미나리로부터 항당뇨합병증 활성 성분의 동정
⁃ 연구노트 ⁃
정경한․김태훈 대구대학교 식품공학과
Characterization of Anti-Diabetic Complication Constituents from Oenanthe javanica
Gyeong Han Jeong and Tae Hoon Kim
Department of Food Science and Biotechnology, Daegu University
ABSTRACT Bioactivity-guided isolation was conducted on a ethyl acetate (EtOAc)-soluble portion of an aqueous ethanolic extract from Oenanthe javanica using an advanced glycation end products (AGEs) formation inhibition assay.
The experiments led to isolation of four previously characterized flavonoids, hyperoside (1), isorhamnetin 3-O-galacto- side (2), isorhamnetin (3), and persicarin (4). The structures were established on the basis of NMR and MS spectroscopic data interpretations. Among these isolated compounds, hyperoside (1) and isorhamnetin 3-O-galactoside (2) showed significant inhibitory effects against AGEs formation, with IC50 values of 28.7±1.3 and 41.5±2.5 μM, respectively.
Furthermore, all tested compounds were evaluated for radical scavenging activity using hydroxyl radicals, and com- pounds 1 and 2 exhibited the most potent capacities. These results suggest that the flavonoids isolated from O. javanica might be beneficial for the prevention and treatment of diabetic complications and related diseases.
Key words: Oenanthe javanica, advanced glycation end products, hydroxyl radical, flavonoids, diabetic complications
Received 4 July 2018; Accepted 22 August 2018
Corresponding author: Tae Hoon Kim, Department of Food Science and Biotechnology, Daegu University, Gyeongsan, Gyeongbuk 38453, Korea
E-mail: [email protected], Phone: +82-53-850-6533
서 론
당뇨합병증은 장기간의 당뇨병으로 인하여 고혈당 이외 에 여러 가지 요인에 의해 유발되는 만성 질환으로 당뇨병 발병률의 증가에 따라 비례 증가하고 있다. 만성적인 고혈당 의 지속은 동맥경화 및 신장질환 등의 다양한 합병증을 유발 한다(1). 당뇨합병증의 유발 경로로는 protein kinase C (PKC)와 신장 조직 안의 여러 세포와 작용하는 성장인자나 cytokine의 활성화로 인한 세포 외 기질 단백의 축적, 알도즈 환원효소(aldose reductase, AR) 관련 poly pathway flux 의 증가 및 최종당화산물(advanced glycation end prod- ucts, AGEs)의 생성 증가가 있다(2). 특히 당뇨로 인한 최종 당화산물 생성의 증가는 고혈당 조건에서 환원당과 단백질 의 비효소적 반응에 의해 유발되는데, 한번 생성된 최종당화 산물은 쉽게 분해되지 않으며, 정상 혈당으로 회복되더라도 분해가 되지 않고 다른 단백질과 교차 결합에 의하여 심각한 합병증을 유발한다(3). 또한 고혈당과 단백질의 비효소적 당 화과정으로부터 생성되는 최종당화산물은 활성산소종(re- active oxygen species, ROS)에 의해 생성이 가속화되며,
세포표면에 존재하는 최종당화산물 수용체와 결합하여 세 포손상 및 당뇨합병증의 유발에 깊이 관여하는 것으로 보고 되고 있다(4). 현재까지 알려진 대표적인 최종당화산물 생성 저해제로 aminoguanidine이 있으나, 제2형 당뇨병 환자를 대상으로 진행한 임상실험에서 독성을 나타내는 것이 보고 되어 보다 안전하고 부작용이 적은 최종당화산물 생성 저해 제의 개발이 요구되고 있다(5). 최근 곤드레(Cirsium seti- dens)의 지상부로부터 동정된 monomethoxlyted flavo- noid 화합물의 우수한 최종당화산물 생성 저해활성을 확인 하였으며(6), 다래(Actinidia arguta) 뿌리에 존재하는 최종 당화산물의 생성억제능이 우수한 flavan-3-ol 유도체가 동 정되었다(7).
미나리(Oenanthe javanica)는 미나리과의 다년생 초본 으로 우리나라 전 지역에 자생하고 중국, 일본, 대만 등 동북 아시아의 많은 지역에서 식용으로 광범위하게 재배되며, 각 종 비타민, 무기질 및 섬유질이 풍부하게 함유되어 있는 알 칼리성 식품으로 잘 알려져 있다. 또한 미나리는 다른 식품 에 없는 독특한 향미가 풍부하고 신선한 줄기 및 잎은 생으 로 섭취할 수 있으며, 무침, 볶음 및 데침 등의 요리 원료로 사용되고 있다(8). 최근 미나리의 기능성에 대한 연구가 활 발히 진행되고 있으며, 미나리에는 flavonoid, caffeoyl- quinic acid 및 phenylpropanoid 등의 화합물이 풍부하게 함유되어 있고(9,10), 항산화 및 간 보호작용 등의 우수한 생리활성을 나타낸다고 알려져 있다(11-13).
O
O OH HO
OR2 OH OR1
1 R1 = H, R2 = Galactoyl 2 R1 = CH3, R2 = Galactoyl 3 R1 = CH3, R2 = H 4 R1 = CH3, R2 = SO3H
Fig. 1. Chemical structures of the isolated compounds from Oenanthe javanica. 1, hyperoside; 2, isorhamnetin 3-O-galacto- side; 3, isorhamnetin; 4, persicarin.
본 연구에서는 미나리의 70% ethyl alcohol(EtOH) 추출 물에서 우수한 최종당화산물 생성 저해활성을 확인하였으 며, 미나리로부터 분리된 4종의 flavonoid 유도체에서 우수 한 최종당화산물 생성 저해활성 및 hydroxyl 라디칼 소거 활성을 확인하였기에 그 결과를 보고하고자 한다.
재료 및 방법
재료
본 실험에 시료로 사용한 미나리는 경상북도 청도군 한재 리에서 2011년 4월에 채취한 신선한 것을 사용하였으며, 표본시료는 대구대학교 식품공학과 천연물 화학실험실에 보관하고 있다.
시약 및 기기
본 실험에서 사용된 bovine serum albumin(BSA), de- oxyribose, aminoguanidine 및 (+)-catechin 등의 시약은 Sigma-Aldrich Co.(St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사 용하였다. Reversed-phase HPLC(LC-10A, Shimadzu, Tokyo, Japan)를 사용하였다. 1H, 13C NMR과 1H-1H COSY, NOESY, HSQC, HMBC 스펙트럼은 MeOH-d4(δH 3.35, δC
49.0) 및 DMSO-d6(δH 2.49, δC 39.7) 용매를 이용하여 600 MHz의 NMR spectrometer(FT-NMR, VNS 600, Varian Inc., Palo Alto, CA, USA)로 측정하였으며, 분석 및 col- umn chromatography용 용매는 특급시약을 사용하였다.
FABMS 스펙트럼은 Micro Mass Auto Spectrometer(OA- TOF, Micromass, Manchester, UK)를 활용하여 분자량을 측정하였으며, TLC plate는 Kiesel gel 60 F254(0.25 mm layer thickness, Merck, Darmstadt, Germany)를 사용하 였고, column chromatography용 고정상은 Toyopearl HW-40(Tosoh Co., Tokyo, Japan) 및 ODS AQ 120S (YMC Co., Kyoto, Japan)를 이용하여 순수물질을 분리하 였다. 형광도 및 흡광도는 ELISA reader(Infinite F200, Tecan Austria GmBH, Grödig, Austria)를 이용하여 측정 하였다.
추출 및 분획
신선한 미나리 1.4 kg을 분쇄기(HMF-3250S, Hanil Electric Co., Seoul, Korea)로 잘게 마쇄한 후 70% EtOH 10 L로 3일간 3회 반복 추출한 후 농축하였다. 얻어진 추출 물(81.5 g)을 10% methyl alcohol(MeOH)에 현탁한 후 유 기용매를 사용하여 극성에 따른 분획을 실시하였으며, 먼저 저극성용매인 n-hexane으로 추출한 다음 수용층을 다시 ethyl acetate(EtOAc), n-butyl alcohol(n-BuOH)을 이용 하여 각각 순차적으로 3회 분획하여 추출하였다. 각 용매추 출 분획을 감압 농축하여 건조시킨 후 n-hexane 분획물 (5.5 g), EtOAc 분획물(1.8 g), n-BuOH 분획물(10.6 g), H2O 분획물(53.6 g)을 각각 얻었다. 각 분획물에 대하여 최
종당화산물 생성 저해능을 평가하였고, 가장 우수한 활성을 나타낸 미나리 70% EtOH 추출물의 EtOAc 분획물에 대해 activity-guided isolation을 수행하여 활성물질의 분리를 실시하였다.
화합물 분리 및 구조 결정
EtOAc 분획물 1.8 g을 H2O-MeOH 혼합용매를 용출용 매로 사용하여 Toyopearl HW-40(coarse grade; 3.0 cm i.d.×48 cm)을 사용한 칼럼크로마토그래피를 실시하여 총 6개의 용리액[OE01; H2O-MeOH(100:0), OE02; H2O- MeOH(80:20), OE03; H2O-MeOH(60:40), OE04; H2O- MeOH(40:60), OE05; H2O-MeOH(0:100), OE06; H2O- acetone(30:70)]을 얻었으며, 각 분획물에 대하여 활성을 평가한 결과 OE03 용리액에서 가장 우수한 최종당화산물 생성 저해활성을 확인하였고, 이에 따라 OE03 용리액에 대 해 YMC gel ODS AQ 120S(1.8 cm i.d.×37 cm)를 이용한 칼럼크로마토그래피 및 ODS column(YMC gel ODS A- 323, 4.6 mm×150 mm)을 이용한 semi-preparative HPLC 를 수행하여 hyperoside(1)는 7.0 mg, isorhamnetin 3-O- galactoside(2)는 7.7 mg, isorhamnetin(3)은 55.9 mg 및 persicarin(4)은 75.9 mg을 분리하였다(Fig. 1). 이동상 용 매로는 1% formic acid(solvent A)와 acetonitrile(solvent B)을 사용하여 gradient elution을 100% solvent A로 분석 하여 20 min, 0% A; 100% B의 용매조성으로 물질을 분석 하였으며, 이동상의 유속은 1.0 mL/min을 유지하였고 280 nm에서 화합물을 검출하였다.
Hyperoside(1): Yellow amorphous powder, FABMS m/z 465 [M+H]+, 1H NMR(CD3OD, 600 MHz): δ 7.83 (1H, d, J=2.4 Hz, H-2'), 7.57(1H, d, J=8.4, 2.4 Hz, H- 6'), 6.85(1H, d, J=8.4 Hz, H-5'), 6.39(1H, d, J=1.8 Hz, H-8), 6.19(1H, d, J=1.8 Hz, H-6), 5.15(1H, d, J=7.8 Hz, H-1"), 3.90~3.10(6H, m, H-2"~H-6").
Isorhamnetin 3-O-galactoside(2): Yellow amor- phous powder, FABMS m/z 479 [M+H]+, 1H NMR(600 MHz, CD3OD): δ 8.02(1H, d, J=1.8 Hz, H-2'), 7.56(1H, d, J=8.4, 1.8 Hz, H-6'), 6.89(1H, d, J=8.4 Hz, H-5'),
Table 1. Inhibitory effects of AGEs formation of several frac- tions and isolated compounds 1∼4 from Oenanthe javanica
Fractions and compounds IC50 values (μM) 70% EtOH extract (μg/mL)
n-Hexane layer (μg/mL) EtOAc layer (μg/mL) n-BuOH layer (μg/mL) H2O layer (μg/mL) Hyperoside (1)
Isorhamnetin 3-O-galactoside (2) Isorhamnetin (3)
Persicarin (4) Aminoguanidine4)
179.3±8.1b1)2)
>500a 52.2±3.5d 103.3±7.6c
>500a 28.7±1.3D3) 41.5±2.5D 118.6±7.9C 156.1±9.0B 951.9±11.1A
1)All tested samples were examined in triplicated experiments.
2)Different letters (a-d) indicate significant differences (P<0.05).
3)Different letters (A-D) indicate significant differences (P<0.05).
4)Aminoguanidine was used as a positive control.
6.38(1H, s, H-8), 6.19(1H, s, H-6), 5.32(1H, d, J=7.8 Hz, H-1"), 3.95(3H, s, OCH3-3'), 3.97~3.30(6H, m, H- 2"~H-6").
Isorhamnetin(3): Yellow amorphous powder, FABMS m/z 317 [M+H]+, 1H NMR(600 MHz, CD3OD): δ 8.01 (1H, d, J=2.4 Hz, H-2'), 7.64(1H, d, J=8.4, 2.4 Hz, H- 6'), 6.90(1H, d, J=8.4 Hz, H-5'), 6.40(1H, s, H-8), 6.19 (1H, s, H-6), 3.95(3H, s, OCH3-3').
Persicarin(4): White amorphous powder, FABMS m/z 397 [M+H]+, 1H NMR(600 MHz, DMSO-d6): δ 8.06(1H, d, J=2.4 Hz, H-2'), 7.61(1H, d, J=8.4, 2.4 Hz, H-6'), 6.92(1H, d, J=8.4 Hz, H-5'), 6.43(1H, d, J=2.4 Hz, H-8), 6.22(1H, d, J=2.4 Hz, H-6), 3.83(3H, s, OCH3- 3'). 13C NMR(150 MHz, DMSO-d6): δ 177.1(C-4), 166.5 (C-7), 161.1(C-5), 156.2(C-2), 155.5(C-9), 149.6(C- 3'), 147.1(C-4'), 131.8(C-5'), 121.2(C-6'), 121.1(C-1'), 115.2(C-2'), 103.1(C-10), 99.7(C-6), 93.6(C-8), 55.6 (OCH3-3').
In vitro 최종당화산물 생성 저해활성 평가
최종당화산물 생성 저해활성은 Vinson과 Howard(14)가 행한 방법을 변형하여 실시하였다. 10 mg/mL의 BSA를 0.2 M phosphate buffer(pH 7.4)에 용해시키고, 0.2 M의 fruc- tose와 glucose를 처리하였다. 이때 0.2 M phosphate buf- fer에 0.02% sodium azide를 넣어 반응기간 동안 박테리아 의 생성을 방지하였다. 시료는 10%의 dimethyl sulfoxide 에 녹여 준비하였으며, 이 반응액에 분리된 화합물 또는 양성 대조군인 aminoguanidine을 첨가한 후 37°C에서 7일 동안 반응시켰다. 반응 후에는 ELISA reader(Infinite F200, Tecan Austria GmBH)를 이용하여 형광도(Ex: 350, Em:
450 nm)를 측정하였다. IC50 값은 시료가 최종당화산물 생 성을 50% 저해하는 농도로 나타내었다.
Hydroxyl 라디칼 소거 활성 평가
미나리 70% EtOH 추출물로부터 분리된 화합물의 hy- droxyl 라디칼 소거 활성은 deoxyribose 방법(15)을 변형 하여 다음과 같이 측정하였다. 2.5 mM deoxyribose, 1.5 mM H2O2, 100 μM FeCl3, 100 μM EDTA를 10 mM phos- phate buffer(pH 7.4)에 녹인 후 농도별로 제조한 시료에 첨가하였다. 반응 시작 전 100 μM ascorbic acid를 첨가한 후 37°C에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 후 0.5% thio- barbituric acid(TBA)와 2.8% trichloroacetic acid(TCA) 를 첨가한 다음 80°C의 온도에서 30분 동안 가열한다. 이후 급속 냉각시킨 후 ELISA reader를 이용하여 532 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 양성 대조군은 천연 항산화 물질 인 (+)-catechin을 사용하였으며, 결과는 시료를 처리하지 않은 군에 대한 IC50 값으로 표시하였다.
통계처리
실험 결과는 SPSS package program(version 20.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용하여 평균과 표준편 차를 구하였으며, 실험군 간의 차이의 유의성은 one-way ANOVA에 의하여 P<0.05 수준에서 검증하였다.
결과 및 고찰
분리된 화합물의 구조 결정 및 최종당화산물 생성 저해활성 본 연구에서는 미나리 70% EtOH 추출물의 최종당화산 물 생성 저해활성을 평가한 결과 IC50 값이 179.3±8.1 μg/
mL로 우수한 저해활성을 확인하였다. 극성별 유기용매인 n-hexane, EtOAc 및 n-BuOH로 순차 분획하여 얻어진 각 분획물에 대상으로 최종당화산물 생성 저해활성을 평가하 였다. 그 결과(Table 1) n-hexane 및 H2O 분획물은 IC50 값이 500 μg/mL 이상의 상대적으로 낮은 저해활성을 나타 냈으며, n-BuOH 분획물의 경우 IC50 값이 103.3±7.6 μg/
mL로 우수한 저해 활성을 확인하였다. 또한 EtOAc 분획물 의 IC50 값은 52.2±3.5 μg/mL로 가장 우수한 최종당화산물 생성 저해활성이 확인하였으며, EtOAc 분획물을 대상으로 Toyopearl HW-40 및 ODS gel을 충진제로 이용한 칼럼크 로마토그래피를 수행하여 4종의 flavonoid 유도체를 분리 하였다. 분리된 4종의 순수한 화합물에 대해서 1H, 13C NMR 의 1D NMR, 1H-1H COSY, HMBC, HSQC, NOESY의 2D NMR 및 FABMS 스펙트럼을 측정 후 참고문헌(16-18) 및 표준품과의 HPLC 직접 비교하여 구조 결정하였다. 그 결과 화합물 1은 retention time(tR): 8.8 min, 화합물 2는 tR: 9.1 min, 화합물 3은 tR: 11.8 min 및 화합물 4는 tR: 9.8 min에 서 존재하는 것으로 확인하였고, 화합물 1은 hyperoside, 화합물 2는 isorhamnetin 3-O-galactoside, 화합물 3은 isorhamnetin, 화합물 4는 persicarin으로 동정하였다.
얻어진 단일물질에 대하여 당뇨합병증과 관련된 최종당 화산물 생성 저해활성 평가를 수행하였다. 그 결과 Table 1에
Table 2. Hydroxyl radical scavenging activities of isolated com- pounds 1∼4 from Oenanthe javanica
Compounds IC50 values (μM)1) Hyperoside (1)
Isorhamnetin 3-O-galactoside (2) Isorhamnetin (3)
Persicarin (4) (+)-Catechin2)
14.3±0.9c 15.0±1.6c 19.8±2.3c 30.8±2.5b 702.6±8.2a
1)All tested samples were examined in triplicated experiments.
Different letters (a-c) indicate significant differences (P<0.05).
2)Used as a positive control.
나타낸 바와 같이 isorhamnetin(3)의 IC50 값이 118.6±7.9 μM의 최종당화산물 생성 저해활성을 나타냈으며, isorham- netin(3)의 3번 위치에 sulfate기가 치환된 persicarin(4)의 IC50 값은 156.1±9.0 μM로 화합물 3보다는 상대적으로 낮 은 저해활성을 확인하였다. 또한 화합물 3의 3번 위치에 galactose가 결합된 형태의 배당체인 isorhamnetin 3-O- galactoside(2)의 IC50 값은 41.5±2.5 μM로 aglycone인 isorhamnetin(3)보다 2.5배 이상 증가한 생성 저해능을 나 타냈으며, quercetin의 3번 위치에 galactoses가 결합되어 있는 hyperoside(1)의 IC50 값은 28.7±1.3 μM로 가장 우수 한 저해활성을 나타내었다. 미나리 추출물에서 분리된 4종 의 flavonoid 화합물은 모두 양성대조군인 aminoguanidine (IC50=951.9±11.1 μM)보다 우수한 최종당화산물 생성 저 해활성을 나타냈으며, hyperoside(1)의 경우 30배 이상 강 한 활성이었다.
최근 천연물 유래의 최종당화산물 생성 저해 물질이 분리 되었으며, 그중에서 Calophyllum flavoramulum의 잎으로 부터 분리된 quercitrin(quercetin 3-O-rhamnoside)이 최 종당화산물 생성을 효과적으로 저해하는 것이 보고되고 있 으며(19), quercitrin의 유사 화합물인 isoquercitrin(quer- cetin 3-O-glucoside)도 우수한 최종당화산물 생성 저해제 로 주목을 받고 있다(20). 본 연구에서는 미나리로부터 분리 된 4종의 flavonoids 화합물이 우수한 효능을 나타냈으며, 이들 화합물에 대해서 추가적인 효능 검증을 실시하여 효능 기전을 검증할 필요가 있다고 생각된다.
단일물질의 hydroxyl 라디칼 소거 활성
미나리 70% EtOH 추출물의 EtOAc 분획물에서 분리한 화합물인 hyperoside(1), isorhamnetin 3-O-galactoside (2), isorhamnetin(3) 및 persicarin(4)에 대해 hydroxyl 라 디칼 소거 활성 평가를 추가로 수행하였다. 그 결과(Table 2) 가장 우수한 최종당화산물 생성 저해활성을 나타낸 hy- peroside(1)의 IC50 값이 14.3±0.9 μM로 우수한 hydroxyl 라디칼 소거 활성을 확인하였으며, 다음으로 isorhamnetin 3-O-galactoside(2)가 15.0±1.6 μM의 IC50 값을 나타내 었다. 또한 비배당체인 isorhamnetin(3)과 persicarin(4)이 각각 19.8±2.3 및 30.8±2.5 μM의 IC50 값을 나타내어 배당 체 화합물에서 hydroxyl 라디칼 소거 활성에 효과적인 것을
확인하였다. 최근 연구 결과 마키베리(Aristotelia chi- lensis) 열매의 우수한 hydroxyl 라디칼 소거능을 가지는 quercetin-3-O-arabinoside 및 reynoutrin(quercetin-3- O-xyloside) 등의 화합물이 동정되었으며(21), 아로니아 (Aronia melanocarpa) 열매 추출물에 존재하는 flavonoid 배당체들이 우수한 hydroxyl 라디칼 소거 활성을 나타냄을 확인하였다(22). 본 연구에서는 미나리 70% EtOH 추출물 의 EtOAc 분획물에서 4종의 flavonoids 유도체인 hypero- side(1), isorhamnetin 3-O-galactoside(2), isorhamne- tin(3) 및 persicarin(4)에 대해서 우수한 hydroxyl 라디칼 소거 활성을 확인하였다. 이상의 연구 결과로부터 미나리 추출물을 활용한 항당뇨합병증에 유효한 신소재 개발에 중 요한 기초 자료로 활용이 가능하리라 판단된다.
요 약
본 연구에서는 천연물 유래의 항당뇨합병증 활성소재를 개 발하기 위한 기초자료 확보를 위하여 실험을 수행하였으며, 미나리 70% ethyl alcohol 추출물의 ethyl acetate 분획물 에서 우수한 최종당화산물 생성 저해활성(IC50=52.2±3.5 μg/mL)을 확인하였다. 활성성분의 동정을 위하여 Toyo- pearl-HW40 및 ODS gel을 충진제로 활용한 칼럼크로마토 그래피를 수행하여 4종의 flavonoid 유도체 화합물을 분리 하였다. 분리한 화합물의 구조는 NMR, MS 스펙트럼 등의 기기분석 데이터 해석과 표준품과의 HPLC 직접 비교를 통 하여 hyperoside, isorhamnetin 3-O-galactoside, iso- rhamnetin 및 persicarin으로 구조 결정하였다. 이들 화합 물에 대하여 최종당화산물 생성 저해활성을 평가한 결과 galactose가 결합되어 있는 배당체 화합물인 hyperoside 및 isorhamnetin 3-O-galactoside의 IC50 값이 각각 28.7
±1.3 및 41.5±2.5 μM로 가장 우수한 생성 저해활성을 나타 내었다. 또한 이들 물질의 hydroxyl 라디칼 소거 활성은 hyperoside의 IC50 값이 14.3±0.9 μM로 가장 우수한 소거 활성이 나타났으며, methoxyl기가 치환된 isorhamnetin 3-O-galactoside는 15.0±1.6 μM로 유사한 IC50 값을 확인 하였다. 비배당체인 isorhamnetin 및 persicarin의 활성은 위에서 언급한 배당체에 비하여 상대적으로 낮은 활성임을 확인하였다. 향후 우수한 활성을 나타낸 배당체 화합물에 대하여 활성 기작 및 추가적인 연구가 필요하다고 생각된다.
REFERENCES
1. Fava S. 2008. Role of postprandial hyperglycemia in car- diovascular disease. Expert Rev Cardiovasc Ther 6: 859- 872.
2. Peyroux J, Sternberg M. 2006. Advanced glycation end- products (AGEs): Pharmacological inhibition in diabetes.
Pathol Biol 54: 405-419.
3. Richardson MA, Furlani RE, Podell BK, Ackart DF, Haugen JD, Melander RJ, Melander C, Basaraba RJ. 2015. Inhibi-
tion and breaking of advanced glycation end-products (AGEs) with bis-2-aminoimidazole derivatives. Tetrahedron Lett 56:
3406-3409.
4. Okada Y, Ishimaru A, Suzuki R, Okuyama T. 2004. A new phloroglucinol derivative from the brown alga Eisenia bicy- clis: potential for the effective treatment of diabetic compli- cations. J Nat Prod 67: 103-105.
5. Edelstein D, Brownlee M. 1992. Mechanistic studies of ad- vanced glycosylation end product inhibition by aminoguani- dine. Diabetes 41: 26-29.
6. Jeong GH, Park EK, Kim TH. 2018. New anti-glycative fla- vonoids from Cirsium setidens with potent radical scaveng- ing activities. Phytochem Lett 26: 115-119.
7. Jang DS, Lee GY, Lee YM, Kim YS, Sun H, Kim DH, Kim JS. 2009. Flavan-3-ols having a gamma-lactam from the roots of Actinidia arguta inhibit the formation of advanced glycation end products in vitro. Chem Pharm Bull 57: 397- 400.
8. Seo WH, Baek HH. 2005. Identification of characteristic ar- oma-active compounds from water dropwort (Oenanthe jav- anica DC.). J Agric Food Chem 53: 6766-6770.
9. Yang SA, Jung YS, Lee SJ, Park SC, Kim MJ, Lee EJ, Byun HJ, Jhee KH, Lee SP. 2014. Hepatoprotective effects of fer- mented field water-dropwort (Oenanthe javanica) extract and its major constituents. Food Chem Toxicol 67: 154-160.
10. Fujita T, Kadoya Y, Aota H, Nakayama M. 1995. A new phenylpropanoid glucoside and other constituents of Oenanthe javanica. Biosci Biotechnol Biochem 59: 526-528.
11. Han YQ, Huang ZM, Yang XB, Liu HZ, Wu GX. 2008.
In vivo and in vitro anti-hepatitis B virus activity of total phenolics from Oenanthe javanica. J Ethnopharmacol 118:
148-153.
12. Lee CH, Park JH, Cho JH, Kim IH, Ahn JH, Lee JC, Chen BH, Shin BN, Tae HJ, Bae EJ, Kang IJ, Won MH, Kim JD. 2015. Effect of Oenanthe javanica extract on antioxidant enzyme in the rat liver. Chin Med J 128: 1649-1654.
13. Ai G, Huang ZM, Liu QC, Han YQ, Chen X. 2016. The protective effect of total phenolics from Oenanthe javanica
on acute liver failure induced by D-galactosamine. J Ethno- pharmacol 186: 53-60.
14. Vinson JA, Howard Ⅲ TB. 1996. Inhibition of protein gly- cation and advanced glycation end products by ascorbic acid and other vitamins and nutrients. J Nutr Biochem 7: 659- 663.
15. Li X. 2013. Solvent effects and improvements in the deoxy- ribose degradation assay for hydroxyl radical-scavenging.
Food Chem 141: 2083-2088.
16. Sikorska M, Matławska I. 2001. Kaempferol, isorhamnetin and their glycosides in the flowers of Asclepias syriaca L.
Acta Pol Pharm 58: 269-272.
17. Liu X, Wang D, Wang SY, Meng XS, Zhang WJ, Ying XX, Kang TG. 2010. LC determination and pharmacokinetic study of hyperoside in rat plasma after intravenous admin- istration. Yakugaku Zasshi 130: 873-879.
18. Park JC, Young HS, Yu YB, Lee JH. 1995. Isorhamnetin sulphate from the leaves and stems of Oenanthe javanica in Korea. Planta Med 61: 377-378.
19. Ferchichi L, Derbré S, Mahmood K, Touré K, Guilet D, Litaudon M, Awang K, Hadi AH, Le Ray AM, Richomme P. 2012. Bioguided fractionation and isolation of natural in- hibitors of advanced glycation end-products (AGEs) from Calophyllum flavoramulum. Phytochemistry 78: 98-106.
20. Jang DS, Kim JM, Kim J, Yoo JL, Kim YS, Kim JS. 2008.
Effects of compounds isolated from the fruits of Rumex japo- nicus on the protein glycation. Chem Biodivers 5: 2718- 2723.
21. Li J, Yuan C, Pan L, Benatrehina PA, Chai H, Keller WJ, Naman CB, Kinghorn AD. 2017. Bioassay-guided isolation of antioxidant and cytoprotective constituents from a maqui berry (Aristotelia chilensis) dietary supplement ingredient as markers for qualitative and quantitative analysis. J Agric Food Chem 65: 8634-8642.
22. Li J, Deng Y, Yuan C, Pan L, Chai H, Keller WJ, Kinghorn AD. 2012. Antioxidant and quinone reductase-inducing con- stituents of black chokeberry (Aronia melanocarpa) fruits.
J Agric Food Chem 60: 11551-11559.
