분원성대장균 – 시험관법 (ES 05704.1b)

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분원성대장균 – 시험관법 (ES 05704.1b)

김 재 건 교수

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1.1 목적

1. 개요

1.2 적용범위

• 먹는물에 존재하는 분원성대장균을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해

필요한 제반사항에 대하여 규정함

• 먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙 제2조의

규정에 의한 먹는물의 수질기준에 규정된 먹는물의

수질검사에 적용

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• 분원성대장균

: - 온혈동물의 배설물에서 발견되는 그람음성∙무아포성의 간균

- 44.5℃에서 락토스를 분해하여 기체 or 산을 발생하는 모든 호기성 or 통성 혐기성균

2. 용어정의

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• 분원성대장균

: - 분변오염의 지표

※ 대장균군에 비하면 우수

-

Escherichia coli.

이외 대장균군에 포함되어 있는 것 :

Klebsiella

^{가 아주 많음}

E-Coli

와 거의 같은 비율을 차지하고 있는 것도 있음

2. 용어정의

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1. 피펫 or 자동피펫 : 멸균된 부피 5mL~25mL의 용량피펫 or 자동피펫 (플라스틱팁 포함)

2. 마개달린 시험관 : - 솜 (플라스틱 or 금속도 가능)으로 마개 를 할 수 있음 - 고압증기 멸균 가능

- 3종류의 시험관 사용가능

☞ 소시험관 (안지름 16㎜, 높이 150㎜) 중시험관 (안지름 18㎜, 높이 180㎜) 대시험관 (안지름 32㎜, 높이 200㎜)

3. 분석기기 및 기구

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3. 다람(Durham)시험관 : 2종류의 시험관 사용가능

☞ 소∙중시험관용 (안지름 6㎜, 높이 30㎜) 대시험관용 (안지름 9㎜, 높이 45㎜)

4. 백금이 : 고리의 안지름이 약 3㎜인 것 사용

5. 항온수조 or 배양기 : 온도 (44.5±0.2)℃ 유지 가능한 것 사용

3. 분석기기 및 기구

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4.1 시약

시험관법 확정시험용 배지

증류수 1L + 표1or2의 조성대로 넣어 녹임

↓

pH를 (6.9±0.2)로 조정

↓

다람관이 들어있는 시험관에 10mL씩 나누어 넣음

↓

121℃에서 15분간 고압증기멸균 (고압증기멸균기)

※ 가급적 상용화된 완성제품을 사용

4. 시약 및 표준용액

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4.1 시약

4. 시약 및 표준용액

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1. 멸균된 시료용기 사용, 무균적으로 시료를 채취, 즉시실험

※ 즉시 실험 불가의 경우 : 빛이 차단된 4℃ 냉장 보관 상태에서 24시간 이내에 시험

2. 잔류염소를 함유한 시료를 채취한 경우

: 시료채취 전 멸균된 시료채취 용기에

멸균한 싸이오황산나트륨용액을 최종농도 0.03% 되도록 투여

5. 시료채취 및 관리

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3. 수도꼭지에서 시료를 채취할 경우

: 수도꼭지를 틀어 2~3분 흘려 보낸 후 채취

☞수도꼭지에 부착물이 있을 경우 : - 부착물 제거

- 깨끗한 헝겊 or 휴지로 이물질을 제거 후 채취

※ 필요에따라 수도꼭지 입구를 화염멸균할 수 있음

4. 먹는샘물, 먹는해양심층수 및 먹는염지하수 제품수의 경우 : - 병의 마개를 열지 않은 상태의 제품을 뜻함

- 병에 넣은 후 12시간내 4℃를 유지한 상태에서 검사 ※ 병의 마개가 열린 것은 사용 불가

5. 시료채취 및 관리

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6. 분석절차

① 삼각플라스크에 필요한 양만큼 증류수와 배지(EC medium)를 혼합하고 마그네틱 바를 넣은 뒤 가열 교반기에 교반하며 가열

② 시험관에 배지 10mL씩 분주하고 다람관(듀람관)을 시험관에 하나씩 넣고 시험관 캡으로 닫고 시헙관과 캡이 분리되지 않도록 시험관의 윗부분을 호일로 감싼 뒤

autoclave(고압증기멸균기)에 넣어 멸균 (121℃ / 1.5atm / 15~20min)

6. 분석절차

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6. 분석절차

③ 멸균이 되는 동안 크린벤치에 실험 초자기구들을

세팅해 두고 Fan과 UV등을 작동시켜 무균상태로 준비 ※ Agar가 포함되지 않아 배지가 굳지 않으므로 미리 제조해도 무방

④ 무균상태인 크린벤치에서 실험을 시작하는데 추정시험에서 양성(가스생성) 시험관 개수만큼 EC배지의 시험관을 세팅한 다음 3LB 시험관을 열어 1백금이 취해 EC 시험관에 털며 접종

※ UV등을 반드시 끈 상태에서 실험 진행 ※ 접종 전 백금이는 화염멸균

6. 분석절차

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6. 분석절차

⑤ 배양조건에 맞는 incubator에 배양한 다음 가스생성 시험관 수 체크하여 기록

[ EC : 44.5±0.5℃ / 24±2hr ]

⑥ 총대장균군 추정시험에 이어 EC시험관에서도

가스가 생성이 될 경우 분원성대장균 양성으로 판정

6. 분석절차

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7. 결과보고

• 결과의 표기

- 분원성대장균군이 검출되지 않은 경우 : 불검출/100 mL - 분원성대장균군이 검출된 경우 : 검출/100 mL

8. 결과보고

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분원성대장균 – 시험관법 (ES 05704.1b)

분원성대장균 – 시험관법 (ES 05704.1b)

목차

1.1 목적

1.2 적용범위

• 먹는물에 존재하는 분원성대장균을 분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해

필요한 제반사항에 대하여 규정함

• 먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙 제2조의

규정에 의한 먹는물의 수질기준에 규정된 먹는물의

수질검사에 적용

• 분원성대장균

: - 온혈동물의 배설물에서 발견되는 그람음성∙무아포성의 간균

- 44.5℃에서 락토스를 분해하여 기체 or 산을 발생하는 모든 호기성 or 통성 혐기성균

2. 용어정의

• 분원성대장균

: - 분변오염의 지표

※ 대장균군에 비하면 우수

-

이외 대장균군에 포함되어 있는 것 :

가 아주 많음

와 거의 같은 비율을 차지하고 있는 것도 있음

2. 용어정의

3. 분석기기 및 기구

3. 분석기기 및 기구

4.1 시약

4.1 시약

5. 시료채취 및 관리

5. 시료채취 및 관리

6. 분석절차

6. 분석절차

6. 분석절차

7. 결과보고

• 결과의 표기

- 분원성대장균군이 검출되지 않은 경우 : 불검출/100 mL - 분원성대장균군이 검출된 경우 : 검출/100 mL

^{가 아주 많음}