수치에 의한 부자류 식물의 아코니틴 함량의 변화에 대한 연구
1)
문대원
1# ․김재현
1* ․정종길
1․조현우
2․류지훈
2․조정희
2․김대성
3 동신대학교 한의과대학 본초학교실1, 전남한방산업진흥원2, 동우당제약3Effects of Various Processing Methods on the Contents of Aconitine in the Aconitum Plants
Dae-Won Mun
1#, Chae-hyun Kim
1*, Jong-Gil Jeong
1, Hyun- Woo Cho
2, Ji-Hoon Ryu
2, Jung-Hee Cho
2, Dae-Sang Kim
3Department of Herbology, College of Oriental Medicine, Dong Shin University1,
Jeonnam Development Institute for Korean Traditional Medicine, 756 Gisanri Anyangmyun Jangheunggun Jeonnam 529-8512, DongWooDang Pharmacyco. 981, Haengwon-ri, Jangheung-eup, Jangheung-gun, jeonnam, Korea3
Abstract
Objective : The roots of Aconitum species have been believed to cure yang depletion syndrome, kideny-yang deficiency syndrome, and obstruction of qi in the chest syndrome and have been used in traditional Korean medicine mainly for the treatment of musculoskeletal disorders. As they are the substances with toxity, they are processed by using such processing materials as childrens’ urine, Gamdutang, wet-heating. So the purpose of this study is to select most efficient method by evaluating effects of various procesing method on the contents of aconitine.
Method : The contents of aconitine in the Aconitum plantswere determined by high performance liquid chromatography.
Results :
1. Radix Aconiti Kusnezoffii contains twice amount of aconitine than Chun-Oh.
2. Contents of aconitine in Kyungpo-Buja, Buja-Kyungpo, childrens’ urine Buja, heuksoonpyeon are reduced by processing.
3. Content of aconitine in heuksoonpyeon is reduced the most.
Conclusion : Content of aconitine in heuksoonpyeon is reduced the most.
Key words : Aconitum plants, Kyungpo-Buja, Radix Aconiti Kusnezoffii, Chun-Oh, Buja-Kyungpo, childrens’ urine Buja, heuksoonpyeon, high performance liquid chromatography
* 제 1저자 : 문대원, 전남 나주시 대호동 252 동신대학교 한의과대학
* 교신저자 : 김재현, 전남 나주시 대호동 252 동신대학교 한의과대학 E-mail : [email protected] Tel : 061-330-3502
․ 접수 : 2010년 11월 26일 ․ 수정 : 2010년 11월 30일 ․ 채택 : 2010년 12월 3일
序 論
Aconitum속 식물은 毛茛科(Ranunculaceae) 에 속하는 다년생 초본으로 그 덩이뿌리는 식 물의 종류, 채취부위, 채취 후 처리방법 등에 따라 초오, 오두, 부자, 측자, 포부자 등의 생약 명으로 불리운다.
1)附子는 毛茛科에 속한 多年生草本인 栽培種 바꽃 Aconitum carmichaeli 의 母根에 附生한 子根의 加工品이다. 川烏頭는 재배종 바꽃의 塊根이다. 즉 母根이다. 초오두는 동속의 야생 종 이삭바꽃 Aconitum kusnezoffii 및 同屬 近 緣植物의 塊根이다.
2)附子는 性味가 熱하고 辛 甘하여 有毒하다. 心脾腎經에 歸經한다. 回陽 補火, 散寒除濕하는 효능이 있어 陰盛格陽, 大 汗亡陽, 吐痢厥逆, 心腹冷痛, 脾泄冷痢, 脚氣水 腫, 小兒慢驚, 風寒濕痺, 踒躄拘攣, 陰疽瘡漏, 一切沈寒痼冷을 치료한다.
3)Aconitum속 식물의 성분은 diterpenoid alkaloids로 독성이 강한 aconitine 및 lipo- aconitine류 alkaloids, 그리고 독성이 비교적 약한 atisine류 alkaloids로 대별된다 그러나 aconitine류 alkaloids는 채취된 Aconitum 속 식 물근의 수치나 제제화의 방법과 정도에 따라 서 benzoylaconitine류, aconine류, lipo-benzoyla- conitine류, lipo-aconine류 alkaloids로 쉽게 가 수분해되면서 독성도 현저히 감소된다.
4)부자의 뿌리에 들어있는 diterpenoid, alkaloid 등은 맹독성으로 치사량이 2 ∼3mg정도의 극 소량이어서 일본의 아이누족은 즙액을 화살촉 에 묻혀 곰사냥용 독으로 사용하였다.
5)이러한 부자류의 독성을 감소시키기 위해서 한의학에서는 부자류의 수치를 중요시 여기었 는데 歷代의 修治法으로는 劉文泰 등은 童便
浸, ≪中藥誌≫에는 冷水浸과 石灰水浸, 張賢 哲 등은 甘豆湯同煮, 中村和子의 濕熱法 등이 있다.
6)대한약전 및 대한약전외 한약 규격 주해에 부자 정량법이 기록되어 있고
7)수치에 따른 부 자류 한약재의 성분 중 aconitine계 알칼로이드 의 변화에 대한 보고가 일부 있으나
1,6)본 연구 에서는 경포부자, 부자경포, 부자동변, 부자흑 순편의 표준품을 설정하고 수치방법에 따른 aconitine 함량을 비교 분석하였다.
재료 및 방법
1. 실험재료
경포부자(무염), 부자(경포), 부자(동변침), 부자(흑순편), 천오, 초오를 옴니허브(주)에서 2010년 6월 10일에 600g 씩을 구입하여 사용 하였으며, 시료는 전라남도한방산업진흥원 한 약자원연구실에 보관 중이다.
2. 실험기기
Rotary evaporator(UT 3000L, EYELA, JAPAN), HPLC(SPD-M20A, SHIMADZU, JAPAN), 초음파 추출기(UC-20)을 사용하였으 며, 기타 용매 등은 특급시약을 사용하였다.
3. 실험방법 1) 수치
(1) 경포부자(無鹽)- 생부자를 無鹽으로 절
단 후 건조하여 黑豆, 甘草로 포제하였
다. 甘草, 黑豆 煎湯液에 生附子를 無鹽
으로 절단 건조한 부자를 넣고 2시간정
도 煮한 후 건조한 것 (附子 5Kg, 甘草
240g, 黑豆 500g)
(2) 부자경포 - 생부자를 無鹽으로 증한 후 절단 건조 후 흑두감초로 포제하였다.
甘草, 黑豆 전탕액에 생부자를 무염으로 증한 후 절단 건조한 부자를 넣고 2시간 정도 煮한 후 건조하였다. (附子 5Kg, 甘 草 240g, 黑豆 500g)
(3) 부자동변- 생부자를 절단한 후 동변(여 자 만 4세소아의 소변 600ml, 생부자 1kg)에 생부자를 7일 담근후 7일 동안 매일 물을 갈아준 다음 햇볕에 말린다.
(4) 부자흑순편 - 보통 크기의 附子를 골라 서 간수에 수일간 담갔다가 간수와 함께 煮沸한 후 꺼내서 水漂하여 두껍게 切片 한다. 재차 묽은 간수에 담그고 黃糖 및 菜油로 만든 調色劑를 첨가하여, 附片이 濃茶色으로 되면 水漂하여 맛을 보되 톡 쏘는 자극이 없을 정도가 될 때까지 하 여 꺼내서 蒸熟하고, 烘乾하되 半乾되면 재차 햇볕에 말린다.
2) 추출 및 농축
분말화된 검체 6종을 각각 20.0g을 정확하 게 평량하여 메탄올 200ml을 가해 1시간 동안 sonication으로 추출하여 여과하기를 3회 반복 하여 그 추출액을 모아 감압 농축하였다. 메탄 올 농축물을 증류수 50ml에 녹인 후 동량의 ether로 3회 탈지한 후 물층을 감압농축하여 HPLC 시료로 이용하였다.
3) HPLC 조건
HPLC는 SPD-M20A( SHIMADZU, JAPAN) 으로서 컬럼은 Pack pro C18 5m(250×4.6mml / YMC) 이고 검출기는 UV 210nm에서 측정하
였다. 이동상은 CH₃CN : Phosphoric acid(pH 3.00) = 13 : 87이었고 유속은 0.8ml/min이며 Injection volume은 10 ㎕으로 하였다. 이를 통 하여 chromatogram의 면적을 얻었고 회귀직선 방정식으로부터 각각의 지표물질의 함량을 구 하였다.
결과 및 고찰
Aconitum 속 식물은 미나리아제비과 (Ranunculaceae)에 속하는 다년생의 초본으로 기원식물이 다양하며, 하나의 기원식물에도 많은 동속 근연식물이 존재한다. 이 식물 중 대 표적인 생약이 부자(Aconitum Tuber)류 생약 과 초오(Aconitum ciliare Tuber)이다.
4)부자류 식물의 수치 방법에 따른 아코니틴 함량 변화를 알아보기 위하여 중약대사전 및 포제학교과서에 나와 있는 방법 되로 포제된 경포부자(무염), 부자(경포), 부자(동변침), 부 자(흑순편)와 재배종 천오 그리고 야생종 초오 의 아코니틴 함량을 비교하였다. 아코니틴 함 량을 측정하기 위하여 HPLC SPD-M20A(
SHIMADZU, JAPAN)를 이용하여 3회 측정하 여 평균값을 확인하였다.
HPLC의 분석조건으로는 Pack pro C18 5 m(250×4.6mml / YMC) column을 이용하여 CH₃CN : Phosphoric acid(pH 3.00) = 13 : 87 을 유속 0.8ml/min으로 용출시킴으로서 retention time은 약 0.8ml/min분으로 aconitine peak(FIg. 1)을 양호하게 분리할 수 있었다.
아코니틴 함량은 야생종 초오가 재배종 천
오의 두배에 가까운 51.61ppm이 검출되었고
부자동변은 야생종 초오의 오분의 일 정도에
해당하는 10.31ppm이 검출되었다. 경포부자
7.25
3.24
9.8
3.1
28.6
53.13
0 10 20 30 40 50 60
경포부자(무염) 부 자 경 포 부 자 동 변 부 자 흑 순 편 천 오 초 오
아코니틴함량(ppm)
Fig. 2. Contents of Aconitine in methanol extracts of Aconitum plant(ppm) Fig. 1. representative HPLC chromatogram of the extract from aconitum plant.
는 7.25ppm이 검출되었고 부자경포와 부자흑 순편이 각각 3.23ppm과 3.09ppm을 기록하여 가장 낮은 농도를 보이었다. 각 부자류식물의 아코니틴 함량은 Table 1과 Fig. 2에 자세히 기 록하였다.
Table 1. Contents of Aconitine in methanol extracts of Aconitum plant(ppm)
구분 1차 2차 3차 평균
무염 경포부자 7.229 7.262 7.246 7.25 무염증 경포부자 3.244 3.239 3.215 3.23 부 자 동 변 9.297 10.307 11.314 10.31 부 자 흑 순 편 3.094 3.101 3.085 3.09
천 오 28.546 28.663 28.727 28.65 초 오 53.378 52.884 48.572 51.61
역대 부자의 포제에 관하여 漢代에 <金櫃玉 函經>에 炮去皮와 <金匱要略方論>에 炮, 去 皮, 破八皮와 <中藏經>에 去皮製法이 기재되 어 있다. 晉代에 <肘後備急方>에 炮去皮臍, 燒 法의 기재가 있고 <劉涓子鬼遺方>에 炮, 炮裂 이 기재되어있다. 南北朝時代에 <雷公炮炙論>
에 東流水와 黑豆를 이용한 浸法의 기재가 있
다. 唐代에 <備急千金要方>에 “搪灰炮, 蜜炙
黃, 蜜塗, 炙令黃, 醋浸法”이, <千金翼方>에 蜜
塗火炙令乾, 復塗蜜炙法이 기재되어 있다. 宋
代에 <太平聖惠方>에 “炭火內燒令黑色, 勿令
藥過取出, 用盆子蓋之候冷細硏”이 <聖濟總
錄>에 醋炙, 黑豆靑鹽製, 漿水製, 黃連製, 醋炙
年代 炮製法 文獻 漢 炮, 去皮, 破八皮 金匱要略方論
火炮法, 炮去皮 金櫃玉函經 晉 炮, 炮去皮臍, 燒 肘後備急方
南北朝 炮, 炮裂 劉涓子鬼遺方
黑豆浸 雷公炮炙論
唐
搪灰炮, 蜜炙黃, 蜜塗, 炙令
黃, 醋浸法 備急千金要方
蜜塗火炙令乾, 復塗蜜炙法 千金翼方
靑鹽, 泔水同浸 銀海精微
煨去皮法 仙授理傷續斷
秘方
年代 炮製法 文獻
宋
炭火內燒 太平聖惠方
生薑水同煮 博濟方
紙裹煨 蘇沈良方
醋淹浸, 火烤, 生薑汁淬 重修政和經史 證類備用本草 生薑棗同煮, 黃連刴碎同銚
子肉炒 聖濟總錄
黑豆煮, 鹽製 三因極病證方
論
童便浸, 朱砂, 濕麵裹煨 校注婦人良方
同赤小豆煮法 類編朱氏集驗
醫方
同薑炒令赤法 女科百聞
童便浸, 薑汁炒法 扁鵲心書 童便煮而浸加入鹽加甘草 瘡瘍經驗方 元 炮, 鹽水浸, 鹽炒 丹溪心法
明
地黃汁煮, 防風鹽黑豆合炒,
米泔水薑蛤粉炒 普濟方
石灰煨, 生薑汁煮, 豬脂煎,
靑鹽炒法 奇效良方
薑汁鹽水甘草黃連童便煮法 本草蒙筌
生熟湯浸 本草綱目
童便製 增補萬病回春
燒灰存性 本草原始
炮裂米醋中浸再炮三五次法 證治準繩 麩炒, 甘草防風同炒法 壽世保元
甘草汁浸 景岳全書
淸
甘草防風同煮, 童便煮 醫宗說約
童便濃甘草湯同煮法 本草必用
甘草湯酒浸法 本草從新
甘草甘遂燒酒共浸, 蕎麥麪
一撮包煨 串雅外編
川連甘草黑豆煎濃汁拌蒸法 得配本草
童便黃泥炮 本草綱目拾遺
와 生薑棗同煮法과 黃連同炒, 鹽湯浸乾法이 있고, <扁鵲心書>에 童便浸, 再加薑汁炒法이 있다. 元代 <丹溪心法>에 “炮, 又以鹽水浸, 再 炮, 如此七次去皮臍”와 “鹽炒”가 기재되어 있 다. 明代 <普濟方>에 “炮去皮, 以地黃汁煮焙 乾. 防風鹽黑豆合炒, 附子裂去者藥用附子, 去 臍皮” 및 “米泔水薑蛤粉炒裂, 去皮臍”로 生薑 汁, 蛤粉同煮法과 地黃製가 기재되어 있고,
<本草綱目>에 “保昇曰, 附子采得, 以生熟湯浸 半日, 勿令滅氣, 出以白灰裛之, 數易使乾. 又 法, 以米粥及糟鞠等淹之. 弘景曰, 俗方每用附 子, 須甘草, 人蔘, 生薑相配者, 正製其毒故也.”
라 하고, <景岳全書>에 “甘草汁浸數日, 捻之 軟透之鍋內炒之將乾, 口嚼尙有辣味是其度也”
로 甘草湯浸法이 기재되어 있다. 淸代에 <醫宗 說約>“用甘草, 防風同煮三四滾, 去皮臍甘防, 再用童便煮一日, 曬乾, 方無毒也”로 甘草防風 童便同製法이, <得配本草>에 “附子切薄片用 夏布包定甘草, 甘遂捶碎, 以燒酒共浸半日, 文 武交煮, 曬乾爲度, 取其附子, 甘草, 甘遂不用”
으로 川連甘草黑豆煎濃汁拌蒸法이 기재되어 있고, <本草綱目拾遺>에 童便, 黃泥炮가 기재 되어 있다.
Table 2. 역대 포제방법
<Table 2>에서 역대 부자의 포제방법을 살
펴보면 漢代에서부터 淸代까지 石灰煨, 生薑
汁煮, 猪脂煎, 靑鹽炒法, 甘草防風同煮, 童便煮
등 다양한 포제법을 응용하였다. 附子는 辛 ․
甘, 大熱하고 有毒하다. 포제를 통해 독성을 감
소시키며 回陽救逆, 補命門之火 逐厥의 효능
을 통해 亡陽虛脫. 肢冷脈微, 陽痿, 宮冷, 心腹
冷痛, 虛寒吐瀉, 陰寒水腫, 風寒濕痺등의 증상
을 치료한다. 附子는 주로 Aconitin을 함유한
국가
鹽附子 제법
製附子 제법
炮附子 제법
韓國
鹽附子
6~8월 사이에 채굴하여 母根, 잔뿌리 및 土砂를 제거한 것을 泥附子라고 하는데, 크 기가 고른 泥附子를 골라 물로 씻고 식용 간수 중에 하룻밤 담가 둔다. 다음날 여기 에 소금을 더 넣어 담갔다가 이를 꺼내어 햇볕에 말린 다음 다시 담가둔다. 이 조작 을 반복하고 동시에 햇볕에 말리는 시간을 점차 연장시켜 약의 표면에 소금이 다량 석출되고 질이 단단하게 변하면 중단한다.
製附子(黑順片)
크기가 고른 泥附子를 취하여 물로 잘 씻고 식용 간수 중에 며칠간 담가 두었다가 浸 液과 함께 속까지 익을 때까지 삶는다. 이를 꺼내고 소금끼가 없어질 때까지 여러 번 물로 우려낸 후 두께가 약 5mm가 되도록 세로로 자른다. 이를 다시 물에 담가 우려 내고 캬라멜 같은 調色液에 담가 진한 차색이 되면 꺼낸 다음 바깥면이 윤기가 날 때 까지 찐다. 이를 꺼내고 반 정도 마를 때까지 烘乾한 다음 다시 햇볕에 말리거나 烘 乾한다.
製附子(白附片)
크기가 고른 泥附子를 취하여 물로 잘 씻고 식용 간수 중에 며칠간 담가 두었다가 浸 液과 함께 속까지 익을 때까지 삶는다. 이를 꺼내고 껍질을 벗긴 다음 두께가 약 3mm가 되도록 세로로 자른다. 물로 우린 다음 이를 꺼내고 속까지 익도록 찐 다음 햇볕에 말린다.
炮附子
鹽附子를 취하여 물에 담근다. 매일 2~3차례 물을 갈아주어 염분이 완전히 제거되었 을때 甘草 및 검정콩과 더불어 속이 익을 때까지 삶고 쪼개어 맛을 보았을 때 혀를 마비시키지 않을 때에 이르러 꺼내어 去皮하고 薄片을 만들거나 2~3절하여 햇볕에 말린다.
中國
鹽附子
크기가 고른 泥附子를 골라 물로 씻고 식용 膽巴液에 하룻밤 담가 둔다. 다음날 여기 에 소금을 더 넣어 담갔다가 이를 꺼내어 햇볕에 말린 다음 다시 담가둔다. 이 조작 을 반복하고 동시에 햇볕에 말리는 시간을 점차 연장시켜 약의 표면에 소금이 다량 석출되고 질이 단단하게 변하면 중단한다.
製附子(黑順片)
크기가 고른 泥附子를 취하여 물로 잘 씻고 식용 간수 중에 며칠간 담가 두었다가 浸 液과 함께 속까지 익을 때까지 삶는다. 이를 꺼내고 소금끼가 없어질 때까지 여러 번 물로 우려낸 후 두께가 약 0.5cm가 되도록 세로로 자른다. 이를 다시 물에 담가 우려 내고 캬라멜 같은 調色液에 담가 진한 차색이 되면 꺼낸 다음 바깥면이 윤기가 날 때 까지 찐다. 이를 꺼내고 반 정도 마를 때까지 烘乾한 다음 다시 햇볕에 말리거나 烘 乾한다.
製附子(白順片)
크기가 고른 泥附子를 취하여 물로 잘 씻고 식용 간수 중에 며칠간 담가 두었다가 浸 液과 함께 속까지 익을 때까지 삶는다. 이를 꺼내고 껍질을 벗긴 다음 두께가 약 0.3cm가 되도록 세로로 자른다. 물로 우린 다음 이를 꺼내고 속까지 익도록 찐 다음 햇볕에 말린다.
淡附片(炮附子)
鹽附子를 취하여 물에 담근다. 매일 2~3차례 물을 갈아주어 염분이 완전히 제거되었 을때 甘草 및 검정콩과 더불어 속이 익을 때까지 삶고 쪼개어 맛을 보았을 때 혀를 마비시키지 않을 때에 이르러 꺼내어 去皮하고 薄片하여 햇볕에 말린다. 鹽附子 100kg, 甘草 5kg, 黑豆 10kg.