항염증 활성 분석
각소재가보유한항염증활성을알아보기전추출물이
RAW 264.7
세포생존율에미치는영향을살펴보았다.
그결과
Fig. 4
에제시한바와같이세추출물모두100
μg/ml
까 지의처리에서심한세포독성을유발하지않는것을확인 하였으며이후실험의농도를100
μg/ml
까지로결정하여수 행하였다.
항염증활성의확인을위해각소재의
NO
생성억제능을 분석하였다. LPS
로 자극을 유도한 쥐 대식세포주RAW 264.7 cell
에서농도별각시료의처리에따른NO
생성양의변화를분석한결과
Fig. 5
에제시된바와같이세시료모두
10-100
μg/ml
의시료처리에의해농도의존적인NO
생성저해능을보였으며이는
NO
생성단백질인iNOS
의발현저해에서기인하는것으로나타났다
(Fig. 6).
이러한결과를통해세소재가항산화능뿐만아니라항염증활성또한 보유함을확인하였다
.
Fig. 4. Effect of MHEE (A), OCEE (B), and PREE (C) on the via- bility of RAW 264.7 cells. Values are represented as the mean ± SD (n = 3). *Significantly different from the LPS-induced control [Con (+)] (p < 0.05).
Fig. 5. Modulation of LPS-induced NO formation in RAW 264.7
cells by MHEE (A), OCEE (B), and PREE (C). Values are repre-
sented as the mean ± SD (n = 3). *, #Significantly different from the
vehicle control [Con, LPS ( −)] and LPS-induced control [Con, LPS
(+)], respectively (p < 0.05).
추출물의 항염증 활성 상위신호전달기전 분석
각추출물이
iNOS
의발현저해를통한NO
생성억제능을보임에따라항염증활성의상위신호전달기전인
NF-
κB
와
AP-1
의연관성을알아보기위해추출물의처리가LPS
에의해 유도된
NF-
κB p65
와I
κB
α,
그리고AP-1
의subunit
중하나인
c-Jun
의인산화에미치는영향을분석하였다.
그결과
Fig. 7
에제시된바와같이2
시간동안의LPS
처리에 의해유도된세전사인자의인산화가시료농도의증가에따 라유의적으로억제되는것으로나타났다.
이러한결과는각 소재가보유한항염증활성이NF-
κB
및AP-1
과같은상위 신호전달인자들의일련의조절기작을통해이루어질가능 성을시사하였다.
이러한결과를통해중국자생식물인
M. hupehensis, O.
cantonensis,
그리고P. rubra
의에탄올추출물이항산화능과 항염증활성을보유함을확인하였다.
이러한결과는기능성 에대한보고가거의없는상기의소재에대한생리활성을처 음으로규명한것으로신규소재에대한새로운기능성데이 터를구축함과동시에향후생리활성보유기능성소재로서 의활용을위한근거자료로사용될수있을것으로판단된다.
M. hupehensis
호북꽃사과나무로불리는데열매인꽃사과는과당
,
포도당,
주석산,
비타민C
등의함유하고,
한방에 서는소화불량,
식욕부진,
위산분비조절등위장관계관련질 환에이용되며,
민간에서는고기를부드럽게하는연육제로,
과즙은숙취해소에사용된다.
보고된바로는M. hupehensis
잎의polyphenol
과flavonoid
가doxorubicin
으로유도한심 장세포사멸에대한보호효과를나타내며,
동물모델에서 기생충으로유도한간섬유증의억제효과를보유하는것으로 밝혀졌다[30, 32].
규명된M. hupehensis
의활성성분으로는 잎으로부터 분리한12
종의flavonoid
와3
종의biflavonoid
glycoside
가있으며이중에는강한항산화능을보유하는것으로알려진
quercetin
을포함하였다[30].
또한M. hupehensis
의
flavon
조성을분석한결과,
사과나무껍질등에서주로채취하는배당체인
phlorizin
이약1.6%
함유되어있는것으 로나타났다[8]. Phlorizin
은포도당수용체인SGLT-2
의억 제제로작용하여당뇨병치료제개발의기초물질로활용되 고있다[25].
본연구에서사용한M. hupehensis
줄기부위 에대해서는기능성및활성성분에대한보고는전무하다.
다만상기의연구결과에서보고된활성성분이줄기부위 에도함유되어있을가능성이있다고판단되며,
그중대부 분이항산화와함염증활성을보유할것으로생각되어이에 대한분석이필요할것으로사료된다. O. cantonensis
의기능성에대해보고된문헌은현재까지없으며
, P. rubra
의기능성또한에탄올추출물에서분리된신종
naphthoquinone
인psychorubrin
의항암활성에대한보고가유일하다[10].
이 에추후계속적인연구를통해상기세소재가보유한항산Fig. 6. Modulation of LPS-induced iNOS protein expression in
RAW 264.7 cells by MHEE (A), OCEE (B), and PREE (C). Actin
was used as an internal control. *, #Significantly different from the
vehicle control [Con ( −)] and LPS-induced control [Con (+)], respec-
tively (p < 0.05).
화및항염증활성의작용물질및그작용기작의세부적인 규명이필요할것으로판단된다
.
요 약
본연구에서는식물자원으로부터생리활성을보유한새로 운기능성소재를찾고자하였다
.
이를위해수종의중국자 생 식물을 분석하여 강한 항산화능을 보유한3
종( Malus hupehensis, Ophiorrhiza cantonensis,
그리고Psychotria
rubra)
을선별하고,
각추출물의항산화능과항염증생리활성을 분석하였다
.
먼저 각 추출물의 항산화능을DPPH
radical
소거능을통해분석한결과모두양성대조군으로사용한
ascorbic acid
와유사한정도의높은활성을보여각소 재가매우강한항산화능을보유함을확인하였다.
또한RAW
264.7
세포주에서H
2O
2 및LPS
에의해유도된ROS
에대한 각추출물의소거능을분석한결과에서도농도의존적인강 한소거능을보였다.
뿐만아니라대표적인항산화효소중 하나로항산화능보유천연물에의해발현이유도되는HO-
1
및그전사인자인Nrf-2
의단백질발현이각추출물의처리에의해증가됨을보였다
.
한편각소재가LPS
에의해유 도된NO
생성에미치는영향을분석한결과모두농도의존 적인NO
생성저해능을보였으며이는NO
생성단백질인iNOS
의발현저해에서기인함을확인하였다.
이와같은각소재의
NO
생성및iNOS
발현억제효과는염증상위신호전달계인
NF-
κB
및AP-1
의조절을통해일어날가능성을 보였다.
이러한결과를통해중국자생식물3
종의높은항 산화능과항염증활성을처음으로확인하였으며향후기능 성소재로서유용하게활용될수있을것으로판단된다.
Fig. 7. Modulation of upstream signaling pathways for the anti-inflammatory activity by MHEE (A), OCEE (B), and PREE (C) in
RAW 264.7 cells. Actin was used as an internal control. *, #Significantly different from the vehicle control [Con ( −)] and LPS-induced control
[Con (+)], respectively (p < 0.05).
Acknowledgments
This work was supported by Blue-Bio Industry Regional Innova- tion Center (RIC08-06-07) at Dong-Eui University as a RIC pro- gram under Ministry of Trade, Industry and Energy (MOTIE) and Busan city.
References