천궁(추출물이)인체구강암세포주에미치는영향

년 월 2011 2 석사학위논문

천궁( Cnidium officinale ) 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

조선대학교 보건대학원

대체의학과

이 두 식

천궁( Cnidium officinale ) 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

Effects of Cnidium officinale MAKINO Extracts on the KB Human Oral Cancer Cells

년 월

2011 2

조선대학교 보건대학원 대체의학과

이 두 식

천궁( Cnidium officinale ) 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

Effects of Cnidium officinale MAKINO Extracts on the KB Human Oral Cancer Cells

지도교수 문 경 래

이 논문을 대체의학 석사학위 신청 논문을 제출함

년 월

2010 10

조선대학교 보건대학원 대체의학과

이 두 식

이두식의 대체의학 석사학위 논문을 인준함

위원장 조선대학교 교수 박 상 학 인 ( )

위 원 조선대학교 교수 서 재 홍 인 ( )

위 원 조선대학교 교수 문 경 래 인 ( )

년 월

2010 11

조선대학교 보건대학원

목 차

그림 목차... 7 page 영문 초록...,... 8 page

서 론

. ...,... 11 page

Ⅰ

재료 및 연구 방법

. ... 12 page

Ⅱ

실험을 위한 재료 1.

시 약

2.

세포 배양 및 화학적 처리 3.

시료 준비 4.

분석 5. MTS

분석 6. Western blot

통계 처리 7.

결 과

. ... 16 page

Ⅲ

천궁 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

1. KB

메탄올 추출물에서 에 의한 세포생존율

( MTS assay )

천궁 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

2. KB

열수 추출물에서 에 의한 세포생존율

( MTS assay )

천궁 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

3. KB

메탄올 추출물에서 에서 및

( Western Blotting iNOS

발현량

COX-2 )

천궁 추출물이 인체구강암 세포주에 미치는 영향

4. KB

열수 추출물에서 에서 및

( Western Blotting iNOS 발현량

COX-2 )

고 찰

. ... 20 page

Ⅳ

결 론

. ... 22 page

Ⅴ

참 고 문 헌

. ... 23 page

Ⅵ

그 림 목 차

그림 1. 천궁 추출물이 인체 구강암 KB 세포주에 미치는 영향 ( 메탄올 추출물에서 MTS assay 에 의한 세포생존율 )

... 16 page

그림 2. 천궁 추출물이 인체 구강암 KB 세포주에 미치는 영향 ( 열수 추출물에서 MTS assay 에 의한 세포생존율 )

... 17 page

그림 3. 천궁 추출물이 인체 구강암 KB 세포주에 미치는 영향 메탄올 추출물에서 ( Western blotting 에 의한

와 발현량 측정

iNOS COX-2 )

... 18 page

그림 4. 천궁 추출물이 인체 구강암 KB 세포주에 미치는 영향 열수 추출물에서 ( Western blotting 에 의한

와 발현량 측정

iNOS COX-2 )

... 19 page

ABSTRACT

Effects of Cnidium officinale MAKINO Extracts on the KB Human Oral Cancer Cells

Lee Doo-Sik

Advisor: Prof. Moon, Kyung-Rye, M.D., Ph.D Department of Alternative Medicine Graduate School of Health Science

Chosun University

Objective : This study is on the effects of the anti-cancer activity of Cnidium officinale MAKINO extract in KB human oral cancer cell lines.

Methods : MTS assay was used to detect the effects of Cnidium officinale MAKINO extracts on the KB human oral cancer cell lines viability. And Western Blotting was used to see the effects of Cnidium officinale MAKINO extracts on inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression.

Results : Methanol extracts of Cnidium officinale MAKINO reduced the KB human oral cancer cell lines depending on time and

concentration. Also it reduced iNOS expression in 600 μg/ml concentration.

MTS assay results,

1. Methanol extracts of Cnidium officinale MAKINO reduced the KB human oral cancer cell lines depending on time.

2. Methanol extracts of Cnidium officinale MAKINO reduced the KB human oral cancer cell lines depending concentration.

Cell survival rate decrease depending on time and concentration especially, it reduced significantly at 600 and 900 μg/ml.

3. Hot water extracts of Cnidium officinale MAKINO do not reduced the KB human oral cancer cell lines depending on time.

4. Hot water extracts of Cnidium officinale MAKINO do not reduced the KB human oral cancer cell lines depending concentration.

Cell survival rate do not decrease depending on time and concentration especially.

Western blot results,

5. Methanol extracts of Cnidium officinale MAKINO reduced dramatically inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) in 600 μg/ml concentration.

6. Hot water extracts of Cnidium officinale MAKINO do not reduced

inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2

(COX-2) expression in various concentrations.

Conclusion :

Methanol extracts of Cnidium officinale MAKINO has strongly implied that it was expected that isolation and purification test would bring out more various clinical effects.

Key words: Cnidium officinale MAKINO, KB human oral cancer cells, MTS, iNOS, COX-2

서 론 .

Ⅰ

구강암은 다른 부위의 암 종에 비하여 그 발현빈도는 낮으나¹⁾ 악성도가 높 아²⁾ 현저한 기능적 심리적 손상과 이에 따른 사회심리학적인 장애로 보다 적, 극적이고 효과적인 치료법이 절실히 요구되는 질병이다.³⁾

이에 최근 들어 이러한 구강암 예방과 치료에 천연물이 많이 이용되고 있으며 많은 연구가 진행되고 있는바,⁴⁾⁵⁾ 천궁의 다양한 임상실험 결과가 IN VIVO 수 준에서⁶⁾ 암을 상당량 억제하거나 파괴했음을 보이고 있다.⁷⁾

하지만 구강암에 대한 항암 작용을 나타내는 천궁의 연구는 아직 확인 된바가 없어 천궁에 대한 과학적 검증의 필요성이 증대 되고 있다. 천궁은 중요한 한 약재로써 지금은 손쉽게 구하여 차로 끓여 먹거나 술에 우려내어 먹는 사례들 이 늘어나고 있는데 이는 천궁의 생리활성 성분 때문이다 이러한 천궁의 생리. 활성 성분에 대한 과학적 고찰이 더욱 필요하다고 생각하여 본 연구를 진행하 게 되었다.⁸⁾⁹⁾

본 연구에서는 KB(human oral epidermoid carcinoma cancer cell line) 암 세포주에 천궁 천연추출물 두 종류 열수추출물( hot-water extracts 와 메탄 올추출물 methanol extracts)을 처리하여 1. 암 세포주 억제 효과와 2. 암 표 적인자 발현 억제능 (Cox-2 or iNOS)을 확인하고자 한다.¹⁰⁾

재료 및 연구 방법 .

Ⅱ

실험을 위한 재료 1.

천궁은 전남 화순군 일대에서 채취하여 수집된 것으로 절단 후 충분히 건조한 상태에서 분말로 만들어 실험에 사용하였다.

시 약

2.

본 실험에 사용한 메탄올 시약은 1급 시약을 사용하였다. LPS, (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-caroboxymeh-oxyphenyl)-2H-tetra-z

및 과 등은 사

olium inner salt (MTS) 1% penicillin streptomycin Sigma

로부터 구입하였다 더불어 항생제

(USA) . 10% FBS, 1% (Gibco, USA),

과 등은 사

minimum essential medium (MEM) serum free mdia Gibco (USA) 의 시약을 구입하여 본 실험에 사용하였다.

세포 배양 및 화학적 처리 3.

구강암 세포주는 American Tissue Culture Collection (Manassas, VA)에서 구입하여 본 실험에 사용하였다. 구강암 세포주는 5% fetal bovine serum

및 등을 첨가한

(FBS), 100 U/ml penicillin 100 U/ml streptomycin DMEM 으로 5% CO2의 상태에서 배양하였다.

시료 준비

4.

열수 추출 1)

천궁의 분말 100g과 증류수 1.3L를 이용하여 약탕기 대웅( , DWP-5000M)에 서 3시간 동안 가열하여 열수 추출을 하였다 추출이 끝나고 나면 부직포 여, , 과지를 이용하여 압착 여과하였다. 여과된 추출물을 50ml 튜브로 나누어 담 고 4,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 여분의 분말 찌꺼기를 침전시켰다.

원심분리 후 상층액 만을 두 겹의 여과지 (Whatman No.1)를 이용하여 감압 여과 하였다. 감압 여과된 추출물을 회전증발농축기를 이용하여 농축한 후 동, 결건조기를 이용하여 동결 건조하였다 동결건조가 끝난 후 곱게 분쇄하여 실. 험에 사용하도록 하였다.

메탄올 추출 2)

메탄올 에 천궁 분말 을 시간 침지시켰다 이 때 시간

99% 1L 100g 24 . 2~3

단위로 교반하여 시료가 골고루 섞이도록 하면서 추출물을 유도하였다 추출. 후 두 겹의 여과지를 이용하여 감압 여과한 후 1차적인 메탄올 추출액을 만들 었다. 여과된 추출액을 회전증발농축기를 이용하여 감압 농축하였다. 이 때

의 온도를 를 유지하여 메탄올을 제거하며 농축하였다

water bath 35~37 Cͦ .

추출농축액을 chloroform과 1:1의 비율로 혼합하여 강하게 vortexing 한 후 에서 분간 원심 분리하여 엽록소 및 여분의 잔여 미세 시료를 층 4,000 rpm 30

분리하였으며 하층의, chloroform이 무색이 될 때까지 3회 이상 반복적으로 과정을 수행하였다.

원심분리를 통하여 엽록소를 완전히 제거한 후 상층액 만을 수거하여 회전 증

발 농축시켰다. 증발 농축 시킬 때 소량의 메탄올을 넣어 농축효율을 증대시 켰다 농축 추출액을 동결 건조한 후 분쇄하여 실험에 사용하였다. .

또한 ethyl acetate 처리를 위하여 상기 방법으로 동일하게 처리한 후 층이 무색이 되면 상층액 만을 새로운 튜브로 옮긴 후

chloroform , ethyl

와 의 비율로 혼합한 후 에서 분간 원심분리 하였다

acetate 1:1 4,000 rpm 2 .

상층액 만을 새로운 용기로 옮겨 담고 원심분리 후 남겨진 하층부에 다시 를 처리하여 상기 방법으로 반복하여 상층부만을 기존에 옮겨 담 ethyl acetate

은 용액이 있는 용기로 수합하였다. 상기 과정을 총 3회 반복하여 ethyl 를 이용한 폴리페놀화합물을 완전히 얻어내도록 하였다

acetate .

옮겨져서 수합된 상층부액을 회전 감압 농축기를 이용하여 감압농축하고 를 완전히 제거되고 얻어진 고체 화합물의 질량을 측정하여 ethyl acetate

를 이용 이 되도록 희석하여 사용하도록 하였다

DMSO 100 mg/ml .

분석 5. MTS

천궁 추출물을 이용한 세포생존율(Cell Viability) 측정은 CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit (Promega, Madison,

로 제작사의 실험 매뉴얼에 따라 측정하였다

WI) .

구강암 세포들은 96-well plate에 분주하고 천궁 추출물의 농도별 처리 후에 시간 후에 시간 경과에 따른 세포생존율 반응을 조사 하였다

24, 48, 72 .

MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-20yl)-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulph 을 첨가하여

ophenyl)-2H-tetrazolium) solution ELISA microplate reader

로 와 에서 흡광도 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) 492 nm 690 nm

와 변화를 측정하여 대조구에 대한 세포생존율을 백분율로 표시하였다.

각 농도별로 약재가 갖는 흡광도를 보정하기 위하여 세포를 뺀 배지를 같이 배양하여 대조구와 실험구의 흡광도를 비교 보정하여 세포 생존율을 백분율로 표시 하였다.

분석 6. Western blot

천궁 추출물은 처리한 후 구강암 세포들을 수확하고 분쇄하였다 단백질 상등. 액 fraction은 SDS-PAGE로 전기영동한 후 membranes로 옮기고 5% skim

로 하였으며 로 하였다

milk blocking , indicated antibodies hybridization . 된

Horse radish peroxidase-conjugated secondary antibody protein bands 는 chemiluminescence detection kit로 관찰 측정하였다.

통계 처리 7.

각각의 실험들은 3 반복 이상으로 실험 하였으며 실험결과는 평균값 표준편± 차로 계산하여 측정하였다 실험결과의 통계분석은. Student's t-test를 이용했 으며, p값이 0.05 이하인 경우에 실험결과가 통계적으로 유의한 것으로 판정하 였다.

결 과 .

Ⅲ

천궁 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

1. KB

메탄올 추출물에서 에 의한 세포생존율

( MTS assay )

인체 구강암 세포주의 세포독성 을 알아보기 위하여 천

KB (Cytotoxicity) ,

궁 메탄올 추출물을 농도를 달리하여 0, 300, 600, 900㎍ ㎖/ 에서 처리 후 24 및 48시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다 그림. 1과 같이 농도 600 과 900 /㎍ ㎖에서 처리 후 48시간 경과 후 각각 40%와 60%의 암세포 성장 억 제율을 보였다 이 결과로 천궁 메탄올 추출물은 농도와 시간의 의존성을 가진. 다고 보여 진다.

그림 1. 천궁 메탄올 추출물의 KB 인체 구강암 세포주의 항암활동에 관한 효과 (농도 0, 300, 600, 900 ㎍ ㎖/ 에서 처리 후 24 및 48시간 경과)

천궁 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

2. KB

열수 추출물에서 에 의한 세포생존율

( MTS assay )

인체 구강암 세포주의 세포독성 을 알아보기 위하여 천궁

KB (Cytotoxicity) ,

열수 추출물을 농도를 달리하여 0, 300, 600, 900㎍ ㎖/ 에서 처리 후 24 및 48 시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다 그림. 2와 같이 농도 300, 600, 에서 처리 후 및 시간 경과 후 각각 암세포 성장 억제율을 측정 900 /㎍ ㎖ 24 48

하였으나 그 억제율은 30% 내외로 미미하였다 이 결과로 천궁 열수 추출물은. 농도와 시간의 의존성을 가지지 않는다고 보여 진다.

그림 2. 천궁 열수 추출물의 KB 인체 구강암 세포주의 항암활동에 관한 효과 농도

( 0, 300, 600, 900 ㎍ ㎖/ 에서 처리 후 24 및 48시간 경과)

천궁 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

3. KB

메탄올 추출물에서 의한 와

( Western Blotting iNOS

발현량

COX-2 )

및 발현량을 측정하기 위하여 실험군과 대조군을 나누고 대

COX-2 iNOS , ,

조군에서 house keeping gene인 β-actin (indicating non-interference in 을 측정하여 실험군의

cellular mechanism) , COX-2 및 iNOS 발현량과 비교 하였다 그림. 3과 같이 농도 600㎍ ㎖/ 에서 놀랍게도 밴드가 보이지 않을 정도 인 99% 이상의 억제효과를 보였다 이 결과는 천궁 메탄올 추출물의 경우는. 농도 600㎍ ㎖/ 이 최적의 조건임을 보여 주는 것이다. COX-2의 발현량은 변화 가 없는 것으로 보아 천궁의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아니라

경로 인 것으로 보여 진다 iNOS (pathway) .

그림 3. 천궁 메탄올 추출물의 KB 인체 구강암 세포주의 COX-2 및 iNOS 발현량 억제효과 농도( 0, 300, 600, 900 ㎍ ㎖/ )

천궁 추출물이 인체 구강암 세포주에 미치는 영향

4. KB

열수 추출물에서 의한 와

( Western Blotting iNOS COX-2

발현량)

및 발현량을 측정하기 위하여 실험군과 대조군을 나누고 대

COX-2 iNOS , ,

조군에서 house keeping gene인 β-actin (indicating non-interference in 을 측정하여 실험군의

cellular mechanism) , COX-2 및 iNOS 발현량과 비교 하였다 그림. 4과 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다.. 이 결과는 천궁 열수 추출물의 경우는 농도 의존성이 없는 것으로 보여 진다.

그림 4. 천궁 열수 추출물의 KB 인체 구강암 세포주의 COX-2 및 iNOS 발현량 억제효과 농도( 0, 300, 600, 900 ㎍ ㎖/ )

고 찰 .

Ⅳ

천궁은 산형과에 속하는 다년생 초본식물로써 향명으로는 궁궁이라고도 하 며 학명은, Cnidium officinale MAKINO이다 중국산 식물로 우리나라에서 흔. 히 재배되고 있는데 높이는, 30 60∼ ㎝이고 곧추 자라며 가지가 갈라진다.

꽃은 8월에 피며 가지 끝과 원줄기 끝에서 큰 산형화서가 발달한다 어린순은. 나물로 먹고 뿌리줄기는 건조시켜 약재로 이용한다 성분은 방향성 정유를 다. 량 함유하고 있어서 냄새가 좋다 주성분은 크니딜라이드. (cnidilide)· 네오크니 딜라이드(neocnidilide)· 리구스틸라이드(ligustilide) 등이 있다.¹¹⁾

동물을 통한 약리적 작용실험에서 중추신경계통에 작용하여 진정효과가 있음 을 확인하였으며 약하지만 지속적인 혈압강하작용도 확인되었다 평활근에 대, . 한 실험에서는 자궁의 수축력을 증대시켜 주고 또 살균작용이 있어서 대장균·

이질균 녹농균 피부진균의 발육을 억제시키는 효과가 나타났다· · .¹²⁾

천궁은 약성이 온화하고 맛이 시어서 체내에 들어가서는 혈액순환을 왕성하게 해주고 통증을 가라앉히는 진통효과가 있다 그러므로 두통에도 자주 응용된다. . 부인에게 있어서는 월경불순 월경통 산후복통과 어지러운 증상을 없애준다 또· · . , 간장의 기능을 활성화시켜 주고 빈혈에 복용하면 조혈작용으로 효험을 얻게 된 다.¹³⁾

그리고 심장근육의 수축부전으로 인한 심장 부위의 통증에도 증상을 호전시키 고 있다 허리와 다리의 골격이 약하고 근육에 경련을 자주 일으키는 사람이. 복용하면 그와 같은 증상이 개선된다.¹⁴⁾

황련(黃連)과의 배합을 꺼리고 오래 복용하면 원기를 손상시킨다.¹⁵⁾ 민간에 서는 옷장에 넣어두어 좀을 예방한다 대표적인 처방으로 궁귀탕. (芎歸湯)이 있 는데 부인의 해산을 전후해서 많이 쓰인다 천궁은 한방에서 많이 쓰이는 약의. 하나이다.¹⁶⁾

이러한 천궁의 KB 인체 구강암 세포주의 세포독성(Cytotoxicity)을 알아보기 위한 실험에서, 그림 1과 같이 농도 600과 900 /㎍ ㎖에서 처리 후 48시간 경과 후 각각 40%와 60%의 암세포 성장 억제율을 보였다는 것은 농도를 달리하여 고농도일 경우 더 강한 억제율이 시사되는 것이라고 할 수 있겠다 이는 고농. 도로 했을 경우 항암보조제로써 역할도 기대 된다고 시사된다.¹⁷⁾

천궁 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정 결과 농도, 600㎍ ㎖/ 에서 놀랍게도 밴드가 보이지 않을 정도인 99% 이상의 억제효과를 보였다는 것은 천궁 메탄올 추출물의 경우는 농도 600㎍ ㎖/ 이 최적의 조건임을 보여 주 는 것이며, COX-2의 발현량은 변화가 없는 것으로 보아 천궁의 항암기작은

경로 가 아니라 경로 인 것으로 보여 주며

COX-2 (pathway) iNOS (pathway) ¹⁸⁾ 이는 천궁 메탄올 추출물을 항암보조제로 사용할 경우 중요한 단서로 작용될 수 있음을 시사한다.¹⁹⁾

한편 천궁 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정 결과, 그림 4와 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다는 것은 천궁 열수 추출물의 경 우는 농도 의존성이 없는 것이므로 천궁 추출물은 분자량 40,000 KDa 이상에 서는 항암효과가 없는 것으로 보여 진다.

결 론 .

Ⅴ

소재 천궁을 가지고 KB 인체구강암 세포주 실험에서 MTS assay 방식에 의 해 세포 생존율을 측정하였고, Western Blotting 방식으로 iNOS 와 COX-2 발현량을 측정하였던바 천궁 메탄올 추출물에서 높은 암세포 성장 억제율이, 측정 되는 한편 99%의 iNOS 발현량 억제라는 놀라운 결과를 얻을 수 있었으 며 또한 천궁의 항암기작이, COX-2 pathway가 아니라 iNOS pathway라는 사 실을 알 수 있었다.

천궁 메탄올 추출물의 경우

1. , 농도 600과 900 /㎍ ㎖에서 처리 후 48시간 경 과 후 각각 40%와 60%의 암세포 성장 억제율을 보임으로서 농도와 시간의 의 존성을 가진다.

천궁 열수 추출물의 경우

2. , 농도 300, 600, 900㎍ ㎖/ 에서 처리 후 24 및 48 시간 경과 후 각각 암세포 성장 억제율은 30% 내외로 미미하였음으로 농도와 시간의 의존성을 가지지 않는다.

천궁 메탄올 추출물에서 및 발현량 측정의 경우 농도

3. COX-2 iNOS , 600

에서 놀랍게도 밴드가 보이지 않을 정도인 이상의 억제효과를 보였

/ 99%

㎍ ㎖

음으로 농도 600㎍ ㎖/ 이 최적의 조건임을 알 수 있고, COX-2의 발현량은 변 화가 없는 것으로 보아 천궁의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아니라

경로 인 것으로 보여 진다 iNOS (pathway) .

천궁 열수 추출물에서 및 발현량 측정의 경우 모든 농도에서

4. COX-2 iNOS ,

억제 효과를 보이지 않았음으로 농도 의존성이 없는 것으로 보여 진다.

참 고 문 헌 .

Ⅵ

1) 김명윤(Myoung-Yun Kim) 김진수(Chin-Soo Kim) 이상한(Sang-Han Lee) 김진욱(Jin-Wook Kim) 장현중(Hyun-Jung Jang) : "최근 8년간 구강암 환자 에 대한 임상통계학적 연구 (A CLINICOSTATISTICAL ANALYSIS OF ORAL CANCER PATIENTS FOR RECENT 8 YEARS)" (대한구강악안면외 과학회지, Vol.33 No.6, 2007.

2) 박현숙 ( Hyun Suk Park ) 민경진 ( Kyung Jin Min ) 차춘근 ( Chun

송진욱 손진창

Geun Cha ) ( Jin Wook Song ) ( Jin Chang Son ) : "작약

추출물의 구강병원균에 대한 항균성 및 구강암 세포 증식 억제효과

(Antimicrobial Activities Against Oral Microbes and Growth-inhibitory Effect on Oral Tumor Cell by Extract of Paeonia Lactiflora)" (韓國環境

, Vol.33 No.1, 2007.

衛生學會誌

3) 이은진(Eun-Jin Lee) 김명진(Myung-Jin Kim) 명훈(Hoon Myoung) : "선 택적 COX-2 저해를 통한 구강암세포주 KB의 침습성 변화에 관한 예비연구 (CHANGE OF THE INVASIVENESS WITH SELECTIVE COX-2 INHIBITION IN AN ORAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA CELL LINE, KB ; PRELIMINARY IN VITRO STUDY)" (대한구강악안면외과학회지, Vol.33 No.2, 2007.

4) 구강모(Kang-Mo Ku) 김길웅(Kil-Ung Kim) 이상철(Sang-Chul Lee) 강영 화(Young-Hwa Kang) : "약용식물로부터 암 예방 활성 탐색 (Screening of Cancer Preventive Activities from Medicinal Plants)" (한국작물학회 학술 발표대회 논문집, Vol.51 No.1, 2006.

5) 이영수 ( Young Soo Lee ) 차정단 ( Jeong Dan Cha ) 김광석 ( Gwang

반석호 전재규 장기완

Seok Kim ) ( Suk Ho Ban ) ( Jae Gyu Jeon ) ( Kee Wan Chang ) : "Tea-tree 휘발성 물질의 구강편평상피암세포에 대한 세포사 멸유도 (Preventive dentisty : Induction of apoptosis in human gingivo-fibroblast and induction of necrosis in oral epidermoid carcinoma

cells from tea-tree)" (大韓口腔保健學會誌, Vol.31 No.3, 2007.

6) Hatip-Al-Khatib I, Egashira N, Mishima K, Iwasaki K, Iwasaki K, Kurauchi K, Inui K, Ikeda T, Fujiwara M. “Determination of the effectiveness of components of the herbal medicine Toki-Shakuyaku-San and fractions of Angelica acutiloba in improving the scopolamine-induced impairment of rat's spatial cognition in eight-armed radial maze test.” J Pharmacol Sci. 2004 Sep;96(1):33-41.

7) Jeong JB, Park JH, Lee HK, Ju SY, Hong SC, Lee JR, Chung GY, Lim JH, Jeong HJ. : “Protective effect of the extracts from Cnidium officinale against oxidative damage induced by hydrogen peroxide via antioxidant effect.“ Food Chem Toxicol. 2009 Mar;47(3):525-9.

8) 서연원 이용수 : " 소화기계 암의 발생 원인에 미치는 식이의 영향 (Role of Diet in the Cause of Digestive System Cancers)" (植物資源硏究誌, Vol.6 No.-, 2007.

9) 김지영 박원봉 : "한국산 겨우살이 렉틴의 구강암에 대한 항암 및 면역효과 (Anticancer Activities against Oral Cancer Cells and Immuno-stimulating Activity of Mistletoe Lectin(Viscum album var. coloratum aggIutinin, VCA))" (자연과학논문집, Vol.20 No.-, 2008.

10) 김민근(Min-Geun Kim) 구강모(Kang-Mo Ku) 강영화(Young-Hwa Kang) : "고양강 추출물의 암세포 증식 억제능 (Cytotoxicity of the Rhizomes Extract of Alpinia galanga in Murine Hepatoma Cell Line)" (한국자원식물 학회 학술심포지엄, Vol.33 No.6, 2007.

11) Jeong JB, Ju SY, Park JH, Lee JR, Yun KW, Kwon ST, Lim JH, Chung GY, Jeong HJ. : “Antioxidant activity in essential oils of Cnidium officinale makino and Ligusticum chuanxiong Hort and their inhibitory effects on DNA damage and apoptosis induced by ultraviolet B in mammalian cell.” Cancer Epidemiol. 2009 Jul;33(1):41-6.

12) Bark KM, Heo EP, Han KD, Kim MB, Lee ST, Gil EM, Kim TH. :

“Evaluation of the phototoxic potential of plants used in oriental medicine.” J Ethnopharmacol. 2010 Jan 8;127(1):11-8.

13) Tomoda M, Ohara N, Gonda R, Shimizu N, Takada K, Satoh Y, Shirai S. : “An acidic polysaccharide having immunological activities from the rhizome of Cnidium officinale.” Chem Pharm Bull (Tokyo). 1992 Nov;40(11):3025-9.

14) Kim JM, Lee P, Son D, Kim H, Kim SY. : “Falcarindiol inhibits nitric oxide-mediated neuronal death in lipopolysaccharide-treated organotypic hippocampal cultures.” Neuroreport. 2003 Oct 27;14(15):1941-4.

15) Lu GH, Chan K, Liang YZ, Leung K, Chan CL, Jiang ZH, Zhao ZZ. :

“Development of high-performance liquid chromatographic fingerprints for distinguishing Chinese Angelica from related umbelliferae herbs.” J Chromatogr A. 2005 May 6;1073(1-2):383-92.

16) Tomoda M, Ohara N, Shimizu N, Gonda R. : “Characterization of a novel glucan, which exhibits reticuloendothelial system-potentiating and anti-complementary activities, from the rhizome of Cnidium officinale.”

Chem Pharm Bull (Tokyo). 1994 Mar;42(3):630-3.

17) Jeong JB, Park JH, Lee HK, Ju SY, Hong SC, Lee JR, Chung GY, Lim JH, Jeong HJ. : “Protective effect of the extracts from Cnidium officinale against oxidative damage induced by hydrogen peroxide via antioxidant effect.” Food Chem Toxicol. 2009 Mar;47(3):525-9.

18) Chang MC, Ho YS, Lee PH, Chan CP, Lee JJ, Hahn LJ, Wang YJ, Jeng JH. : "Areca nut extract and arecoline induced the cell cycle arrest but not apoptosis of cultured oral KB epithelial cells: association of glutathione, reactive oxygen species and mitochondrial membrane potential." arcinogenesis. 2001 Sep;22(9):1527-35

19) Kim SJ, Kwon do Y, Kim YS, Kim YC. : “Peroxyl radical scavenging capacity of extracts and isolated components from selected medicinal

plants.” Arch Pharm Res. 2010 Jun;33(6):867-73. Epub 2010 Jul 6.

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저자명 국문( ) 이두식

저자명 영문( ) Doo-Sik, Lee

주민등록번호

학번 20098630

전화번호 (062)-(431)-(8887)

핸드폰 (011)-(625)-(6367)

주소

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주소 공개 여부

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논문명 국문( ) 천궁 추출물이 인체구강암 세포주에 미치는 영향 논문주제분야 총류( ), 철학( ), 종교( ), 사회과학( ), 순수과학( ),

기술과학( ),˅ 예술( ), 어학( ), 문학( ), 역사학( )

학위구분 석사 ( )˅ 박사 ( )

초록기술언어 영어 논문 쪽수 26 쪽

한글초록

천궁 메탄올 추출물의 경우, 농도 600과 900 /㎍ ㎖에서 처리 후 48시간 경과 후 각각 40%와 60%의 암세포 성장 억제율을 보임으로서 농도와 시 간의 의존성을 가진다.

천궁 열수 추출물의 경우, 농도 300, 600, 900 /㎍ ㎖에서 처리 후 24 및 시간 경과 후 각각 암세포 성장 억제율은 내외로 미미하였음으로

48 30%

농도와 시간의 의존성을 가지지 않는다.

천궁 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 농도 600㎍ ㎖/ 에서 놀랍게도 밴드가 보이지 않을 정도인 99% 이상의 억제효 과를 보였음으로 농도 600㎍ ㎖/ 이 최적의 조건임을 알 수 있고, COX-2 의 발현량은 변화가 없는 것으로 보아 천궁의 항암기작은 COX-2 경로

가 아니라 경로 인 것으로 보여 진다 (pathway) iNOS (pathway) .

천궁 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우 모든 농도, 에서 억제 효과를 보이지 않았음으로 농도 의존성이 없는 것으로 보여 진 다.

주제어 국문( ) 천궁 구강암 세포생존율, ,

논문명 원문( ) Effects of Cnidium officinale MAKINO Extracts on the KB Human Oral Cancer Cells

본문기술언어 한글

초록 원문( )

MTS assay results, Cell survival rate decrease depending on time and concentration especially, it reduced significantly at the 600 and 900 μg/ml of methanol extract.

Western blot results, Methanol extracts of Cnidium officinale MAKINO reduced dramatically inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) in 600 μg/ml concentration.

주제어 원문( ) Cnidium officinale MAKINO, KB human oral cancer cells, iNOS