사랑과 열정으로 더불어 함께 하는 세상 만들기 - 율촌재단(栗村財團)

전체 글

(1)흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 최용희 경북대학교 식품공학과. 1. 서. 론. 우리의 주식인 쌀에는 tocopherol, tocotrienol, γ-oryzanol 및 ferulic acid 등의 항산화 성분을 비롯하여 식이섬유와 다양한 생리활성 성분이 함유되어 있으며, 이들 성분의 대부분은 쌀의 배아, 호분층 및 과 피를 포함하는 미강층에 분포되어 있다. 근래 많은 연구에서 도정 과정에서 버려지는 미강의 영양소 및 유효 성분 등에 대한 효능이 규명되고 산업적인 이용가치가 높은 것으로 생각되어 미강에 대한 재 고찰이 이루어지고 있다. 그중 흑미는 검정약쌀이라 불리며 시판되고 있는데, 우리나라에서는 진도군 지산면에서 처음 재배되어 점차 재배 지역이 확산되고 있으며, 그 생산량도 늘고 있을 뿐만 아니라 최근에는 개량종의 개발도 활발해지고 있다. 최근 연구에서 미강 비누화물의 항산화 효과가 보고되었 고(1), 유색미로부터 미강 추출은 암 발생 저해를 보여주었다(2). 또한 이러한 성분들은 혈중 콜레스테 롤 저하 효과, 항산화 효과, 혈압 상승 억제 효과가 우수하다고 보고되기도 하였다(3, 4). 특히 미곡 부산물인 미강으로부터 다양한 유효 성분들이 확인되어 그 효능이 보고되었고(5), 일부가 기능성 소재 로서 제품화되기도 하였다. Oryzanol은 미강에 존재하는 물질로서 유지 및 유지식품의 산화방지제로 서뿐만 아니라, 화장품 및 의약품의 원료로서 널리 사용되고 있다(6, 7). 쌀과 미강의 주요 페놀산으로 나타난 ferulic acid는 LDL 산화 억제(8, 9), radicals에 의한 세포 손상 보호(10) 등 항산화 효과가 우 수할 뿐만 아니라, 당뇨 유도쥐의 혈중지질 개선 효과(11) 등 여러 생리활성이 보고되었다. 이와 같이 미강의 효능이 보고됨에 따라, 그에 따른 미강의 특성 및 분리에 대한 분석방법 및 미 강의 구조에 영향을 주는 요인에 대한 보고도 있다. Reverse-phase HPLC 방법으로 γ-oryzanol의 구. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 673.

(2) 조가 10가지의 ferulate 성분으로 이루어져 있는 것을 관찰하였으며, 그중 cycloartenyl ferulate, 24-methylenecycloartanyl ferulate 및 campesteryl ferulate가 γ-oryzanol의 주요 성분이라고 보고되었다 (12). 이 밖에도 미강의 생리활성 성분인 tocopherol과 tocotrienol(12～15), octacosanol(16, 17) 등의. 분석방법이 보고되었다. 이러한 미강 추출물의 최적화에 대한 연구도 보고되었는데, R. Renuka Devi 등(26)에서 미강의 생리활성 물질 추출물의 조건이 용매는 methanol, 용매비가 1：15(wt./vol.), 10h일 때 가장 효율적으로 추출되었다고 보고되었다. 국내에서도 Park 등의 연구에서는 벼 품종별 미강의 tocppherol과 tocotrienol 함량 평가(18) 및 도 정율에 따른 미강의 tocotrienol과 tocopherol 함량(19)에 관한 연구가 보고되었고, Kim 등은 품종 및 도정도별 백미와 미강의 특성 및 페놀산 함량(20)을 보고하였다. 한편 흑미에 대한 연구로, Lee 등은 흑진주벼 미강으로부터 생리기능성 물질의 탐색 및 추출조건 (21)에 대하여 보고하기도 하였다. Nam과 Kang은 흑미 미강 추출물과 색소 분획의 항산화, 항암 및. 항염증 활성이 백미보다 우수하다고 보고하였고(22, 23), Choi 등의 연구에 의하면 흑미가 백미나 현 미보다 높은 항산화 활성을 나타내었다(24). 또한 본 연구자들은 이전의 연구에서 일반미 미강의 기 능성 성분의 에탄올 추출공정 최적화 조건을 확립한 바 있다(30). 이에 본 연구자들은 흑미의 추출물 에서도 기능성 성분이 함유되어 최적화 조건의 탐색이 가능하다고 사료된다. 또한 최근까지 보고된 연구들을 보면 백미 미강에 대한 연구보다 흑미 미강에 대한 연구가 매우 미미함을 알 수 있다. 그 러나 블랙푸드(Black food)의 기능성과 효능에 대한 관심이 높아지면서 블랙푸드(Black food)의 일종 인 흑미의 생산량 및 기능성이 강화된 개량종도 늘고 있고, 그 부산물인 흑미 미강 생성도 늘고 있 어 그에 따른 연구도 점차 활발해지고 있다. 본 연구로 미강을 적극 활용함으로써 새로운 가공제품 을 효율적으로 개발, 적용을 가능하게 함과 동시에, 국내산 쌀의 고부가가치화를 하기 위한 기초 연 구의 일환으로서 흑미 미강 시료를 각 변수별 처리하여 미강 내의 기능 성분 특성을 분석하여 이러 한 성분들의 최적의 추출조건을 확립하여 미강을 실용화, 상품화하기 위한 기초 자료의 제공 및 미 강 추출물을 활용하여 피부 미용․아토피 피부용 화장품에 첨가, 곡류 음료 첨가물, 의약품등 다른 산업 분야에서 크게 활용될 수 있으리라 사료된다. 본 연구에서는 쌀의 도정 과정 중 폐기물화되고 있는 흑미 미강을 적극 활용함으로써 새로운 가 공제품을 효율적으로 개발, 적용을 가능하게 함과 동시에 국내산 쌀의 고부가가치화를 하기 위한 기 초 연구의 일환으로서 흑미 미강 시료를 각 변수별 처리하여 흑미 미강 내의 기능 성분 특성을 분석 하여 이러한 성분들의 최적의 추출조건을 확립하여 미강을 실용화, 상품화하기 위한 기초 자료를 제 공하기 위한 것이다.. 674.

(3) 2. 연구방법 2.1 실험재료. 흑미 미강은 2009년 8월 전라남도 진도군 진도 정미소 영농조합법인으로부터 분쇄된 시료를 공급받 았으며, 표준망체 No. 40(aperture 425μm)을 통과한 분말을 취하여 -20℃의 암소에 보관하면서 실험 에 사용하였다.. 2.2 추출공정 변수의 공정구간 설정 시험. 추출조건을 예비 설정하기 위한 기초 실험으로서 시료에 대한 용매비(1：5, 1：10, 1：15, 1：20, 1：25)별로 추출하여 추출물의 기능성 성분을 확인하였다. 여기에서 결정된 시료에 대한 용매비에서. 추출온도(20, 40, 60, 80, 100℃)별로 추출하여 그 결과를 비교하였으며, 또한 위의 결정된 두 조건에 서 추출시간(4, 6, 8, 10, 12hr)에 대한 각 함량을 비교하였다.. 2.3 용매 추출공정에서 기능성 성분 함량 측정. 추출공정 구간 설정 실험의 방법과 동일하지만, 전처리를 수행한 후 시료에 대한 용매비(1：5, 1： 10, 1：15, 1：20, 1：25)별로 추출하여 추출물의 기능성 성분을 확인하였다. 여기에서 결정된 시료. 에 대한 용매비에서 추출온도(20, 40, 60, 80, 100℃)별로 추출하여 그 결과를 비교하였으며, 이에 결 정된 두 조건에서 추출시간(2, 4, 6, 8, 10hr)에 대한 각 함량을 비교하였다.. 2.4 UAE를 이용한 흑미 미강의 전처리 추출공정. 흑미 미강 기능성 성분의 최적 추출을 위하여 환류냉각 추출공정의 추출시간을 단축시키기 위하여 Ultrasound-assisted extraction(UAE) 공정을 실시하였다. 흑미 미강의 전처리 추출조건을 선정하기 위. 해 에탄올 농도는 95.5%로 고정하고, 추출온도와 추출시간을 변화시키면서 추출하였다. 즉 <Figure 1>에 나타낸 바와 같이, 흑미 미강 시료 10g에 150mL의 에탄올을 가하여 각 추출공정 변수에 따라. 추출한 후 여과 및 정용하여 시험용액으로 사용하였다.. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 675.

(4) Black rice bran powder 10g+Ethanol 95.5% ↓ UAE Extraction condition Extraction temperature(℃)：20, 25, 30, 35, 40 Extraction time(min)：5, 10, 15, 20, 25 ↓ Filtering(Whatman No. 1) ↓ 100mL mess up ↓ ┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓ TPC, TFC EDA, Ferulic acid(HPLC). Saponification ↓ HPLC analysis (Oryzanol). <Figure 1> Scheme for extraction preprocess from black rice bran. 2.5 UAE 공정 최적화를 위한 전처리 실험계획. 흑미 미강 기능 성분의 최적 추출조건을 확립하기 위해 반응표면분석법(response surface methodology, RSM)을 이용하였으며, 예비실험 결과를 바탕으로 중심합성계획법(central composite design)을 실시하. 였다. 전처리 공정의 독립변수(Xn)는 추출온도(X1), 추출시간(X2)에 대한 실험범위를 선정하여 5단계 (-2, -1, 0, 1, 2)로 부호화하였으며, <Table 1>에 나타낸 바와 같다. 또한 이들의 독립변수에 영향을. 받는 종속변수는 추출수율, 총페놀 함량, 총플라보노이드 함량, 전자공여능, γ-oryzanol 및 ferulic acid 를 측정하여 각각 회귀분석을 실시하였다. 최적 전처리 추출공정 예측은 SAS(statistical analysis system, Version 9.1) program을 이용하였으며, 회귀분석 결과 임계점이 최대점이거나 최소점이 아니고. 안장점일 경우에는 능선분석을 하여 최적점을 구하였고 사용한 회귀식은 다음과 같다. 2. 2. Y=b0+b1X1+b2X2+b11X1 +b21X2X1+b22X2. <Table 1> Level of leaching condition of black rice bran in experimental design Leaching condition. -2. -1. 0. 1. 2. X1. Extraction temperature(℃). 20. 25. 30. 35. 40. X2. Extraction time(min). 5. 10. 15. 20. 25. 676.

(5) 2.6 흑미 미강의 용매 추출공정 흑미 미강의 용매 추출공정 본 연구에서 흑미 미강으로부터의 기능 성분 추출방법은, <Figure 2>에 나타낸 바와 같이 미강 10g 에 ethanol을 가한 후 UAE 공정을 실시한 후 <Table 2>에 나타낸 각각의 변수별로 환류냉각기를 이 용하여 추출한 후 32℃에서 진공농축(Model 2007GV, H.S. Co., Deagu, Korea)시킨 추출물을 시험용 액으로 사용하였다.. Black rice bran powder 10g+Ethanol 95.5% ↓ Preprocessing (ultrasound-assisted extraction) ↓ Extraction condition solvent ratio(mL/g)：10, 15, 20, 25, 30 Extraction temperature(℃)：60, 70, 80, 90, 100 Extraction time(hr)：2, 3, 4, 5, 6 ↓ Filtering(Whatman No. 1) ↓ Evaporation ↓ ┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓ TPC, TFC EDA, Ferulic acid(HPLC). Saponification ↓ HPLC analysis (Oryzanol). <Figure 2> Scheme for extraction process from black rice bran. 용매 추출공정 최적화를 위한 실험 계획 흑미 미강 기능 성분의 최적 추출조건을 확립하기 위해 반응표면분석법(response surface methodology, RSM)을 이용하였으며 예비실험의 결과를 바탕으로 중심합성계획법(central composite design)을 실시. 하였다. 추출공정의 독립변수(Xn)는 시료에 따른 용매비(X1)와 추출온도(X2), 추출시간(X3)에 대한 실 험범위를 선정하여 5단계(-2, -1, 0, 1, 2)로 부호화하였으며, <Table 2>에 나타낸 바와 같다. 또한 이 들의 독립변수에 영향을 받는 종속변수는 총페놀 함량, 총플라보노이드 함량, 전자공여능, γ-oryzanol 및 ferulic acid를 3회 반복 측정하여 각각 회귀분석을 실시하였다. 회귀분석에 대한 최적 조건은 SAS(statistical analysis system, Version 9.1) program을 이용하여 예측하였으며, 회귀분석 결과 임계점. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 677.

(6) 이 최대점이거나 최소점이 아니고 안장점일 경우에는 능선분석을 하여 최적점을 구하였고 사용한 회 귀식은 다음과 같다. 2. 2. Y=bo+b1X1+b2X2+b11X1 +b12X1X2+b22X2 +b2X3X1+b2X3X2+b2X3X3. 추출특성의 모니터링과 최적 조건 범위 예측은 각 종속변수의 contour map을 이용하여 분석하였다. <Table 2> Level of leaching condition of black rice bran in experimental design Leaching condition. -2. -1. 0. 1. 2. X1. Solvent to ratio(mL/g). 10. 15. 20. 25. 30. X2. Extraction temperature(℃). 60. 70. 80. 90. 100. X3. Extraction time(hr). 2. 3. 4. 5. 6. 2.7 추출물의 기능성 성분 측정 Total phenolics 측정 Total phenol 함량은 Folin-Denis법에 따라 비색정량하였다. 즉 일정하게 희석한 검액 1mL에 Folin-Ciocalteu 시약(Sigma-Aldrich Chemical Co., U.S.A) 1mL를 가하여 혼합하고 3분 후 10% Na2CO3 1mL를 넣어 진탕한 후 1시간 실온에 방치하여 UV-visible spectrophotometer(TU-1800 Human Crop. Co., Beijing, China)를 사용하여 700nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준물질로 gallic acid(Sigma Chemical Co., St. Louis, U.S.A)를 농도별로 조제하여 표준 검량선을 작성한 후 정. 량분석하였다.. Total flavonoids 측정 Total flavonoid의 함량은 modified colorimetric 방법(27)에 의해 측정하였다. 각 추출액 70μl를 50% ethanol 430μl에 희석하여 5% Sodium nitrite 50μl를 혼합 후 상온에서 1시간 동안 방치한다. 그 다음 10% Al(NO3)3․9H2O를 50μl를 가하여 상온에서 6분 동안 다시 방치한 후 여기에 1N NaOH 500μl. 를 넣고 510nm에서 UV-visible spectrophotometer로 흡광도를 측정하였다. 이때 표준시약은 Rutine(Sigma Chemical Co., St. Louis, U.S.A)을 이용하여 표준곡선으로 함량을 구하였다.. 전자공여능 측정 DPPH(α,α-'diphenyl-β-pycrylhydrazyl)는 항산화능을 가진 물질의 전자공여능에 의해 환원되어 탈색되. 678.

(7) 는데, 이 탈색의 정도로 항산화능을 측정할 수 있다. 전자공여능(Electron donating ability, EDA)시험 은 DPPH 12mg을 absolute ethanol 100mL에 용해하여 4×104M의 DPPH용액을 조제한 다음, ethanol 용액을 Blank로 하여 525nm에서 흡광도가 0.95~0.99가 되도록 50% ethanol을 첨가하여 조정한다. 그 다음 추출물 1mL에 조제한 DPPH시액 4mL를 혼합하여 10초간 강하게 진탕한 후 상온에서 10분간 방치한다. 이를 520nm에서 UV-visible spectrophotometer로 흡광도를 측정한 후 대조구에 대한 흡광 도의 감소 정도를 다음 식에 의하여 계산한다.. . .  DPPH radical scavenging activity(%)=    ×100  ABS：Absorbance of DPPH solution with sample at 518nm ABC：Absorbance of DPPH solution without sample at 518nm. Ferulic acid 함량 측정 미강 시료에서 추출한 추출물에 ethanol 100mL로 정용화한 후 HPLC(Agilent 1100, Hewlett Packaard, Germany)를 사용하여 분석하였다. Ferulic acid 함량 분석을 위한 HPLC 분석조건은 column은 YMC pack pro C18 RS(250, 4.6mm I.D., YMC Inc., U.S.A)을 사용하였고 mobile phase로 Acetonitrile/ dichloromethane/ acetic acid(88：6：6)：methanol/ n-butyl alcohol/ water(90：2：8)=72： 25가 되도록 하여 사용하였다. Flow rate는 1mL/min, injection volume은 10μl로 하여 325nm에서 분. 석하였다. 이때 표준용액의 검량선은 Ferulic acid(Sigma Chemical Co., St. Louis, U.S.A)로 검량선을 작성하여 시료 중의 ferulic acid를 계산하였다.. γ-oryzanol 함량 측정 Oryzanol은 Hu 등(28)의 방법을 이용하여 추출된 rice bran oil 0.1g에 ethanol 5mL와 ascorbic acid 0.1g을 첨가하여 혼합한 후 KOH 0.15mL를 첨가하여 water bath에서 80℃로 10분간 비누화 (saponification)시켰다. 그후 냉각하고 hexane 5mL와 distilled water 5mL를 첨가하여 혼합하였다. 이. 용액을 분액여두에 취하여 진탕한 후 두 층으로 분리될 때까지 방치하였다. 분리된 상층액을 취하고 남은 시료에 hexane 5mL를 재첨가하여 위 과정을 2차례 반복하였으며 수집한 상층액은 32℃에서 진 공농축한 후 hexane 3mL를 가하여 HPLC 분석을 하였다. γ-oryzanol 함량 분석을 위한 HPLC 분석 조건으로 column은 YMC pack pro C18 RS(250, 4.6mm I.D., YMC Inc., U.S.A)을 사용하였고, mobile phase는 methanol/ acetonitrile/ dichloromethane/ acetic acid=50：44：3：3가 되도록 하여 사용. 하였다. Flow rate는 1mL/min, injection volume은 10μl로 하여 330nm에서 분석하였다. 표준용액 조 제는 γ-oryzanol(Wako Pure Chemical Industrieds, Ltd., Osaka, Japan)을 사용하였고 검량선을 작성하. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 679.

(8) 여 시료 중의 γ-oryzanol을 계산하였다.. α-tocopherol 함량 측정 Tocopherol도 oryzanol과 같은 방법으로 비누화한 후 농축물을 isooctane 3mL에 녹여 분석 시료로 사. 용하였다. Tocopherol 함량 분석은 보통 FID detector를 이용한 연구가 많은데, 본 실험에서는 Kim 등(29)의 분석조건을 참고하여 UV detector를 이용하여 분석하였다. 분석조건은 column은 Agilent TC-C18(4.6mm I.D.×150mm L, 5μm, Agilent Inc., U.S.A)을 사용하였고 mobile phase는 hexane： isopropanol(98：2)가 되도록 하여 사용하였다. Flow rate는 1.6mL/min, injection volume은 20μl로 하. 여 290nm에서 분석하였다.. 표준용액 조제는 α-tocopherol(Sigma Chemical Co., U.S.A)을 사용하여 검량선을 작성한 후 각 함량을 계산하였다.. 3. 결과 및 고찰 3.1 공정변수별 기능성 성분 함량 분석. 중심합성법에 의한 조건범위를 설정하기 위하여 시료에 대한 용매비 1：5~1：25, 추출온도 20~100℃, 추출시간 4~12hr의 조건별로 용매 추출을 수행하였다.. 시료에 대한 용매비가 추출함량에 미치는 영향 흑미 미강 10g에 용매비 1：5, 1：10, 1：15, 1：20, 1：25(w：v)로 95.5% 에탄올을 가하여 80℃에 서 12시간 동안 추출하였다. 미강 성분을 추출한 추출물의 기능성 성분 결과를 <Table 3>과 <Figure 3>에 나타내었다. 시료에 대한 용매비가 증가할수록 수율은 증가하였고, 총페놀 함량은 시료에 대한. 용매비가 1：20일 때 최댓값 118.91mg GAE/100g으로 나타났으며, 이는 Devi & Arumughan(25)의 연구에서와 같이 용매비가 증가할수록 총페놀 함량이 증가하는 경향이 같았다. 전자공여능은 시료에 대한 용매비가 1：5일 때 최댓값 77.78%를 나타내었고, 용매비가 1：20일 때도 72.06%로 비교적 높 은 값을 나타내었다. Ferulic acid 함량은 시료에 대한 용매비가 증가할수록 함량은 증가하였고, 1： 20일 때 최댓값 27.87mg/10g으로 나타났다. γ-Oryzanol 역시 시료에 대한 용매비가 증가할수록 함량. 이 증가하였으며 1：20일 때 최댓값을 나타내었다. α-Tocopherol 함량은 시료에 대한 용매비가 증가 할수록 함량도 증가하였다. α-Tocopherol 함량은 시료에 대한 용매비가 1：25일 때, 11.03mg/100으로 최댓값을 나타내었다.. 680.

(9) <Table 3> Effect of solvent ratio condition on extraction from black rice bran. 1 2. Solvent to ratio (mL/g). Yield (%). TPC1 (mg GAE/100g). EDA2 (%). Ferulic acid (mg/10g). γ-Oryzanol (mg/10g). α-Tocopherol (mg/100g). 5. 18.2. 67.60. 77.78. 15.29. 14.59. 6.49. 10. 28.71. 72.87. 71.94. 17.25. 17.65. 6.99. 15. 32.56. 96.22. 66.73. 25.94. 18.02. 8.35. 20. 36.3. 118.91. 72.06. 27.87. 22.02. 10.39. 25. 39.55. 50.30. 59.67. 18.15. 20.46. 11.03. Extraction was performed for 12hr at 80℃ TPC：total phenol contents, EDA：electron donating ability. <Figure 3> Effect of solvent ratio condition on black rice bran. 추출온도가 추출함량에 미치는 영향 시료에 대한 용매비의 조건을 1：20으로 결정하고 추출시간은 12hr으로 하여 각 온도별로 흑미 미강 의 기능 성분을 추출하였다. 흑미 미강의 추출물 기능 성분 실험 결과는 <Table 4>와 <Figure 4>에 나타낸 바와 같다. 추출온도에 따른 추출물의 수율은 온도가 높아질수록 증가하였으며 80℃일 때 최 댓값 32.5%로 나타났다. 총페놀 함량도 동일한 온도에서 최댓값 133mg GAE/100g으로 나타났다. 그 러나 전자공여능의 경우 74.6%로 60℃일 때 가장 높은 값을 나타내었다. 한편 100℃일 때 모든 실 험값들이 급격히 감소하였는데, 이는 고온에서 장시간 추출을 하여 용매의 손실로 인한 것으로 사료 된다. 온도 변화에 대한 ferulic acid 함량은 온도가 높아질수록 함량이 점차 증가하다가 80℃에 최댓 값 28mg/10g을 나타내었다. 그리고 γ-oryzanol 함량은 추출온도가 60℃와 80℃에서 가장 높은 값 을 나타내었다. 이는 Xu 등(29)의 실험에서 추출온도가 높아질수록 추출되는 oryzanol 함량이 증가 한다고 하였는데, 본 실험에서도 온도가 높아질수록 추출함량이 조금씩 증가한 결과와 유사하였다. α-Tocopherol 함량도 온도가 높아질수록 함량이 증가하는 경향을 보였으며 80℃에서 최댓값. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 681.

(10) 9.86mg/100g을 나타내었다. 한편 추출온도가 100℃보다 높아질 때 추출함량이 낮아지는데, 이는 끓. 는점 이상으로 온도가 높아짐에 따라 추출용매의 증발과 같은 손실을 가져와 각 함량이 감소하는 것 으로 사료된다. <Table 4> Effect of extraction temperature condition on extraction from black rice bran. 1 2. Extraction temperature (℃) . Yield (%). TPC1 (mg GAE/100g). EDA2 (%). Ferulic acid (mg/10g). γ-Oryzanol (mg/10g). α-Tocopherol (mg/100g). 20. 27.2. 66.99. 66.77. 15.7. 16.9. 3.39. 40. 28.7. 96.77. 69.69. 20.4. 19.8. 4.95. 60. 29.9. 124.67. 74.60. 26.9. 22.7. 8.35. 80. 32.5. 133.00. 71.16. 28.0. 22.4. 9.86. 100. 15.5. 98.22. 58.67. 13.0. 9.9. 4.05. Extraction was performed for 12hr on a mixture composed of 10g of sample and 200mL of solvent. TPC：total phenol contents, EDA：electron donating ability. <Figure 4> Effect of extraction temperature condition on black rice bran extraction. 추출시간이 추출함량에 미치는 영향 추출시간에 대한 추출물의 성분 변화를 알아보기 위하여 시료에 대한 용매비는 1：20, 추출온도는 80℃로 고정시키고, 추출시간별로 흑미 미강의 기능 성분을 추출하였다. 성분 변화의 결과는 <Table 5>과 <Figure 5>에 나타낸 바와 같다. 수율은 <Figure 5>에 나타난 바와 같이 변화가 적은 것으로. 보아 추출시간에 대한 영향은 비교적 적게 받는 것으로 사료된다. 총페놀 함량은 추출시간이 길어질 수록 함량이 감소하였다. 총페놀 함량은 추출시간이 8시간 이내일 때는 비교적 유사한 값을 나타내 었다. 전자공여능도 총페놀 함량과 유사한 경향을 보였다. 추출시간이 길어질수록 전자공여능도 감소 하였다. 한편 추출시간이 6시간일 때 총페놀 함량과 전자공여능이 각각 156.95mg GAE/100g과 75.39%로 최댓값을 나타내었다. Ferulic acid 함량, oryzanol 함량 및 tocopherol 함량 변화는 모두 유. 682.

(11) 사하게 나타났는데, 추출시간이 길어질수록 함량이 대체적으로 감소하는 경향을 보였다. 추출시간이 6시간일 때 각각 31.3mg/10g, 25.6mg/10g과 10.99mg/100g으로 최댓값을 나타내었다. <Table 5> Effect of extraction time condition on extraction from black rice bran. 1 2 3. Extraction time1 (hr) . Yield (%). TPC2 (mg GAE/100g). EDA3 (%). Ferulic acid (mg/10g). γ-Oryzanol (mg/10g). α-Tocopherol (mg/100g). 4 6 8 10 12. 34.5 38.9 36.3 32.5 31.5. 153.06 156.95 150.50 139.88 129.00. 72.97 75.39 73.95 71.50 70.60. 30.2 31.3 29.9 28.8 28.5. 22.2 25.6 24.1 22.6 22.0. 10.00 10.99 9.95 9.12 8.86. Extraction was performed for 80℃ on a mixture composed of 10g of sample and 200mL of solvent. TPC：total phenol contents EDA：electron donating ability. <Figure 5> Effect of extraction time condition on black rice bran extraction. 추출공정 범위의 설정 공정 변수별 기능성 성분 함량을 시료에 대한 용매비, 추출온도, 추출시간별로 측정한 실험 결과, 중 심합성계획법을 실행하기 위한 중심점으로 시료에 대한 용매비는 1：20, 추출온도 80℃, 추출시간 6hr로 결정되었다.. 3.2 UAE를 이용한 흑미 미강의 전처리 추출공정 최적화. 전처리를 하지 않은 추출물의 경우 장시간 추출시 함량이 비교적 높음을 알 수 있었다. 이에 추출시 간을 단축하여 효율적인 추출공정의 수립을 위하여 본 추출공정 이전에 전처리 공정으로 UAE 추출 공정을 적용하였다. 전처리 공정도 본 추출공정과 마찬가지로 반응표면 분석법을 이용하여 전처리 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 683.

(12) 추출공정의 최적화를 확립하였다.. Total phenolics 측정 각각의 추출조건에 따라 흑미 미강 추출물의 총페놀 함량 측정 결과에 대한 회귀식의   값은 0.8987 로 나타났다(<Table 6>). 반응표면 분석 결과 추출조건에 따른 총페놀 함량의 변화는 <Figure 9>에서 나타난 바와 같이 추출온도와 추출시간 모두 영향을 받았으며, 추출온도가 높아질수록 추출시간이 길 어질수록 함량이 증가하는 경향을 나타내었다. 이때 최댓값은 82.08mg/100g로 나타났고, 추출조건은 <Table 8>에 나타난 바와 같이 추출온도는 38.72℃, 추출시간은 19.90min에서 최댓값을 나타내었다. <Table 6> The central composite design for the optimization of leaching condition of black rice bran No.1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4. Extraction temp. (℃) 35 35 25 25 30 30 40 20 30 30. Extraction time (min) 20 10 20 10 15 15 15 15 25 5. TPC2 (mg GAE/100g) 79.726 58.721 50.046 23.562 34.977 38.63 73.333 3.014 61.461 8.95. TFC3 (mg/100g) 50.826 42.928 42.203 36.333 40.029 37.058 47.203 32.058 40.681 12.783. EDA4 (%) 80.795 78.560 74.876 64.652 74.379 73.303 80.091 42.343 80.174 53.767. Oryzanol (mg/100g) 19.152 22.602 23.692 24.010 23.126 23.125 22.914 22.571 20.395 24.469. Ferulic acid (mg/100g) 9.901 9.748 9.673 9.588 9.656 9.664 9.815 9.453 9.785 9.520. The number of experimental conditions by central composite design TPC：total phenol contents TFC：total flavonoids compounds EDA：electron donating ability. <Figure 6> Effect of extraction conditions on total phenol compounds(mg GAE/100g). 684.

(13) Total flavonoids 측정 흑미 미강의 각 추출조건에 따른 총플라보노이드 함량을 측정한 결과는 <Table 6>에 나타내었고, 회 귀식은 <Table 7>과 같다. R2값은 0.8398이었고 반응표면 분석 결과 총플라보노이드는 추출시간에 유의하게 영향을 받는 것으로 확인되었고 추출시간이 길어짐에 따라 총페놀 함량은 증가하다가 감소 하였다(<Figure 7>). 또한 반응표면 분석으로 예측된 정상점은 최대점으로 <Table 8>에 나타난 바와 같이 추출온도 39.22℃, 추출시간 18.86min에서 최댓값 51.96mg GAE/100g로 나타났다. <Table 7> Estimated coefficients of second order response models for black rice bran. Intercept X₁ X₂ X₁X₁ X₁X₂ X₂X₂ R² Pr˃F. TPC1 (mg GAE/100g). TFC2 (mg/100g). EDA3 (%). Oryzanol (mg/100g). Ferulic acid (mg/100g). -162.980267 6.213307 6.059469 -0.032779 -0.054795 -0.062459 0.8987 0.0405. -28.31988 1.037957 4.712215 -0.009731 0.02029 -0.138716 0.8398 0.0949. -170.368673 11.347761 6.038809 -0.142680 -0.079884 -0.085147 0.8922 0.0454. 11.877696 0.434797 1.229519 -0.002175 -0.031319 -0.019120 0.9063 0.0349. 8.764751 0.037056 0.001125 -0.000478 0.000677 -0.000288 0.9211 0.0251. Y=b0+b1X1+b2X2+ b11X12+b21X2X1+b22X22 X1：Extraction temperature(℃), X2：Extraction time(min) 1 TPC：total phenol contents 2 TFC：total flavonoids compounds 3 EDA：electron donating ability. <Figure 7> Effect of extraction conditions on total flavonoids components(mg/100g). 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 685.

(14) 전자공여능 측정 각 추출조건에 따른 전자공여능의 반응표면 분석은 <Figure 8>에 나타낸 바와 같고, 분석 결과 추출 온도가 높아짐에 따라 전자공여능이 유의하게 증가하였으며 총페놀 함량과 유사한 경향을 보였는데, 이는 항산화작용이 페놀성 물질 등과 밀접한 관계가 있음을 보여준다(23). 전자공여능에 대한 회귀식 은 <Table 7>에 나타내었으며, R2는 0.8922로 나타내었다. 반응표면 분석의 결과 예측점은 최대점으 로 시료에 대한 추출온도 34.28℃, 추출시간은 19.20min에서 최댓값 82.95%로 나타났다(<Table 8>). <Table 8> Predicted levels of extraction condition for the maximum responses of variables by the ridge analysis Response. X1. X2. Maximum. Morphology. TPC (mg GAE/100g). 38.72. 19.90. 82.08. maximum. TFC (mg/100g). 39.22. 18.86. 51.96. maximum. EDA(%). 34.28. 19.20. 82.95. maximum. oryzanol (mg/100g). 35.28. 6.51. 24.51. saddle. Ferulic acid (mg/100g). 37.49. 21.63. 9.92. maximum. X1：Extraction temperature(℃), X2：Extraction time(min). <Figure 8> Effect of extraction conditions on electron donating ability(%). 686.

(15) Oryzanol 함량 흑미 미강을 시료로 하여 추출온도(X1)와 추출시간(X2)을 달리한 전처리 추출조건에 따른 oryzanol 함량의 결과에 대한 반응표면 회귀식은 <Table 7>에 나타냈으며, R2값은 0.9063로 측정되었다. 예측 된 정상점은 안장점으로 <Table 8>에 나타난 바와 같이 추출온도는 35.28℃, 추출시간은 6.51min로 나타났다. 이때 추출함량은 24.51mg/100g으로 최댓값을 나타냈다. 반응표면 분석 결과는 <Figure 9> 에서 나타난 바와 같이 추출시간과 추출온도에 유의하게 영향을 받았는데, 추출온도가 낮고 추출시 간이 길 때 추출온도가 높고, 추출시간이 짧을 때 가장 높은 함량을 나타내었다.. <Figure 9> Effect of extraction conditions on γ-oryzanol components(mg/100g). Ferulic acid 함량 흑미 미강의 각 추출조건에 따른 ferulic acid 함량을 측정한 결과는 <Table 6>에 나타내었고 회귀식 은 <Table 7>과 같다. R2값은 0.9211이었으며 반응표면 분석 결과 추출온도가 높아질수록 유의하게 영향을 받았으며, 추출온도가 높을 때 시간이 길수록 높은 함량을 나타내었다(<Figure 10>). 예측된 정상점은 최대점으로 <Table 8>에 나타난 바와 같이 추출온도 37.49℃, 추출시간 21.63min에서 최댓 값 9.92mg/100g로 나타났다.. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 687.

(16) <Figure 10> Effect of extraction conditions on ferulic acid(mg/100g). 최적 추출조건의 예측 및 실측 추출온도와 추출농도, 추출시간을 추출조건으로 하여 이로부터 추출조건 최적화를 위해 추출물의 특 성인 총페놀 함량(Y1), 총플라보노이드 함량(Y2), electron donating ability(Y3), oryzanol(Y4), ferulic acid(Y5)의 contour map을 superimposing하여 <Figure 11>과 같이 최적 추출조건 범위를 예측하였다.. 이때 반응표면이 중복된 부분은 <Table 9>에 나타난 바와 같이 추출온도 41.67℃, 추출시간 21.95min이었으며, 각 회귀식에 대입하여 구한 예측값을 <Table 10>과 같이 설정하여 실제 추출실험. 을 실시하여 성분을 측정해 본 결과, <Table 10>에 나타낸 바와 같이 실측값이 예측값과 유사한 수 준을 나타내었다.. <Figure 11> Superimposing contour map of optimized conditions (A) TPC, (B) TFC, (C) EDA, (D) γ-Oryzanol, (E) Ferulic acid. 688.

(17) <Table 9> The optimum condition of extraction conditions for response variables by superimposing of contour maps for black rice bran Leaching condition. Optimum range. Optimum condition. X1. Extraction temperature(℃). 39.02~44.32. 41.67. X2. Extraction time(min). 19.2~24.7. 21.95. <Table 10> The optimum condition of extraction conditions for response variables by superimposing of contour maps for black rice bran 1. 1. Leaching condition. Predicted value. Experimental value. TPC (mg GAE/100g). 51.54. 55.64. TFC (mg/100g). 20.47. 21.52. EDA(%). 40.69. 48.59. oryzanol (mg/100g). 9.76. 12.33. Ferulic acid (mg/100g). 9.51. 10.49. Given conditions：20mL/g in solvent ratio, 40℃ in temperature. 3.3 용매 추출공정에서의 기능성 성분 함량 분석. 효율적인 추출공정을 수립하기 위하여 전처리 공정으로 UAE를 이용하여 전처리한 후 용매 추출을 수행하고자 하였다. 반응표면 분석법에 의하여 예측된 최적 조건에서 전처리를 한 후 중심합성계획 법에 의한 범위를 재설정하고자, 시료에 대한 용매비 1：5~1：25, 추출온도 20~100℃, 추출시간 2~10hr의 조건별로 용매 추출하여 전처리를 하지 않은 추출물의 기능성 성분 함량과 차이를 알아보. 았다.. 시료에 대한 용매비가 추출함량에 미치는 영향 흑미 미강 10g에 용매비 1：5, 1：10, 1：15, 1：20, 1：25(w：v)로 95.5% 에탄올을 가하여 80℃에 서 6hr 동안 추출하였다. 미강 성분을 추출한 추출물의 기능성 성분 결과를 <Table 11>과 <Figure 12>에 나타내었다. 총페놀 함량은 시료에 대한 용매비가 1：20일 때 최댓값 157.04mg GAE/100g으. 로 나타났으며, 전자공여능도 85.09%로 가장 높은 값을 나타내었다. 총플라보노이드 함량은 1：15, 1：20일 때 비슷한 함량을 나타내었으나, 1：20일 때 최댓값 178.38mg/100g을 나타내었다. Ferulic. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 689.

(18) acid 함량은 시료에 대한 용매비가 증가할수록 함량은 증가하였고, 1：20일 때 최댓값 26.87mg/10g. 으로 나타났다. γ-Oryzanol은 시료에 대한 용매비가 1：15일 때 최댓값 24.02mg/10g을 나타내었고, α-tocopherol은 시료에 대한 용매비가 1：15 이상일 때 비교적 유사한 값을 나타내었으며 1：20일 때 최댓값을 나타내었다. 전처리를 수행하지 않은 추출물(<Table 3>)과 비교했을 때 전처리를 한 추 출물의 경우 함량이 증가함으로 보아 전처리 공정을 수행한 후 용매 추출을 하는 것이 효율적으로 성분을 추출할 수 있는 방법으로 사료된다. <Table 11> Effect of solvent ratio condition on extraction1 from black rice bran Solvent to ratio (mL/g). 1 2. TPC2 (mg GAE/100g). TFC2 (mg/100g). EDA2 (%). Ferulic acid (mg/10g). γ-Oryzanol (mg/10g). α-Tocopherol (mg/100g). 5. 67.60. 126.30. 78.78. 16.02. 15.38. 6.49. 10. 102.87. 130.95. 71.16. 16.33. 16.97. 6.98. 15. 143.03. 163.33. 66.77. 18.48. 24.02. 8.21. 20. 157.04. 178.38. 85.09. 26.87. 23.00. 9.82. 25. 133.28. 159.95. 80.22. 20.42. 18.49. 9.24. Extraction was performed for 6hr at 80℃. TPC：total phenol contents, TFC：total flavonoids compounds, EDA：electron donating ability. <Figure 12> Effect of solvent ratio condition on black rice bran after preprocess. 추출온도가 추출함량에 미치는 영향 시료에 대한 용매비의 조건을 1：20으로 결정하고 추출시간은 6hr으로 하여 각 온도별(20, 40, 60, 80, 100)로 흑미 미강의 기능 성분을 추출하였다. 흑미 미강의 추출물 기능 성분 실험 결과는 <Table 12>와 <Figure 13>에 나타낸 바와 같다. 추출온도에 따른 추출물의 총페놀 함량은 온도가 높아질수. 록 증가하는 경향을 보였으며, 80℃일 때 최댓값 152.96mg GAE/100g을 나타내었고 100℃일 때 함 량이 급격히 감소하였다. 총플라보노이드 함량은 온도별 추출물이 비교적 유사한 값을 나타내었고. 690.

(19) 60℃일 때 174.05mg/100g으로 최댓값을 나타내었다. 전자공여능의 경우 80℃일 때 84.03%로 가장. 높은 값을 나타내었다. 온도 변화에 대한 ferulic acid 함량은 60℃일 때 최댓값 31.46mg/10g을 나타 내었고, γ-oryzanol 및 α-tocopherol 함량은 80℃일 때 최댓값이 18.39mg/10g, 9.93mg/100g으로 온도 가 높아질수록 함량이 점차 증가하는 경향을 보이다가 100℃에서 함량이 급격히 감소하였다. 온도의 변화에 따른 추출물은 100℃에서 급격히 감소하는 경향을 보이는데, 이는 추출용매의 증발과 같은 손실로 인해 함량이 감소한 것으로 사료된다. 전처리 공정을 수행한 추출물의 경우(<Table 12>)와 전 처리를 수행하지 않은 추출물(<Table 4>)를 비교했을 때 모두 온도조건은 80℃에서 가장 높은 값을 나타내었으나, 전처리 공정을 한 추출물의 경우 조금 더 높은 함량을 나타내었다. 이는 본 추출공정 전 미온에서 전처리 공정의 수행으로 인하여 함량이 증가한 것으로 사료된다. <Table 12> Effect of extraction temperature condition on extraction from black rice bran. 1 2. Extraction 1 temperature (℃) . TPC2 (mg GAE/100g). TFC2 (mg/100g). EDA2 (%). Ferulic acid (mg/10g). γ-Oryzanol (mg/10g). α-Tocopherol (mg/100g). 20. 86.55. 169.88. 63.11. 16.93. 9.91. 3.94. 40. 106.16. 171.89. 67.36. 21.58. 11.30. 5.91. 60. 134.77. 174.05. 78.60. 31.46. 13.26. 8.85. 80. 152.96. 172.05. 84.03. 30.74. 18.39. 9.93. 100. 78.39. 150.40. 56.74. 13.44. 0.99. 4.49. Extraction was performed on a mixture composed of 10g of sample and 200mL of solvent. TPC：total phenol contents, TFC：total flavonoids compounds, EDA：electron donating ability. <Figure 13> Effect of extraction temperature condition on black rice bran extraction after preprocess. 추출시간이 추출함량에 미치는 영향 추출시간에 대한 추출물의 성분 변화를 알아보기 위하여 시료에 대한 용매비는 1：20, 추출온도는 80℃로 고정시키고, 추출시간별로 흑미 미강의 기능 성분을 추출하였다. 성분 변화의 결과는 <Table. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 691.

(20) 13>과 <Figure 14>에 나타낸 바와 같다. 실험 결과, 총페놀 함량은 추출시간이 4hr일 때 최댓값 165.95mg GAE/100g로 최댓값을 나타내었고 4hr 이후에는 함량이 유사하게 나타났다. 총플라보노이. 드 함량은 6hr일 때 180.03mg/100g으로 최댓값을 나타내었다. 전자공여능의 경우 4hr일 때 84.96%로 가장 높은 값을 나타내었다가 시간이 경과할수록 감소하였다. 시간 변화에 대한 ferulic acid, γ -oryzanol 및 α-tocopherol 함량은 4hr일 때 각각 32.98mg/10g, 25.96mg/10g, 10.97mg/10g으로 최댓값. 을 나타내었다. 전처리를 수행한 후 용매 추출을 한 결과, 전처리를 수행하지 않은 용매 추출(<Table 5>)과 비교했을 때 기능성 성분의 함량은 조금 증가하였으며 시간을 단축시킬 수 있었다. <Table 13> Effect of extraction time condition on extraction from black rice bran. 1 2. Extraction time1 (hr) . TPC2 (mg GAE/100g). TFC2 (mg/100g). EDA2 (%). Ferulic acid (mg/10g). γ-Oryzanol (mg/10g). α-Tocopherol (mg/100g). 2. 128.39. 163.22. 77.97. 30.38. 16.23. 9.19. 4. 165.95. 173.88. 84.96. 32.98. 25.96. 10.97. 6. 153.18. 180.03. 79.04. 27.99. 17.94. 9.82. 8. 150.33. 174.29. 73.96. 28.48. 22.50. 9.11. 10. 149.77. 170.03. 70.80. 28.44. 21.59. 8.75. Extraction was performed for 30℃ on a mixture composed of 10g of sample and 200mL of solvent. TPC：total phenol contents, TFC：total flavonoids compounds, EDA：electron donating ability. <Figure 14> Effect of extraction time condition on black rice bran extraction after preprocess. 추출공정 범위의 재설정 효율적인 추출공정의 수립을 위하여 전처리를 한 후 공정변수별 기능성 성분 함량을 시료에 대한 용 매비, 추출온도, 추출시간별로 측정한 실험 결과, 중심합성계획법을 실행하기 위한 중심점으로 시료 에 대한 용매비는 1：20, 추출온도 80℃, 추출시간 4hr로 결정되었다. 흑미 미강의 기능성 성분의 추 출시간을 단축하기 위하여 전처리 공정을 수행한 결과, 추출시간의 단축 및 기능성 성분 함량도 소. 692.

(21) 량 증가하였다. 이와 같은 결과로 흑미 미강의 기능성 성분의 용매 추출시 전처리 공정을 수행하는 것이 효율성을 향상시키므로 전처리 공정 후 본 추출공정을 수행하였다.. 3.4 흑미 미강의 용매 추출공정 최적화. UAE를 이용한 전처리 공정의 최적 조건(40℃, 20min)에서 전처리 추출을 수행한 시료를 즉시 환류추. 출기를 이용하여 각 공정변수별(시료에 대한 용매비, 추출온도, 추출시간)로 용매 추출을 수행하였다.. 추출조건이 total phenolics 함량에 미치는 영향 추출조건에 따른 추출물의 total phenolics를 측정한 결과는 <Table 15>에 나타낸 바와 같으며, 그에 대한 회귀식의 R2값은 0.9085로 높은 상관관계를 보였고 p＜0.01 이내에서 유의성이 인정되었다. <Figure 15>에 나타낸 반응표면 그래프를 보면 시료에 대한 용매비와 추출온도가 total phenolics 함. 량에 유의하게 영향을 주는 것으로 나타났으나, 추출시간은 비교적 영향을 적게 받았다. Jo 등(30)의 일반 미강의 추출조건 최적화에 대한 총페놀 함량의 반응표면 분석 결과 시료에 대한 용매비와 추출 온도에 유의하게 영향을 받았는데, 본 실험인 흑미 미강의 경우에도 유사한 결과가 나타났다. 또한 <Table 14>를 보면 알 수 있듯이 일반 미강의 경우보다 추출함량이 높게 나타났으며, 특히 전처리. 추출공정을 환류추출 이전에 수행함으로써 추출시간을 단축시키면서 추출함량도 증가시킴을 알 수 있었다. 반응표면 분석에 따라 예측된 정상점은 최대점(Maximum point)이고, 최댓값은 176.57mg GAE/100g로 예측되었다. 이때의 추출조건은 <Table 16>에 나타낸 바와 같이 시료에 대한 용매비 17.43mL/g, 추출온도 82.13℃, 추출시간 3.78hr이었다. <Table 14> The central composite design for the optimization of leaching condition of black rice bran X3 TPC2 TFC2 (hr) (mg GAE/100g) (mg/100g). EDA2 (%). Oryzanol (mg/100g). Ferulic acid (mg/100g). α-Tocopherol (mg/100g). 251.872. 91.326. 209.838. 181.535. 8.253. 132.934. 188.402. 87.784. 187.461. 181.053. 7.871. 3. 161.440. 245.936. 92.461. 204.566. 229.420. 8.374. 5. 165.211. 160.548. 85.559. 177.162. 213.169. 7.815. 70. 3. 137.459. 249.132. 86.104. 189.079. 224.186. 9.106. 25. 70. 5. 139.118. 169.680. 82.243. 181.649. 220.223. 8.869. 25. 90. 3. 144.548. 241.370. 90.509. 175.480. 160.680. 9.165. 8. 25. 90. 5. 139.872. 188.858. 88.556. 151.813. 143.856. 8.680. 9. 20. 80. 4. 183.612. 243.653. 92.234. 220.877. 283.274. 9.106. No.1. X1 (mL/g). X2 (℃). 1. 15. 70. 3. 137.986. 2. 15. 70. 5. 3. 15. 90. 4. 15. 90. 5. 25. 6 7. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 693.

(22) 1 2. X3 TPC2 TFC2 (hr) (mg GAE/100g) (mg/100g). EDA2 (%). Oryzanol (mg/100g). Ferulic acid (mg/100g). α-Tocopherol (mg/100g). 264.201. 92.734. 220.161. 264.281. 9.571. 228.128. 91.190. 207.613. 247.891. 8.899. 138.363. 206.210. 86.376. 199.406. 218.684. 9.123. 4. 114.005. 200.731. 79.882. 206.268. 137.694. 6.214. 4. 110.535. 143.653. 78.565. 123.945. 92.413. 6.042. 80. 2. 163.552. 279.269. 90.599. 206.613. 254.593. 9.243. 80. 6. 148.318. 192.055. 86.921. 137.867. 227.712. 9.932. No.1. X1 (mL/g). X2 (℃). 10. 20. 80. 4. 170.038. 11. 10. 80. 4. 160.385. 12. 30. 80. 4. 13. 20. 60. 14. 20. 100. 15. 20. 16. 20. The number of experimental conditions by central composite design X1：Solvent to sample ratio(mL/g), X2：Extraction temperature(℃), X3：Extraction time(hr). Temperature(℃). Solvent to ratio(mL/g). Extraction time(hr) Solvent to ratio(mL/g). 694.

(23) Extraction time(hr) Temperature(℃). <Figure 15> Response surface for the effects of extraction conditions on total phenolic compounds(mg GAE/100g). 추출조건이 total flavonoids 함량에 미치는 영향 추출조건에 따른 추출물의 total flavonoid 함량을 측정한 결과는 <Table 4>에 나타내었고, 이에 대 2 한 회귀식은 <Table 15>에 나타낸 바와 같다. 회귀식의 R 값은 0.9118로 높은 상관관계를 보였고,. p＜0.01 이내에서 유의성이 인정되었다. <Figure 16>에 나타낸 반응표면 그래프를 보면 시료에 대. 한 용매비가 total flavonoid 함량에 가장 영향을 많이 주는 것으로 나타났고, 추출온도도 유의적으 로 영향을 받았다. 반응표면 분석에 따라 예측된 정상점은 최대점(Maximum point)이고, 최댓값은 291.09mg GAE/100g로 예측되었다. 이때의 추출조건은 시료에 대한 용매비 18.32mL/g, 추출온도 77.51℃, 추출시간 2.04hr이었다(<Table 16>). <Table 15> Polynomial equation calculated by RSM program for extraction of rice bran. 1 2. Responses The second order polynomial1 2 TPC Y1=-1235.852000+19.723875X1+28.445963X2+37.987125X3-0.274510X1 2 2 0.119720X2X1-0.161388X2 -0.043400X3X1+0.031100X3X2-5.222500X3 (mg GAE/100g) TFC Y2=-850.640375+3.453175X1+29.329288X2-5.392125X3-0.367580X12+ (mg/100g) 0.113015X2X1-0.204338X22+0.422350X3X1+0.062775X3X2-4.566250X32 Y3=-91.079438-1.586025X1+4.830113X2+5.109125X3-0.037010X12+0.029520X2 EDA(%) X1-0.033151X22+0.115750X3X1-0.018150X3X2-0.931000X32 oryzanol Y4=-898.536250+9.291375X1+23.225062X2+94.836875X3-0.170100X12-0.06967 (mg/100g) 5X2X1-0.138537X22+0.467250X3X1-0.265875X3X2-12.070000X32 Ferulic acid Y5=-3444.423125+59.140125X1+74.973688X2+90.210625X3-0.404900X12-0.5496 (mg/100g) 25X2X1-0.396812X22-0.101750X3X1-0.357875X3X2-8.156250X32 α-Tocopherol Y6=-45.085359+0.197116X1+1.312449X2-0.200837X3-0.003270X12-0.000485X2X 2 2 (mg/100g) 1-0.008025X2 +0.005480X3X1-0.005322X3X2+0.062393X3 2 2 2 Y=bo+b1X1+b2X2+b3X3+b11X1 +b21X2X1+b22X2 +b31X3X1+b32X3X2+b33X3 X1：Solvent to sample ratio(mL/g), X2：Extraction temperature(℃), X3：Extraction time(hr). . significance. 0.9085. 0.0160. 0.9118. 0.0145. 0.9314. 0.0072. 0.8939. 0.0240. 0.9470. 0.0035. 0.9285. 0.0081. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 695.

(24) Temperature(℃). Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Temperature(℃). <Figure 16> Response surface for the effects of extraction conditions on total flavonoids components(mg/100g). 696.

(25) 추출조건이 전자공여능에 미치는 영향 흑미 미강의 추출조건에 따른 전자공여능의 결과에 대한 회귀식은 <Table 15>에 나타내었고, <Table 16>에 나타낸 바와 같이 최댓값 94.34%로 나타났다. Nenadis 등(31)의 실험에서 에탄올을 용매로 전. 자공여능을 실험한 결과 ferulic acid의 전자공여능은 30.9%였다. <Table 14>에 나타낸 바와 같이 본 실험에서는 전자공여능이 78.56~92.73%로, Jo 등(30)의 연구에서 34.20~54.91%를 나타내었는데, 흑미 미강 추출물에서 전자공여능이 높게 나온것은 다른 페놀성 물질들뿐 아니라 색소 성분의 영향을 받 아 높은 항상화능을 보인 것으로 사료된다. 반응표면 분석 결과는 <Figure 17>에 나타낸 바와 같으 며, 흑미 미강의 전자공여능에서도 추출온도에 가장 유의적으로 영향을 받았으며 온도가 높아짐에 따라 전자공여능이 증가하다가 감소하였다. 예측된 정상점은 최대점(Maximum point)으로 <Table 16> 에 나타낸 바와 같이 추출조건은 시료에 대한 용매비 14.37mL/g, 추출온도 78.46℃, 추출시간 2.87hr 이었다. <Table 16> Predicted levels of extraction condition for the maximum responses of variables by the ridge analysis. 1. 1. 1. 1. Response. X1. X2. X3. Maximum. Morphology. TPC (mg GAE/100g). 17.43. 82.13. 3.76. 176.57. maximum. TFC (mg/100g). 18.32. 77.51. 2.04. 291.09. maximum. EDA(%). 14.37. 78.46. 2.87. 94.34. maximum. oryzanol (mg/100g). 16.39. 76.45. 3.41. 226.46. maximum. Ferulic acid (mg/100g). 17.71. 80.58. 3.62. 265.18. maximum. α-Tocopherol (mg/100g). 25.00. 79.18. 5.73. 9.71. saddle. X1：Solvent to ratio(mL/g), X2：Extraction temperature(℃), X3：Extraction time(hr). 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 697.

(26) Temperature(℃) Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Temperature(℃). <Figure 17> Response surface for the effects of extraction conditions on electron donating ability(%). 698.

(27) 추출조건이 oryzanol 함량에 미치는 영향 추출조건에 따른 미강으로부터의 γ-oryzanol 함량에 대한 회귀식을 <Table 15>에 나타내었으며, 이때 2. R 는 0.8939이었다. γ-oryzanol 함량의 반응표면 분석을 한 결과는 <Figure 18>에 나타내었다. Oryzanol 함량의 반응표면 그래프를 보면 추출온도를 고정시켰을 때 시료에 대한 용매비가 감소할수. 록 추출함량은 증가하였으며, 추출시간이 길어질수록 함량은 증가하다 감소하였다. 추출온도가 높아 질수록 함량이 증가하다가 감소하였다. Xu 등(26)의 실험에서 추출온도가 높아질수록 추출되는 oryzanol 함량이 증가한다고 하였는데, 본 실험에서도 온도가 높아질수록 추출함량이 조금씩 증가한. 결과와 유사하였으며, 추출온도가 81.83℃보다 높아질 때 추출함량이 낮아지는데 이는 끓는점 이상으 로 온도가 높아짐에 따라 추출용매의 증발과 같은 손실을 가져와 oryzanol 함량이 감소하는 것으로 사료된다. Britz 등(32)의 실험에서는 종(種)별로 분류된 6가지 현미 시료를 ethanol을 사용하여 oryzanol을 추출한 결과 japonica종은 220~383mg/100g으로 나왔다. 본 실험에는 <Table 14>에서 나타. 낸 바와 같이 123.945~220.877mg/100g으로 유사한 결과를 나타내었다. 본 실험의 결과가 Jo 등(30)의 실험보다 낮은 함량을 나타내었는데, 일반미의 미강보다 흑미 미강에 oryzanol이 더 적게 함유되어 이와 같은 결과가 나온 것으로 사료된다. 이는 추출 후 농축시 육안으로도 확인되었는데, 일반미 미 강 농축물에서는 비교적 oil 성분이 많이 보였는데 흑미 미강의 농축물에서 oil 성분이 더 적었다. <Table 16>에 나타낸 바와 같이 예측된 정상점은 최대점(saddle point) 형태였으며, 시료에 대한 용매. 비 16.39mL/g, 추출온도 76.45℃, 추출시간 3.41hr에서 최댓값 226.46mg/100g을 나타났다. <Table 17> Regression analysis for regression model of variables in extraction condition Extraction conditions. F-Ratio X1. X2. X3. TPC (mg GAE/100g). 4.06*. 13.05**. 1.44. TFC (mg/100g). 1.24. 5.74*. 9.44**. EDA(%). 4.24*. 14.58**. 3.83*. Oryzanol (mg/100g). 1.18. 7.30*. 6.22*. Ferulic acid (mg/100g). 6.03*. 23.22**. 1.20. α-Tocopherol (mg/100g). 1.29. 12.15**. 0.11. * means p＜0.05, ** means p＜0.001. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 699.

(28) Temperature(℃). Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Temperature(℃). <Figure 18> Response surface for the effects of extraction conditions on γ-oryzanol(mg/100g). 700.

(29) 추출조건이 ferulic acid 함량에 미치는 영향 Ferulic aicd 함량에 대한 R2값은 0.9470로 5%의 수준에서 유의성이 인정되었으며, 예측된 회귀식은 <Table 15>과 같으며 반응표면 분석을 한 결과는 <Figure 19>에 나타내었다. 본 실험에서는 ferulic acid 함량 결과는 <Table 14>에 나타낸 바와 같으며, Jo 등(30)의 실험과 비교했을 때 본 실험의 ferulic acid 함량이 30~143mg 정도 적었다. 또한 추출시간이 단축되었음에도 비교적 유사한 결과를. 나타낸 것은 UAE를 이용한 전처리 공정의 수행에 인한 것으로 사료된다. <Figure 19>에 나타낸 바 와 같이 Ferulic acid 함량은 추출온도가 고정되었을 때 시료에 대한 용매비가 증가할수록 함량이 감 소하였고, 추출온도는 시간과 용매비에 관계없이 온도가 높아질수록 함량이 증가하다 감소하였다. Ethanol의 끓는점인 약 80℃까지는 함량이 높아지다가 그 이상으로 온도가 높아질수록 ferulic acid. 함량이 감소하는 것을 알 수 있는데, 이 또한 oryzanol과 유사하게 온도가 높아짐에 따라 추출용매의 증발과 같은 손실을 가져와 함량이 감소하는 것으로 사료된다. Ferulic acid 함량은 시료에 대한 용매 비와 온도에 유의적으로 영향을 받는 것을 알 수 있었다(<Table 17>). 추출조건이 시료에 대한 용매 비 17.71mL/g, 추출온도 80.58℃, 추출시간 3.62hr일 때 최댓값 265.18mg/100g이었다(<Table 16>).. Time(hr). Temperature(℃). 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 701.

(30) Time(hr). Solvent to ratio(mL/g). Temperature(℃). Solvent to ratio(mL/g). <Figure 19> Response surface for the effects of extraction conditions on ferulic acid(mg/100g). 추출조건이 α-tocopherol 함량에 미치는 영향 각 추출조건에 따른 α-tocopherol의 결과에 대한 반응표면 회귀식은 <Table 15>에 나타내었으며, 반 응표면 결과는 <Figure 20>에 나타내었다. Park 등(18)의 벼 품종에 따른 tocopherol 및 tocotrienol 함 량 평가에서 α-tocopherol 함량은 2.36~10.59mg/100g으로 <Table 14>에 나타낸 바와 같이 본 실험에 서도 유사한 결과를 나타내었다. <Figure 20>에 나타낸 반응표면 그래프를 보면 시료에 대한 용매비 가 증가할수록, 추출온도가 높아질수록 함량이 증가하였으나, 추출시간은 함량에 크게 영향을 미치지 못했다. 한편 추출온도가 100℃로 높아질수록 함량이 조금씩 줄어들었는데 이는 고온에서 추출용매. 702.

(31) 의 손실에 따른 것으로 사료된다. 예측된 최적 조건은 <Table 16>에 나타낸 바와 같이 예측된 정상 점은 안장점에서 시료에 대한 용매비 25.00mL/g, 추출온도 79.18℃, 추출시간 5.72hr일 때 최댓값 9.71mg/100g으로 나타났다.. Temperature(℃) Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Solvent to ratio(mL/g). Time(hr) Temperature(℃). <Figure 20> Response surface for the effects of extraction conditions on α-tocopherol(mg/100g). 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 703.

(32) 최적 추출조건의 예측 미강의 γ-oryzanol의 최적 추출조건 설정을 위해 추출조건에 따른 기능성 성분의 contour map을 superimposing하여 최적 추출조건의 범위를 예측하였다. <Figure 21>에서 시료에 대한 용매비(X1)와. 추출온도(X2), 시료에 대한 용매비(X1)와 추출시간(X3), 추출온도(X2)와 추출시간(X3)의 조건에 따른 변화를 알아본 결과, 최적 조건은 어두운 부분에 나타낸 바와 같다. 최적 추출조건은 17.05mL/g, 78.65℃, 3.36hr이었고 <Table 18>에 나타내었다. 이들을 각 회귀식에 대입하여 구한 예측값을 <Table 19>와 같이 설정하여 실제 추출실험을 실시하여 분석한 결과, 실제 값들이 예측된 값들과 유. 사한 수준을 나타내었다. Jo 등(30)에 의하면 일반미 미강의 경우 예측된 최적 조건은 시료에 대한 용매비가 1：10, 추출온도 80℃, 추출시간 8.91hr이었는데, 본 실험에서는 추출온도는 유사한 수준이 었는데 시료에 대한 용매비는 약 10mL, 추출시간 약 6hr 차이가 있었다. 이는 UAE를 이용한 전처 리 공정으로 인해 차이가 생긴 것으로 사료되며 특히 추출시간의 단축에 영향을 많이 준 것으로 사 료된다.. <Figure 21> Superimposing contour map of optimized conditions (A) TPC, (B) TFC, (C) EDA, (D) γ-Oryzanol, (E) Ferulic acid, (F) α-tocopherol. <Table 18> The optimum condition of extraction conditions for response variables by superimposing of contour maps for black rice bran Leaching condition. Optimum range. Optimum condition. X1. Solvent to ratio(mL/g). 19.55~21.14. 20.35. X2. Extraction temperature(℃). 78.1~80.7. 79.4. X3. Extraction time(hr). 2.75~3. 2.88. 704.

(33) <Table 19> The optimum condition of extraction conditions for response variables by superimposing of contour maps for black rice bran. 1. Leaching condition1. Predicted value. Experimental value. TPC(mg GAE/100g). 170.22. 168.38. TFC(mg/100g). 276.25. 210.55. EDA(%). 93.16. 93.02. oryzanol(mg/100g). 217.81. 225.98. Ferulic acid(mg/100g). 258.94. 279.09. α-Tocopherol(mg/100g). 9.45. 8.84. Given conditions：20mL/g in solvent ratio, 80℃ in temperature and 3hr in extraction time. 4. 요. 약. 미강이란, 현미에서 백미로 도정하는 과정에서 생기는 부산물로서 현미의 껍질인 과피, 종피, 호분층 을 포함한 겨층과 쌀눈으로 구성된 가루를 말한다. 미강의 기능 성분으로 tocopherol과 tocotrienol 등 의 tocol류, γ-oryzanol 등의 지용성 성분과 ferulic acid, p-coumaric acid, benzoic acid 등의 페놀성 화합물이 함유되어 있으며, 체내 콜레스테롤 대사 조절에 도움을 주는 β-sitosterol, stigmasterol 등과 같은 식물성 스테롤도 함유되어 있다. 그 외에도 고급 지방족 alcohol인 octacosanol도 함유되어 있으 며, 흑미 미강의 경우 anthocynin의 색소 성분도 함유되어 있다. 이러한 미강의 생리활성 물질이 혈 중 콜레스테롤 저하 효과, 항암 효과, 항염증 효과, 지질산화 억제, radicals에 의한 세포 손상 보호 등의 효과뿐만 아니라 식품, 의학, 화장품에 항산화제로 사용되고 있다고 보고되었다. 본 연구에서는 흑미 미강의 기능성 성분인 총페놀 함량, 총플라보노이드 함량, 전자공여능, γ-oryzanol, ferulic acid, α-tocopherol 함량을 ethanol을 이용하여 시료에 대한 용매비, 추출온도, 추출시간을 달리하여 추출하고자 하였다. 이전 실험 및 예비 실험 결과 추출시간이 길어 추출 시간을 단축시키고자 UAE 공정을 이용하여 전처리 추출공정의 최적 추출조건을 탐색하였다. 반응표면 분석법에 의한 전처리 공정의 최적 추출조건은 추출온도 41.67℃, 추출시간 21.95min 으로 예측되었으며, 실제 측정값에서도 유사한 결과를 나타내었다. 이러한 전처리 추출공정을 수행 후 기능성 성분 추출시 시료에 대한 용매비와 추출온도, 추출시간의 영향을 알아보기 위 하여 용매비는 10~30mL/g, 추출온도 60~100℃, 추출시간 2~6hr으로 하여 각 조건에서 추출함 량을 측정하였으며 최적 추출조건을 구하기 위해 반응표면 분석을 실시하였다. 그 결과, 미강의 기능성 성분의 추출시 추출온도에 가장 영향을 많이 받았으며, 추출시간은 크게 영향을 받지. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 705.

(34) 않았다. 시료에 대한 용매비는 추출온도 다음으로 종속변수에 비교적 유의하게 영향을 주었다. 총페놀 함량의 추출조건은 시료에 대한 용매비 17.43, 추출온도 82.13℃, 추출시간 3.76hr일 때 최댓값 176.57mg GAE/100g을 나타내었고, 총플라보노이드 함량은 18.32mL/g, 77.51℃, 2.04hr 일 때 291.09mg/100g으로 최댓값을 나타내었다. 전자공여능은 14.37mL/g, 78.46℃, 2.87hr일 때 94.34%로 최댓값을 나타내었다. Ferulic acid의 추출조건은 시료에 대한 용매비 17.71mL/g, 추. 출온도 80.58℃, 추출시간 3.62hr일 때 최댓값 265.18mg/100g으로 예측되었고, γ-oryzanol은 시 료에 대한 용매비 16.39mL/g, 추출온도 76.45℃, 추출시간 3.41hr에서 최댓값 226.46mg/100g을 나타냈다. α-tocopherol은 시료에 대한 용매비 25mL/g, 추출온도 79.18℃, 추출시간 5.73hr일 때 최댓값 9.71mg/100g을 나타내었다. 흑미 미강의 기능성 성분의 최적 추출조건을 예측하기 위하 여 각 종속변수에 대한 각각의 contour map을 superimposing한 결과, 시료에 대한 용매비 20.35mL/g, 추출온도 79.4℃, 추출시간 2.88hr으로 나타났다. 이 조건에서 실험한 결과 각각 종. 속변수들의 예측값과 실제값이 유사하게 나타났다.. 참고문헌 1) Lee JW, Lee SW, Kim MK, Rhee C, Kim IH, Lee KW, “Benficial effect of the unsaponilable matter from rice bran on oxidative stress in vitro compared with tocopherol”, Journal of the Science of Food and Agriculture, 85, 2005, pp. 493-798. 2) Nam SH, Choi SP, Kang MY, Koh HJ, Kozukue N, Friedman M, “Bran extracts from pigmented rice seeds inhibit tumor promotion in lymphoblastoid B cells by phorbol ester”, Food and Chemical Toxicology, 43, 2005, pp. 741-745. 3) Nicolsi RJ, Rogers EJ, Ausman LM, Orthefer FT, “Rice bran oil and its health benefits”, Marshal WE, Wadsworth JI(eds), Rice Science and Technology, New York, Marcel Dekker, 1993, pp. 421-437. 4) Capro PA, Reaven G, Olefsky J, “Postgrandial plasma-glucose and insulin responses to different complex carbohydrate”, Diabetes, 26, 1977, pp. 1178-1183. 5) Xu Z, Hua N, Godber JS, “Antioxidant activity of tocopherols, tocotrienols, and γ-oryzanol components from rice bran against cholesterol oxidation accelerated by 2,2'-azobis(2-methylpropinamine) dihydrochloride”, J. Agric. Food Chem., 49, 2001, pp. 2077-2081. 6) Okada T, Yamaguchi N, “Antioxidant effect and pharmacology of oryzanol”, Yukagaku, 32, 1983,. 706.

(35) p. 305. 7) Ishitani A, “Oryzanol antioxidant for food”, JPN Kokai Tokko Kobo, 1980, pp. 8050-8094. 8) Ohta T, Semboku N, Kuchii A, Egashira Y, Sanada H, “Antioxidant activity of corn bran cell-wall fragments in LDL oxidation system”, J. Agric. Food Chem., 45, 1997, pp. 1644-1648. 9) Andreasen MF, Landbo AK, Christensen LP, Hansen A, Mayer AS, “Antioxidant effects of phenolic rye(Secale cereale L.) extracts, monomeric hydroxycinnamates, and ferulic acid dehydroxydimers on human low-density lipoproteins”, J. Agric. Food Chem., 49, 2001, pp. 4090-4096. 10) Ogiwara T, Satoh K, Murakami Y, Unten S, Atsu T, Sakagami H, Fujisawa S, “Radical scavenging activity and cytotoxicity of ferulic acid”, Anticancer Res., 22, 2002, pp. 2711-2717. 11) Balasubashini MS, Rukkumani R, Menon VP, “Protective effects of ferulic acid on hyperlipidemic diabetic rats”, Acta. Diabetol., 40, 2003, pp. 118-122. 12) Heinemann RJB, Xu ZM, Godber JS, Lanfer-Marquez UM, “Tocopherols, tocotrienols, and. γ-oryzanol contents in Japonica and Indica subspecies of rice(Oryza sativa L.) cultivated in Brazil”, Cereal Chemistry, 85, 2008, pp. 243-247. 13) Imsanguan P, Roaysubtawee A, Borirak R, Pongamphai S, Douglas S, Douglas PL, “Extraction of. α-tocopherol and γ-oryzanol from rice bran”, LWT -Food Science and Technology, 41, 2008, pp. 1417-1424. 14) Stoggl W, Huck C, Wongyai S, Scherz H, Bonn G, “Simultaneous determination of carotenoids, tocopherols, and γ-oryzanol in crude RBO by liquid chromatography coupled to diode array and mass spectrometric detection employing silica C30 stationary phases”, Journal of Separation Science, 28, 2005, pp. 1712-1718. 15) Ha TY, Ko SN, Lee SM, Kim HR, Chung SH, Kim SR, “Changes in nutraceutical lipid components of rice at different degrees of milling”, European Journal of Lipid Science and Technology, 108, 2006, pp. 175-181. 16) Gonzalez BLJ, Magraner HZL, Acosta GPC, “Analytical procedure for the determination of 1-octacosanol in plasma by solvent extraction and capillary gas chromatography”, Journal of Chromatography B, 682, 1996, pp. 359-363. 17) Rapport LJ, “Nutraceuticals(3)：octacosanol”, Pharmaceutical Journal, 265, 2000, pp. 170-171. 18) 박경열, 강창성, 조영철, 이용선, 이영현, 이용상, <벼 품종별 미강의 tocppherol 과 tocotrienol 함. 량 평가>, ≪한국작물학회 48(6)≫, 2003, 469-472쪽. 19) 박경열, 강창성, 조영철, 이용선, 이영현, 이용상, <도정율에 따른 미강의 tocotrienol과 tocopherol. 함량>, ≪한국작물학회 49(6)≫, 2004, 468-471쪽. 흑미 미강의 기능성 성분 추출공정 최적화. 707.

(36) 20) Kim SR, Ahn JY, Lee HY, Ha TY, <품종 및 도정도별 백미와 미강의 특성 및 페놀산 함량>, KOREAN J. FOOD SCI. TECHNOL., 36(6), 2004, pp. 930-936. 21) 이국영, 김재호, 손종록, 이종수, <흑진주벼 미강으로부터 생리기능성 물질의 탐색 및 추출조건>, ≪한국식품저장유통학회 8(3)≫, 2001, 296-301쪽. 22) 남석현, 강미영, <유색미 쌀겨추출물의 in vitro의 발암 억제 효과>, ≪한국농화학회지 40(4)≫, 1997, 307-312쪽. 23) 남석현, 강미영, <유색미 겨 추출물의 품종 간 발암 과정 억제 효과의 비교>, ≪한국농화학회지 41(1)≫, 1998, 78-83쪽. 24) Choi YG, Jeong HS, Lee JS, “Antioxidant activity of methanolic extracts from some grains consumed in Korea”, Food Chemistry, 103, 2007, pp. 130-138. 25) Renuka Devi R, Arumughan C, “Phytochemical characterization of defatted rice bran and optimization of a process for their extraction and enrichment”, Bioresource Technology, 98, 2007, pp. 3037-3043. 26) Xu Z, Godber JS, “Purification and identification of components of γ-oryzanol in rice bran oil”, J. Agric. Food Chem., 47, 1999, pp. 2724-2728. 27) Bakar MFA, Mohamed M, Rahmat M, Fry F, “Phytochemicals and antioxidant activity of different parts of bambangan(Mangifera pajang) and tarap(Atrocatpus odoratissimus)”, Food Chem., 113, 2009, pp. 479-483. 28) Hu W, Wells JH, Shin TS, Godber JS, “Comparison of isopropanol and hexane for extraction of vitamin E and oryzanols from stabilized rice bran”, J. Am. Oil Chem. Soc., 73, 1996, pp. 1653-1656. 29) Kim YS, Park SR, Lee YS, Jung H, Koh KH, Kim HS “Determination of tocopherol and tocotri enol contents in rice cooked with various cereals”, J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 34, 2005, pp. 1289-1292. 30) Jo IH, Choi YH, “Optimization of ethanol extraction of γ-oryzanol and other functional compone nts from rice bran”, Korea J. Food Preserv., 17, 2010, pp. 281-289. 31) Nenadis N, Tsimidou M, “Observations on the estimation of scavenging activity of phenolic com pounds using rapid 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) tests”, J. Am. Oil Chem. Soc., 79, 2002, pp. 1191-1195. 32) Britz SJ, Prasad PVV, Moreau RA, Allen LH, Kremer DF, Boote KJ, “Influence of growth temp erature on the amounts of tocopherols, tocotrienols, and γ-oryzanol in brown rice”, J. Agric. Foo d Chem., 55, 2007, pp. 7559-7565.. 708.

(37)