방사면역 측정 볍 (Radio Immuno Assay) 어l

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대한임상랭리사회시 : 제 8 권 제 1 호 1976

방사면역 측정 볍 (Radio Immuno _{Assay) 어l}

의 한 α- fetoprotein 정 량분석 법

서울내학뱅원 임상영리과 서딜택·김현주·동희초

서 론

방사면역 측정 법 (放射免평測定法)은 1960년 미 국의

Yalow" Berson에 의 하여 개 발되 어 1nsulin 빛 Thyr-

oxine 측정에 이용된 이래 현재까지 급속한 발전을이

룩하여 내분비학을 비롯한 의학 각 분야에 걸쳐 획기 적인 공헌을 하였다. 즉 종래의 화학적 생물학적 측정 법에서 볼수 있었던 복장성과 불확실성이 이 방엽의 도움4로 극복되고 미량까지 측정할 수 있게 되었마.

연자는 a-feto protein을 이중면역확산업 (二重免평據散法， 1mmunodiffusion) 둥오로 측정 되 어 오딘 것 을 방사면역측정 법으로 측정하였다. α-fetoprotein은 원말 성간암(原發性따찮) 환자에서 특수하게 나타나는 분자 량 65， 000의 태아혈청 α-globulin의 일종오로 간암의 진단에 매우 중요하다. 방사면역측정업에 의한 α-feto protein의 검 출은 종래 의 micro-Ouch ter lony (이 중면 역확산법)은 5,000""" 10, OOOOngjml이상에서 검출할 수 있 A냐 방사면역측정뱀오로는 10ngjml까지 측정할 수 있어 검출감수성이 500 ，....， 1000배정도 예만하묘로 원딸 성 간암에 있 어 서 α-feto protein의 검 출 양성 율이 종래 의 방엽 _Q_로는 50 ，....， 80% 에 비 해 방사연역 측정 볍 은90%

이상을 나타낸다.

《조작기구》

1. 우물형 α선 섬 광 계 수기 (Gama scitilloition Counter)

2. 원심분리기 (3000 RPl\1)

3. 자동 미 량 분주기 (tip O.lml 부착) 4. 혈청 시험관 (8x80mm)

5. 여과지(슴지)

《시 약》

1. 표지 항원(1²⁵1-α-feto protein)

2. 제 1항체 ; Anti α-fetoprotein rabbit serum 3. 제 2항체 ; Anti rabbit a-G goat serum 4. α-fetoprotein 표준액 ; 320ngjml 5. 말의 혈청 ; Horse serum

6. 완충액 ;

o.

5~1 Borate buffer pH 8.6 in 0.5%

Bovin serum albumin

《원 리》

방사면 역 측정 볍 (R1A)에 서 이 중항체 법 (double antibody method)를 이 용한 분석 볍 추로 항원 (측정 하고자 하는 물질)과 항체(제 l항체)를 면역반응을 시킨후 항 원 항체 복합체를 두고 여기에 다시 제 1항체를 항원우 로 하는 항체(제 2헝-체)를 면역반응시켜 항원파 제 l헝

체가 제 2항체를 결합한 분자량이 큰 물질로 만들어 원 첨 여파 동￡로 결합형파 유리형을 분러한다. (표 1)

Radioimmunoassay ill de:scribed by the 1'olloving competitive

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《표준곡선의 준비》

α-feto protein 320ngjml용액 을 다음파 같이 희 석 한 다.

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(2)

넣고 잘 혼합한후 4⁰C에서 24시간 반응시킨마.

3. 결 합형 (Bound form)파 유리 형 (Free form)의 분리 (1) 총 방사능을 계측한다.

(2) 3000rpm 30분간 원침 분리 한다.

(3) 상층액을 버리고 시험관 기벽에 묻은 액도 흡지 로 닦는다.

(4) 결 합형 (ppt)을 방사능 계 측한다. (표 3)

4. ^{계 산}

결합형 방사능 cpm-=- 총 방사능 cpm ~< 100=%. 나온

%를 이용하여 표준 곡선에서 값을 찾는마.

Loncent- ratlon 320ng/ml 160ng/ml 80ng/ml 40ng/ml

20ng;샤nl

10ng/ml 5ng/ml Ong/ml Buffer

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1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml

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검체의 채취는 공복을 원칙오로 하여 전혈 5ml정도 채혈하여 serum 2ml정도 취하여 실험조작 할혜까지

-20⁰C에서 보관하였다 이중면역확산엽 (Immuno dif- fusion method)파 방사면 역 측정 볍 의 측정 값을 비 교하 기 위하여 임상적￡로 Hepatcn~a이면서 이중 면역확 산댐으로 양성안 환자 5명의 serum을 혼합하여 원액，

2배， 5배， 10배， 20배， 40배 희석하여 두가지 방엽 A로 각각 측정하여 보았더니 아래와 같은결과를 얻었다(표 4) 이 표와같이 이중면역확산엽에서는 2배희석에서 양 성을 나타내고 그후부터는 양성이 없으나 방사면역측정

법은 ￡에서도 350ng의 값을 나타내어 35없O하면

14， OOOng/ml가 함유된 것 을 알 수 있였으며 이중확산볍에서는 2배까지 양성을 보여 7000ng/ml

정도에서이상의 값을 측정할 수 있는 것￡로 생각되었다.

또한 침체의 최석에 의한 값의 오차범위을 얄기위해 검체중 무작위 추출하여 10개를 원액 5배， 10배 희석 하여 실험하였든바 다음 표와같은 결과를 섣었다(표5) 여기서 알 수 있는것은 원액의 것을 값으르 하고 표준 곡선에서 벗어나는 값에 대하여만 희석하는 것이 좋을 것￡로 생각되었 A며 처음부터 원액과 5배 희석을 동 시에 하는것은 무방하리라고 생각되었마. 이와같이 희 석하였을해의 약간의 차이를 가쳐오고 있우며 조작중 에 문제점들을 생각하여 나열하여 보띤 검체의 반응시 항원 항체의 만응이 높아야 하는데 필요한 것들은

@ 항원의 순수성이 있어야 하고

@ 특이 반응 물질에 대한 반응 특이성이 있어야 하

《고 안》

《조작순서》

1. 제 1 반응

(1) 검체혈청과 표준액을 각각 0.1ml씩 시험관에 나 누어 넣는다.

(2) 표지 항원(1²⁵1_α-feto protein)을 0.1ml씩 넣 는다.

(3) 제 1항체 (Anti α-fetoprotein Rabbit serum)를

O.1ml 넣 는마.

(4) 완충액 을 0.5ml씩 넣 는마- (5) 초종이 로 막고 잘 혼합하여 응시킨다.

2. ^{제 2반응}

제 2항체 (Anti rabbit r-G goat serum)를 0.1ml썩 4⁰C에서 24시간 만

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@ 항원과 표지항원이 특이 반응에 대한 응을 일￡켜야 하고

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@ 항원(측정 하고자 하는 혼몬)이 극허 미량이요로 표지 E상원도 극히 마 렁:ι1 어 야 하며

@ 표지 항원은 충분한 계측치를 보이기 위해 표지 향원의 비 방사능 (specific activity 일정 량의 물질내 에 포함된 바 방사능량)이 극히 높아야 한마. 이 런 조 건이 완벽하게 성립되연 극히 마량의 성분도 분석을 정확히 할 수 있다.

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론》

최 근 방사면역 측정 엽 의 발달로 hepatoma의 조기 발켠 에 중요한 α-f etoprotein을 높은 감도로써 측정 할 수 있 A며 정상 뱀위는 500ng/ml이하이다. 또한 많은 량의 캠체를 처리할 수 있으며 비교적 정확하고 확실 성있게 측정할 수 있어 앞으로 많은 검사실에서도 이 방볍을 사용하였오면 한다.

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