토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

2012년 2월 석사학위논문

토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal

Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

조선대학교 보건대학원

대체의학과

육 미 영

토복령(Smilax china L) 추출물이

인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

Effects of Smilax china L Extracts on Colorectal Cancer Cells

2012년 2월

조선대학교 보건대학원 대체의학과

육 미 영

토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal

Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

Effects of Smilax china L Extracts on Colorectal Cancer Cells

지도교수 문 경 래

이 논문을 대체의학 석사학위 신청 논문을 제출함

2011년 10월

조선대학교 보건대학원 대체의학과

육 미 영

육미영의 대체의학 석사학위 논문을 인준함

위원장 조선대학교 교수 서 재 홍 (인)

위 원 조선대학교 교수 박 상 학 (인)

위 원 조선대학교 교수 문 경 래 (인)

2011년 11월

조선대학교 보건대학원

목 차

도표 목차 ... ⅱ 영문 초록 ...,... ⅲ

Ⅰ. 서 론 ...,... 1

Ⅱ. 재료 및 연구 방법 ... 3 1. 실험을 위한 재료

2. 시 약 3. 세포 배양 및 화학적 처리 4. 시료 준비

5. MTS 분석

6. Western blot 분석 7. 통계 처리

Ⅲ. 결 과 ... 9 1. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

(72시간, 메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)

2. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

(72시간, 열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)

3. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

(메탄올 추출물, Western Blotting, iNOS 및 COX-2 발현량)

4. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

(열수 추출물, Western Blotting, iNOS 및 COX-2 발현량)

Ⅳ. 고 찰 ... 14

Ⅴ. 결 론 ... 17

Ⅵ. 참 고 문 헌 ... 19

도 표 목 차

도표 1. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율) ... 9

도표 2. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율) ... 10

도표 3. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 Western blotting에 의한 iNOS와 COX-2 발현량 측정) ... 11

도표 4. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암

세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는

영향 (열수 추출물에서 Western blotting에 의한 iNOS와

COX-2 발현량 측정)

... 12

ABSTRACT

Effects of Smilax china L Extracts on Colorectal Cancer Cells

Mi-young Yoog

Advisor: Prof. Moon, Kyung-Rye, M.D., Ph.D Graduate School of Health Science

Chosun University

Objective : This study aims to find the effects of the anti-cancer activity of Smilax china L extract in colorectal cancer cells.

Methods : MTS assay was used to detect the effects of Smilax china L extracts on the viability of colorectal cancer cells.

Western Blotting was used to see the effects of Smilax china L extracts on inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression.

Results : Methanol extracts of Smilax china L reduced colorectal cancer cells depending on time and concentration. Also it reduced iNOS expression in he concentration of 600μg/ml.

MTS assay results,

1. Methanol extracts of Smilax china L reduced colorectal cancer

cells depending on time.

2. Methanol extracts of Smilax china L reduced colorectal cancer cells depending concentration. Cell survival rate dramatically decrease depending on time and concentration especially, as it significantly reduced by 97% at 400μg/ml.

3. Hot water extracts of Smilax china L reduced colorectal cancer cells depending on time.

4. Hot water extracts of Smilax china L reduced colorectal cancer cells depending on the concentration. Cell survival rate decreased by 45% at 400μg/ml, depending on time and concentration.

Western blot results ae as follows;

5. Methanol extracts of Smilax china L reduced inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) expression by 40% at 200μg/ml.

6. Hot water extracts of Smilax china L did not reduce

inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expressions at any concentration.

Conclusion : Methanol extracts of Smilax china L significantly reduced cell viability by 97% of human colorectal cancer cell lines at 400μg/ml and iNOS expression by 40% at 200 μg/ml. Hot water extracts of Smilax china L did not reduce the expression of iNOS at

any concentration.

Methanol extracts of Smilax china L implied that it was expected that isolation and purification tests could bring out more various clinical effects.

Key words: Smilax china L, Colorectal cancer, MTS, iNOS, COX-2

Ⅰ. 서 론

대장암¹⁾은 결장과 직장 혹은 양쪽 모두에서 비정상적인 세포들이 조절 되지 않고 성장하는 암의 한 종류이다. 세계적으로 한 해에 655,000명 이 대장암에 의해 사망하며, 미국에서 흔한 암으로 암 사망의 2번째 원 인이며, 미국암학회(The American Cancer Society)는 2005년에 미국 에서 145,000명이 대장암 진단을 받고, 약 56,000명의 미국인이 대장암 으로 사망할 것으로 추정합니다. 대장암은 대장에서 폴립이 선종으로부 터 성장된 것이며, 대장 벽면에 발생한 대장암 1기 및 2기의 경우에는 수술 요법만으로 치료를 하나, 이 시기를 놓칠 경우, 대장암 세포는 림 프선으로 전이되어, 이 단계를 대장암 3기로 정의한다. 이 때는 수술 요 법과 항암제를 이용한 화학 요법을 병행 치료한다²⁾. 암덩어리가 심하게 커지면 대장암 4기로 정의하여, 이는 화학요법을 사용해도 완치가 어렵 다.³⁾ 드물게 수술 요법과 화학 요법으로 치료되기도 한다.⁴⁾

최근 들어 여러 가지 질환⁵⁾ 특히 암 예방과 치료에 천연물이 많이 이 용되고 있으며 많은 연구가 진행되고 있는바,⁶⁾⁷⁾ 특히 토복령(Smilax china L)에 관한 연구가⁸⁾⁹⁾ 활발하여 다양한 임상실험 결과가 나오고 있 르며¹⁰⁾, 항암본초에서는 위암, 식도암, 간암, 직장암, 자궁암 등 갖가지 암에 효과가 있다고 밝혀져 있다.

토복령(Smilax china L)에 관한 많은 선행연구를 고찰해 보면, 혈청 요산치의 감소 작용¹¹⁾, 콩팥증¹²⁾, 암세포 사멸유도¹³⁾, 자궁 경부암¹⁴⁾, 암에대한 항증식 효과¹⁵⁾, 유도신경세포" (induced neuronal cell)¹⁶⁾등

다양한 연구가 진행되었음을 알 수 있었다. 하지만 이러한 선행연구에 도 불구하고, 대장암에 대한 항암 작용을 나타내는 토복령(Smilax china L)의 연구는 아직 확인 된바가 없어 토복령(Smilax china L)에 대한 대 장암에 대한 효과 검증의 필요성이 증대 되고 있다.

토복령(Smilax china L)는 중요한 한약재로써 지금은 손쉽게 구하여 차로 끓여 먹거나 술에 우려내어 먹는 사례들이 늘어나고 있는데 이는 토복령(Smilax china L)의 생리활성 성분 때문이다¹⁷⁾. 토복령(Smilax china L)의 생리활성 성분인 4%의 사포닌은 효과가 매우 강력하기 때문 에 누구나 손쉽게 구할 수 있는 토복령의 추출물로, 급속히 증가하고 있 는 대한민국의 대장암 유병율을 감안하여, 대장암에 대한 토복령(Smilax china L) 추출물에 대한 과학적 고찰이 더욱 필요하다고 생각하여 본 연 구를 진행하게 되었다.

본 연구에서는 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 토복령(Smilax china L) 천연추출물 두 종류 (열수추출물 Hot-Water Extracts 와 메탄올추출물 Methanol Extracts을 처리하여 암 세포주 억제 효과와 암 표적인자 발현 억제능 (COX-2 or iNOS)을 확인하고자 한다.

Ⅱ. 재료 및 연구 방법

1. 실험을 위한 재료

토복령(Smilax china L)는 전남 화순군 일대에서 채취하여 수집된 것 으로 절단 후 충분히 건조한 상태에서 분말로 만들어 실험에 사용하였 다.

2. 시 약

본 실험에 사용한 메탄올 시약은 1급 시약을 사용하였다. LPS, (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-caroboxymeh-oxyphenyl)-2H-t etra-zolium inner salt (MTS) 및 1% penicillin과 streptomycin 등은 Sigma사(USA)로부터 구입하였다. 더불어 10% FBS, 1% 항생제 (Gibco, USA), minimum essential medium (MEM)과 serum free media 등은 Gibco사(USA)의 시약을 구입하여 본 실험에 사용하였다.

3. 세포 배양 및 화학적 처리

대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)는 American Tissue Culture Collection (Manassas, VA)에서 구입하여 본 실험에 사용하였다. 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)는 5% fetal bovine serum (FBS), 100 U/ml penicillin 및 100 U/ml

streptomycin 등을 첨가한 DMEM으로 5% CO₂의 상태에서 배양하였다.

4. 시료 준비

1) 열수 추출

토복령(Smilax china L)의 분말 100g과 증류수 1.3L를 이용하여 약탕 기(대웅, DWP-5000M)에서 3시간 동안 가열하여 열수 추출을 하였다, 추출이 끝나고 나면, 부직포 여과지를 이용하여 압착 여과하였다. 여과 된 추출물을 50ml 튜브로 나누어 담고 4,000 rpm에서 30분간 원심분 리하여 여분의 분말 찌꺼기를 침전시켰다.

원심분리 후 상층액 만을 두 겹의 여과지 (Whatman No.1)를 이용하여 감압여과 하였다. 감압 여과된 추출물을 회전증발농축기를 이용하여 농 축한 후, 동결건조기를 이용하여 동결 건조하였다. 동결건조가 끝난 후 곱게 분쇄하여 실험에 사용하도록 하였다.

2) 메탄올 추출

99% 메탄올 1L에 토복령(Smilax china L) 분말 100g을 24시간 침지 시켰다. 이 때 2~3 시간 단위로 교반하여 시료가 골고루 섞이도록 하면 서 추출물을 유도하였다. 추출 후 두 겹의 여과지를 이용하여 감압 여과 한 후 1차적인 메탄올 추출액을 만들었다. 여과된 추출액을 회전증발농 축기를 이용하여 감압 농축하였다. 이 때 water bath 의 온도를 35~37

ͦ

C를 유지하여 메탄올을 제거하며 농축하였다.

추출농축액을 chloroform과 1:1의 비율로 혼합하여 강하게 vortexing 한 후 4,000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 엽록소 및 여분의 잔여 미 세 시료를 층 분리하였으며, 하층의 chloroform이 무색이 될 때까지 3 회 이상 반복적으로 과정을 수행하였다.

원심분리를 통하여 엽록소를 완전히 제거한 후 상층액 만을 수거하여 회전 증발 농축시켰다. 증발 농축 시킬 때 소량의 메탄올을 넣어 농축 효율을 증대시켰다. 농축 추출액을 동결 건조한 후 분쇄하여 실험에 사 용하였다.

또한 ethyl acetate 처리를 위하여 상기 방법으로 동일하게 처리한 후 chloroform 층이 무색이 되면, 상층액 만을 새로운 튜브로 옮긴 후 ethyl acetate와 1:1의 비율로 혼합한 후 4,000 rpm에서 2분간 원심분 리 하였다.

상층액 만을 새로운 용기로 옮겨 담고 원심분리 후 남겨진 하층부에 다 시 ethyl acetate를 처리하여 상기 방법으로 반복하여 상층부만을 기존 에 옮겨 담은 용액이 있는 용기로 수합하였다. 상기 과정을 총 3회 반복 하여 ethyl acetate를 이용한 폴리페놀화합물을 완전히 얻어내도록 하였 다.

옮겨져서 수합된 상층부액을 회전 감압 농축기를 이용하여 감압농축하

고 ethyl acetate를 완전히 제거되고 얻어진 고체 화합물의 질량을 측정 하여 DMSO를 이용 100 mg/ml이 되도록 희석하여 사용하도록 하였다.

5. MTS 분석

토복령(Smilax china L) 추출물을 이용한 세포생존율(Cell Viability) 측 정은 Cell titer 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit (Promega, Madison, WI)로 제작사의 실험 매뉴얼에 따라 측정하였 다.

대장암 세포들은 96-well plate에 분주하고 토복령(Smilax china L) 추출물의 농도별 처리 후에 24, 48시간 후에 시간 경과에 따른 세포생 존율 반응을 조사 하였다.

MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-20yl)-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4 -sulphophenyl)-2H-tetrazolium) solution을 첨가하여 ELISA microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 492 nm와 690 nm에서 흡광도와 변화를 측정하여 대조구에 대한 세포생존 율을 백분율로 표시하였다.

각 농도별로 약재가 갖는 흡광도를 보정하기 위하여 세포를 뺀 배지를 같이 배양하여 대조구와 실험구의 흡광도를 비교 보정하여 세포 생존율 을 백분율로 표시 하였다.

6. Western blot 분석

토복령(Smilax china L) 추출물은 처리한 후 대장암 세포들을 수확하 고 분쇄하였다. 단백질 상등액 fraction은 SDS-로 전기영동한 후 membranes로 옮기고 5% skim milk로 blocking하였으며, indicated antibodies로 hybridization 하였다. Horse radish peroxidase-conjugated secondary anti-body 된 protein bands는 chemiluminescence detection kit로 관찰 측정하였다.

7. 통계 처리

각각의 실험들은 3 반복 이상으로 실험 하였으며 실험결과는 평균값±

표준편차로 계산하여 측정하였다. 실험결과의 통계분석은 Student's t - test를 이용했으며, p값이 0.05 이하인 경우에 실험결과가 통계적으로 유의한 것으로 판정하였다.

Ⅲ. 결 과

1. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)

인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)의 세 포독성(Cytotoxicity)을 알아보기 위하여, 토복령(Smilax china L) 메탄 올 추출물을 농도를 달리하여 0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖에서 처리 후 24시간과 48시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다. 도표 1과 같이 농도 400㎍/㎖에서 처리 후 24과 48시간 경과 후 각각 90%와 97%의 암세포 성장 억제율을 보였다. 이 결과로 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물은 농도와 시간의 의존성을 가진다고 보여 진다.

Figure 1. Effects of methanol extracts of Smilax china L on the inhibitory activity of human colorectal cancer cell lines of 24 and 48 hours after treatment with dependence on the concentration (0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖).

2. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)

인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)의 세 포독성(Cytotoxicity)을 알아보기 위하여, 토복령(Smilax china L) 열수 추출물을 농도를 달리하여 0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖에서 처리 후 24 시간과 48시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다. 도표 2와 같 이 각 농도 에서 24시간과 48시간 경과 후 각각 암세포 성장 억제율을 측정 하였으나 그 억제율은 45%와 55% 내외 정도였다. 이 결과로 토복 령(Smilax china L) 열수 추출물은 농도와 시간의 의존성은 크지 않다 고 보여 진다.

Figure 2. Effects of hot water extracts of Smilax china L on the inhibitory activity of human colorectal cancer cell lines of 24 and 48 hours after treatment with dependence on the concentration. (0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖).

3. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 Western Blotting의한 iNOS 와 COX-2 발현량)

COX-2 및 iNOS 발현량을 측정하기 위하여, 실험군과 대조군을 나누 고, 대조군에서 house keeping gene인 β-actin (indicating non-interference in cellular mechanism) 을 측정하여, 실험군의 COX-2 및 iNOS 발현량과 비교 하였다. 도표 3과 같이 농도 200㎍/㎖

에서 40% 정도의 iNOS 발현량 억제효과를 보였다. 이 결과는 토복령 (Smilax china L) 메탄올 추출물의 경우는 농도 200㎍/㎖에서 iNOS 발 현량 억제효과를 보았지만, COX-2의 발현량은 변화가 없는 것으로 보 아 토복령(Smilax china L)의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아 니라 iNOS 경로(pathway)인 것으로 보여 진다.

Figure 3. Inhibitory effects of classified methanol extracts of Smilax china L on the COX-2 and iNOS expression of human colorectal cancer cell lines.(0, 50, 100, 200㎍/㎖)

4. 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주에 미치는 영향 (열수 추출물에서 Western Blotting에 의한 iNOS 와 COX-2 발현량)

COX-2 및 iNOS 발현량을 측정하기 위하여, 실험군과 대조군을 나누 고, 대조군에서 house keeping gene인 β-actin (indicating non-interference in cellular mechanism) 을 측정하여, 실험군의 COX-2 및 iNOS 발현량과 비교 하였다. 도표 4과 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다. 이 결과는 토복령(Smilax china L) 열수 추 출물의 경우는 농도 의존성이 없는 것으로 보여 진다.

Figure 4. Inhibitory effects of classified hot water extracts of Smilax china L on the COX-2 and iNOS expression of human colorectal cancer cell lines.(0, 50, 100, 200㎍/㎖)

Ⅳ. 고 찰

토복령(Smilax china L)의 영어명은 Wild Smilax, China Root이며 향명으로는 망개나무, 명감, 동고리낭, 맹게낭, 벨내기, 벨랑지낭(제주)등 을 불리우는 백합과의 낙엽 덩굴식물인 청미래 덩굴의 뿌리로써 우리나 라 산야에 흔히 자라는 덩굴성 떨기나무 뿌리이다. 가을철에 빨갛게 익 는 열매가 아름다우며, 열매를 따먹기도 하는데 맛은 별로 없으며(떫고 시다) 잎은 넓은 달걀꼴로 윤이 반짝반짝 나고 줄기에는 가시와 덩굴손 이 있다. 꽃은 붉은색을 띤 녹색으로 여름철에 조그맣게 피며, 망개떡에 이용되기도 한다.

뿌리는 굵고 딱딱하며 꾸불꾸불 옆으로 길게 뻗어가고. 줄기는 마디마 다 굽으면서 2m 내외로 자라고 갈고리 같은 가시가 있다. 잎은 어긋나 고 원형 또는 넓은 타원형이며 두껍고 윤기가 나며. 열매는 둥글며 지름 1cm 정도이고 9~10월에 붉은색으로 익고. 개화기는 5월이며, 분포지역 은 한국 ·일본 ·중국 ·필리핀 ·인도차이나 등지에 분포하며 산지의 숲가 장자리에서 자란다.

어린 순은 나물로 먹고, 열매는 명감 또는 망개라고 하는데 식용으로.

뿌리는 이뇨, 해독, 거풍 등의 효능이 있어 관절염, 요통, 종기 등에 사 용하기도 하고, 온갖 독을 푸는 작용이 있어 수은 중독으로 인한 피부염 (또는 만성피부염), 풍습성관절염, 연주창, 감기, 신경통에 효과가 있다고 알려져 있으며, 성병치료에 탁월한 효과를 보여 매독, 임질, 태독, 악창 에 탁월하다고 본초강목에 전하고 있으며, 땀을 흘리게 하여 소변을 잘 보게 하고 신장염, 방광염, 풍습관절염과 독을 풀며 피를 맑게 하는 약 리작용이 알려져 있는데, 뿌리에 사포닌 성분이 4%정도 함유되어 있기

때문이다. 간경, 위경에 작용하여 해열, 제습, 해독 작용이 있다고 동의 보감에 전해지고 있으며, 간염, 지방간, 간경화 및 설사에 탁월한 효과가 입증된 바 있다. 성질은 평(平), 맛(味)은 담담하다.

함암작용이 뛰어나서 항암본초에는 위암, 식도암, 간암, 직장암, 자궁암 등 갖가지 암에 효과가 있다고 알려져 있고¹⁸⁾, 발갛게 익은 열매 및 덩 굴도 함께 이용되며, 뿌리에는 알칼로이드, 페놀류, 아미노산, 유기산, 당질, 정유성분이 들어 있고, 씨앗에는 조지방성분이 10%정도 들어 있 다.

토복령과 까마중, 부처손, 꾸지뽕나무를 함께 달여 마시면 위암, 식도 암, 간암, 직장암, 자궁암등에 좋은 효과를 본다고 민간에서 전하고 있는 데, 항암약재로 처방하는 방법으로는, 식도암에 신선한 토복령 500그램, 물 1500그램에 달여 500그램으로 졸이고 찌꺼기를 버리고, 이 달인 물 에 돼지비게 100그램을 넣고 끓여 하루 3번을 나누어 다 먹는다. 식도 암 환자 중 신선한 토복령 14,5킬로그램을 내복하여 증상을 개선한 뒤 4년 이상이 되어도 재발하지 않은 임상 사례가 있으며, 식도암, 위암, 직 장암, 비인암, 자궁경부암에 토복령 500~630그램에 3~3.5킬로그램의 물을 붓고 약한 불로 3시간 끓여 찌꺼기를 버리고 돼지비계 30~60그램 을 넣고 500그램을 달여서 하루 여러 번으로 나누어 다 먹고 개선된 임 상사례가 있는데, 돼지비계를 넣은 것은 사포닌과 기타 잡질을 중화시켜 위의 자극으로 야기되는 오심과 구토를 예방하기 위한 것이다.

발갛게 익은 열매와 덩굴도 달여 마시면 항암작용에 효과가 있다고 항 암본초에는 청미래덩굴 달인물의 암세포 억제력을 기록하고 있고, 중국 과 북한에서는 뿌리를 항암제로 이용하고 있으며, 동물실험결과 암에 걸 린 흰 생쥐의 종양억제효과는 30-50% 이며 생명연장율은 50% 라는 임 상결과가 있다.

관절통증, 장염, 이질, 수종, 임파선염, 대하증등에는 말린 약재(토복령)

를 1회에 4~8g씩 200cc의 물로 뭉근하게 달이거나 또는 가루로 빻아서 복용하는데, 임파선에는 뿌리 5~6g을 1회분 기준으로 달여서 1일 2~3 회씩 4~5일 복용한다.

토복령은 식용으로도 많이 사용하였었고, 성질이 평하고 슴슴(담담)하 므로 특별한 부작용은 없는 것으로 보고되고 있으나, 다만 위의 약효를 믿어 과용하지 말아야 하며, 간, 위에 좋다하여 남용하면 실해져서 다른 병변을 가져올 수도 있다. 토복령을 오랫동안 먹으면 변비가 생겨 고생 하는 수 있는데, 쌀뜨물과 같이 끓이면 그런 일이 없다고 한다.

이러한 토복령(Smilax china L)의 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)의 세포독성(Cytotoxicity)을 알아보기 위한 실험에서, 도표 1과 같이 농도 800㎍/㎖ 이상에서 처리 후 48 및 72시간 경과 후 각각 97% 이상의 암세포 성장 억제율을 보였다는 것은 농도를 달리하여 고농도일 경우 더 강한 억제율이 시사되는 것이라고 할 수 있겠다. 이는 고농도로 했을 경우 항암보조제로써 역할도 기대 된다 고 시사된다.¹⁹⁾

토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정 결과, 농도 400㎍/㎖에서 처리 후 24과 48시간 경과 후 각각 90%

와 97%의 암세포 성장 억제율을 보였다는 것은 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물의 경우는 농도 400㎍/㎖이 최적의 조건임을 보여 주 는 것이며, COX-2의 발현량은 변화가 없는 것으로 보아 토복령(Smilax china L)의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아니라 iNOS 경로 (pathway)인 것으로 보여 주며²⁰⁾ 이는 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물을 대장암 항암보조제로 사용할 경우 중요한 단서로 작용될 수 있

음을 시사한다.²¹⁾

한편 토복령(Smilax china L) 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현 량 측정 결과, 도표 4와 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았 다는 것은 토복령(Smilax china L) 열수 추출물의 경우는 농도 의존성 이 없는 것이므로 토복령(Smilax china L) 추출물은 분자량 40,000 KDa 이상에서는 항암효과가 없는 것으로 보여 진다.

Ⅴ. 결 론

소재 토복령(Smilax china L)를 가지고 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines) 실험에서 MTS assay 방식에 의해 세 포 생존율을 측정하였고, Western Blotting 방식으로 iNOS 와 COX-2 발현량을 측정하였던바, 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물에서 높 은 암세포 성장 억제율이 97% 이상으로 측정 되는 놀라운 결과를 얻을 수 있었으며, 또한 토복령(Smilax china L)의 암세포 성장율 억제는 열 수 추출이 아니라 메탄올 추출이 더욱 효과적이라는 사실을 알 수 있었 다.

1. 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물은, 농도 400㎍/㎖에서 처리 후 24과 48시간 경과 후 각각 90%와 97%의 암세포 성장 억제율을 보 였다. 이 결과로 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물은 농도와 시간 의 의존성을 가진다고 보여 진다.

2. 토복령(Smilax china L) 열수 추출물의 경우, 각 농도 에서 24시간과 48시간 경과 후 각각 암세포 성장 억제율을 측정 하였으나 그 억제율은 45%와 55% 내외 정도였다. 이 결과로 토복령(Smilax china L) 열수 추 출물은 농도와 시간의 의존성은 크지 않다고 보여 진다.

3. 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 농도 200㎍/㎖에서 40% 정도의 iNOS 발현량 억제효과

를 보였다. 이 결과는 토복령(Smilax china L) 메탄올 추출물의 경우는 농도 200㎍/㎖에서 iNOS 발현량 억제효과를 보아자만, COX-2의 발현 량은 변화가 없는 것으로 보아 토복령(Smilax china L)의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아니라 iNOS 경로(pathway)인 것으로 보여 진다.

4. 토복령(Smilax china L) 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다. 이 결과는 토 복령(Smilax china L) 열수 추출물의 경우는 농도 의존성이 없는 것으 로 보여 진다.

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저작물 이용 허락서

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논문제목

한글 : 토복령(Smilax china L) 추출물이 인체 대장암 세포주 (Human Colorectal Cancer Cell Lines)에 미치는 영향

영어 : Effects of

Smilax china L

Extracts on Colorectal Cancer Cells

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