Microbiological Assay of Vitamin B group in Panax Ginseng Roots I.Assay of Nicotinic acid and Folic acid roots

Vitamin B

룹의 합 초 부 탄 토 I

V itam in B1 2, Nicotinic acid 및 Folic acid 의 많 ^

• ffl®

특

(Received September 14, 1964)

Young Eun Kim, Kye Soo Juhn, Byoung Jun An: Microbiological Assay of Vitamin B group in Panax Ginseng Root I. Assay of Nicotinic acid and Folic acid roots

The purpose of this investigation is to observe the variation of vitamin Bi2, nicotinic acid and folic acid contents in relation to the growing years of Panax Ginseng roots. The contents of the i vitamins were estimated microbiologically with Lactobacillus leichmannii, Lactobacillus arabinosus and Streptococcus faecalis, respectively. It is found that the content of vitamin B12 in Panax Ginseng roots somewhat increases according Id their growing ^ears except 3-year-old roots. It is probable that the lower amtent in these roots should be due to the cultivating soil.

The cont< nt of nicotinic acid in all the roots is not significantly different. 1 he result of paper chromatography using the concentrated extract of the roots suggests that there exists some other substance besides nicotinic acid and nicotinarr ide, of which Rf value is 0.5 in comparison with the Rf 0.75 of nicotinic acid and nicotinamide. It is thought that this substance stimulate the growth of L. arabinosus.

The content of folic acid is significantly different. The content level is the highest in the 4-year-old roots and the lowest in the 6- year-old roots.

jg jg 흑|i，2)은 쌓I굵, X 훌황 의 토환회에 로 초# I친에서 한 토부fc#

을 나타내고 있는 vitamin B1 2, nicotinic acid 및 folic acid 가 •늙::향되 어 있음을 %[토^

으로 ：텔W하여 이를 하고 있으며 부®>다! § 휴홈>은 A 훌에서 토목b뽑 및 토 으 로 a

$ 한 ；« « 를 가지고 있는 cobak 록의 a * 7 ij좋를 한 Jg롱를 후S S 하고 었다.

불흠황은 이러한 에 을 가지고 옛날부터 몇:5에서는 오늘날 아직도 의

$ 황으로 널리 되고 있는 우리 나라 황 홈 인 A 훌의 3번1±행뽑와 하여 A 층fti외

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층 에 서 하는 동안에 어떠한 슘 스 b가 나타나는가를 해 하 고 져 A 를iS S ttC R iO 에 서 한 2 부토, 3 부토, 4

5 및

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봉을 타로 하여

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* College of Pharmacy, Seoul National University, Seoul, Korea.

Journal ot the Pharmaceutical Society ot Korea 8, 80-85 (1964)

80

81 요 • ffl • !찾 : A황 4효 Vitamin B i벼 했보!^뽑 해^ I Vol. 8. No. 3

많 호 ^촉 를 하는 바이다.

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1.

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* 흥이며 » ® S B 7jc훌을 물에 잘 하고 •一핏 s jk 하여 웠®의 7jc왔을 없엔 다옴 하였다.

2. Vitam in 8 , 2 호* ffl ~ 훌을 I총i 한 흙후® 7jc쫓을 5 개 JiU : 몫해 50 g 썩 fp물하여 Waring blendor 에 서 75 % ethanol 150 ml(pH 4.5~ 4.6)로 20 ：0ffg 하■려 이 것을 봤?1텔®하고 램S 는 다시 50% ethanol 50 ml 로 하여 © g lS ii하였다. Jg됐을 ■숱 하여 에서 40 ml 가 되도록 ethan이을 S i 하고, ® ，iL>^gt하여 i ：?S봤에 물을 ；&n하여 50 m l로 한 다옴 ether SOml 을 Jq하여 |ggg한 환 , ether 물은 버 리고 7j<®에 m

하는 ether을 하여 I좋S 하였다. 여기에 물을 ；&[!해 술클 50m l로 하여 vitamin B12 $ M m A 충«u±i?&•으로 ?늙i i * 에 하였다.

3. Nicotinic acid 및 Folic acid . —— =S■부ffi 7KW lO g 썩을 f f * 하여 mortar에 넣고 잘 펼5후한 다옴 O.lJVNaOH 50m l로 mortar를 잘 해 ^하여 erlenmeyer flask 에 넣고 험®하여 autoclaveFt쎄 서 10Lbs. 1 ；&|]Sffl{±i하였다. }%W ^ p H 6 .5 로 <^IE하 여 f e * ethanol 10 ml 썩으로 3 0 SEi류하여 SEil* ® 을 슴하고 한 다옴 pH 7.0 으로 다시 하여 물을 Jp해 ：술;R 100 ml 로 하여 nicotinic acid 및 folic acd 효풀된으로 ?측|ii!®

에 ^ 훈하였다.

4. *S8Jgife.—— 5황;t 혹I 은 Vitamin 호 외 M S 축 햇 외 풀 를 i

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El햇^ ; &P하였으며 ®J불로

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하였다.

T a b le I . —Composition of B12 Assay Medium (Double Strength).

Acid-hydrolyzed casein soln. 25 ml Pyridoxine HCl 1 0 0 0 r

Tomato juice preparation b 50 ff Thiamine HCl 250 ff

Dextrose, anhydrous 1 0 g Nicotinic acid 500 ff

Sodium acetate, anhydrous 5 fl />-Aminobenzoic acid 500 ff

Ascorbic acid _{1 If} Ca-pantothvnate 250 n

L-Cystine 0 . 1 n Biotin 2.5 tr

DL-Tryptophan _{0 . 1 tt} Folic acid 50 ff

lAT-HCl _{1 0}ml Polysorbate 80 500 mg

Asparagine 50mg KH2PG4 250 ft

Adenine sulfate 5 n K2HPO4

MgSCVVHgO

250 ff

Guanine hydrochloride 5 n _{1 0 0} ff

Uracil 5 tt NaCl 5 ff

Xanthine 5 ff FeSOi-THzO 5 tr

Riboflavine 250 r M11SCVH2O 5 ft

After adjusting pH 6.0 with 10% NaOH soln., add water to make 250 ml.

September, 1964 ^{몇 뽑 술} il ^흔 82

Table I , n 및 I 과 같다.

(a) Acid-hydrolyzed casein soln®>*°>. IflSS milk casein 을 tv) 쿨의 ether 로 한 다옴 75~80%의 ethanol 4~5 을 ；5q하여 It) 10 SgS시 켜 과^ t t ® 삼을 I총 *하 고 IS；벌시켜 vitamin-free casein을 만들고 텔뾰(1：2)으로 하였다.

(b) Tomato juice preparation®'!®'. TtJIS외 합,W한 tomato 를 물로 Sfeil®한 다옴 Waring blendor 에서 homogenation 한 ；꽃, 하여 셨의 cellulose 를 하고 월 를 Jp하여 iiiiS 한 다옴 iV-HCl 로 pH3.5(BPB|S8늦IS) 로 ；S iff하고 S fe 황 1.2~ 1.5%를 Jp 하여 20~30 융ra a f #한 다옴 ii£fc하여 소?f 됐을 j R s a 블±1*>를 로 햇 하 여 텔 S i i i ®하고 toluene Kris을 Jn하여 ?유liW 에 종 하 면 서 하였 다.

TABLE II.—Nicotinic acid Assay Medium (Double Strength).

Acid-hydrolyzed casein soln. 25 ml Dextrose, anhydrous 1 0 g

DL-Tryptophan 1 0 0 mg Sodium acetate, anhydrous 5 tf

L-Cystine 50 ff Riboflavin 2 0 0 r

Guanine hydrochloride 5 n Folic acid 5 tf

Adenine sulfate 5 ff KH2PO4 250 mg

Uracil 5 ff K2HPO4 250 If

Thiamine hydrochloride 1 0 0 r MgSOi-THsO 1 0 0 ff

Biotin 0.4// MnSOrHaO 5 ff

p-Aminobenzoic acid 1 0 0 ff NaCl 5 tf

Pyridoxine hydrochloride 400 ff FeSOi-THgO 5 ff

Ca-pantothenate 500 tl

pH 6.8, add water to make 250 ml

TABLE III.—Folic acid Assay Medium (Double Strength).

Acid-hydrolyzed casein soln.a) 25 ml Dextrose, anhydrous 1 0 g

DL-Tryptophan 1 0 0 mg Sodium acetate, anhydrous 1 0 ff

L-Cystine 50 If Peptone treated with Norit* 0.5 g

Alanine 60 n Ca-pantothenate 2 0 0 r

Asparagine 50 ff K2HPO4 250 mg

Adenine sulfate 5 ff KH2PO4 250 ff

Guanine hydrochloride 5 ff MgS04*7H20 1 0 0 ff

'Uracil 5 ft MnSCVHgO 5 ft

Pyridoxine hydrochloride 400 r NaCl 5 ff

Nicotinic acid 150 ff FeSOi-THgO 5 ff

Riboflavin 2 0 0 ff Biotin 0.4 r

Thiamine hydrochloride 1 0 0 tf /)-Aminobenzoic acid 1 0 0 //

pH 6.8, add water to make 250 ml

* Replaced with activated carbon made in Kanto Chemicals Co.

5. 확 환 호 . vitamin B1 2 외 ^ 쿨®*패은 Coleman universal spectrophotometer, model 14 로 600 m/•( 에서 그 를 % ^종1£ 로 SO효하였으며 , nicotinic acid^^) 및 acid 의 호 a 내은 BTB 를 국S I으로 하여 O.liVNaOH 로 ?|힐호하였다. (Fig. 1.2 및 3 ).

6. fiHGhTSHijiS의 P P O *>.—— 룰IS5타 50g 을 f f ® 하여 nicotinic acid 및 folic acid 호 * 된 A 를 과 I히 하 게 WiHi하여 16ral로 J맺 하 여 PPC(whatman N o 4 .2 x 3 0 cm )로 7hrs.

± # ® ^ (H A C :H2 0 ： w-C4H9 0H =1 ：5：4) ：^ cyanogen bromidei^) ^ 획 Ff!에서 Ihrs. 황 1

% ^-aminobenzoic acid 를 하여 S f e 시 켰 다 .

0 i0 5 0 .1 0 0 .1 5 VtUmin Bis miltimicrogram

-Standard response curve of ritamin B12

Strain: L. arabinostu 17*5 Tem p-： 3 r

Period: 72 ms. incubation

Nicotinic acid microgrsm 늦

Fig.2.—Standard response curve of nicotinic acid

Strain: Strep, faecalis

Temp. 37"

Period: 72 hrs. incubaiion

Folic acid miiiimicrogram

F ig.3.—Standard response curve of folic add

83

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훌

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CIUOIJOB\*.vro

September, 1964 m m ^{^ t：:：>} 84

1. =S■후® 7jc¥ vitamin Bj2, nicotinic acid 및 folic acid 외

■S■들은 TableiV과 같으며 vitamin Big activity 는 i ?:툼부했에 따라 옳:^ i®：&n를 보이 고 있으 나 3 후©에 있어서는 오히러 J넬^ 하고 있으며 nicotinic acid는 ffl휴외 블뿔를 볼 수 없고,

또 Folic acid 는 4 후 까지는 룰 나타내고 었으나 다시 함을 알 수 있다. 이

TABLE IV. —Contents of Vitaminsin Ginseng roots Age of roots

； (Yrs)

Vitamin

2 3 4 6 6

Vitamin B12 (itir/g) 0.40 0.37 0.50 0.57 0.60

Nicotinic acid (r/g) 13.7 15.96 15.0 15.4 15.5

Folic acid (mr/g) 50.59 51.56 67.91 63.76 39.98

와 같은 볼뽑를 lit숨해보면 이들 없^이 A 출의 a 범후®[에 (소해 S 니그의 을 나타내는 것인지는 앞으로의 해W가 하며 또한 «^&첸의 ± « 름 과 하고 있는 것이 아닌 가 한다.

2. SS화의 P P C —— 타 의 PPC 붙록는 3Si후과다폐 nicotinic acid 및 nicotinamide H 의적 행팔이 흡®함을 알 수 있으며 nicotinic acid 와 nicotinamide 가 ^속히 R f 0.75임에 버 추 어 이 은 Rf 0.5 였고 또 L. arabinosus의 물" 을 {E^S하였다.

끝으로 탈i흥에 으로 1효i&를 아끼지 않으신 ^ 볼 I 분 했 I t

서울:출;*: 후출떻t f ± , 및 w-i붓^ ^ 팡 ^ 하 m

?호 햇 초 께 으로 참하는 바이 V .

REFERE N C ES

1. ^ 광 , J. Pharm. Soc.(Japan), 73, 419(1953) 2. m m , ibid, 73, 841(1953)

3. et al., 7. 13C1963)

4. 우 혈 , 55. n o .2(1959) 5. Thompson et al., J. Biol. Chan., 184, 211(1950) 6. Skeggs et al., ibid., 184, 175(1950)

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9. m ：$：, r s 스 원 Iii할

10. ff n, ^{크 본 출 Iiii：}

11. Hubert Clauser et aL, J. Am. Chem. Soc.황 76, 4337(1954) 12. Snell et aL, ibid., 139. 675(1941)

13. Teply et a/,, J. Biol. Chem., 157, 303(1945)

14. Block et a l., Paper Chromatography and Paper Electrophoresis.

15. Hoff-Jrgensen, Methods of Biochemical Analysis^ Vol. I, p. 81.