총대장균의 경우 토양 미생물에 의한 영향이 크므로 주위 토양에 의한 교란이 큰 계곡수의 경우 수치가 높을 가능성이 큼.
총대장균군 = 분원성대장균군 + 자연서식세균(자연환경에서 검출) 분원성대장균군 = 대장균 + 열저항성세균(자연환경에서 검출)
대장균 = 사람이나 동물의 장에 서식하고 있는 장내세균 종으로 분변성 오염의 지표
총대장균군
대장균 자연서식세균 분원성대장균군
특징은 총대장균군과 동일
방법은 총대장균군과 달리 평판집락법은 사용하지 않음
※ 측정대행업체, 보건환경연구원 등 대다수는 막여과법 사용
나. 분석준비
방법 및 시료 보관 1)
구 분 내 용
방 법
시 료 보 관
막여과법
막여과법은 액체 내 존재하는 미생물을 여과막으로 거른 후 이를 배양하여 미생물의 존재 유무 및 개체수를 측정하는 생균 측정법(viable count)으로, 0| 시험방법은 수계에 존재하는 총대장균군과 분원성대장균군을 분석하는 시험방법의 제1법에 해당
시료용기 : P(polyethylene), G(glass)에 저온(10 ℃ 이하) 보관 최대보존기간(권장보존기간) : 24시간
필요시약
가) 배지 (고체배지, 액체배지, 시판 중인 제품 중 택1) (1) 막여과법 고체배지
(가) 정제수 1L에 배지를 표 1의 조성대로 넣고 가열하여 녹인 후, 수산화나트륨(0.2 M)에 용해된 1 % 로졸린산 (rosolic acid)용액 10 mL를 첨가한 다음, pH를 (7.4 ± 0.2)로 맞춘다.
(나) 고체배지(m-FC agar)는 2주간, 액체배지(m-FC)는 96시간까지 보관할 수 있다.
2)
조 성 성 분
트립토오스(tryptose)
프로테우스 펩톤 또는 폴리펩톤(proteose peptone or polypeptone) 효모추출물(yeast extract)
염화나트륨(sodium chloride, NaCl, 분자량: 58.50) 락토오스(lactose, C12H22O11, 분자량 : 342.30) 담즙염(bile salts or bile salts mixture)
아닐린 블루(aniline blue, C32H25N3O9S3Na2, 분자량: 843.00) 한천(agar, (C12H18O9)n (액체배지에서는 첨가하지 않음)
10.0 g 5.0 g 3.0 g 5.0 g 12.5 g 1.5 g 0.1 g 15.0 g [막여과법 고체배지(m-FC agar) 또는 막여과법 액체배지(m-FC) 조성]
시료 종류별 예상 시료량 선정
공단 계곡수의 경우, 수질오염공정시험법 시료 분류에 명시되어 있지 않다. 따라서 명시된 항목 중에서 상수원수가 공단의 계곡수와 가장 유사하기 때문에 아래 표의 상수원수 기준으로 시료를 여과한다. 그러나 시료가 오염이 심하여 대장균 군락수가 상당히 많이 나올 것으로 예상되면 실험자 판단 하에 하천수 등의 기준으로 여과 시료량을 줄여서 실험을 진행한다.
3)
[시료의 종류에 따른 여과 예상 시료량]
여과해야할 예상 시료량(mL)
○ ○
○ ○ ○
○ ○ ○
○ ○ ○
○ ○
○ ○
○
○ 시료의 종류
호소, 저수지수 상수원수 위락용수 하수처리장 방류수
하천수 생활하수 축산폐수
100 50 10 1 0.1 0.01 0.001
인산완충희석액
(1) 인산이수소칼륨(monopotassium phosphate, KH2PO4, 분자량: 136.09) 34 g을 500 mL의 정제수에 녹인 후 수산화나트륨용액(0.5 M)으로 실온에서 pH (7.2 ± 0.2)를 확인한 다음 후 정제수를 넣어 1 L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 함.
(2) 보존용 원액 1.25 mL 와 염화마그네슘·6수화물(magnesium chloride, MgCI2·6H2O, 분자량 : 203.30) 81.1 g을 정제수 1 L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0 mL를 넣은 다음 정제수로 1 L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하여 사용 펩톤희석액
정제수에 10 % 펩톤(peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1 %가 되도록 희석하고, 실온에서 pH (6.8 土 0.2)를 확인한 다음 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하여 사용
나)
다)
(2) 시판 중인 액체 배지(m-FC with Rosolic Acid, plastic Ampules)
(가) 시판 중인 m-FC with Rosolic Acid 액체배지(2 mL 플라스틱 엠플에 개별 포장된 제품)를 사용한다.
(나) 액상배지는 상대적으로 유통기한이 짧기 때문에 월간 시험물량 등을 고려하여 구입하는 것이 좋으며, 제조일로부터 시간이 경과될수록 배지의 신선도가 떨어져 대장균의 금속성 광택의 발현이 잘 안되는 경향이 있다.
(다) 일반세균이 폭증하는 여름철의 경우 대장균 계수가 어려울 수 있는데，이때 신선한 배지를 사용하면 대장균 계수가 보다 용이해 질 수도 있다.
다. 실험
실험 준비물품 1)