임상병리검사과학회지 : 제 28권 제 1 호 1996.
AMeX- 처 리 파라핀 절 편 을 이 용한 alkaline phosphatase의 검출에 관한 조직화학적 연구
원광보건전문대학 임상병리과
제갈승주·정주연
Histochemical Demonstration of Alkaline Phosphatase by Using AMeX - Prepared Paraffin Sections in Rat Tissues
Jekal, Seung-Joo., Jung, Ju- Yeun
Dept. of Clinical Path여ogy. Wonkwang Health Junior C여~lege
The purpose of this study was performed to evaluate the usefulness of the acetone- fixed, methyl benzoate and xylene cleared (AMeX -prepared) paraffin sections for dem- onstration of alkaline phosphatase(ALPase) activity. Tissues were fixed in acetone at
- 200C overnight, then cleared in methyl benzoate and xylene, consecutively, and embed- ded in ordinary paraffin at 58 ... 60oC. Paraffin sections were deparaffinized with xylene, rehydrated with a descending graded alcohol series and then washed in distilled water, and stained with azo dye coupling method, which have generally been used on fresh- frozen or cold acetone-fixed frozen sections. As with cold-acetone-fixed frozen sec tions, ALPase activity was clearly localized in the all tissue sections prepared with the present method : stomach, small intestine, liver, spleen, pancreas, kidney, adrenal, uterus, salpinx, ovary, heart, trachea and lung. High concentrations of ALPase, especially, were found in the brush borders of the intestinal mucosa and the proximal tubules of the kid- ney. ALPase was always observed in the capillary endothelium of all tissue sections, and also in the chief cells of stomach, eosinophilic leukocytes in intestinal mucosa, Kupffer cells of liver, reticular cells of spleen, basal cells and some surface epithelial cells of tracheal epithelium and alveolar macrophages of lung. In addition, isozyme pat- terns of ALPase in the all tissue sections could be classsified to two species, intestinal - type and other nonspecific type, based on response to 2.5 mM L -levamisole and 650C - pretreatment. These findings indicate that sections prepared by the present method demonstrated much better histologic and cytologic preservation than possible in frozen sections. Therefore, azo dye coupling method using AMeX - prepared paraffin sections is
considered to be a useful method for demonstration of ALPase activity in rat tissues.
Key words: ALPase, isozyme, azo dye coupling method, AMeX-prepared paraffin S9C-
tions
1 . 서 료르 L....
Alkaline phospha tase (ALPase) 는 알카리 성
(pH 9.8 부근)에 서 phosphate ester 화합물의 가수분해를 촉매하는 효소로， 분자량 100,000
--200,000 정도의 당단백질이며， 구성분자내에
아연 (Zn) 을 함유한 metalloenzyme이 다 1 ， 2) 사 람의 경우 ALPase는 2개의 동일 분자로 이루 어진 2량체 (dimer) 이며， 적어도 3가지 이상의 Isozyme이 있는 것 으로 알려 져 있다 2， 3) 이 효소 는 조직화학적으로 조직의 종류에 관계없이 효 소활성 이 세 포막에 서 관찰되 며 , phospholipase
C의 처리에 의하여 제거할 수 있다 4)
ALPase의 활성은 조직화학적으로 소장점막 상피의 쇄자연 (brush border ), 콩팔의 근위곡 요세관상피의 쇄자연에 풍부하게 존재하며， 혈 액， 골수， 방광， 부신， 유선， 난소， 간장， 태반 등에 분포하고 있다. 그러 나 이 효소는 다양한 세포에서 발견되고 있고， 또 몇 종류의 IS0- zyme으로 이루어져 있으며， 기질 특이성이 낮 기 때문에 아직도 그 기능이 확실히 이해되지
않고 있다 3 ， 5， 6)
최근 ALPase는 뼈와 연골의 석회침착과정 7.8) ’ 혈 관 - 뇌 관문 (blood - brain barrier) 의 형 성 과 정 9) ， 혈관벽의 대사 lû) 등에 관여하며， 소장에서 인산결합단백질과 1) 태반에서 IgG receptor로서 10) 보고되어 있다. 또한 ALPase는 B- 림프구， 망 막세포， 맥락막세포와 같은 세포들의 성장과 분
화에도 관여하는 것으로 보고되고 있으며 l2 l3 l4), 병리조직학적으로는 태반 ALPase의 경우 드 물게 비뇨생식기계암， 위장관계암， 폐암에서 종 양태아성 항원 (oncofetal antigen) 으로 알려지 고 있어 ALPase에 대한 새로운 관심이 증대 되고 있다.
ALPase 활성은 1939 년 Gomori와 Takamat
su가 같은 해에 각각 독자적으로 금속침전법
(metal precipitation method) 을 사용하여 최초 로 조직내에서 국재화 (localiza tion) 하는데 성공 한 이 래 15,16), Menton 등은 기 질로 a-naphtyl
phosphate를 사용하는 아조염 료커 플링 법 (azo dye coupling method) 에 의 해 신 장 에 서 ALP ase 활성을 국재화하였고l7) ， 그 후 Burstone은
a-naphtyl phosphate 대 신 naphthol AS- MX
또는 AS-BI를 기질로 사용함으로써 안정된 아 조염료커플링법을 정착시키는데 공헌하였다 18) 그러 나 ALPase 활성 을 조직 화학적 으로 정 확히 국재화하는데는 고정액의 종류， 절편의 종류，
조직의 고정유무， 고정방법， 효소저해제 또는 활성제 등의 사용에 대한 많은 문제점이 있는 것으로 지적되어 왔다 19-28)
이 때문에 Dempo 등(1 980) 은 태반 ALPase
Isozyme의 종간 차이를 보기 위해 ALPase 활 성이 좋은 고정액을 검토한 결과 acetone ( 40C )
고정후 파라핀절편한 것이 에탄올이나 포르마린 고정후 파라핀절편한 것보다 우수하다고 보고 하였다 29) 그 후 Sato 등은 이 방법을 개량한 AMeX처리 파라핀절편을 acetone( - 200C) 에 고 정한 후， acetone 으로 탈수， methyl benzoate 와 xylene에 투명， 파라핀포매한 절편을 조직내 항원 검출을 위한 면역조직화학적 염색에 적용 한 바 항원의 보존에 매우 우수하며， 조직처리 과정이 비교적 신속한 방법임을 확인하였다30)
따라서 본 연 구의 목적 은 ALPase의 광학현 미경에 의한 효소조직화학적 검색에서 AMeX 처리 파라핀절편제작방법에 대한 효소활성의 보존상태를 평가함과 동시에 그 활용 가능성을 검토하기 위해 시도하였다. 이를 위해 흰쥐의 여러 장기를 AMeX 처리과정을 거쳐 파라핀절 편을 제작하여 아조염료커플링염색을 실시하였 고， 이 와 함께 ALPase isozyme의 양상도 조사
하여 안정된 결과를 얻었기에 그 결과를 보고 한다.
ll. 실험재료 및 방법
1. 조직표본제작
실험에는 Sprague-Dawley계의 암컷 흰쥐 (체중 200--320 g) 10마리를 원광대의대 동물 사육실에서 구입하여 사용하였다. 실험을 위해 2주간 상품화된 고형사료(신촌사료주식회사，
서울)와 물을 먹이로 사육하면서 실험환경에 적옹시킨다음， 실험전 24시간 절식하였다. 이 쥐 는 척 추탈구 ( cervical disloca tion) 에 의 해 희 생시킨 후， 즉시 절개하여 위， 소장， 간장， 비 장， 훼장， 콩팔， 부신， 자궁， 난관， 난소， 심장，
기관， 폐를 적출하였다. 이 조직들은 Sato 등 (1 986) 이 보고한 AMeX 방법에 따라 파라핀 표본을 제작하였다 30) 그 과정을 간단히 요약 하면， 적출된 각 장기들을 2--3mm 두께로 절 취하여 -200C 의 냉아세톤에 넣어 하룻밤 고 정한 후， 40C 의 아세톤과 실온의 아세톤에 옮 겨 각각 15분씩 탈수하고， methyl benzoate( 실 온)와 xylene( 실온)에 각각 30분씩 투명화한다 음 600C 의 파라핀에 옮겨 진공상태 하에서 2
시간 침투시켜 포매하였다.
2. ALPase으| 조직화학적 검색
파라핀블럭을 회전형 박절기 (Microm사， 독 일)를 사용하여 4μn 두께로 절편을 제작하고 550C 의 slide warming table(Lipshaw Corp.
USA) 에서 30분간 건조시킨 후， 일반적인 방법 에 따라 크실렌으로 탈파라핀하고 함수한 다음 ALPase의 활성을 보기 위해 아조염료커플링 법에 의해 염색하였다. 염색과정은 먼저 염색 직 전 0.05 M 2 - amino - 2 - methyl-1,3 - pro- pandiol(AMP) buffer(pH 9.8) 에 naphthol AS- BI(500 mg/ g, Sigma, St. Louise, Mo., USA)
와 Fast blue BB(500 mg/ g, Sigma) 를 첨가하
여 녹인 다음 신속히 여과한 액에 절편을 1시간 염 색한 후 universal mount(Research Gènetic, Inc. USA) 로 봉입하여 현미경 (Olymphus BX50, Japan) 으로 관찰 및 사진촬영하였다. 핵 대조 염 색 은 사용하지 않았다. 또한 ALPase의 IS0-
zyme 양상을 관찰하기 위하여 같은 블럭의 절
편을 ALPase 염색전에 65"C 에서 30 분간 침적하 였고， ALPase에 대해 특이도가 높은 저해제로 알려진 2.5 mM L-levamisole(Sigma, USA) 을 반응액에 첨가하여 염색하였다.
ill. 결
AMeX로 처리한 파라핀절편을 아조염료커플 링법에 의해 ALPase 활성을 염색한 결과 조 사대상 13 종류의 모든 기관에서 양성반응을 나타내었다. 이 기관들 중 특히 콩팔과 소장에 서 육안적으로 뚜렷이 인정할 만한 강한 양성 반응을 관찰할 수 있었으며， 나머지 다른 장기 들도 현미경하에서 볼 수 있는 양성반응을 나 타내었다. 각 조직별 ALPase 활성부위는 Fig.
1a--m과 같다. 콩팔의 경우는 근위곡요세관의 쇄자연 (brush border) 에서， 소장은 융모의 쇄 자연과 융모상피세포의 세포질 및 고유층의 조 직 호산구 ( tissue eosinophils) 의 세 포질 ( 과립 은
음성)에서， 난소는 내난포막세포 (theca interna
cells) 와 황체의 모세혈관내피세포( endothelial
cells) 및 수질의 동맥의 내피와 외막에서， 심
장은 근세포사이 모세혈관 내피세포에서 강양 성반응을 나타내었다. 또 위장의 경우는 고유 위선 선저부의 주세포 (chief cells) 에서， 간장은 소엽 사이 관담관상피 (interlobular ductal cells)
와 쿠퍼세포 (Kupffer cells) 에서， 훼장은 소엽 사이 관세 포 (interlobular ductal cells) 와 랑게 르
한스섬내의 모세혈관내피세포에서， 비장은 결합 조직내의 세망세포 (reticular cells) 에서， 부신은 피질의 사구충 (zona glomerulosa) 과 다발층
(zona fasciculata) 의 모세혈관내피세포에서， 자 궁은 내막( endometrium) 의 점막상피표면과 내 막선의 내 강면 (luminar surf ace )에 서， 난관은
Fig. 1a~m. ALPase histochemistry in AMeX -prepared, paraffin embedded sections in rat tissues.
a. Stomach. Chief cells(arrow) in fundic gland showed positive staining. b. Small intestine. The brush borders of intestina1 mucosa were strong1y positive. The inset shows positive staining of eosinophi1ic 1eukocytes in the 1amina propia of mucosa. c. Liver. Interlobu1ar bi1e ducts and Kupffer cells(arrow) showed positive staining, whereas the hepatocytes were negative. d. Sp1een. Reticu1ar cells in connec- tive tissue were strong1y positive, whereas the lymphocytes in a lymphatic nodule showed no reactivity.
e. Pancreas. ALPase was localized to interlobular ducts, capillary endothelium around the acina1 gland and in the is1ets of Langerhans(arrow). f. Kidney. The brush borders of proxima1 tubules were strong- 1y positive, whereas the glomeru1ar capillary endothelium showed negative staining. g. Adrenal. The capillary endothelium of zona glomerulosa and zona fasciculata showed positive staining, whereas ALPase was not detectab1e in the capillary endothe1ium of zona reticu1ata. h. Cross sectiona1 view of uterus. ALPase was 1oca1ized to the epthelia1 surface of endometrium, capillary endothelium and lumi- na1 surface of glands. i. Sa1pinx. Capillary endothelium in 1amina propia showed positive reaction but not in villous epithe1ium. j. Ovary. ALPase was detectab1e in the theca interna of primary and secon- dary follicles, tunica intima of artery wall and capillary endothelium in corpus 1uteum. k. Heart. Capi1- lary endothelium between cardiac muscle fibers showed positive staining. 1. Trachea. ALPase was 1oca- lized to the basal cells and surface epithelial cells of epithelium. Some carti1age cells(arrow) showed a1so positive staining. m. Lung. A1veo1ar macrophages showed positive staining. a, e, k, 1, X400; b, d, f, g, h, i; XI00; c, j, m, X200. b inset, X400; j inset, X200.
Table 1. Distribution and isozyme pattern of ALPase in rat tissues
Organ
Small intestine Brush borders of intestinal mucosa Eosinophilic leukocytes in lamina propia Liver Interlobular bile ducts
Kupffer cells Spleen Reticular cells
Pancreas Interlobular ductal cells
Capillary endothelium in Langerhans islets Kidney Brush borders of proximal tubule
Adrenal Sinusoidal capillary in zona glomerulosa Stomach
Uterus
Salpinx Ovary
Heart Trachea
Lung
Mucosal surface of endometrium Luminal surface of endometrial gland Capillary endothelium in lamina propia
Theca interna of primary and secondary follicles Endothelium of capillary in corpus luteum Tunica intima of artery
Capillary endothelium Surface epithelium Basal cells in epithelium Alveolar macrophages
Positive cell types
Chief cells
and zona fasciculata
Inhibition 2.5 mM L -levamisole 650C
+ +
+ +
+ +
+ + +
+
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ t inhibition; - t no inhibition
고유충의 모세혈관내피세포에서， 기관은 일부 점막상피표면과 기저세포 (basal cells) 에서 그 리 고 폐 의 폐 포대 식 세 포 (alve이ar macrophag es) 에서 양성반옹을 나타내었다.
각 조직에서의 ALPase isozyme의 양상을 조 사하기 위해 2.5 mM L -levamisole에 의한 저 해 유무와 650C 내열성 실험결과， 소장쇄자연
의 ALPase 활성이 두 가지 처리에 모두 저해
되지 않았고， 그 외 나머지 모든 조직은 두 처리 에 모두 저해되는 것으로 조사되었다 (Table. 1).
N. 고 찰
본 실험은 ALPase의 조직내 국재화를 위해
Sato 등영0) 의 조직내 항원 검출에 사용한 AMeX
-처리 파라핀절편의 일반적인 활용성을 검토 한 것이다. 실험결과 조사대상 13 종류의 조직 절편내에서 모두 양성반응을 나타내었으며， 그 반응부위 는 소장의 융모상피 쇄 자연 과 콩팔의 근위곡요세관상피의 쇄자연을 비롯하여 대부분 의 조직내 모세혈관이나 동맥의 내피세포표면 및 기도의 상피표면과 선상피의 내강면에서 일 관된 양성반응을 나타내었다. 이 같은 결과는 주로 그 반응부위가 세포막이나 모세혈관 내피 세포 표면에 분포하고 있다는 점에서 다른 보 고들과 일치하며 3l) ， 조직내 ALPase가 인산결 합단백질로서의 기능과 혈관벽의 대사 및 물질 수송에 관여할 것이라는 가정을 뒷받침 해 주 고 있다 1 ， 10， 32) 단， 예외적으로 부신피질의 사구 충과 다발충내의 모세혈관내피세포는 양성을
나타냈으나， 망상층과 부신수질내의 모세혈관 내피세포는 음성반응을 보인 점이 특이하였다 (Fig. 19). 따라서 부신의 경우 이 결과에 대한 연구가 좀 더 있어야 할 것으로 생각된다. 또한
Inayama 등이 ALPase를 토끼 기 도 기 저 세 포의 표지자 (marker) 로서 유용하다고 하였는데 33) ， 본 실험에서는 기저세포 외에 일부 상피표면에서도 ALPase의 활성이 관찰되기 때문에 ALPase의 활성이 기저세포만 특이적으로 반응하지않는 것으로 나타나 좀더 많은 관찰이 필요하다고 사료된다. 이밖에 위장의 주세포， 간의 쿠퍼세 포， 비장의 세망세포， 폐의 폐포대식세포， 소장 고유층의 호산구의 세포질내에서도 양성반응을 나타내었다. 호산구의 경우 대체로 과립은 음 성이지만 세포질이 양성을 보인다는 보고 34) 와 본 실험과 유사하였으나， 나머지 세포들에 대 한 보고는 되어있지 않아 비교할 수 없었다.
ALPase의 자해제로는 urea35l, 0.1" , - , 1.0 mM
levamisole과 2.5 mM levamisole 및 650C 의 열 처리 등이 사용되고 있으며 2327) ， 태반 ALPase
의 경우 종간 L - pheny lalanine과 L-homoar-
gme에 대한 저해율이 다를 뿐만 아니라， 고정액 의 종류 (95% ethanol, 10% formalin, 100%
acetone) 에 따라서도 다른 것으로 보고되어 있 다 28) 이 중 특히 L -levamisole이 ALPase의 저해제로 가장 특이도가 높은 것으로 알려져있 다 23， 31 ) 본 실험에서는 2.5 mM L -levamisole과 함께 650C 에서의 열처리를 하여 본 결과， 조사 대상 13 종류의 조직들 중 2.5 mM L-levamisole
과 650C 에서 소장의 쇄자연만 저해되지 않았 고， 기타 나머지 조직은 두 처리에 모두 완전 히 저해되어 적어도 2 종류의 lsozyme이 있는 것으로 조사되었다. 이는 소장 ALPase는 leva-
misole에 전혀 저해되지 않는다는 결과 1) 와 일 치하였으며， ALPase isozyme이 효소동력학，
저해제에 대한 반응， 안정성 및 전기영동상 이 동도에 따라 3 군， 즉 태반 ALPase 및 종양유 래 ALPase, 소장 ALPase 및 기타(뼈， 신장，
간장) 종류로 분류된다는 보고 2) 와 유사한 결과 를 얻을 수 있었다. 그러나 사람의 경우 650C
내열성 실험결과 4 종류의 ALPase isozyme( 뼈，
간장， 소장， 태반)으로 분류된다는 보고 36) 와는 약간의 차이가 있었다. 이는 본 실험에서 뼈와 태반조직을 사용하지 않았기 때문에， 이에 대 한 결과는 추후 더 검토가 필요하였다. 그러나 간장의 경우는 두 처리에 분명한 차이를 나타 내고 있기 때문에 종간 차이에 의한 것으로 사 료되나， 다른 저해제의 처리 및 면역학적 방법 에 의한 재검토가 요망된다.
한편， 조직내의 가수분해효소 (hydrolase) 를 국재화하기 위해서는 그 활성을 보존하기 위해 동결절편이 권장되고 있다. 그러나 조직의 통 결은 효소의 활성과 세포성분의 확산을 막을 수 있지만 동결절편 작성 후 반응액에 침적
( incuba tion) 시 lysoenzyme의 확산이 여전히 발생하기 때문에 이를 막기 위해 조직의 고정 이 필요하다고 하였다 19， 21 ， 22) 효소조직화학에 있어서 고정의 목적은 첫째， 가능한 한 조직의 형태가 원형에 가깝도록 보존해야하고， 둘째，
효소활성을 최대로 유지해야하며 세째， 효소의 자리 이 탈 ( disloca tion) 을 막는데 있 다 35’J얘38옛8 때문에 효소의 조직화학적인 국재화에는 조직 의 형태보존과 효소활성의 보존이라는 두 가지 서로 상이한 두 요소를 적절하게 조절할 필요 가 있다. 그러나 ALPase 활성을 보기 위한 고 정 액 으로는 100% acetone(4VC), 90% ethanol (40C), formol-calcium( 40C) 및 10% formol
saline이 사용되고 있어서 아직도 저자들 간에 가장 좋은 효소활성보존을 위한 고정액의 일치 를 보지 못하고 있다 38) 또 절편의 종류에 있 어 서 도 cryostat post-fixed, cryostat prefixed,
동결건조， 파라핀절편 등 다양한 절편들을 사 용하기 때문에 임상 검사실이나 연구자들마다 서로 다른 방법이 사용되고 있다. 이 외에 효 소활성의 검출방법에 있어서도 금속침전법과 아조염료커플링법이 전자현미경 및 광학현미경 적 검색을 목적으로 달리 사용되고 있어 표준 화된 방법이 제시되지 않고 있다. 표본제작과 정에 따른 효소활성에 미치는 영향에 대해서는 Stafford와 Atkinson (1 948) 은 조직을 cold eth-
anol에 50시 간 고정 후 ALPase의 88% 가 남 아있었으나 탈수， 투명과정을 거쳐 파라핀으로 포매한 후에는 그 양이 20% 로 감소한다고 하 였으며 19) ， Nachlas 등(1 956) 은 미고정 조직의 경우 증류수에 1 시간 두었을 때 ALPase가 조 직으로부터 1/3이 유출된다고 보고하였다 22) 또한 Pearse (1 960) 는 4UC 의 포르말린에 2...,4
시 간 조직 을 고정 하였 을 때 cytochrome oxi-
dase와 succinate dehydrogenase는 완전히 실 활 (inactivation) 되 었 으나， acid phosphatase와
nonspecific esterase의 활성은 같은 조건 하에 서 단지 20% 만 실활하는 것으로 나타나 효소 의 종류에 따라 고정액에 대한 감도 (sensitivity) 가 다르다는 것을 보여주었다 38) 그러나 Christie
와 Stoward (1974) 는 acid phospha tase에 대한 포르마련 고정의 효과에 관한 실험에서 간장과 콩팔의 경 우 포르마린 고정 후 acid phospha-
tase의 활성이 50% 감소하였으나 24시간 수세 후 거의 대부분의 효소가 재활성화됨을 관찰하 여 포르말린 고정의 경우 수세의 중요성을 강
조하였다 26)
본 실험의 경우 ALPase의 실활에 미치는 다른 고정액의 영향에 대해서는 비교해 보지않 았으나 , Dempo 등(1 98이， Sato 등(1 986) 및 Inayama 등(1 995) 의 보고 29， 30， 33) 를 감안해 볼 때 AMeX- 처리 파라핀절편을 사용한 아조염 료커 플링 법 이 조직 의 형 태 보존과 ALPase를 정확히 국재화해야한다는 효소조직화학적 조건 에 충분히 부합되는 좋은 방법임을 확인할 수 있었다.
따라서 AMeX처리 파라핀절편은 ALPase 뿐 만 아니라 다른 종류의 가수분해효소의 검출에 도 적용할 수 있으리라 생각된다. 다만 이 방 법을 일반화하기 위해서는 앞으로 각 효소의 종류별 생화학적 정량분석과 병행하여 표본제 작 후 효소활성 소실량에 대한 정밀한 조사와 그 보존 기간에 대한 연구가 더 진행되어야 할 것이다.
v.
결 론조직내 ALPase 활성 검출을 위해 AMeX- 처 리 파라핀절편을 이용한 아조염료커플링방법의 활용성을 검토하기 위해 13 종류의 장기를 대 상으로 조사한 바 다음과 같은 결론를 얻었다.
1. 조사대상 13 종류의 장기에서 모두 ALP
ase활성이 양성반응을 나타내었다.
2. 양성 ALPase활성 은 주로 흡수와 관련 된 쇄자연이나 모세혈관 내피세포 및 상피표 면에서 관찰되었으며， 또한 위장점막의 주세포， 장점막고유충의 호산구， 간장의 쿠퍼세포， 비장의 세망세포 및 폐포대식 세포도 양성반용을 나타내었다.
3. 13 종류의 장기 중 L -levamisole 처리와
650C 내열성 실험결과 열에 안정하고 L
-levamisole에 저 해 되 지 않는 소장형 IS0-
zyme과 나머지 장기에 존재하는 열에 불 안정하고 L -levamisole에 저해되는 비특 이 형 Isozyme의 2 종류가 존재 하는 것 으 로 나타났다.
4. 13 종류의 조직은 모두 조직학적 형태보 존이 우수하였고， ALPase 활성부위를 확 산이 없이 정확히 국재화할 수 있었다.
이상의 결과를 종합해 볼 때， AMeX- 처리 파라핀절편은 광학현미경적으로 ALPase 보존 에 유용한 표본임을 확인할 수 있었으며， 다른 효소들의 검출에도 널리 활용될 수 있을 것으 로 예상된다.
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