(1) 조직의 고정
① 고정액은 10% 중성 포르말린을 사용한다.
② 고정액의 용량은 조직 크기의 10배 이상이 되어 검체 조직이 충분히 잠기게 한다.
③ 고정 시간은 1시간에 1mm의 속도이므로 작은 조직일 때는 4~6시간이 적당하다.
(2) 육안 검사
① 장기 및 질환에 따른 육안 검사 계획 수립
② 절제된 조직 검체의 크기 등 수치 측정. 이때 조직 의뢰서에 기술된 내용과 상이할 경우 즉시 의뢰한 곳에 연락을 취한다.
③ 절제된 조직 검체의 겉모양 및 병리학적 병변에 대한 육안 소견 기술(녹음 후 전사 혹은 메모한 후 서 술함)
④ 육안 사진 촬영(필요한 경우)
⑤ 작은 검체(펀치 생검 등)는 렌즈페이퍼에 해당 병리번호와 함께 싸서 조직 캡슐이나 카세트에 넣어 분실 및 손상을 방지한다.
⑥ 카세트 번호표시(casette labelling) 및 카세트개수 확인 (3) 파라핀 침투 과정
① 자동 침투기의 첫 단계를 10% 중성포르말린(Neutral buffered formalin) 용액으로 하여 육안 절편 된 조직을 마지막으로 한번 더 고정시킨다.
② 탈수 과정은 70% 에탄올- 80% 에탄올- 95% 에탄올- 100% 에탄올 과정을 거친다.
접수
날짜 검체명 환자명 등록
번호
접수자/
서명
인수자/
서명
인계 일자
인계자/
서명
결과
보고 기타
③ 투명 과정은 자일렌(또는 Histo-clear)로서 4단계 거친다.
④ 마지막은 파라핀 침투 단계로서 60℃가 유지되도록 하여야 한다.
⑤ 검체 조직 처리양과 시약 교체 시기를 기록지에 매일 표시하여 시약을 제때에 갈아 주어야 파라핀이 조직 내로 침투가 잘 되어 박절 과정에서 어려움이 없다.
(4) 포매 과정
① 파라핀이 침투된 조직을 박절이 용이하게 파라핀으로 카세트 블록을 만든다.
② 병소 부위를 아래쪽으로 향하게 포매한다.
③ 내시경 조직은 포매용 핀셋으로 한 번에 여러 개를 잡지 말고 한 개씩 최소한 거리를 두고 포매한다.
④ 다른 파라핀 블록에 조직 부스러기가 오염되지 않도록 포매용 핀셋 끝 부분을 열을 가하여 털어준다.
(5) 박절 과정
① 2~4㎛ 두께로 연속적 박절을 한다.
② 연속적으로 연결된 절편을 부유 온수조(적정온도 45~50℃) 위에 띄운다
③ 파라핀 블록의 병리번호와 유리 슬라이드의 병리번호가 잘 일치하는지 확인하고 잘 펴진 절편을 선 택하여 유리 슬라이드에 붙인다.
④ 잘 떨어지는 절편으로 예상되는 검체는 코팅이 되어 있는 슬라이드(slian-coated slide) 를 사용한다.
⑤ 조직 절편이 붙은 유리 슬라이드를 Dry oven에 넣고 파라핀을 녹인다. 이 과정에서 조직 절편이 유 리 슬라이드에 강하게 붙게 된다.
(6) 일반 염색(Hematoxylin and Eosin stain)
① 염색 전 탈 파라핀 과정(Xylene 4단계), 함수 과정(고농도 알코올- 저 농도 알코올- 수세)을 거친다.
② 헤마톡실린(Hematoxylin) 용액은 제조 후 바로 사용 가능하며 1~2분 염색하고 0.5%~1% Acid alcohol로 탈색 시킨다. Ammonia 수로 중화시킨 후 수세한다.
③ 에오진(Eosin) 용액은 제조 후 하루 이상 숙성시키는 것이 염색이 잘 된다.
④ 탈수 과정(저농도 Alcohol - 고농도 Alcohol), 투명 과정(Xylene 또는 Histo-clear)을 거쳐 봉입할수 있는 상태가 되도록 한다.
(7) 봉입 과정
① 자일렌(Xylene) 과정을 거친 유리 슬라이드는 비수용성 봉입제로 봉입한다.
② 커버슬라이드 바깥쪽으로 봉입제가 넘치지 말아야 하고 공기 방울이 보이면 핀셋 끝으로 제거한다.
(8) 특수 염색
병리의사가 필요하다고 판단한 경우 필요한 특수염색을 시행한다.
특수염색의 질관리를 위하여 대한병리학회 정도관리위원회에서 주관하는 숙련도 평가에 참가하여야 한다.
(9) 면역조직 화학 염색
면역병리 검사는 항원-항체 반응을 이용하여 세포의 단백질 발현양상을 분석하여 종양의 진단을 하는 것으로 암의 기원, 분류, 전이암 분석 등 다양하게 사용되는 검사이다. 조직병리 검사를 한 환자의 약 10-20%에서 면역병리 검사가 시행되고 있다.
환자에서 진단을 위해 면역병리 검사를 추가로 할 것인가, 어떤 종류의 검사를 할 것인가, 몇 가지 검사 를 할 것인가 등은 전적으로 병리전문의의 판단에 의해 결정한다. 염색의 질관리를 위하여 대한병리학 회 정도관리위원회에서 주관하는 숙련도 평가에 참가하여야 한다.
(10) 그 외 필요한 검사
필요한 경우 분자병리검사, 전자현미경 검사 등을 시행한다. 검사의 질관리를 위하여 대한병리학회 정 도관리위원회에서 주관하는 숙련도 평가에 참가하여야 한다.
(11) 조직진단
① 수검자의성명, 병리번호와제작된슬라이드의번호를확인하고검체의채취부위와개수가일치하는지를 확인한다.
② 수검자의성별, 나이, 검사소견및임상진단등을참고하여병소에서적절한검체가얻어졌는지평가한다.
③ 광학 현미경에서 관찰하여 진단한다.
④ 진진단에 필요하다고 판단될 때에는 육안검사 재시행, 연속절편 제작, 다양한 특수염색검사, 면역조직 화학염색검사 등을 추가로 시행하여 정확한 진단이 되도록 한다.
⑤ 조직검사에서 악성 종양으로 진단될 때에는 종양의 조직학적 진단명을 기재하고 관찰이 가능한 경우에 분화도, 혈관림프관 침윤 여부 및 침윤깊이 등을 기재한다. 질환에 따라 염증 정도, 병원균의 종류를 기 술하기도 한다.
⑥ 진단 목적 이외에도 특히 암 수검자의 경우에 치료 방법 결정 및 예후 예측 인자로 알려져 있는 면역 조 직화학염색검사가 요구되는 경우에는 이를 시행하여 정성적 또는 정량적으로 판독하여 이를 보고서 에 기재한다.
(12) 진단지 전사 및 보고
① 진단지와 수검자 인적 사항 재확인
② 진단 결과 입력
③ 진단 결과 출력
④ 진단 결과 확인
⑤ 진단 결과 배송
⑥ 검체 의뢰서 정리
⑦ 진단 보고서 정리
⑧ 진단 건수 통계