Journal of Sasang Constitutional Medicine

Vol. 16, No. 2, 2004;84-98 http://www.esasang.com

I. 緖 論

1)

은

凉膈散火湯 李¹⁾의 『東醫壽世保元』에 처음

접수일 2004년 월 일 승인일7 9 ; 2004년 월 일8 4

∙

∙교신저자 박성식：

경기도 성남시 분당구 수내동87-2동국대학교 분당한방병원 사상체질과 Tel : +82-31-710-3723, Fax : +82-31-710-3780 E-mail :[email protected]

으로 수록된 처방으로少陽人 胃受熱裏熱病의胸

에 대한 을 으로 사용되었다

膈熱證 淸陽上升 目的 ²⁾.

의 적응증에 대해

凉膈散火湯 李¹⁾는『東醫壽世保

에서 ‘

元』｢胃受熱裏熱病論｣ 治上消 纏喉風及 脣腫 이라고 하였으며 임상적으로는

’ , ,

之輕症 胸悶 手足

, , , , , ,

痺 運動障碍 手足麻木 火熱證 口舌疾患 上焦熱 등에 되고 있다

皮膚疾患 多用 ^3-7,51-53.

에서 아토피 피부염은 , ,

韓醫學 奶癬 胎癬 胎斂

이 Atopy 에 미치는

凉膈散火湯 皮膚炎 影響

윤보현박성식․

동국대학교 한의과대학 사상체질과

Abstract

Yangkyuksanhwa-tang effected to Atopic Dermatitis Yangkyuksanhwa-tang effected to Atopic Dermatitis Yangkyuksanhwa-tang effected to Atopic Dermatitis Yangkyuksanhwa-tang effected to Atopic Dermatitis

Yun Bo-Hyun Park Seong-Sik Yun Bo-Hyun Park Seong-Sik Yun Bo-Hyun Park Seong-Sik Yun Bo-Hyun Park Seong-Sik․․․․

Dept. of Sasang Constitutional Medicine, College of Oriental Medicine, Dongguk Univ.

1. Objectives 1. Objectives 1. Objectives 1. Objectives

Yangkyuksanhwa-tang is used mush in pruritus and dermatopathy of Soyangin. It is suggested this prescription is effective on atopy dermatitis.

2. Methods 2. Methods 2. Methods 2. Methods

For observation of Yangkyuksanhwa-tang effected to atopic dermatitis, extract of Yangkyuksanhwa-tang has been dispensed to the stratum corneum of epithelium in dermatome of murine after making damage to its defense mechanism against fat and causing atopic dermatitis artificially. After that, the change in outer dermatome and minute mechanism of epidermis, the change of eosinophil, the change in distribution of soybean agglutinin, the change in distribution of fat and ceramide in stratum corneum, the change in inflammation in dermatome, the change of cell accrementition and apoptosis, and the effect on anaphylaxis andStaphylococcus aureuswas observed.

3. Results 3. Results 3. Results 3. Results

After administration of Yangkyuksanhwa-tang, severe skin damage such as eczema and psoriasis, that was observed in the case of atopy dermatitis, was decreased and the increase of eosinophil in serum was suppressed. Lipid lamella was recovered, so epidermal demage was relieved. The distribution of HSP70 in the outer skin was decreased.

Yangkyuksanhwa-tang suppressed activation of NF- B p50, induced CD11/18b not to be generated, and suppressedκ inflammatory response of skin. Anaphylaxis and groth ofStaphylococcus aureuswas suppressed.

4. Conclusions 4. Conclusions 4. Conclusions 4. Conclusions

Yangkyuksanhwa-tang decreased skin damage of atopy dermatitis. It has antibiosis aboutStaphylococcus aureus, it can be medicinal substances on atopy dermatitis. In addition, it is possible that it can be medicinal substances on regional skin allergy.

Key Words Key Words Key Words

Key Words: Yangkyuksanhwa-tang, Atopic Dermatitis, Anaphylaxis,Staphylococcus aureus, Cytokine, Apoptosis

, , , , , , , 瘡 濕疹 濕瘡 四彎風 淫瘡 胎熱 胎熱丹毒 胎毒

등의 범주에 속할 수 있으며

, , ,

瘡疥 赤游丹 赤遊風

원인으로는風熱 血熱 濕熱 血虛 等, , , 을 들 수 있 다^27-30).

아토피 피부염에 관한韓醫學 硏究報告로는 아 토피 피부염에 대한 韓醫學的인 辨證體系分類³⁴⁾,

에 대한

皮膚 搔痒症 臨床的 硏究^35-37),아토피 피부 염의 발생부위와經絡과의關係에 대한考察³⁸⁾, 四

에 대한

象醫學的 接近 方式 硏究^39-40), 韓洋方的․ 文獻 考察^33,42), 外來患者를 위주로 한 統計 論文

43-47)

에 대한

, 外治法 硏究^48-49), 斷食療法을 이용한 證例報告⁵⁰⁾ 等이 있다.

또한, 凉膈散火湯의 활용에 관한臨床硏究로는 口腔潰瘍 治驗例⁵¹⁾, 少陽人 中風에 대한治療效果

52) 等이 있으며,實驗硏究로는糖尿病에 대한治療 效果 硏究^54-55), 腦血流회복 및腦損傷개선 효과에 대한 硏究^56-59), 肥滿症에 미치는 효과에 대한硏究

60), 高血壓 및高脂血症 개선효과에 대한 硏究⁶¹⁾, 개선효과에 대한

allergy性 接觸皮膚炎 硏究⁶²⁾等이 있었으나 아토피 피부염에 미치는 효과에 관한, 實

는 없었다.

驗 硏究

이에著者는少陽人의搔痒症과皮膚疾患에多

되는 인 이 아토피 피부염의

用 處方 凉膈散火湯 治

에 영향을 미칠 것으로 기대되어 을

療 凉膈散火湯

아토피 피부염을 유발시킨 생쥐에 경구 투여한 후, (eosinophil) ,

血液內 好酸性 白血球 變化 皮膚 表皮

사이 의 , 의

細胞 空間內 複合糖質 變化 表皮 角質層 과

, ,

脂質 保護 障壁 變化 炎症 變化 細胞增殖 細胞 , anaphylaxis ,

自己殺害 變化 受動 皮膚 抑制 效果

Staphylococcus aureus

및 . 材料 方法

Ⅱ

1.

1.

1.

1. 實驗動物 實驗動物 實驗動物 實驗動物

대한실험동물Center에서 분양 받은 태령 주된4 계 암컷 생쥐를 무균사육장치내에서 주일

BALB/c 2

동안 적응시킨 후 체중20 g된 생쥐를 선별하여 사 용하였다 대조군 아토피 피부염 유발군. , (AD ),群 아 토피 피부염 유발 후凉膈散火湯추출액 투여군(YS 으로 나눈 후 시간의 경과에 따라 그리

) , 24, 48

群

고72시간으로 세분시켰으며 각, 群에10마리씩 배

정하였다 한편. 受動皮膚 anaphylaxis를 위해 계 흰쥐를 별도로 각 에 마리씩 Sprague-Dawley 群 10 배정하여 실험하였다.

아토피 피부염의 아토피 피부염의 아토피 피부염의 아토피 피부염의 2.

2. 2.

2. 誘發 誘發 誘發 誘發

에서는 의 사이에

本 實驗 皮膚 角質層 角質細胞

존재하는lipid lamella層을 계면활성제(surfactant) 중 하나인 sodium dodecyl sulfate(SDS : Sigma, U.S.A) 로 유실을 유도하여 아토피 피부염을 유발하였다.

와

Christophers Mrowietz⁶⁷⁾가 기술한 방법을 응용하 여 생쥐 서혜부의皮膚를 면도한 다음 cellophane

을 부착하여 의 을 제

tape (3M, U.S.A) 角質層 脫落層 거하였다 그런 다음. 70% ethyl alcohol로 소독한 후

들

Minehiro ⁶⁸⁾처럼5% SDS 1㎖을 면봉으로 하루에

회씩 동안 문질러서 의 를

20 2日 角質層 lipid lamella 하였다 그 결과 육안으로 아토피 증상 즉 아. , 除去

토피성 습진이 유발된 개체(Fig 3.)만을 확인선별․ 하여 사용하였으며 유발률은, 70% 정도였다.

의 와 경구투여 의 와 경구투여 의 와 경구투여 의 와 경구투여 3.

3. 3.

3. 凉膈散火湯 抽出液 凉膈散火湯 抽出液 凉膈散火湯 抽出液 凉膈散火湯 抽出液 製造 製造 製造 製造

본 실험에서 사용된凉膈散火湯(Yangkyuksanhwa- tang : YS)은東國大學校 韓方病院에서 구입한 후 정선하여 사용하였다(Table 1).凉膈散火湯 貼 分2 을 증류수500 에 넣고 시간동안3 한 후 여

量 ㎖ 煎湯

과하였다 그. 濾液을rotary evaporator로50㎖濃縮 한 凉膈散火湯 抽出液을 아토피 피부염 유발 후

에 매일 로 경구투여 시켰다

YS群 2.5 / /day㎖ ㎏ .

韓藥名 生藥名 重量(g)

生地黃 Rehmanniae Radix 8

忍冬藤 Lonicerae Caulis 8

連翹 Forsythiae Fructus 8

山梔子 Gardeniae Fructus 4

薄荷 Menthae Herba 4

知母 Anemarrhenae Rhizoma 4

石膏 Gypsum Fibrosum 4

防風 Ledebouriellae Radix 4

荊芥 Schizonepetae Herba 4

總 量 48

Table 1. The amount and composition ofYangkyuksanhwa -tang(YS) extract

4. (eosinophil) 4. (eosinophil) 4. (eosinophil) 4. 血液內 好酸性 白血球 血液內 好酸性 白血球 血液內 好酸性 白血球 血液內 好酸性 白血球 (eosinophil) 變化 變化 變化 變化

아토피 질환의 대표적 지표인好酸性 白血球의 혈액내 조성 변화를 조사하기 위해 심장천자로 채 혈한 후, Hinkelmann용액에 희석한 다음Neubauer 계산반(Superior, Germany)으로 계수하였다.

5. 5. 5.

5. 皮膚 組織標本 製作 皮膚 組織標本 製作 皮膚 組織標本 製作 皮膚 組織標本 製作

아토피 피부염이 유발된 각 群을 sodium

용액으로 마취한 후 와

pentobarbital vascular rinse 중성 포르말린용액

10% (neutral buffered formalin : 으로 심장관류고정을 실시하였다 처리부

NBF) . SDS

위에서 절취한皮膚는 실온에서10% NBF에24시 간동안 고정한 후 통상적인 방법으로paraffin에 포 매하고 5㎛ 두께로 연속절편을 만들었다 만들어. 진 연속절편은Hematoxyline과Eosin으로 염색하여 표본을 제작하였다 한편 냉동절편 제작은. NBF에 고정한 후10% formol-calcium에 주일동안 산화 처1 리하였다. 30% sucrose용액에cryprotection한 후 냉 동절편기(Microm, Germany)로10㎛두께의 냉동절 편을 제작하였다. 角質層에서의 微細構造 관찰을 위해皮膚 切片을1/2 Karnovsky용액에 선고정한 후1% OsO4용액에 후고정하였으며Uranyl acetate 에90分동안 염색한 후 통상적인 방법으로epon에 포매하였다.組織切片은ultramicrotome(LKB, Nova) 으로90㎚두께로切片을 만들어toluidine blue로 염색한 후 광학현미경으로 皮膚 角質層의微細構 를 관찰하였다. 전자현미경 관찰은 造 變化

으로 두께로

ultramicrotome(LKB, Nova) 60-80㎚ 切片 을 만든 다음 투과전자현미경(Hitach H-600)으로 관찰하였다.

사이공간내 의

사이공간내 의

사이공간내 의

사이공간내 의

6.

6. 6.

6. 皮膚 表皮細胞 皮膚 表皮細胞 皮膚 表皮細胞 皮膚 表皮細胞 複合糖質 複合糖質 複合糖質 複合糖質 變化 變化 變化 變化

을 이용한 면역조직화학적 염색을 실시하였 lectin

다 우선 조직을 실온에서. 1% bovine serum

에 시간동안 한

albumin(BSA; Sigma, U.S.A) 1 blocking 다음1:100으로 희석한biotinylated anti SBA(Sigma,

에 내에서 시간동안

U.S.A) 4℃incubation chamber 24

반응시켰다 그런 다음. ABC kit(avidin biotin 에 시간동안 실온에서 complex; Vector Lab, U.S.A.) 1

반응시켰다.

과 0.05% 3,3'-diaminobenzidine(DAB : Sigma, U.S.A)

이 포함된 완충용액

0.01% HCl 0.05M tris-HCl (pH 에서 발색시킨 후 으로 대조 염색하 7.4) , hematoxylin

여 광학현미경으로 관찰하였다. Lectin반응의 강도 는- (음성), + (약한 양성), ++ (중간정도 양성 그) 리고 +++ (강한 양성 등으로 표시하였다) .

Lectin Optium ditution Sugar specificity SBA 4㎍ ㎖/ D-N-acetylgalactosamine Table 2. Sugar Specifities and Inhibitory Carbohydrate of Soybean Agglutinin(SBA)

의 의 의 의 7.

7.

7.

7. 表皮 角質層 表皮 角質層 表皮 角質層 表皮 角質層 脂質 保護障壁 變化 脂質 保護障壁 變化 脂質 保護障壁 變化 脂質 保護障壁 變化

1) 脂肪 分布 變化 觀察

염색법을 통해 내 지방의 Sudan black B 角質層

분포변화를 조사하였는데, 우선 냉동절편을 로 분간 탈수한 후 absolute propylene glycol 10 Sudan

용액에 분간 염색하였다

black B 10 . 85% propylene 로 분간 탈색한 후 증류수에 수세하고 glycol 3

로 분간 대조 염색하였다 대조 염 nuclear fast red 1 .

색 후 증류수로 회 수세한 다음3 glycerin jelly로 봉 입한 후 광학현미경으로 관찰하였다.

2) Ceramide 分布 變化 觀察

각질층내 지방중26%을 차지하는ceramide의 분 포 변화를 조사하기위해서 항ceramide항체를 이 용한 면역조직화학적 염색을 실시하였다 우선 냉. 동절편을 blocking serum인 10% normal goat 에서 시간 동안 반응 serum(1:20, DAKO, Denmark) 1

시켜 비특이적 면역반응을 억제하였다 그리고. 1 차 항체인mouse anti-mouse ceramine(1:10, Sigma)에 에서 시간 동안 반응시켰 4℃humidified chamber 72

으며, biotinylated goat anti-mouse IgG(DAKO)에 실온 에서10분간link하였다. Steptavidin peroxidase(LSAB

에 분동안 실온에서 반응시킨 후

: DAKO) 10 0.05%

과 이

3,3'-diaminobenzidine(DAB : Sigma) 0.01% HCl 포함된0.05M tris-HCl완충용액(pH 7.4)에서 발색 시킨 후, hematoxylin으로 대조염색하여 광학현미경 으로 관찰하였다.

8.

8.

8.

8. 炎症 變化 炎症 變化 炎症 變化 炎症 變化

1) 肥滿細胞 分布 變化 觀察

에 관여하는 진피내 비만세포의 분포 炎症反應

와 형태 변화를 조사하기 위해Luna's method를 실 시하였다 우선. 5㎛두께의 연속절편을 aldehyde

에 분간 염색한 후

fuchsin 30 Weigert's iron

과 용액에 각각 분 분

hematoxylin methyl orange 1 , 5 동안 대조염색하였다.

의

2) Stress 緩衝 物質 變化 觀察

피부손상에 따른 스트레스에 대한 완충적 물질 인 열 충격 단백질(heat shock protein, HSP)의 하나

인Hsp70분포변화를 관찰하기 위한 면역조직화학 적 염색을 실시하였다 우선 절편을. proteinase K(20

에 분 동안 과정을 거친 후

/ ) 5 proteolysis

㎍ ㎖

인

blocking serum 10% normal goat serum(DAKO, 에서 시간 동안 반응시켰다 그리고

Denmark) 1 . 4℃

에서 차 항체인

humidified chamber 1 rabbit anti mouse 을 시간 반 Hsp70(1:200, Santa Cruz Biotec, U.S.A) 72 응시켰으며 다음, 2차 항체인 goat anti-rabbit

에 시간 동안 반응시켰다 시 IgG(1:100, DAKO) 24 . 1 간동안 실온에서 Avidin biotin complex(ABC : Vector

에 반응시킨 후 로 발색처리 후 Lab, U.S.A) DAB

으로 대조염색하여 광학현미경으로 관 hematoxylin

찰하였다.

의

3) 炎症誘發性Cytokine 變化 觀察

상피내 염증에 관여하는cytokine들 중 세포활성 을 주도하는protein kinase C(PKC),염증관련 신호 에 관여하는nuclear factor(NF)- B p50,κ 염증유발성

인

cytokine Tumor necrosis factor- (TNF- ),α α 그리고 분자 등의 분포 변 Interleukin-12(IL-12) CD28

화를 조사하기 위해서 rabbit anti-mouse PKC(1:200, Santa Cruz Biotec), rabbit anti-mouse NF- B p50(1:200,κ Santa Cruz Biotec), rabbit anti-mouse TNF- (1:200,α

및

Santa Cruz Biotec) rabbit anti-mouse IL-12B(1:200, Santa Cruz Biotec), rabbit anti-mouse CD28(1:200, 를 이용한 면역조직화학적 염색을 Santa Cruz Biotec)

실시하였으며 이후 과정은 위에 기술한 면역조직, 화학적 염색법과 동일하였다.

세포기용 변화 4)

피부내 세포기용에 관여하는 세포부착분자 과 그 관련된 (intercellular adhesion molecule : ICAM)-1

인 의 분포변화를 관찰하기 위해

ligand CD11/18b

과 rabbit anti-mouse ICAM-1(CD54 : Serotec) rat

항체를 이용한 면역조 anti-mouse Mac-1(Serotec, UK)

직화학적 염색을 실시하였다.

과 과 과 과 9.

9. 9.

9. 細胞增殖 細胞增殖 細胞增殖 細胞增殖 細胞自己殺害 變化 細胞自己殺害 變化 細胞自己殺害 變化 細胞自己殺害 變化

피부내 세포증식 변화를 조사하기위해BrdU를 이용한 면역조직화학적 염색을 실시하였다 우선. 실험동물에서 피부를 적출하기 시간 전5 , 3시간 전, 1시간 전에 생리식염수에 녹인5- bromo -2’

을 복강 주 -deoxyuridine(BrdU, Sigma, U.S.A) 50㎎㎏/

사하였다 얻어진 연속절편은. 4℃와 37℃의 2N

용액에서 각각 분씩 반응시켜

HCl 20 DNA-

을 일으켰다 완충용액 처리

denaturation . 0.1M borate

로 안정시킨 후 비특이적 면역반응을 억제하기위 해0.01% proteinase K의 가 포함된normal goat serum 에 시간동안 반응시켰다 그런 다음 차 항체인1 . 1

에 mouse anti-mouse BrdU(1:50, Amersham, UK) 4℃

내에서 시간 반응시켰고 이후 incubation chamber 72

과정은 위에 기술한 면역조직화학적 염색법과 동 일하였다.

2) 細胞自己殺害 變化 觀察

세포의 분포변화를 조사하기 위해

Apoptotic in

를 situ apoptosis detection kit(Apoptag, Intergen, U.S.A) 이용한 TUNEL(terminal deoxynucleotid transferase-

방법을 실시 mediated dUTP-biotin nick-end labelling)

하였다 먼저 조직 절편을. proteinase K에 분간5

시킨 다음 에서 초간

proteolysis equilibration buffer 20 처리하였다 그런 다음. strength TdT enzyme(36㎕

을 처리하여 TdT enzyme : 72㎕reaction buffer) 37℃ 의humidified chamber에서 시간 동안 반응시킨 후1 에서 분 동안 처리하였다 strength stop/wash buffer 10 .

에 시간 동안 반응시킨 Anti-digoxigenin-peroxidase 1

후DAB를 처리하였다. Hematoxylin으로 대조염색 한 후 광학현미경으로 관찰하였다 한편. Bcl-2와 등의 신호분자들 변화를 조사하기 위 Bax Apoptosis

해서rabbit anti-mouse Bcl-2(Pharmingen, U.S.A)그리 고rabbit anti-mouse Bax(Pharmingen)항체를 이용한 면역조직화학적 염색을 실시하였다.

10. 10.

10. 10. 凉膈散火湯 凉膈散火湯 凉膈散火湯 凉膈散火湯 의 의 의 의 受動皮膚 受動皮膚 受動皮膚 受動皮膚 anaphylaxis anaphylaxis anaphylaxis anaphylaxis 抑制 效果 抑制 效果 抑制 效果 抑制 效果

IgE monoclonal anti- 를 면도 dinitrophenyl(DNP) IgE (Sigma, U.S.A) 100㎕

된 등쪽 피내에 주사한 다음48시간 후4% Evan 에 희석한

blue DNP-human serum albumin(DNP-HSA 을 꼬리정맥에 주사하여 일으

; Sigma, U.S.A) 100㎎

켰다.凉膈散火湯추출액은DNP-HSA주사 시간1 전에 경구 투여하였다 피부에 나타난. Evan blue의 분포를 영상분석 하였으며 아울러 피부절편을, 로 염색한 후 에 의한 비만 Luna's method 凉膈散火湯

세포의 분비 억제능을 조사하였다.

11. 11.

11. 11. Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus 의 생장 변화 의 생장 변화 의 생장 변화 의 생장 변화

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus

을 추출액으로 medium, 24 , 120 rpm)℃ 凉膈散火湯

농도에 따라 처리한 다음16시간 배양하여 배양액 을 분광광도계(UV-160A UV-Vis spectrophotometer, Shimadzu Co., Japan)의660㎚에서 흡광도를 측정하였 다 또한. LB한천배지에 도포시켜16시간동안 성장 시킨

Staphylococcus aureus

과 과 과 과 12. 12.

12. 12. 映像分析 映像分析 映像分析 映像分析 統計處理 統計處理 統計處理 統計處理

모든 결과를Optimas 5.2 (Optima Co., U.S.A)를 이용한 영상분석(image analysis)을 실시하였으며 영 상분석 결과는 Sigma Plot 2000(Sigma)을 통한

로 유의성을 검증하였다

student T test .

. 結 果

Ⅲ

1. 1. 1.

1. 外部形態 變化 外部形態 變化 外部形態 變化 外部形態 變化

시간 경과 후 의 피부에서는 대부분 각질

72 AD群

층이 손상된 습진 형태로 관찰되었다(Fig 3.).또한 일 부에서는 가장자리지역까지 확대된 극심한 표피세포 의 증식 즉 건선이 확인되었다, (Fig 4.).이러한AD群 의 아토피 유발 피부를 절개하여 진피를 관찰한 결과 혈관의 직경이 커졌으며 신생혈관으로 추정되는 혈, 관이 많이 관찰되었고 중심지역은 누출된 혈액으로, 붉은색을 띠고 있었다(Fig 5.).이에 반해YS群은 일부 가장자리 지역을 제외하고는 정상적인 각질층의 분 포를 유지하여(Fig 6., 7.)아토피 유발직후(Fig 3.)보다 각질층이 회복되는 것으로 관찰되었다 또한 진피 쪽. 피부의 혈관 분포도AD群에 비해 적었고 누출된 혈, 액도 적었다(Fig 8.).

2. 2. 2.

2. 血液內 好酸性 白血球 變化 血液內 好酸性 白血球 變化 血液內 好酸性 白血球 變化 血液內 好酸性 白血球 變化

혈액내 호산성 백혈구의 수를 조사한 결과 시간이 경과할수록 대조군에 비해AD群에서는 그 수가 증가 한 반면, YS群에서는AD群에 비해 유의성 있는 감소 경향을 보였다(Fig 1.).그 결과513±15.4 /㎕개 인 대조 군에 비해AD群은 아토피 유발 후24시간에서11.3%

증가한571±12.5 / , 48개㎕ 시간에서는63.6%증가한

개 시간에서는 나 증가한

839±21.3 / , 72㎕ 205.4%

개 로 측정되었다 이에 반해 에서는 1566±27.8 /㎕ . YS群

에 비해 아토피 유발 후 시간에서 감소

AD群 24 8.1%

한 525±10.1 / , 48개㎕ 시간에서는 21.0% 감소한

개 시간에서는 나 감소한

662±17.8 / , 72㎕ 50.3%

개 로 나타났다 778±22.4 /㎕ .

G R O U P

Number of Eosinophil (/µl)

4 0 0 8 0 0 1 2 0 0 1 6 0 0

Y S C O N A D

*

Fig. 1. The inhibition effect of eosinophil in YS treated murine at hour-72 after atopic dermatitis (AD) elicitation.

The number of eosinophil in mice treated with YS noticeably decreased than AD group and this decrease had probability in P<0.05 of student T test.

인 와 의

인 와 의

인 와 의

인 와 의

3.

3.

3.

3. 一般的 一般的 一般的 一般的 形態 形態 形態 形態 微細構造 微細構造 微細構造 微細構造 變化 變化 變化 變化

에서 외부형태상 각질층 손상이 확인된 피부 AD群

에서는 과립백혈구와 림프구의 침윤과 혈관에서 누 출된 혈액의 분포 증가가 두드러지게 관찰되었다(Fig.

그리고 외부형태상 각질층 손상주변의 상피는 세 9).

포과형성으로 인한 상피층의 증가와 부종화를 확인 할 수 있었다(Fig 10.).손상된 각질층에서는 각질세포 사이공간에lipid lamella가 존재하지 않았으며(Fig 17.), 세포사이공간의 확장과 각질세포의 탈락이 두드러졌 다(Fig 13.).이에 반해YS群에서는 과립백혈구와 림프 구의 침윤 및 혈관에서 누출된 혈액의 분포가 관찰되 지 않았으며(Fig 11.),상피층 증가와 부종화도 적었다

각질층의 각질세포사이공간에서는

(Fig 12.). lipid

와 가 균일하게 분포하였으며 lamella lipid body (Fig 18.,

과는 달리 세포사이공간의 확장과 각질세 19.), AD群

포의 탈락이 관찰되지 않았다(Fig 14.).

사이공간내 의

사이공간내 의

사이공간내 의

사이공간내 의

4. 4.

4. 4. 皮膚 表皮細胞 皮膚 表皮細胞 皮膚 表皮細胞 皮膚 表皮細胞 複合糖質 複合糖質 複合糖質 複合糖質 變化 變化 變化 變化

AD群 SBA

이 과립층의 일부 세포사이공간에서만 유지되고, 가시층과 기저층의 세포사이공간에서는 사라졌다

반면 에서는 과는 달리

(Table 3., Fig 15.). YS群 AD群

과립층과 가시층의 세포사이공간에서 강한 양성반 응을 보였다(Table 3., Fig 16.).

의 의 의 의 5.

5.

5.

5. 角質層 角質層 角質層 角質層 脂質 保護障壁 變化 脂質 保護障壁 變化 脂質 保護障壁 變化 脂質 保護障壁 變化

에서 각질층의 분포는 일부 과

AD群 lipid lamella

립층 주변에서만 관찰되었으며 그 외 지역에서는, 나타나지 않았다(Fig 20.).이에 반해YS群에서는 과립층과 각질층의 각질세포 사이에서 선 모양으

로 배열된 지방분포를 관찰할 수 있었다(Fig 22.).

한편 각질층의ceramide분포 조사 결과AD群에 서는ceramide가 약한 양성반응이 관찰된 반면(Fig

에서는 강한 양성반응이 나타났다

21.), YS群 (Fig

에서는 대조군에 비해 감소한

23.). AD群 88.1%

로 관찰되었다 이에 반해 646±12 / 100,000 pick cell .

에서는 에 비해 증가한

YS群 AD群 331.7% 2789±96 / 로 관찰되었다

100,000 pick cell (Table 4.).

Antibody Group

CON(M±S.D) AD(M±S.D) YS(M±S.D) Ceramide 5439±148 646±12 2789±96^* (image analysis for 100,000 particles / range of intensity : 80 - 140) Abbreviation : CON,no treated mice ; AD,atopic dermatitis elicitated mice ; YS,YS extract administered mice after AD elicitation ; M±S.D,Mean±Standard Deviation ; *,P < 0.05 compared with AD Table 4. The Image Aanalysis of Ceramide Distribution in YS treated Murine Skin with Atopic Dermatitis(AD)

6.

6. 6.

6. 皮膚內 炎症 變化 皮膚內 炎症 變化 皮膚內 炎症 變化 皮膚內 炎症 變化

1) 肥滿細胞 分布 變化

에서는 진피 유두에서 피하 인접부까지 많 AD群

은 수의 비만세포가 분포하고 있었으며 탈과립형, 이 주를 이루었다(Fig 24.).이에 반해YS群에서는 에 비해 적은 수가 관찰되었으며 과립형이

AD群 ,

주를 이루었다(Fig 25.).

의 2) Stress 緩衝物質 變化

에 대한 완충적 물질인 분포는 핵과

Stress Hsp70

주변세포질에서 강한 양성반응을 보이는 것으로 관찰되었는데, AD群에 비해YS群에서Hsp70양성 반응세포가 감소된 것으로 관찰되었다(Fig 28., 29.).

은 대조군에 비해 증가한

AD群 914.0% 2170±125 / 로 관찰되었다 이에 반해 에 200,000 pick cell . YS群 서는AD群에 비해35.7%감소한1396±98 / 200,000

로 관찰되었다

pick cell (Table 5.).

Antibody Group

CON AD YS

Hsp70 214±18 2170±125 1396±98^*

(image analysis for 200,000 particles / range of intensity : 80 - 140) Abbreviation : CON,no treated mice ; AD,atopic dermatitis elicitated mice ; YS,YS extract administered mice after AD elicitation ; M±S.D,Mean±Standard Deviation ; *,P < 0.05 compared with AD Table 5. The Image Analysis of Hsp 70 Distribution in YS treated Murine Skin with Atopic Dermatitis(AD)

의

3) 炎症誘發性Cytokine 變化 觀察

표피 기저부와 진피유두에서 관찰되는PKC양 성반응은 핵막과 세포질에서 강하게 나타났으며,

에 비해 에서 양성반응세포가 감소

AD群 YS群 PKC

된 것으로 관찰되었다(Fig 30., 31.). AD群은 대조군 에 비해227.7%증가한1170±134 / 200,000 pick cell 로 관찰되었다 이에 반해. YS群에서는AD群에 비 해39.3%감소한710±28 / 200,000 pick cell로 관찰 되었다(Table 6.).

일부 기저부와 진피유두에서 관찰되는 NF- Bκ 양성반응은 핵막과 세포질에서 강하게 나타났 p50

으며, AD群에 비해YS群에서NF- B p50κ 양성반응 세포가 감소된 것으로 관찰되었다(Fig 32., 33.). AD 은 대조군에 비해491.5%증가한1248±139 / 群

로 관찰되었다 이에 반해 에 200,000 pick cell . YS群 서는AD群에 비해58.5%감소한518±38 / 200,000

로 관찰되었다

pick cell (Table 6.).

표피 기저부와 주변 진피에서 관찰되는 TNF-α 양성반응은 핵막주변 세포질에서 강하게 나타났으 며, AD群에 비해YS群에서TNF-α양성반응세포가 감소된 것으로 관찰되었다(Fig 34., 35.). AD群은 대 조군에 비해910.1%증가한2707±185 / 200,000

로 관찰되었다 이에 반해 에서는

pick cell . YS群 AD

에 비해77.8%감소한597±43 / 200,000 pick cell 群

로 관찰되었다(Table 6.).

LECTIN POSITION GROUP

CONTROL AD YS

stratum corneum + + +

stratum granulosum +++ + +++

SBA stratum spinosum ++ - ++

stratum basale + - +

dermis - - -

Abbreviation : CON,no treated mice ; AD,atopic dermatitis elicitated mice ; YS,YS extract administered mice after AD elicitation ; *,P < 0.05 compared with AD ; -,negative ; +,weak ; ++,moderate ; +++,strong

Table 3 The Difference of SBA Distribution at Hour 72 after AD Elicitation

표피 기저부에서 관찰되는IL-12B 양성반응은 세포질에서 강하게 나타났으며, AD群에 비해YS 에서IL-12B양성반응세포가 감소된 것으로 관 群

찰되었다(Fig 36., 37.). AD群은 대조군에 비해

증가한 로 관찰

763.3% 1269±141 / 200,000 pick cell 되었다 이에 반해. YS群에서는AD群에 비해74.4%

감소한325±21 / 200,000 pick cell로 관찰되었다 (Table 6.).

진피유두와 손상 표피 기저부에서 관찰되는 양성반응은 세포질에서 강하게 나타났으며

CD28 ,

에 비해 에서 양성반응세포가 감

AD群 YS群 CD28

소된 것으로 관찰되었다(Fig 38., 39.). AD群은 대조 군에 비해726.3%증가한1636±163 / 200,000 pick 로 관찰되었다 이에 반해 에서는 에

cell . YS群 AD群

비해67.8%감소한526±29 / 200,000 pick cell로 관 찰되었다(Table 6.).

Antibody Group

CON(M±S.D) AD(M±S.D) YS(M±S.D)

PKC 357±21 1170±134 710±28^*

NF- B p50κ 211±31 1248±139 518±38^*

TNF-α 268±28 2707±185 597±43^*

IL-12B 147±39 1269±141 325±21^*

CD28 198±13 1636±163 526±29^*

(image analysis for 200,000 particles / range of intensity : 80 - 140) Abbreviation : CON,no treated mice ; AD,atopic dermatitis elicitated mice ; YS,YS extract administered mice after AD elicitation ; M±S.D,Mean ± Standard Deviation ; *,P < 0.05 compared with AD Table 6. The Image Analysis of Immunohistochemistry for Inflammation Intricated Cytokine in YS treated Murine Skin with AD

세포기용 물질의 변화 4)

표피기저부와 진피유두에서 관찰되는 ICAM-1 양성반응세포는AD群에 비해YS群에서 감소된 것 으로 관찰되었다(Fig 40., 41.). AD群은 대조군에 비 해623.7%증가한2598±196 / 200,000 pick cell로 관 찰되었으며 이에 반해, YS群에서는AD群에 비해

감소한 로 관찰되

56.1% 1141±102 / 200,000 pick cell 었다(Table 7.).

진피유두에서 관찰되는CD11/18b양성반응세포 는AD群에 비해YS群에서 감소된 것으로 관찰되 었다(Fig. 42., 43.). AD群은 대조군에 비해238.2%

증가한301±49 / 200,000 pick cell로 관찰되었다 이. 에 반해 YS群에서는AD群에 비해27.9%감소한

로 관찰되었다

217±28 / 200,000 pick cell (Table 7.).

Antibody Group

CON(M±S.D) AD(M±S.D) YS(M±S.D) ICAM-1 359±28 2598±196 1141±102^*

CD11/18b 89±7 301±49 217±28^*

(image analysis for 200,000 particles / range of intensity : 80 - 140) Abbreviation : CON,no treated mice ; AD,atopic dermatitis elicitated mice ; YS,YS extract administered mice after AD elicitation ; M±S.D,Mean±Standard Deviation ; *,P < 0.05 compared with AD Table 7. The Image Analysis of Immunohistochemistry for Cell Adhesion in YS treated Murine Skin with AD

피부내 과

피부내 피부내 과 과

피부내 과

7.

7.

7.

7. 細胞增殖 細胞增殖 細胞增殖 細胞增殖 細胞自己殺害 變化 細胞自己殺害 變化 細胞自己殺害 變化 細胞自己殺害 變化

표피 기저층의 증식된 세포에서 관찰되는 BrdU 양성반응은 핵에서 강하게 나타났으며, AD群에 비 해YS群에서 반응세포가 감소된 것으로 관찰되었 다(Fig 44., 45.). AD群은 대조군에 비해366.4%증가 한2677±181 / 200,000 pick cell로 관찰되었다 이에. 반해 YS群에서는 AD群에 비해 50.7% 감소한

로 관찰되었다

1320±109 / 200,000 pick cell (Table 8.).

2) 細胞自己殺害 變化 觀察

표피의 자기살해세포에서 관찰되는apoptotic양 성반응은 핵에서 강하게 나타났으며, AD群에 비해 에서 반응세포가 감소된 것으로 관찰되었다 YS群

은 대조군에 비해 증가

(Fig 46., 47.). AD群 1739.0%

한4947±391 / 200,000 pick cell로 관찰되었다 이에. 반해YS群에서는AD群에 비해85%감소한536±84

로 관찰되었다

/ 200,000 pick cell (Table 8.).

진피유두에서 관찰되는Bcl-2양성반응은 핵막 주변에서 강하게 나타났으며, AD群에 비해YS群 에서 반응세포가 증가된 것으로 관찰되었다(Fig.

은 대조군에 비해 감소한

48., 49.). AD群 60.3%

로 관찰되었다 이에 반 1780±191 / 200,000 pick cell .

해YS群에서는AD群에 비해89%증가한8169±384 로 관찰되었다

/ 200,000 pick cell (Table 8.).

진피유두에서 관찰되는Bax양성반응은 핵막주 변에서 강하게 나타났으며, AD群에 비해YS群에 서 반응세포가 감소된 것으로 관찰되었다(Fig 50.,

은 대조군에 비해 증가한

51.). AD群 469.3%

로 관찰되었다 이에 반 3974±245 / 200,000 pick cell .

해 YS群에서는 AD群에 비해 71.8% 감소한 로 관찰되었다

1119±87 / 200,000 pick cell (Table 8.).

Antibody Group

CON(M±S.D) AD(M±S.D) YS(M±S.D)

BrdU 574±64 2677±181 1320±109*

Apoptosis 269±32 4947±391 536±84*

Bcl-2 4478±214 1180±191 8169±384*

Bax 698±52 3974±245 1119±87*

(image analysis for 200,000 particles / range of intensity : 80 - 140) Abbreviation : CON,no treated mice ; AD,atopic dermatitis elicitated mice ; YS,YS extract administered mice after AD elicitation ; M±S.D,Mean±Standard Deviation ; *,P < 0.05 compared with AD Table 8. The Image Analysis of Cell Proliferation and Apoptosis in YS treated Murine Skin with AD

8. anaphylaxis 8. 8. anaphylaxis anaphylaxis

8. 受動皮膚 受動皮膚 受動皮膚 受動皮膚 anaphylaxis 抑制 效果 抑制 效果 抑制 效果 抑制 效果

의존성 피부반응은 에비해 에서

IgE AD群 YS群

감소된 경향을 보였는데(Fig 52., 53.),영상분석 결 과7107±354 / 200,000 pick cell인AD群에 비해YS 은710±21 / 200,000 pick cell로 나타나84.2%의 群

억제율을 보였다 한편. IgE 의존성 피부반응이 일 어난 부위의 비만세포의 형태변화를 살펴보면 AD 에서는 탈과립형 비만세포가 주된 분포경향을 群

보인 반면(Fig 54.), YS群에서는 과립형 비만세포가 주로 관찰되었다(Fig 55.).

9. 9. 9.

9. Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus 의 의 生長 抑制 效果 의 의 生長 抑制 效果 生長 抑制 效果 生長 抑制 效果

인 생장억제 경향을 보였다(Fig 56., 57., 58., 59.).

무처리시0.38±0.0012 unit/㎖인데 비해YS추출물 배 희석 처리시 감소한

1000 11.8% 0.335±0.0021

배 희석 처리시 감소한

unit/ , 100㎖ 12.9%

배 희석 처리시 감소 0.331±0.0014 unit/ , 10㎖ 20.5%

한 0.302±0.0017 unit/㎖로 관찰되었다(Fig 2.).

Absorption rate of Staphylococcus aureus

0 . 3 0 0 . 3 5 0 . 4 0

C O N x 1 0 0 0 x 1 0 0 x 1 0 F o ld s

* *

*

Fig. 2. The inhibition effect of proliferation inStaphylococcus aureusat hour-16 after YS extract treatment. The number ofStaphylococcus aureuswere dependently decreased by YS dilution and this decrease had probability in P<0.05 of student T test.

CON,no treated ; X1000,1000-folds dilution ; X100,100-folds dilution ; X10,10-folds dilution