Anti-oxidant Activity and Whitening Activity of Bamboo Extracts

■활후 ■출학

대나무 추출액의 항산화 작용과 미백작용

송 호 선•문 효 진•박 병 언■최 방 실•이 동 자■이 지 윤. 김 창 종■심상수^ 중앙대학교 약학대학

(Received November 14, 2007： Revised December 7, 2007)

Anti-oxidant Activity and Whitening Activity of Bamboo Extracts

Ho Sun Song, Hyo Jin Moon, Byoung Eun Park, Bang Sil Choi, Dong Ja Lee, Ji Yun Lee, Chang Jong Kim and Sang Soo S in /

College of Pharmacy, Chung-Ang University, 221 Huksuk-dong, Dongjak-gu, Seoul 156-756, Korea

Abstract —— To investigate the possibility of development as a whitening agent using bamboo extracts

(Phyllostachys nigra

var.

henonis),

Keywords □ bamboo extracts, anti-oxidant, tyrosinase, melanin

대나무는벼과(Gmmineae)에속하는식물로한국, 일본, 중국 등동님아시아식1 주로분포한다. 벼과중가장키가큰식물로높 이 30 m, 지름 30 cm 내외에달한다. 줄기는땅속을옆으로뻗어 가는근경으로부터 직립하며, 등글며속이 비어있다. 대나무잎 추출물의 생리활성물질과 t：!성=한약리작용에대한보고가" 있다. 대나무엎주줄물은 flavone glycosides, phenolic acids, coumarin lactones, anthraquinones, amino acids 등을함유한다.내 Flavonoid 가많은대나무잎추출물은항산화, 항노화, 항피로, 항박테리 아, 항바이러스효과가있으며, 심혈관질환의 예방및약제학적 중간물질, 식이 보조제, 미용원료, 식품첨가물등으로사용 된다2,8-：15)

사람의 피부색은헤모글로빈, 카로틴, melanin에의해결정되 며 , 이중 melanin의영향이가장크다. Melanocyte에는 lysosome- like organlles인 melanosome이었는데 여기에는 melanin의합 성에 관여하는몇가지 효소들을포함하고 있다. 그효소중에

^ 논문에 관한 문의는 저자에게로

(전화) 02-820-5615 (팩스) 02-816-7338 (E-mail) [email protected]

구리률함유하고있는 tyrosinase는생체내 tyrosine을 DOPA 로, 나아가 DOPA quinone으로 산화되는 과정을 촉매하여

melanin 생합성에관여한다. 또한같색과흑색의 색소를만들어

내는 eumelanogenesis에는적어도두가지이상의효소가관여 하는데그것은 TRP-1(DHICA oxidase)페파 melanin 중간체인 DOPAchrome으로부터 5,6-dihydroxy indole-2-carboxyIic acid (DHICA)의번응을촉매하는 TRP-2(D0PA chrome tautomerase) 이다^^^ 또적색흑은황색의색소룰만들어내는 pheomelano genesis는 cysteine 또는 glutathione과같은황함유반응물질 이관여하는경로이다. 일반적으로 melanin polymer라고하면 eumelanogenesis에의해 생성된 eumelanin을지청한다. 최근 들어천연물질을이용하^ 미백제및항산화제탐색이활발히진 행되고있다. 식물추출물에서 가장보편적인머백제로사용되 는 hydroquinone은 phenol성화합물로서 산화, 환원빈움에민 감한구조적특정으로 tyrosinase의휠성을억제하고 melanocytes 를선택적으로억제한다.^^스

식물추출물에 대한관심은화장품영역에서도고조되고있으 며현재시관되고 있는천연물을이용한화장품이늘어나고있 다. 특히 미백에관련되어식물추출물을이용한화장품이 지속

대나무 추출액의 항산화 작용과 미백 효과 501

적으로시관되고있다. 대나무잎추출액에대한많은연구에비 해대나무즐기추출액을이용한항산화작용과미백작용에 대 한연구걸과는없는실정이다. 그러므로이실험에서는대나무"

추출액의 항산화효과률즉정하고, B16 melanoma cell을이용 하여 tyrosinase activity와 melanin 생성을관찰하였다.

실험 방법

시약

대나무(/%//ostoc%s

nigra

세포배양

B16 melanoma 세포와 RAW 264.7 세포와 10% fetal bovine serum(FBS) 파 penicillin(100 lU/ml)/ streptomydn(50 나g^m/)을 함유한 dulbecco's modified eagle's medium(DMEM) 용액으로 3/^C로유지되는 5% COg 배양기에서 배양하였다.

대나무 추출액의 분획

죽림식품으로구입한대나무추출액을 60~7(fC로가열히식 액성물질은모두날려버리고잔사민을얻어이를 BAS_ 간주하 였다. BA를증류수에녹여원심분리 el여증류수에용출된잔사 룰 BB로간주하였으며, 증류수에녹지 않은잔사률다시 ethyl acetate에녹여얻은잔사를 BC로간주하였다.

세포득성 측정

B16 melanoma 세포(1 x lO^ells/m/) 200 나/를 96-well plate 에가하고각각의대나무추출액을처치하고 72시간배양한후 배양액을모두제거하였다. 사용하기 30분전에제조한 500 ng/

rd

DPPH 라디칼소거작용측정

96 well plate에 ethanol에녹인 100 |_iM DPPH 용액 180 [i/와

대나무추출액을최중농도가 1, 3, 10, 30, 100, 300, 1000 농도로각각 20 n/씩가하고차광상태에서 37°C에서 20분간배 양한후 FL 600 spectrofluorometer(Bio-Tek, U.S.A.)률이용하

여 517nm에서흡광도를측정하였다

Xanthine oxidase 활성

Xanthine oxidase 활성은 xanthine에서 uric add로 전환되는 양을 290nm에서흡광도률측정하였다. 50 nM xanthine파 0.1 mM EDTA를함유하는 200 mM phosphate buffer(pH 7.5) 0.8 m/에대나무추출액을가하여 잘흔합하였다. 반응은 xanthine oxidase(10mU/m/) 200 (j/를가하면서 시작하였다. 반응혼합액 을 37°C에서 30분간배양한후 0.58 M HC1 100 |i^t 가하여반 응을정지시키고 290nm에서흡광도률측정하였다.

NBT/XO(superoxide 소거작용) 측정

Xanthine oxidase에의해 hypoxathine을 uric acid로전환시 키는 과정에서 생성되는 superoxide를 nitroblue tetrazolium (NBT)와반응시켜 superoxide틀소거하는작용으로서항산화작 용을측정하였다. 0.6 mM hypoxanthine, 1 mM EDTA, 0.2 mM NBT률 함유하는 50 mM potassium phosphate buffer(pH 7.4) 400 m/에 대나무 추출액을 5 ^1/률 가하여(최종 1, 3, 10, 30, 100 |ag/m/의농도) 잘흔합하였다. 반옹은 xanthine oxidase(100 mU/m/>를 100 를가하면서시작하였다. 반응혼합액을 37°C에 서 20분■간배양한후 96 well plat쉬1 200 p/씩소분하51 FL 600 spectrofluorometer를 이용하여 590nm에서 롭광도률 죽정하 였다.™

DCF-DA를 이용한 세포 내 ROS 생성측정

Raw 264.7 세포내에서 생성되는산소라디칼 reactive oxygen species(ROS)를측정하기위하여 2',7-dichlorofluoresdn diacetate (DCF-DA)률 이용하였다. Raw 264.7 세포률 15 m/의 krebs buffer 용액(mM: NaCl 137, KCl 2.7, Na2HP0 4 0.4, MgClg 0.5, HEPES[pH 7.4] 10, CaClg 1.8, glucose 5) 에 suspend 시 킨후 20 |iM DCF-DA를가하고 1시간빛을차단한곳에서 배 양하였다. DCF-DA가없는 Krebs 용액으로한번세척한후 10®

cells/m/로분주하고대나무추출액을 전처치한후 silica 1 mg/

m/을가하여 30분간 H2O2 생성을유도하였다. 원심분리 후 cell pellet을 200 m/의 Krebs 용액에분산시킨후형광(Ex: 485 nm;

Em： 535nm>을측정하였다.

기질에 띠른 tyrosinase 측정

Tyrosinase 활성죽정 시기질은 L-tyrosine과 L-DOPA률사

용하였다. L-DOPA# 기질로사용할때번용어신속하게 일어나

므로효소의양을즐여서 실험하였다. 기질농도로 L-tyrosine은

송호선 • 문효진 ■벅병언 • 최방실 • 이동자 • 이지윤 • 김창종 • 심상수

0.3 mg/m/, L-DOPA는 2 mg/m/률 potassium phosphate buffer (0.1 M, pH 6.8)로완전히 녹이고 tyrosinase는 125 units/m/과 25 units/m/ 두농도로준비하였다.

L-tyrosine(0.3 mg/m/)과 L-D0PA(2 mg/m/)를 eppendorf tube 에 450 pi를가하고대나무추출액을 5 p/'t 가하여최종농도률 조절하였다. Tyrosinase(기질이 L-tyrosine일경우 125 units/mi, 기질이 L-DOPA일경우 25 units/m/) 50 나/률처처한후 37*=C에 서각각 30분, 1시간빈움시킨후 475nm에서흡광도률측정하 였다.

B16 melanoma 세포 내에서 tyrosinase 활성과 melanin 생 성 측정

B16 세포에 약물 처치후 배앙이끝나면 l%(w/v) triton X- 100을함유한 10 mM phosphate buffer(pH 6.8)률 100 |i/룰가 하고 5분간 shaking 한후에세포와용액을모두 eppendorf tube 로이견시키고원심분리하여상중액은 tyrosinase 활성과단백 질정량에이용하고, cell pellet은델라닌정량에사용하였다.

96 well plate에약물처치후얻은상층액 4(너룰 분주하고 0.1 M sodium phosphate buffer(pH 7.2) 에 녹인 2 mg/m/ L- DOPA 200 n /t 가하지 37°C에서 30& W 배임히였다. Tyrosinase 에의해생성된 DOPA chrome은 475nm에서흡광도를측정하 였다.22> Cell pellet은 1N NaOH 100 p/와증류수 200 |o/를가하 고 6(fC에서 1시간방치하여 melanin을완전히녹인후 96 well plate에 200n/를 옮긴 후 405피고에서 흡광도룰측정하였다. Melanin 표준품으로얻은표준검량선을이용하여각 well에서 생성된 melanin 양을신:출하였다.

자료 분석 및 통계적 검정

실험결과는평균소표준편차로표기하였으며 , 실험성적은 non- paired Student's t test로검정하였고 P 값이 5% 미만일때통 계적으로유의하다고간주하였다.

실험결과 및 고찰

대나무 추출액의 TLC 양상

TLC 분석에있어서 대나무추출액은 3개의 spot을나타내고 있다. 대나무추출액을건조시킨후증류수로추출한 BB는 a와 b spot이모두나타나는반면나머지 잔사를 ethyl acetate로추 출한 BC는 b spot은거의없고 a spot 만이나타나고있다(Fig.

1). 이들은 FeClg 용액으로발색되는것으로보아 phenol성화합 물로사료된다.

대나무 추출액의 세포득성

대나무추출액을장시간세포에노출하는실험에서세포득성

Fig. 1 - Thin layer chromatography of bamboo extracts. TLC plate was developed in mixed solvent (CHCI3; Methanol: H2 0= 90 :20 :2) and stained with FeCL.

■BA

100 0 80 0 60 B 40 s? 20

0 ^Control

U iiii

Bamboo Extracts (^g/ml)

100

Fig. 2 - Effects of bamboo extracts on cell proliferation in B16 melanoma cells. The cells were incubated with bamboo extracts for 72 hrs in 5% CO^ incubator at 37®C. The amount of living cells was measured using MTT. Results are means ±SD from 3 separate experiments, a: signifi­

cantly different from control (P<0.05).

이있는지률확인하기위하여 MTT률이용한세포득성을측

정하였다. 대나무추출액은 30

ng/m!

타내지 않았지만 100 ng/m/에서세포의 생존율이대조군에비하

여 60%로감소하였다(Fig. 2). 대나무추출액은 pH가 2.54로서 강한산성을나타내는것으로서세포득성은아마도 pH에의한 것으로사료된다. 그러나증류수로추출한 BB군은세포득성이 가장낮게나타나고있는것^ 보아지용성물질중에세포득 성을일으키는물질이 있는것으로사료된다. 대나무추출액을 장기간세포에노출시키는 melanin 생성에미치는영향을관찰 하는실험에서는대나무추출액을 30 ng/m/ 이하의농도룰사용 하였다.

IT

0 1 3 10 30 100 300 1000

Bamboo Extracts (jj.g/ml)

U 획

0 10 20 40 80 100

Ascorbic Acid (pJvl)

Fig. 3 - Anti-oxidant activities of bamboo extracts in the DPPH radical scavenging activity assay. A solution of 180 yl ^{of 100}

I요M DPPH solution in ethanol was gently mixed with 20 |oi of bamboo extracts for 2 0 min and the absorbance was measured at 517 nm. Results are means ±SD from 4 separate experiments.

DPPH 라디칼 소거작용

DPPH(l-diphenyl-2-picrylhydroazyl)i- 이용한유러라디칼소 거빈움으로대나무추출액의항Ii■화작용을측정한결과, 1-1000

ng/m/의농도에서농도의존적인항산화작용을보였다. BB가

BA나 BC보다항산화작용이 강하게 나타났으나대조약물인 ascorbic acid 보다는항산화작용이낮게나타났다(Fig. 3). 이러 한결과는대나무잎으로부터추출한 chlorogenic acid 유도체들

이 DPPH룰이용한항산화실험에서 유의한항산화작용이있

다는것이보고와잘일치하고있다

Xanthine oxidase(XO) 억제 작용

Xanthine oxidase에의해생성된 superoxide를 NBT(nitroblue tetrazolium chloride)와반응시켜항산화정도률죽정히는 NBT/

X0 superoxide scavenging assay에서대나무추출액은농도의 존적으로 superoxide의소거반•§을보였다(Fig. 4). 대나무추출 액중 30 ng/m/ 이하의농도에서 BC가 BB보다더크게억제하 였다. 이러한대나무추출액의 항산화작용은대조약물로사용 한 X0 억제제인 100 m/m allopurinol의억제작용보다는 작게

■BA 텔BB °BC

.으 [q

IE

Fig. 4

30 Bamboo Extracts Cp-g/ml)

100

- Anti-oxidant activities of bamboo extracts in NBT/Xanthine oxidase assay. The scavenging potential for superoxide radicals was analyzed via a hypoxanthine/xanthine oxidase generating system coupled with nitroblue tetrazolium.

Results are means ±SD from 4 separate experiments. AP:

allopurinol 100 |iM. a: significantly different from BB at the same concentrations (P<0.05).

나타났다.

대나무추출액이 x o률 직접억제하는지를확인하기 위하여

X0에의해서 생성되는 uric acid를측정하였다. 대나무추출액을

처치한군은 X0만을처치한대조군보다 290nm에서흡광도가

증가하는현싱■이나타났다. 이는대나무추출액의 성분중 290

nm에서흡광도에 영향을주는물질이존재할가능성이 었는것

으로사료되어 대나무추출액만을이용하식 같은농도와조건에 서흡광도룰측정하였다. 그림에서보는바와갈이대나무추출 액은 290 미고에서농도의존적으로흡광도가증가하였다(Fig. 5).

290nm에서 대나무추출액의 흡광도률제거한후 X0의억제효

과률산출하여볼때 BC가 BB 보다 X0를더많이억제하는것 으로나타났다. 이러한결과는대나무잎으로부터추출한 chloro­

genic acid 유도체가 xanthine oxidase를억제한다는보고로에미 루어볼때대나무추출액의 자체흡광도때문에 X0의 직접적

인억제효과률보이지는못했지만대나무추출액은 superoxide

를제거하는활성뿐만아니라 X0룰직접억제하는효과도있는 것으로사료된다.

세£ 내 reactive oxygen species(ROS) 생성에 미치는 대니무 추출액의 효과

대나무추출액의 항산화 작용이 세포내에서 발생하는 ROS (reactive oxygen species)생성에서도항산화작용이 있는지률 확인하기 위하여 생쥐의 대식세포인 Raw 264.7 세포를이용하 여측정하였다. Raw 264.7 세포를자극하는물질을투여 시세 포내 ROS의생성은증가하는데 silica는 macrophage에서 ROS 생성을증가시키는 물질로 알려져 었다.® 1 mg/m/의 silica는 Raw 264.7 macrophage 세포에서 superoxide 생성을 3배 정도

대나무추출액의 항신:화작용과미백효과 503

64_ uoiLiu

l %

A

uo!;!q!L

jul

%

Fig. 6

Control Silica 1 3 10 30

Bamboo Extracts (|ig/mi)

- Inhibitory activity of bammbo extracts on silica-induced intracellular ROS generation in Raw 264.7 cells. Results are means ±SD from 4 separate experiments, a: significantly different from BB at the same concentrations (P<0.05).

증가시켰다. 이러한 silica에의한 ROS 증가는대나무추출액에 의해농도의존적으로억제되었으며(Fig. 6), 이러한억제효과는 BC가 BB 보다더강하게작용하였다. 한편최근대나무잎에서

BuOH 추출액은 HepG2 세포의산화성손상으로부터세포를보

호한다는 결과로™ 미루어볼 때대나무추출액은시험관수준 뿐만아니라세포수준에서도항산화작용이있는것으로생각 된다.

대나무 추출액어 mushroom tyrosinase 활성에 미처는 영향

대나무추출액의 미백작용을확인하기위하쉬 던저 melanin

생성에중요한작용을하는 tyrosinase에직접적인작용이관찰

하였다. Tyrosinase는 L-tyrosineS: L-DOPA로 전화시키고이어

서 L-DOPA를 L-DOPA quinone으로산화시킨다. 이때 cysteine 이나 thiol기률갖는물질이없을때자발적으로 L-DOPA chrome 이형성된다.^®가이설험에서는 tyrosinase의기질을 L-tyrosine 과 L-DOPA률이용하여 purified mushroom tyrosinase의활성 을측정하였다.

대나무추출액은 L-DOPA를기질로사용하였을때는억제효

과룰나타내지않았으나 L-tyrosine을기질로사용하였을때는

tyrosinase틀억제하였다. 이러한억제효과는 BC보다 BB가더 강하게 억제하였다(Fig. 7). Tyrosinase 억제제로알려진 Im M arbutin은 L-tyrosine을기질로사용한실험에서는 tyrosinase 활 성을 90% 억제하였으나 L-DOPA를기질로사용한설험에서는 억제하지않았다(Fig. 7). Arbutin은 tyrosinase에기질이결합하 는부위에서 작용하여기질이 tyrosinase에결합하는것을방해 하는것으로알려져있는데,2®) 이실험결과로볼때 arbutin은 tyrosinase 작용중 tyrosine hydroxylase 작용을억제하는것으 로 생각된다. 이러한 결과로 머루어 볼 때대나무추출액은 tyrosinase 활성을직접적으로억제하는것으로사료되며, 머백 제로사§• 중인 arbutin의억제효과보!다는미약한것으로사§_된다.

B-16 melanoma 세포에서 대나무 추출액이 MSH)i| 의한 melanin 합성에 미처는 영향

대나무추출액이 melanin을생성하는세포수준에서미백효과

가있는지를확인하기위하여 a-melanocyte stimulating hormone (a-MSH)로자극한 B16 melanoma 세포에서 tyroinase 활성과

§0,6 O)

■각 -e8 0.2

< 0.0

ii-iiliy

Fig. 5 - Effects of bamboo extracts on XO activity. Absorbance of uric acid produced by XO was measured at 290 nm. Results are means ±SD from 3 separate experiments. AP: allopurinol 100 uM. a: significantly different from BB at the same concentrations (P<0.05).

X

AP 1 3 10 30 100

Bamboo Extracts (lig/ml)

504 송호선 • 문효진 ■박병언 • 최방살 • 이동자 ■이지윤 - 김창종 ■심상수

* Uric Acid ^ BA alon^ * Uric Acid ^ BB alone I

S 0.8 0.6

! 0.4 8 0,2 0.0

e 0.8

E 0.8

uiMILiUli

Mjric Acid ^BC alone I

0,0

100

Control AP 1 3 10 30 100

BB Concentrations (냐g/ml)

I

oooooooo4321SOH JB3II80SUI o ooo

8

6

4

2

uoj^iqlLIU

I %

Control MSH 1 3 10 30 Bamboo Extracts CM-g/mt)

Fig. 9 - Effects of bamboo extracts on melanin synthesis in B16 melanoma cells stimulated by 1\^aM a-melanocyte stimulating hormone (MSH). Results are means ±SD from 4 separate experiments, a: significantly different from BC at the same concentrations (P<0.05).

m M

Control Arbutin 1 3 10 30 BA Concentrations (u,g/ml)

I BA ■ BB °BC

ooooo

5

4

3

2

1

uiqILtu

%I ¹

AjLii

Bamboo Extracts (p.g/ml)

Fig. 8 - Effects of bamboo extracts on tyrosinase in B16 melanoma cells stimulated by 1 fiM a-melanocyte stimulating hormone (MSH). Results are means ±SD from 4 separate experi­

ments. a: significantly different from BC at the same concentrations (P<0.05).

melanin 생성을관찰하였다. B16 melanoma 세포에서 MSH는 tyrosinase 활성과 melanin 생성을유의하게증가시켰다(Figs. 8

& 9). 이러한 MSH에의한 tyrosinase 활성과 melanin 생성증 가는대나무추출액에의해농도의존적^ 억제되었다(Figs. 8

& 9). 이러한미백 억제효과는 BC보다는 BB가더강하게 미 택작용을나타내었다. 정제한 tyrosinase 억제효과에서는 arbutin 보다는머약했지만 melanin 생성을억제하는세포수준에서는

1 mM arbutin에의한미백효과와유사한정도로나타나는것으

로볼때대나무추출액의머백효과는우수한것으로사료되며

앞 머 백 제 로 서 의 개발가능성이었는것으로사료된다.

결 론

대^ 추출액이 미백제로개발가능성여부률관찰하기 위하 여항산희작용파 melanin 생성에미처는영향을관찰하였다. 대 나무추출액은 DPPH radical 소거작용과 xanthine oxidase에의 한 superoxide 소거작용뿐만아니라 Raw 264.7 세포에서 silica

에의해생성된세포내 KOS 생성을유의하게 억제하였다. 이러

한걸파로 아대나무추출액은 free radical을소거하는항산화

JMM

I * L-DOPA ^ L-Tvrosine

- 140 r 100 r ^

Control Arbutin 3 10 30 Arbutin 3 10 30

BC Concentrations (M-g/ml) Bamboo Extracts (iig/ml)

Fig. 7 - Effects of bamboo extracts on mushroom tyrosinase activity. Purified tyrosinase was mixed with bamboo extracts and incubated with 0.3 mg/m/ L-tyrosine or 2 mg/ml L-DOPA for 1 hr and 30 min at 37T, respectively. Results are means ±SD from 4 separate experiments, a: significantly different from BC at the same concentrations (P<0.05).

대나무 추t 액의 항산화 작용파 미백 효과

I L-DQPA ° L-Tyrosine I F L-DQPA ° L-Tvrosine

ujurolal고

pQoOQoo^08642

104UOU

0^

3CTUral.ju%

506 송호선 ■문효진 ■박병언 ■최방설 • 이동자 • 이지윤 • 김청종 • 심상수

작용뿐만아니라세포내에서 free radical이생성되는것을억제 하는 작용도 있는 것으로 여겨진다. 또한 대나무 추출액은 xanthine oxidase를직접적으로억제하는것으로사료되며, 항산 화작용에 있어서수용성물질보다는지용성 물질이항산화작 용이큰것으로생각된다.

대나무추출액의미백작용은tyrosinase의활성을직접적으로

억제하며, B16 melanoma 세포에서 MSH에의한tyrosinase 활

성과melanin 생성증가률능도의존적으로억제하였다. 이러한

머백효과는지용성물질보다는수용성물질이더강한머백효 과룰나타내었다. 한편세포득성실험에있어서도수용성물질 의세포득성이 지용성물질보다적게나타났다. 이러한걸과률 고려하식볼때대나무추출액을미백제로개발시지용성성분 을제거한다면세포득성을감소시키며 미백효과를증가시킬수 있을것으로사료된다.

참고문헌

1) Zhou, Z. X. : The studies on the chemical constituents of bamboo leaves. Res, Develop. Nat Prod. 4, 44 (1992).

2) Zhang, Y. and Ding, X. L. : Studies on anti-oxidative fraction in bamboo leaves and its capacity to scavenge active oxygen radicals. /. Bamboo Res. 15, 17 (1996).

3) Chen, Q., Wu, L. J. and Ruan, L. J. : Chemical studies on the constituents of lophatherum gracile brongn. J. Shenyang Pharmaceut Univ. 19, 257 (2002).

4) Meng, D. L., Li, X., Xiong, Y. H. and Wang, J. H .: Study on the chemical constituents of Achyranthes bidentata Bl./. Shenyang Pharmaceut Univ, 19, 23 (2002).

5) Li, H. Y., Sun, J. W and Dai, S. W : Study on chemical components of bamboo leaf. Chin. Med. Mat. 26, 562 (2003).

6) Luo, J. Y. and Chen, X. Y.: Study on extracting tea polyphenols from leaf of Indocalamus. Chem. Ind. Forest Prod, ^{37, 15}

(2003).

7) Lu, Z. K. and Liao, W : Preliminary determination of chemical components for leaves of Phllostachys pubescens. /. Shenyang Pharmaceut. Univ. 26, 46 (2003).

8) Zhang, Y. and Ding, X. L. : Existence of specific amino acid in bamboo leaves and its biological significance. J. Wuxi Univ.

Light Ind. 16, 29 (1997).

9) Tang, L. L. and Ding, X. L .: Extraction of bamboo amylase and its biological functions. Devel Res. Food ^{21, 8 (2000).}

10) Xu, G., Zhang, H. and Dong, J. H. : Studies on superoxide and hydroxyl radical scavenging capacity of bamboo leaves extracts. J. Nutr. 23, 79 (2001).

11) Xu, G. and Zhang, H. : A comparison of the antimicrobial function of both extracts to bacterium between bamboo leaves and Artemisia anomala s. moore. Food Sci Techn.⁶, 38 (2001).

12) Huang, W, Wang, Y, Hu, X. B. and Yin, J. T. : Study on antimicrobial characteristics of bamboo leaf extracts. Chem.

Ind. Forest Prod. 22, ^{6 8 (2002).}

13) Li, Y. H., Liu, H. M., Yan, Y. E, Luo, D. S., Zheng, H. H., Wang, M. J. and Yao, S. Q. : The inhibitory effect of bamboo leaves extract on implanted Sarcomal 80 tumor. J. Hubei Coll TCM.

4, 17 (2002).

14) Zhang, Y., Shen, J. E, Yu, Z. Y., Lu, B. Y. and Lou, D. D. : Primary studies on bamboo leaf flavonoids used as anti-aging factor for skin protection. Chem. Ind. Forest Prod. ^{24, 95}

(2004).

15) Fu, X. C., Wang, M. W, Li, S. R, Zhou, Q. and Li, Y. Q. : Effect of bamboo leaf extracts on cardiac function and hemodynamic anesthetized dogs. Chin. Trad. Herbal Drugs. 35, 141 (2004).

16) Jimbow, K„ Chen, H., Park, J. S. and Thomas, R D .: Increased sensitivity of melanocytes to oxidative stress and abnormal expression of tyrosinase-related protein in vitiligo. Br. J.

Dermatol 144, 55 (2001).

17) Jackson, I. J., Chambers, D. M., Tsukamoto, K., Copeland, N. G., Gilbert, D. J., Jenkins, N. A. and Hearing, V A. : Second tyrosinase-related protein, TRP-2, maps to and is mutated at the mouse slaty locus. EMBO J. 11, 527 (1992).

18) Sakuma, K., Ogawa, M., Sugibayashi, K., Yamada, K. and Yamamoto, K. ; Relationship between tyrosinase inhibitory action and oxidation-reduction potential of cosmetic whitening ingredients and phenol derivatives. Arch. Pharm. Res. ^{22, 335}

(1999).

19) Mosmann, T.: Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J.

Immunol Methods 65, 55 (1983).

20) Perez, G. R. M., Vargas, S. R., Martinez, M. E J. and Cordova, R. I. I. : Antioxidant and free radical scavenging activities of 5,7,3'-trihydroxy-3,6»4'-trimethoxy flavone from Brickellia veronicaefolia. Phytother. Res. 18, 428 (2004).

21) Parejo, I., Viladomat, E, Bastida, J., Rosas-Romero, A., Flerlage, N., Burillo, J. and Codina, C. : Comparison between the radical scavenging activity and antioxidant activity of six distilled and nondistilled mediterranean herbs and aromatic plants. J. Agric Food Chem. 50, 6882 (2002).

22) Ohkura, T, Yamashita, K., Mishima, Y. and Kobata, A. : Purification of hamster melanoma tyrosinase and structural studies of their asparagine-linked sugar chains. Arch. Biochem.

Biophys. 235, 63 (1984).

23) Park, H. S., Lim, J. H., Kim, H. J., Choi, H. J. and Lee, I. S. : Antioxidant flavone glycosides from the leaves of Sasa borealis. Arch. Pharm. Res. 30, 161 (2007).

24) Kweon, M. H., Hwang, H. J. and Sung, H. C. : Identification and antioxidant activity of novel chlorogenic acid derivatives from bamboo (Phyllostachys edulis). /. Agric. Food Chem. ^49,

대나무 추출액의 항산화 작용과 미백 효과 507

4646 (2001).

25) Cho, Y. J., Seo, M. S., Kim, J. K., Lim, Y., Chae, G., Ha, K. S.

and Lee, K. H. ; Silica-induced generation of reactive oxygen species in Rat2 fibroblast: role in activation of mitogen- activated protein kinase. Biochem. Biophys. Res. Commun.

262, 708 (1999).

26) Hearing, V J. and Jimenez, M. : Mammalian tyrosinase-the critical regulatory control point in melanocyte pigmentation.

Int. ^/ Biochem. 19, 1141 (1987).

27) Hearing, V J. and Jimenez, M. : Analysis of mammalian pigmentation at the molecular level. Pigment Cell Res. 2, ⁷⁵

(1989).

28) Maeda, K. and Fukuda, M. ; Arbutin: mechanism of its depigmenting action in human melanocyte culture. J.

Pharmacol. Exp. Ther. 276, 765 (1996).