자궁경부 상피내 종양에서 언체 유두종바이러스의 검출

임상병리검사과학회지

:

제 30권 제 3호

1998.

자궁경부 상피내 종양에서 언체 유두종바이러스의 검출

아주대학교병원 해부병리과 서 기 춘

Detection of Human Papillomavirus in Cervical Intraepithelial Neoplasia.

Seo, Ki Chun

Dept. 01 Anatomical Pathology,

A.ψu

University Hospita1.

cervi덩1

carcinoma of the uterus is the rmst comrmn cancer of the

KOfl않n

woræn, but its

않rly det:f왜on ~th띠

is not

JX뼈ùarized

yet. Recent rep::>rts

in이caκrl

human

papilloma찌rus(HPV)

as one of the

m퍼or

factors to

t뾰 devel따ænt

of the ærvical canær.

1bis study is

perfom빼

to find out whether the epithelia of the uterine ærvix were

i파ectfrl

by HPV or not by using an in situ K:R

~thod.

None of the chronic

nonsκ~ific i며larrnnation(CNI)

case was {X)Sitive for HPV, but 23.3%

cases of

ærvi떠1

intraepithelial neoplasia(CIN) grade 1 were JX)sitive by immunohistochemi-

S따.

But the JX)sitive rates by in situ PCR were different: 76.29-6 in CNI cases and fJj.7%

in CIN grade 1 cases. The JX)sitive cases of

mαe

than one HPV subty}æs(rl1Ìxed subtypes

JX)sitive cases) which

inc1ucX최

a high risk group was 40 armng the tota1 51 cases(OOO/O) by in situ PCR

~thod.

1bis finding suggest that HPV JX)sitive cases have a JX)ssibility to

m맹ress

to an

얹rly 떠nc앉.

1be rmst significant finding in this study was that CNI

ca뚱S

showed a high JX)sitive rate for HPV by in situ PCR

~thod.

1bis JX)sitive finding was usually detectfrl in the koilocytes of

ærvi떠1

epithelium, although in 4 cases non-koilocytes were also JX)sitive.

1bis study suggests that the DNA

않st

for HPV should be carried for the early

de~tion

of the high-risk group of HPV infection. And these patients

빠처

follow-up study

andfl멸ular exænina디on:

and

the않

efforts would contribute to the reduction of the ærvical canærs.

Key Words : Uterine cervix. HPV. Immunohistochemistry. In situ-PCR

-238 -

1. 서

^료등

‘-

한국 여성에서 발생하는 암(떠nær) 중에서 빈 도 1 위를 차지하는 것은 자궁경부암(uterine

cervix

canær) 이다. 1%년(1%.

1 - 1%. 12)

보건복지부 한국인 암등록 분석보고서에 의하면 등록된 자궁경부암이 6，W6명으로 전체 ?i3，7껴건 의 여성암 발생의 21. 1%를 차지하고 있다1) 이는 선진국에 비하여 월등히 높은 수준이다.

자궁경부암의 원인에 관한 역학적， 실험적 연구 에 의하면 성관계 특히 낮은 연령부터 시작된 성 접촉， 여러명과의 성접촉， 저112형 단순포진 바이러 스(he~s

simplex type II)

및 인체 유두종바이 러스(Human

papilloma virus ; HPV)

등이 자궁 경부암의 발생에 원인이 된다는 많은 보고들이 있다8，14，18，19.때1.21.Z3.l3) 그 중에서도 자궁경부암은 성 접촉성 감염증(않X뻐lly transmitt어

disease

STD)과 관련성이 높은 것으로 알려져 있다~) 성접촉성 감염증중에 자궁경부암의 원인 인자로 서 인체 유두종바이러스가 자궁경부암 발생에서 중요한 요인으로 주목되면서 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다~1l

인체 유두종바이러스와 자궁경부암과의 관련성 에 대하여 관심을 갖게 된 동기는 1ffi3년에

Dürst

등이 자궁경부암 조직에서 매'v

type 8, 9, 10,

11의 DNA를 검출함으로서 시작되었다~)

자궁경부암의 원인으로 알려진 인체 유두종바 이러스는 1잃4년 Serra에 의해 분류되어진 이래，

1æ8년에는

Ogilvie

와 Dunn이 전자현미경으로 상피세포의 핵안에서

viral

며rticles의 존재를 확 인하였다. 최근에는 DNA의 상동관계 (Homology) 연구를 통하여 약 70여종 이상의 아형 (sub ~) 이 발견되었으며 15) 이 중 약 20여종의 아형이 자 궁경부암 등에서 발현되고æ) 자궁경부암의 전구 병소(precancerous lesion) 에서 높은 빈도로 출현 하는 것이 밝혀져 인체 유두종바이러스가 암 발 생에 관여한다는 사실이 명확해지고 있다. 여러 가지 임상연구 및 분자생물학적 연구에 근거하여 볼 때 인체 유두종바이러스는 성적인 접촉으로

감염， 전파되는 인자(agent)로서 자궁경부암 발생 에 관여하는 가장 중요한 요인으로 인정되고 있

다31.32)

생식기계에서 주로 발견되는 인체 유두종바이 러스는 그 병변의 특이성에 따라 자궁경부 상피 내 종양(

ærvical intraepithelial neoplasia ; CIN )

및 자궁경부암(

uterine ærvix canær

)에 주로 연관되어 검출되는 고위험군

(high risk group )

과 주로 여성생식기의 양성병변(

begnign lesion)

인 첨규형 콘딜로매 condylo때

acuminata

)에서 검출되는 저위험군(low

risk

group)으로 분류하고 있다.

암 발생 빈도가 높은 고위험군에는

HPV-16,

18, :I>, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, æ^{, fß,}

^{돼， 66이}

있으며， 암 발생 빈도가 낮은 저위험군에는

HPV -6, 11, 40, 42^,43, 44,

57이 있다13.낌.32.l).37.~) 실제로 인체 유두종바이러스와 연관된 암 발생 은 암의 전구병소(precanærous lesion)에서 암으 로 진행되는 잠재력 (p뼈ressive rnten디al)은 주 로 감염된 인체 유두종바이러스의 유형에 의하여 결정된다.

역학 연구조사 결과에 의하면 자궁경부 조직이 암 발생 빈도가 높은 고위험군인 인체 유두종바

이러스

type 16

및 18에 감염된 경우가 암 발생

빈도가 낮은 저위험군인 인체 유두종바이러스

type 6

및 11 에 감염된 경우보다 자궁경부 상피

내 종양 및 자궁경부암으로 발전할 가능성이 높 은 것으로 보고되었다~.34) 인체 유두종바이러스가 자궁경부암의 원인일 것이라는 가능성을 갖게 해 주는 것은 자궁경부 상피내종양 및 자궁경부암에 서 인체 유두종바이러스

16

형과 18형 같은 고위 험군의 인체 유두종바이러스가 주로 검출된다는 것이다7.16，찌.

최근 분자병리학의 발달과 함께

Southem

bl야，

In situ hybridization(ISH), Polyrærase chain

rea띠on(I{:R) 및

In situ-PCR

등이 바이러스 검

출에 이용되고 있는데， 이 중

Southem

비α 과

PCR은 조직에서 핵산을 추출하여 실험에 이용하

기 때문에 인공적인 변화가 일어날 수 있고 종양

세포에 비특이적인 염증세포들이 포함될 가능성 이 있다. 그러나 probe를 이용한

In situ hybrid-

없다on이나 pruær를 이용한 PCR은 염색체나 세 포 그리고 조직의 DNA나 RNA의 염기서열 (sequenæ)을 검출하는 방법이다~，l1.l7) 특히 이들 의 임상적 응용은 감염성 질환 중에서도 바이러 스의 진단에 이용되고 있다. 최근에는 검출감도 가 높은

PCR

법과 세포에서 유전자 해석을 할 수 있는

In situ hybridization

법을 조합한

m

situ PCR

법을 이용하여 세포나 조직의 형태학적

구조가 잘 보존된 상태에서 바이러스 감염을 확 인할 수 있어 유용한 검출방법으로 활용할 수가 있다.

따라서 본 연구는 자궁경부의 조직검사상 만성 염증과 상피내종양으로 확인된 51 개의 시료를 대 상으로 인체 유두종바이러스의 감염 유무를 확인 할 수 있는 면역조직화학적 염색(Irrnnunohistoc­

hemi떼

stain)

과

In situ

PCR을 시행하여 인체 유두종바이러스의 각 유형을 관찰하고 두 방법간 의 검출 정도를 비교하므로서 인체 유두종바이러 스의 고위험군에 노출된 시료를 조기발견하고 또 한 고위험군에 높은 발현도를 나타내는 방법을 확인하므로서 자궁경부암을 예방하는데 도움을 주고져 한다.

11 •

재료및 방법

1.

연구재료

1ffi4년 6월 1 일부터 1937년 8월 31 일까지 아주 대학교병원에서 자궁경부상피의 생체검사 조직이

Hematoxylin & ^Eosin (H & E)

염 색상에서 만성 염증 (απonic

nonsp:x::ific

i따1따nma디on

;

CND과 자궁경 부상피 내 종양 등급

I( Cervical intraepithe- lial

n∞plasia

grade 1 ; CIN grade

1)으로 진단된

예 중에서

10%

포르말린 고정액으로 처리된 파 라핀 블록중 보존상태가 양호한 51 예를 가지고 인체 유두종바이러스에 대한 면역조직화학적 염 색과

In situ

κR 법을 시행하였다.

이 중 CNI는 21 예이며

CIN grade

1으로 진단 된 것은 30예였다.

2.

연구방법

1)

면역조직화학적 염색

(Immunohistochemical stain)

10%

중성 포르말린에 고정하여 파라핀에 포매 된 조직 블록을 3μm로 절편을 만들어 슬라이드에 부착하였다. 5~rC oven에 1시간 동안 방치한 후 xylene으로 파라핀을 제거하였다 100%

ethanol

에 2분씩 3번， 앉5% ethanol에 2분씩 2번 거 친 후 에 증류수로 세척하였다.

O.OlM

s여iwn

citrate buffer(pH

6.0)에 넣어 microwave(Shandon)로

5

분간 처리하였다. 식힌 후 에 증류수로 세척하고

3%

I-破를 첨가한 ~단lanol어1 10분간 실온에서 처 리 하였다.

Tris buffered saline(pH 7.6. Tris base 1.4g, Tris Hcl 6.0g, NaCl

8.7g)으로 세척한 후에 Labell어 stn야뼈vidine

biotineU.5AB, DaKO)

피t에 들어 있는

blocking

reagent로 10분간

처리하였다. 인체 유두종바이러스에 대한 일차 항 체 (Papillomavirus

JX)lychlonal

antibc성y

Noboca-

stra)로 처리한 후에 습윤상자를 이용하여 4

⁰

C 에 서 18시간 동안 방치하였다.

TBS buffer(pH 7.6)

로 충분히 씻어낸 후 이차 항체인 link용액 (DaKO)으로 æ분간 처리하였다.

TBS buffer(pH

7.6)로 세척 한 후에

streptoavidine

I=eroxidase로 æ분간 처리하였다. 다시

TBS buffer(pH

7.6) 로 10분간 세척한 후에 발색은

AEC(3-amino-9-

ethylca뼈zole) subs없te-chrorr맹en을 사용했고，

대조염색으로 뼈yer

hernatoxylin

염색을 시행하 였다. 증류수로 세척한 후에

Univesal

rmunt로 봉입한 후 검색하였다.

2)

조직내 중합효소 연쇄반응(In

situ Aolymerase O1ain

Reactiα1)

파라핀에 포매된 조직 블록올 3μm로 절편을 만 들어 슬라이드에 부착하였다. 5:~rC oven에 1 시 간 동안 방치한 후 xylene에서 파라핀을 제거하

-240 -

였다.

1000/0

ethanol에 2분씩 3번，9)% eth뻐01에 서 2분씩 2번 거친 후에 머rdry시켰다.

Proteinase

K(a)μglm~; Bc양1fÎnger 뻐nnhe뼈 용액으로 '5rc 에서 10분간 처리하고 증류수로 세 척한 후에

9)%

ethanol과

100%

ethanol로 각각 처리하고 머rdry 시켰다. 처리가 끝난

slide

표 본에

In situ

R::R용

slide

sea1(T:라얼Ra

ox:le No.

~-OO:B)올 붙인 후

In situ

Th앉ma1

Cyc1ers (M J

Research)어l 슬라이드를 장착하였다.

82⁰C

에서 7분간 처리하고， 55

⁰

C 에서 조제된 ~R 반웅 액을 슬라이드 위에 얹었다.R::R 반응액은 다음 과 같이 조제하였다.

(Tag IX>lyrærase

0.8，μ~.

10 x R::R buffer

2.5μ~，

2.5mM dNTPs

4μ~，

1mM DIG-11-dUfP

1μ~， 2OpIID1/.μe 따JVpF 1μ~，

2OpIID1/.μ~

HPVpR

1μ~，

DW up to

2J뼈) 사용된 인체 유두종바이러스의 유형은 田JV

6,

11, 16, 18, 31

및

33

이었다. Prirær의 염기서열 은 다음과 같으며 Bioneer에서 주문 제작하였다.

HPV 6 <F5’-AAaXffifAACCGAAATCXXiT-3'’

R5’-1GfCACAAACXlrIG-3’), HPV 11 (F

5’ -j뾰nrGTAACCGAAA1αIT-3’，

R5’-1GfCACAACrCGI’IGfGIGA-3’), HPV 16

<F 5’-AAaXffifA와rGAMTCXXiT-3’，

R5’김~TA-3’)，

.HPV 18 (F 5'’-AAaXffifAACCGAAATCXXiT-3’,

R5'’견IGI1’ ìπ CA(따:;r π ’m좌rcrr:;ACA-3'’')，

,

f班iPV 3 퍼:1

<F

5' 당당’(κ‘-감-

그리고

R5'’{좌VL1GIUffifAATπ "It:LlπC-3' 윈

’7 ⁾

HPV 33 (F

5’-AAaXffifAACCGAAA1αIT-3’，

R5’강TCTCCAA1αrn:rr:ACA-3').

시약이 마르지 않도록하기 위해서

In situ R::R

용

slide sea1

∞Iver film으로 밀폐하여 없℃에서 3분 처리 후 55

⁰

C 에서 2분， g.rc 에서 1분씩

14

cycles올 돌려 증폭시켰다.

In situ

R::R용

slide

￡머을 떼어낸 후

Tris Buffered Saline(pH

7.6)으 로 세척하였다Ar띠-Digo:업g없m-.뾰(B:냥ninga-

h뀐mh많n)로 3TC 에서 $분간 반웅시켰다.

TBS(pH

7.6)로 세척하고

5’-bvonno-4-chlovo-3- indolyl-phosphate/nitnJblue

tetI강olium

(BCIP/

NBT ; Scy Tek)

발색제로 발색시킨 후에 증류 수로 세척하였다. 대조염색으로

l\t1ayer hematox-

ylin을 사용했으며 세척 후에 unive:뼈 IIDunt로 봉입하였다.

川. 걸 과

사용한 검체의 대상은 세포검사(Pap. srrear)에 서 Atypi ^，떠 l 찍뻐IIDUS

ælls

undeterrnir빼

signi-

n떠nce(ASCUS) 또는 Iρw

grade squannous int-

fa(행thelial lesion(LSIL)으로 진단된 환자의 자궁 경부 상피내세포(Fig. 1)이다. 통상적인 조직검사 의 Hematoxyline

& Eosin(H & E)

염 색에서 만성 염증(ChnJnic nonspecific 따1mπm디on

CND (Fig. 3A,

3C)으로 진단된 21 예와 자궁경부 상피 내종양 등급

1

(않vi떠1 intr，뼈thelial n∞plasia 밍-ade

1 ; CIN grade 1 ) (Fig.

4A)으로 진단된 30예를 합한 51 예를 대상으로 실험을 수행하였다.

면역조직화학켜 염색에서 인체 유두종바이러스 에 대한 양성반응은 핵이 적갈색의 과립상으로 염색되었다(Fig.

4B, 4D).

인체 유두종바이러스에 대한 양성세포들은 주로 자궁경부상피의 표층 및 중간층에서 관찰되었으며 심층부에서는 관찰되지

Table 1.

Immunorea다ivity tìα

human

맺다110-

Inavirus in CNI and CIN grade 1.

CNI CIN, grade 1

Number of case 21 2D

fb밍디ve

number 0 7 (23.3)

*

(은

%

Table 2. In situ R::R for human papillomavi- n1S in CNI and CIN grade 1.

C:NI CIN. grade 1

Number of

떠se

21 2D

F>osi디ve

number 16 (76.2) 17 (ffi.7)

*

(는

%

Table 3. Number of HPV DNA IX>sitive lesion

associa때

with HPV

subty야s

in CNI and CIN gracle 1.

Total HPV6 HPV11 HPV16 HPV18 HPV31 HPV33

CNI 21 3 7 6 1 11 11

CIN, grade 1 30 1 4 7 10 11 10

Table 4. Correlation

때th

IX>sitive HPV subtype in CNI

Total

한종류만

11/33 11/31 16/31 31/33 11/16 16/31 6/11/ 6/11 11/16/18 /31 /33 16/33 /31/33 /31/33

21 4 1 1 2 2 1 2

% 19 5 5 5 10 5 10 5 10 5

Table 5.

Correla디on 때th φsitive

HPV subtype in CIN grade 1 Total

한종류만

18/33 31/33 18/31

30 7 1 1 2

% 23 3 3 6

않았다. 이러한 양성반응 세포들은 대체로 비정형 스푼세포(atypi뎌1 koilocyte) 에서 관찰되었다. 면 역조직화학적 염색상에서

CNI

병변에서는 양성반 응이 전혀 관찰되지 않았으며，

CIN grade

1에서 는 23.3%의 양성률올 나타내었다(Table.

1).

In situ

PCR은 검출감도가 높은

PCR

법과 세 포에서 유전자 해석을 할 수 있는

In situ Hybridization

법을 조합한 방법 이다 In

situ

K:R을 사용하면

1

copy의 유전자배열을 갖는 세 포에서도 세포속에 존재하는 바이러스나 세포내 에 미량의 유전자발현 등을 확인할 수 있다.

In situ

PCR에서는 인체 유두종바이러스

DNA

검색에 대한 양성반웅은 모두 핵이 흑갈색으로 진하게 염색되거나 과립상을 보였으며 핵 주변부 나 세포질에서는 관찰되지 않았다(Fig.

4C, 4E).

양성반응은 면역조직화학적 염색에서와는 달리 심층부에서도 간혹 관찰되었다.

In situ

PCR상 에서는

CNI

병변에서의 인체유두종바이러스의 양 성률은 76.ZO/o였고

CIN grade

1에서는 ff3.7%로 관찰되었다(Table.

2).

한편 많은 연구자들 13，낀짧，38) 에 의하면 인체 유두종바이러스의 아형

11/31/33 16/18/31/ 11/16 11/16/18 33 /31/33 /31/33

1 3 1

3 10 3 3

(sub-ψ~)들 중에서 암 발생빈도가 높은 고위 험 군으로는

16, 18, 3), 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, ff3, æ^{, 59, ffi}

이며， 암 발생빈도가 낮은 저위험 군으로는

6, 11, 40, 42, 43, 44, 57

이 라고 보고하 였다.

본 연구에서

in situ

PCR을 위한 prirrer로 사 용한 인체 유두종바이러스의 sub-type으로 고위 험군에서

16, 18, 31,

33형올 사용하였고， 저위험 군에서는 6과 11 형을 사용하였다.

In situ

PCR에 의한 실험결과(Table 3) 에서 사 용한 모든

prirær

들에 대하여

CNI

와

CIN

gradeI

예에서 모두 sub-띤야들이 검출되었다.

특히

CNI

예에서는 저위험군인 11 형과 고위험군 인

31

및 33형이 높게 관찰되었고，

CIN grade 1

예에서는 저위험군인 6과 11 형은 낮게 관찰된 반 면 고위험군인

18, 31, 33

형이 높게 관찰되었다.

또한 하나의 시료에서 인체 유두종바이러스의 여러 sub-ψ야들이

in situ K:R

에서 동시에 관 찰이 되고 있다(Table

4).

이중에

CNI

예에서는 저위험군인 6과 11 형이 동시에 관찰된 경우는 없 었고 반면， 저위험군인 11 과 고위험군인 31 과

33

- 242-

훌

^•

웰」

’‘ ,

·훌훌

,.

.. ..

‘· ~

‘*‘혈.'"

‘’

-

-

‘’

1ι

•

.. ...

..

--

-‘ • ’

i’

빼

--

* w.

·‘ ^..

.. ^'

*

(B)

Fig 1.

Aty다떠1

SQuarmus ælls of tmdetennined significanæ (A)

ar떠 koiloc뾰s

(B) in

Pa행ni∞J­

aou

srm표 많p.

x ax>

‘ (A)

(B)

Fig 2. Norrna1

따-vi떼

SQuarmus epithelium

때단1

HPV

앉pression

in superficia1 æll layer. (A H&E. x :ID. B ; In situ PCR. x :ID)

(A)

었다. 반면 어느 한가지

sub-tyre

형만이 존재하 는 경우도 4개의 예에서 관찰되었다.

한편

CIN grade 1

의 예 (Table 5)에서는 저위 험군은 존재하지 않는 반면 고위험군인

16118131/

33형이 동시에 존재하는 경우가 3개의 예에서 관 찰되었다. 또한

11/31/33, 11/16131/33

및

11/161

18/3ν33/형이 동시에 존재하는 경우는 각각 1개 형이 동시에 존재하는 경우는 각각 1개씩의 예에

서 관찰되었다. 또한 저위험군과 고위험군들이 동 시에 여러 sub-~ 들이 존재하는 경우는 611ν16/33형과 6111131/앓형으로 각각 1 개의 예 에서 관찰되었다. 더구나 고위험군들의 여러

sub-type

들이 동시에 존재하는 경우는 1ν16/31

및 11/16/18/31/33형으로서 2개의 예에서 관찰되

I . . . - : .‘ - -、a‘IIIIIIIIIII""~’-“'!. ~ ___ ^{4111ι1“。}... ‘ⁱ“ ‘... ^{‘、 ι •}

뜸=간 l

(A)

?활 쫓햄

영홉r 、·

(C)

(B)

(D)

Fig 3.

αmmic nonsκrific i따l없nmation wi삼1

squarmus rretaplasia

sho때ng

HPV

앉pression.

(A, C ; H&E. x

~.

B. D ; In situ PCR x

~)

씩의 예에서 관찰되었으며， 한종류의 sub-ψR 만 존재하는 경우가 7예에서 관찰되었고， 2가지 형의 sub-type이 동시에 존재하는 경우는

1&'33, 31/33

형으로 각각 1예， 18131형이 2예에서 관찰 되었다.

CIN grade

1으로 판독된 예에서 면역조직화학

적 염색에서도 양성반응이면서

in situ

PCR에서 양성반웅올 보인 경우는 6예이며， 면역조직화학적 염색에서 음성이면서

in situ

PCR이 양성인 경우

는 12예였다.

또한 면역조직화학적 염색에서 양성이면서

m

빼 PCR이 음성인 경우도 1 개의 예가 있었다.

이것은 prirær로 사용한 6종류 sub-ψ야 이외의 것으로사료된다.

N. 고 찰

-244 -

(A) (B) ^(C)

(D) ^(E)

Fig 4.

않vi떠1

intraepithelial neoplasia grade 1 with HPV

e짜Jression.

(A ; H&E, X ax>, D;

Immunohistochemistry, X 400, B, C, E ; In situ PCR X 2C())

면역조직화학적 염색에서 인체 유두종바이러스 에 대한 양성반응은 핵이 적갈색으로 염색되었고，

In situ

PCR상에서 인체유두종바이러스 DNA에

대한 양성반웅은 핵이 흑갈색으로 진하게 염색되 거나 과립상을 보였으며 핵 주변부나 세포질에서 는 관찰되지 않았다.

In situ

PCR에 의한 인체 유두종바이러스 DNA에 대한 양성반응이 면역조 직화학적 염색에서 보다 더 많이 나타난 것은 세 포당 바이러스의 수가 적어도 증폭해서 검출할

수 있다는 장점을 가지고 있기 때문이다.

본 연구에서

drronic

nonspecfic 따lamrr빼on

(CND으로 판독된 것과

cevical intraepithelial

neo이a의a

(CIN) grade

1으로 판독된 것을 대상으

로 면역조직화학적 염색상에서 CNI에서는 모두

음성인 반면에

CIN grade

1에서는 23.3%가 양성

으로 발현되었다. 이는 국내의 연구결과인

21.7<>/0

와 비슷한 수치이며 12) 만족할 만한 결과로 생각

되었다. 반면에

In situ

PCR상에서

CIN grade 1

의 양성률은 fX)%였고 CNI에서는 76%로 높게 나타났는데， 이러한 결과는 기존의 조직검사 결과 에 의한 진단에 있어서 객관적이기보다는 주관적 인 관점이 개입되지 않았나 하는 생각을 갖게 되 었다. 즉 상피내세포 종양과 인체 유두종바이러스 감염에 대한 진단의 기준이 진단병리학 의사간에 일치하지 않은 것도 그 원인이 될 수 있으며 진 단의 기준이 과거에 비해 달라진 점에도 그 원인 이 있다고 하겠다.

연구결과에서 저위험군과 고위험군이 대체로 혼합해서 양성반응이 나타나거나 여러형이 같이 섞여서 나오는 것으로 보아 인체 유두종바이러스 를 검출하기 위해서는 최소한 몇가지를 동시에 검사를 수행하는 것이 한가지나 두가지의 형만을 검사하는 것보다 더 의미가 있다고 생각되었다.

자궁경부암의 원인균으로 알려진 인체 유두종 바이러스는 성접촉에 의해서 감염된다는 사실을 이미 밝혔듯이 하나의 시료에서 여러형의 인체 유두종바이러스가 동시에 각각 검색되는 것은 환 자나 환자와 성접촉을 한 배우자의 성 생활 방식 에 문제가 있는 것이 아닌가 하는 생각도 갖게 되었다.

있다. 그러나 본 연구에 의하면 반드시 스푼형세 포(koiloc뾰)에서만 인체 유두종바이러스가 검출 되는 것만은 아니다. CNI로 진단된 것 중 전혀 인체 유두종바이러스 감염의 변화가 없는(Fig.

2)

4개의 예에서도

In situ PCR

법에서 양성반응이 나타났다. 이는 기존의 사고방식과는 대치되는 것 으로 향후 자궁경부암 검사시 반드시 인체 유두 종바이러스 DNA에 대한 검사가 이루어져야함을 보여주고 있다. 조직검사에 스푼형세포화(koiloc­

ytosis)가 확실한 상피내에서는 인체 유두종바이 러스 DNA의 증식 뿐만 아니라 바이러스 단백질 의 발현이 있기 때문에 이러한 세포에는 조직학 적인 검색과 면역조직화학적인 검색，

In situ hybridization

및

In situ PCR

등을 이용하여 감 염 여부를 확인할 수 있을 뿐더러 세포의 형태도 관찰할 수 있다는데 그 장점이 었다. 암으로의 진 행은 다단계과정 (m뻐S뼈 process)를 거칠것이 나 인체 유두종바이러스에 의한 각질세포(kera디­

nocyte) 의

DNA

변성이 세포의 변형과 악성화를 일으키는 첫 시작인 것으로 보고되고 있다~) 실 제 인체 유두종바이러스와 연관된 암의 경우를 볼 때， 암의 전구병변(precursor lesion)에서 암으 인체 유두종바이러스는 감염시 편평상피의 기 로 진행되는 잠재력은 주로 감염된 인체 유두종 저세포를 침범하여 잠복상태로 있으면서 인체 유 바이러스의 형에 의해서 결정된다고 보고하였다

두종바이러스 DNA는 땅so~ 상태로 세포에 존 떼.

재하게 된다째 인체 유두종바이러스의 잠복감 한편，

In situ

PCR같은 방법으로 극소량의 인 염은 특징적인 세포병리학적 변화를 동반하지 않 체 유두종바이러스 DNA를 검출하는 것이 의미 기 때문에 조직학적으로 검색하기가 힘들다. 세 있는 일인가에 대하여서는 논란이 있을 수 있다.

포내에서 바이러스의

DNA

복제활동이 활발해지 잠복감염 Oatent infection} 의 경우 인체 유두종바 면서 감염된 세포들은 성숙해지고 표층으로 이동 이러스 DNA의 복제가 미약하여 매우 적은 양의 하면서 스푼형세포(koilocyte)가 표층부에 출현하 인체 유두종바이러스 DNA의

copy

수를 지니고

게 된다. 있으며3)) 자궁경부 상피내종양 또는 암에서도 아

스푼형세포화(koilocytosis)는 편평상피의 표층 주 적은 양의 인체 유두종바이러스 DNA의 ∞py 세포에 나타나는 것으로 핵 주위가 밝게 탈락된 수를 지닐 수 있다. 그러므로 암을 일으키는데 이 것처럼 공동(vacuole) 이 형성되고 핵의 농축 등이 렇게 아주 적은 양의 인체 유두종바이러스

DNA

보이는 형태학적인 현상으로(Fig.

1 B)

일반적으 의

copy

수라 하더라도 중요한 역할을 하기 때문 로 인체 유두종바이러스 감염의 특징적인 변화로 에:!B)

In situ

PCR로 극소량의 인체 유두종바이러 생각된다. 세포나 조직검사에서 인체 유두종바이 스 DNA를 검출하는 것은 의미가 있다. 본 연구 러스 감염의 지표로서 이러한 특징들이 이용되고 에서도 CNI인 경우 면역조직화학적 염색에서는

- 246-

양성반응을 보인 것이 하나도 없었지만

In situ human immunocleficiency virus typ:! 1 K:R

법 에서는 76.2%라는 아주 높은 양성 반응을

provirus in

rmnonucl않r

ælls by in situ

나타내었다{X)lyrrerase

chain

re<뼈on

N

과19l.

J Med

인체 유두종바이러스는

in

vitro와

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vivo에서 3aJ:1표-1391，

1002

감염된 숙주의 편평상피세포를 암세포화 시킨다는

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Ale때nder

ER

것은 이미 잘 알려진 ^~실이래6，10，짧짧æ，뼈 특 히 고위험군의 인체 유두종바이러스 형들이 사람 성기의 각질세포를 변성 시킬 수 있다잉

본 연구에서 CNI나

CIN grade

1을 대상으로 인체 유두종바이러스를 검출함에 있어서 면역조 직화학적 염색보다

In situ

K:R에서 높은 양성률 을 보였고 인체 유두종바이러스 감염의 형태학적 변화가 없는 정상상피 핵에서도 발현되었다는 것 은 진단법으로

In situ

K:R이 매우 유용한 방법 이 될 수 있다는 것을 의미한다. 또한 CNI로 판 독된 대상에서도 인체 유두종바이러스가 높게 검 출되었다는 것은 본 연구의 중요한 의미로 생각 된다. 향후 CNI나

CIN grade

1으로 의심되는 경 우

In situ

K:R로 인체 유두종바이러스

DNA

검 사를 반드시 시행하여야 하며 연구결과에서와 같 이 최소한 4종류 이상의 sub-ψ￠을 대상으로 검 사를 실시하여야 할 것으로 사료된다. 이 검사에 서 양성으로 발현되면 자궁경부상피내 종양의 등 급에 따라 추적과 관찰 및 치료를 결정하는 지침 에 따라 환자를 진료함으로서 자궁경부암의 위험 군을 구분하여 암으로의 진행을 사전에 예방하고，

불필요한 과다 치료를 방지함으로서 궁극적으로 환자에게 양질의 서비스를 제공하고 경제적 발전 을 도모할 수 있을 것으로 사료된다.

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