펀널임누 ;냄 노

대한임상병리사회지 : 제 9 권 제 1 호 1977

혐기성 세균의 생균수에 미치는 공기 노출의 영향

연세대학교 의과대학 임상벙리과 킴 성 옥·정 윤 ^{λ4 닙}

1 . 서 론

인체에는 호기성세균보다 훨씬 많은 혐기성세균이 었￡며， 혜로는 인체에 캄염을 일오킴이 잘 알려져 있 다낌， 3 ， 4， 5) • 혐커성세균중 무아포 험기성세균 (Non­

sporeforming anaerobic bacteria)은 병 원성 은 낮지 만 뇌 농양 (brain abscess), 간농양(l iver abscess), 복 막염 (peritonitis), 산욕열 (puerperal sepsis), 난판­

난소농양 (tubo-ovarian abscess) 등 중독한 감염 을 일 우킬 수 있음이 보고되 어 있다 6 ， 7 ， 8 ， 9 ， 10).

이 세균들중에는 항생제 감수성이 후기성 세균과는 천연 다른 것이 있오묘로 그 분리， 동정 및 감수성 검 사는 환자의 치료를 위해 철대로 필요하게 펀다 11 ， 12).

혐기성 써균감염이 근년에야특히 주목을 끌게된 것 은 이러한 감염이 드물었거냐 중요하지 않었기 해문이 기 보마는 쉽고도 유효한 혐기성 세균배양방법이 없어 서 이들 감염에 대해 얄지 뭇했던 째문이라고 할 수 있다 13). 혐기성세균배양성적은 검사물 채취에서 배양 까지의 방법에 좌우되겠￡나 가장 중요한 것은 검사물 중의 혐기성세균을 죽지 않게 보존하는 것이라 하겠 다 14). 검사물중의 혐기성세균은 공기에 노출되었을 혜 온도에 짜라 그 사멸 도가 다르마고 Kosakai & Suzuki

15)는 몇가지 균종에서 그 영향을 보고 하였다. 본 실 험에서는 임상검사물에서의 혐기성세균 배양에 영향을 미치는 여러가지 요소중 공기노출의 영향을 임상검사 물에서 흔히 분리되는 여러 균종에 대하여 실험하였 다.

ll. ^{실험재료 및 밤법}

A. 실험채료 혐기성세균 균주

1. Anaerobe Laboratory, Virginia Polytechnic Institute and State University, Blacksburg, Vir-

ginia, USA에서 분양받은 종과 연세의료원 임상명리

과에서 분리한 8종의 무아포 혐기성세균균주를 본 실 험에 사용하였다.

2. 배 지

다음 배지와 첨가물을 사용하였다 16 ， 17 ， 18).

Fluid thioglycollate medium (FTM, Difco, Cat.

No. 0256-01, Cont. No. 593809) Human bank blood

Tryptose blood agar base(TBA, Difco, Cat. No.

0232-01)

3. 희석액

Phosphate buffered saline(PBS) 19)

Sodium chloride 8.5g

Monopotassum phosphate 9,247g Dipotassium phosphate 11,670g

Distilled water 1000ml

2.5N NaOH를 써서 pH를 7.2로 맞추었다.

4. Anaerobic indicater (Fildes and M^cIntosh)20) CD 6% glucose수용액

(Î) O.lN를 Sodium hydroxide 6ml를 94ml 증류 수에 희석.

@ 0.5% methylene blue 수용액 3ml를 100ml 증 류수로 희석.

사용시에는 각 용액 1ml씩을 시험관에 넣어 섞고탈 색 이 될혜 까지 자벼 한 후 anaero bic jar에 넣 고 봉한.

다. 배양후 무색이어야 혐기성 조건이 유지된 것이다.

5. GasPak anaerobic system21 )

Room temperature catalyst가 둔 GasPak ana- erobic jar (BBL, Cat. No. 60465)와 GasPak dispo sable H2+C02 generaotr (BBL, Cat. No. 70304) 를 사용하였마.

B. 방 법

시 험 균주를 FTM에 계 대 배 양한 후 3ml의 PBS로 10배 단계희석하고 1ml씩 나누어 4⁰C, 실온， 37⁰C에 각각 보판하면서 얼정시간마다 0.2ml 파이렛오로 O.Olml씩 TBA형 판배 치 에 캡 종해 서 GasPak볍 A로

- 2 4 -

.37⁰C에 48시간 배 양한 후에 가능한한 30-300개의 집 락이 생긴 희석을 택하여 집략수를 세고 희석배수를

-곱해 생끊수로 하였다 22) ^S. 'r."lls

YPI 6æl8 6 ’

‘

i。=

-‘

。‘‘SEι

l ι ~ 4 5 f 7

[χp::~ur{' (ιι"

홍떤 펜 l\

펀널임누 ;냄 노

the able 2. Adverse effect of air e):posure on

surval of anaerobes

임상 검사물에서 흔히 분리되는 혐기성세균 9균종에 대해 실험하였다. 예벼실험을 통해 공기노출에 덜 예 만한 세균은 4⁰C, 실온， 3rC에 2일， 4일， 7일， 만 감한 세균은 2시간， 4시간， 8시간， 24시간 노출한 후 생 균수의 변화를 판찰하였 다. B. fragilis, E.limosum

은 4⁰C에서 7일， 실온에서 4일 노출후까지 생균야 았 었 A나， 37⁰C에서의 생균수는 급격히 갇소되어 2 일후 부터 는 생 균을 판찰할 수 없 었 다. Pc. asaccharolyt- icus, Pc. magnus, V. parvula 도 망 C에 서 가장 오 래 보존되없고， 실온에서는 2일후까지 생균이 있였、무 나 37⁰C에서는 1시간 노출후에도 생균이 없었다. Ps.

intermedius는 4⁰C와 실은에서 7 일까지 생존라였오 벼， 37⁰C에서는 2일후부터 생균이 없었다(표1 ，도 1 ， 2).

공기 노출에 더 욱 예 만한 necrophorum, F. nucl- aetu m, Ps. anaerobius는 24시 간 동안도 생 존하지 는

결과 및 고찰

m

Table 1. Adyerse effect ot air exposure on the surval of anaerobes

Temp. r Exposure Time(day)

Anaerobe

(C) 0 1 2 4 7

B. fra5g5i1is 4 6.5 X10‘ 5.3X10' 2.1 x10⁴ 1. 6x 10' 1.1 X 10³ RT**

” ^{3.6x104 1. 2x 103 0 0}

VPI6559B

37 ^/1 2.6x10⁴ 0 0 0

BY.C f 7r3a0g8i01is 847 RT 4 3.0x10" 1. 4 X 10⁴ 1. 0 x 10' 8.0X10³ 6.0x10³

” ^{3.9X103 4. Ox 103 8.0x101 0}

37 ” ^{2.7X103 0 0 0}

Pc. asaccharolyticus VPI 2608 RT 4 3.5x10⁴ 7.0x10³ 4.0X10¹ 2.0x10¹ 0

” ^{5.5X102 0 0 0}

37 ” ^{2.5X103 0 0 0}

Pc.asacbharolyticus 4 8.5x10⁴ 3. 9X 10³ 1.1x10⁴ 3.0X10³ 0

YC 74120732 RT ^!I NT* 3.6)<10¹ 0 0

37 !’ 0 0 0 0

Pc. m6a2gl7nus 4 1. 5 X 10⁵ 1. 7x 10³ 8. OX 10² 1. Ox 10² 2.7+10¹

VPI RT ^/1 1.1 X 10³ 5.0x10¹ 0 0

37 _!’ 0 0 0 0

Ps. intermedius VPI 5939A RT 4 1. Ox 10^{I! 5} 1.1X10NT ⁴ 5.3x106. OX 10^{3 2} 3.6X103. 5x 10^{3 2} 4.0x103.5x10^{2 2}

37 ^!I 5.0X10³ 6.8X10¹ 0 0

v. parvula 4 2.7X10⁴ 2.6x10³ NT 8. 2x 10¹ 3. Ox 10⁰

-IPI 5788-1 RT

” ^{9.7X101 0 0 0}

37 _!’ 0 0 0 0

E. limosum 4 2.5X10⁵ NT 7. 8x 10³ 2. Ox 10² 1. OX 10¹

VPI 0260 RT ^!I NT 1. 8 X 10² 9.0XlO^O 0

37 ^!I 4.1 X 10³ 0 0 0

- 2 5 - NT: Not countable due to culture faiure.

**RT:Room Temperature.

Adverse effect of air exposure on the survial of anaerobes Table. ^1.

Exposure(hr)

聊”

T

24

o o

o

1.0xl0² O O O O O 6. Ox 10²

O O 8

1. 5 X 10³ G O 3.4Xl0² 2. 9x 10¹

o

5. OX 10² O O 1.9xl03 6. Ox 10²

0 4

3.2X103 5.7x10¹

0 3.4XI0² 2.5X10² 3.0X10¹ 1. ox103 4.8X10²

0 2.1 X 103 1. 2X 10³ 1.6X103 2

8. 7X 10³ 8.0X10z

5. OX 10² 4.5x10² 1. OX 10² 1. 3X 10² 1. 5 X 103 6.8X10² 8.4x10¹ 5.3>< 103 2.6X103 1. 9X 10³ 0

5.4Xl0⁴

8.8X10²

1. 3X 10⁴

3. 2X 10⁴

4R

하

4mur

4R%

4R

”이 Anaerob

F. necrophorum YC 74110664 F. nucleatum VPI 4355 Ps. anaerobius VPI 6601B Ps. anaerobius YC 75010219

트 4l~\

\\、\\\

1Y[\

Fig. 2. Adverse offect of air survial of anaerobes.

Ps. mtη ， . . ytOl1iu:;

VPI 59:fl^

3

L、

{식

3 누f;、\겁 1

b

,‘

찌 a

e ……

p‘ ’aerob,us WPI68)18

‘

?

i으

) ESν

is-QQ

8 bposu'p 、

thε?

Fig. 3. Adverse effect of air survival of anaerobes.

on

는 것보마 배양 양성율을 높일 것으로 생각한마. 그랴 나 F. necrophorum은 실온에 서 3시 간 노출후에 는 배 양을 기대할 수 없을 정도로 균수는 급격히 감소하였、

으며 검사물중에 들어 있을 균종이 무엇안지 알 수 없 으-묘로 검사물은 채취 즉시 배양할 것이 중요하다.

무아포혐커성 세균의 공기노출의 영향을 시험하였으‘

며 마음 결론을 얻었마.

1. F. necrophorum^, F. nucleatum ，는 공기 노출어L

- 2 6 -

exposure

결 론 the

뭇하였￡나， 4⁰C에서 더 오래 보존되었마(표 2 ，도 3).

小몇와 設樂 23) Peptostreptococcus은 Fusobacterium

이 들어 있 는 검 사물을 4⁰C, 25⁰C, 및 37⁰C에 보존하 고 각 온도에서의 생균수의 변화를 판찰한 바 4⁰C에 서 가장 오래 보존되고 37⁰C에서는 급격하게 감소함을 또 변중의 Cl. perfringens도 4⁰C에 서 오래 보존됨 을 관찰하였마. 본 잘험의 결과에 있어서도 4⁰C에서 세 균이 가장 오래 보존되었다. 小몇와 設樂 23)의 검자물 을 이용한 실험이나 보존균주를 사용한 이 실험의 결 파로 볼 혜 임상 캠사물의 혐커성 배양이 지연될 경우 에 는 4⁰C에 보존하는 것 이 실온이 나 ， 3rc에 보존하

exposure on

의해 생균수가 카장 급격히 감소되었마.

2. Ps. anaerobius등은 오래 풍안의 공기 노출에 도 생균이 증명되었다.

3. 공기노출서의 은도의 영향은 어느 균종에 있어서 나 4⁰C에서 가장 적였다.

임상검사물에서 혐기성 세균을 배양할 때 균종에 짜라 서는 검사물을 실온에 방치해서는 그 노출시간이 짧드 라도 좋은 결과를 얻을 수 없을 것이므로 즉시 배양할 갯야 필요하며 즉시 처리할 수 없을 해는 4⁰C에 보존

하는 것이 좋을 것 A로 판단하였마.

이 실험을 함에 있어 지도의 노고를 아끼지 않A신 이삼옐 교수님께 진심오로 감사드럽니마.

BIBLIOGRAPHY

1) Sencer, D.}., “Emerging diseàse of man and animals", Aηη. Reν. Microbiol., 25 : 466-467,

1971.

~2) Finegold, S.M., Rosenblatt, }.E., Sutter V.L., and H.R. Attebery, Scopemoηograph 0η aηa­

erobic iηfectioηs， Kalamazoo: U pjohn Co., 69 pp., 1972.

,3) Kosakai N., “Isolation of anaerobic baJteria,"

N aika, 30 : 617-620, 1972.

4) Sutter, V.L., Attebery, H.R., Rosenblatt, ].

E., Bricknell, K.S., and S.M Finegold, Anα­

robic bactε-l iology manuα l ， Los Angeles:

School of I\Ied., UCLA, 89 pp., 1972.

‘5) Holdeman, L. V., and vV.E.C. Moore, Anαe­

robe laboratory lnanual, Virginia: Virginia polytechnic institute, 130 pp., 1973.

‘6) Tynes‘ B.S., and vV.B. Frommeyer, Jr.,

“Bacteroides Septicemia: Culttural,clinical, dnatherapeutic features in aseries of twenty fivepatients," Ann. Int. Med., 56: 12-26, 1962.

"7) Tillotson, ].R. and A.M. Lerner, “Bacteroides pneumonias: Characteristics of cases with empyema", Anη. 1ηt. l1vfed., 18: 308-317,

1968.

썽) Finegold, S.M., Marsh, V.H., and }.G. Bar- tlett, “Anaerobic infections in the compro- mised host," Proc. Internat. Conf. on λTosoco

mial Infections, Chicago: Am. Hosp. Assoc., 123-134, 1971.

9) Sabbaj, ]., Sutter, V.L., and S.M. Finegold,

“Anaerobic pyogenic liver abscess," Aηη .Int.

Med., 77 : 629-638 1972.

10) 옳木麻一郞， 購氣性園感梁ιι，，\，、 τ 臨皮病理 20 : 447-452, 1972.

11) Kislak, J.W., “The susceptibility of Bacte- pides fragilisto 24 antibiotics," J. Lηf. Dis., 125 : 295-299, 1972.

12) Sutter, V.L., Kwok, Y.Y., and;S.M.Fineg01d,

“Standardized antimicrobia1 disc susceptibi1- itytesting of anaerobic bacteria: r.Susce ptib- ility of Bacteroides fragilis totetracycline,"

Appl. Alicrotiol., 28 : 268-275, 1972.

13) Sutter, V.L., and S.M.Fineg01d, “Anaerobic bacteria: Their recognition and significance int he clinca1 Laboratory," Prog. in. Cliη.

Pathol., New Yor: Grune and Stratton, 213- 238, 1974.

14) DoweU, ]r., V.R., and T.M. Howkins, “1s01- ation of anaerobic bacteria from clinica1 materia1," Laboratory methods in anaerobic bacteriology, Atlanta: USDHEW, 3-6,1974.

15) Kosakai, N., and S. Suzuki, Aηaerobes in clinical Jη edicine， 1sl ed., Tokyo: 19iku shoin, p. 21, 1968.

16) Difco laboratories, Difco Mα%μal， 9th ed., Detroit: Difco 1aboratories, 350 pp., 1971.

17) BBL, Products for the microbiological labor- atory, 4th ed., Baltimore: BBL, 244 pp.,1958.

18) 日水製藥， 緣氣培養 ε 廳氣{生用培養， 91pp. 1973.

19) Blair, 1 .E., Lennette, E.H. and J.P. Truant, ]'vfanual of clinical microbiogy, 1st ed., Beth- esda: Am.Soc. for Microbiol., p. 675, 1971.

20) Kosakai, N., and S. Suzuki, Aηaerobes 낌

Clinical Mediciηe 1sted., Tokyo1gaku Shoin, p. 31, 1968.

21) Brewer, ]. H., and D.L. Allgeier, “Safe self- contained carbon dioxide-hydrogen ‘ anaerobic system," Appls λlicrobiol. ， 14: 988, 1966.

22) Kosakai, N., and S. Suzuki, Aηaerobes iη Clinical Medicine 1st ed., ‘ Tokyo: 19aku Shoin, p. 328, 1968.

23) 小몇豊子， 設樂政次， 臨tR材料b 、 !?O) 爆氣f生園 0 檢 出方法 Vζ 關켓 Q 2 ， 3 0) 檢討， 衛生檢찮 21 : 1001- 1005, 1972.

- 2 7 -