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2 0 12 년 2월 석사학위논문
천마( Gas t r odi ael at aBl ume)추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cut aneous
Canc erCel lLi nes ) 에 미치는 영향
조선대학교 보건대학원
대체의학과
이 기 복
천마( Gastrodia elata Blume ) 추출물이 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer
Cell Lines)에 미치는 영향
Effects of Gastrodia elata Blume Extracts on Human Cutaneous Cancer Cells
2012년 2월
조선대학교 보건대학원
대체의학과
이 기 복
천마( Gastrodia elata Blume ) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous
Cancer Cell Lines)에 미치는 영향
Effects of Gastrodia elata Blume Extracts on Human Cutaneous Cancer Cells
지도교수 문 경 래
이 논문을 대체의학 석사학위 신청 논문을 제출함
2011년 10월
조선대학교 보건대학원
대체의학과
이 기 복
이 기 복 의 대체의학 석사학위 논문을 인준함
위원장 조선대학교 교수 서 재 홍 (인)
위 원 조선대학교 교수 박 상 학 (인)
위 원 조선대학교 교수 문 경 래 (인)
2011 년 11월
조선대학교 보건대학원
목 차
도표 목차 ... ⅱ 영문 초록 ...,... ⅲ
Ⅰ. 서 론 ...,... 1
Ⅱ. 재료 및 연구 방법 ... 3 1. 실험을 위한 재료
2. 시 약 3. 세포 배양 및 화학적 처리 4. 시료 준비
5. MTS 분석
6. Western blot 분석 7. 통계 처리
Ⅲ. 결 과 ... 8 1. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (24시간 및 48시간, 메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)
2. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (24시간 및 48시간, 열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)
3. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향
(메탄올 추출물, Western Blotting, iNOS 및 COX-2 발현량)
4. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향
(열수 추출물, Western Blotting, iNOS 및 COX-2 발현량)
Ⅳ. 고 찰 ... 12
Ⅴ. 결 론 ... 15
Ⅵ. 참 고 문 헌 ... 17
도 표 목 차
도표 1. 천마(
Gastrodia elata Blume
) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율) ... 8도표 2. 천마(
Gastrodia elata Blume
) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율) ... 9도표 3. 천마(
Gastrodia elata Blume
) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 Western blotting에 의한 iNOS와COX-2 발현량 측정) ... 10
도표 4. 천마(
Gastrodia elata Blume
) 추출물이 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (열수 추출물에서 Western blotting에 의한 iNOS와 COX-2 발현량 측정) ... 11ABSTRACT
Effects of Gastrodia elata Blume extracts on human cutaneous cancer cells
Gi-bok Lee
Advisor: Prof. Moon, Kyung-Rye M.D., Ph.D Department of Alternative Medicine Graduate School of Health Science
Chosun University
Objective : This study aims to examine the effects of the anti-cancer activity of Gastrodia elata Blume extract on human cutaneous cancer cells.
Methods : MTS assay was used to detect the effects of Gastrodia elata Blume extracts on the viability of human cutaneous cancer cells. And Western Blotting was used to see the effects of Gastrodia elata Blume extracts on inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression.
Results : Methanol extracts of Gastrodia elata Blume reduced human cutaneous cancer cells depending on time and concentration. Also it reduced iNOS expression at the concentration of 200μg/ml.
MTS assay results,
1. Methanol extracts of Gastrodia elata Blume did not reduce human cutaneous cancer cells at any given time.
2. Methanol extracts of Gastrodia elata Blume did not reduce human cutaneous cancer cells at any concentration. Cell survival rate did not decrease at all with respect to time or concentration.
3. Hot water extracts of Gastrodia elata Blumedo did not reduce human cutaneous cancer cells at any given time.
4. Hot water extracts of Gastrodia elata Blumedo not reduced human cutaneous cancer cells at any concentration. Cell survival rate did not decrease at all with respect to time or concentration.
Western blot results
5. Methanol extracts of Gastrodia elata Blume dramatically reduced inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) expression by 95% at 200μg/ml.
6. Hot water extracts of Gastrodia elata Blumedo did not reduce inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expressions at various concentrations.
Conclusion : Methanol extracts of Gastrodia elata Blume did not significantly reduced the cell viability of human cutaneous cancer cell
lines. However, they reduced expression of iNOS by 92% at the concentration level of 200 μg/ml. Hot water extracts of Gastrodia elata Blume did not reduce the expression of iNOS at any concentration.
The reslts of methanol extracts of Gastrodia elata Blume implied that the isolation and purification process could bring out more various clinical effects.
Key words: Gastrodia elata Blume, human cutaneous cancer, MTS, iNOS, COX-2
Ⅰ. 서 론
피부암(皮膚癌, skin cancer) 은 피부 악성 종양으로 대표적인 종류로 는 기저세포암, 편평상피세포암, 흑색종이 있다.1)
일반적으로 자외선에 과다하게 노출되면 피부암이 걸릴 확률이 높아진 다.2) 자외선은 파장에 따라 UV-B와 UV-C로 구분되는데, UV-B는 기 저세포암과 편평상피세포암을 유발하는 것으로 알려져 있다. 이 두 종류 는 전체 피부암의 80%를 차지한다.3) 보다 치명적인 UV-C는 대개 오존 층에서 여과되어 지표까지 도달하는 일이 드물지만, 최근 오존층의 파괴 로 인해 UV-C가 여과되지 못하고 지표까지 도달하는 경우가 늘고 있 다. UV-C는 흑색종을 유발한다.4) 흑색종은 발생한 세포마다 멜라닌을 침착시키면서 확산되며 예후가 좋지 않다. 흑색종은 유럽계 백인 집단에 서 발병율이 더 높게 나타난다. 한편, 할로겐등이나 형광등과 같은 조명 기구도 UV-C를 방출하여 장기간 노출되면 흑색종이 발생할 수 있다.5)
피부암은 가장 흔히 발병하는 암이다. 피부암의 80%는 얼굴, 머리, 손목 등 태양광에 노출된 부위에서 일어난다. 2002년 미국의 질병 통계에는 백만명 이상의 피부암 환자가 기록되었다. 피부암 발병자 가운데 대부분 은 기저세포암이나 편평상피세포암이며 이 암들은 비교적 치료가 잘 되 는 편이다. 흑색종은 피부암 환자의 3%를 차지했는데, 흑색종 환자 가운 데 사망률은 14%로 위험한 암에 속한다.
최근 들어 여러 가지 질환6) 특히 암 예방과 치료에 천연물이 많이 이
용되고 있으며 많은 연구가 진행되고 있는바,7) 특히 천마에 관한 연구가 활발하여8) 다양한 임상실험 결과에서 여러 종류의 암을 상당량 억제하 거나 파괴했음을 보이고 있다.9)
천마에 관한 많은 선행연구를 고찰해 보면,10)11) 암 세포의 사멸에 관한 다양한 연구가 진행되었음을 알 수 있었고,12) 항암 연구와 관련이 매우 깊은 항염증에 관한 다양한 선행연구가 있었음을 알 수 있었다 .13)14)15)
하지만 이러한 선행연구에도 불구하고, 피부암에 대한 항암 작용을 나 타내는 천마의 연구는 아직 확인 된바가 없어 천마에 대한 피부암에 대 한 효과 검증의 필요성이 증대 되고 있다.16)17)
본 연구에서는 인체 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 천마 천연추출물 두 종류 (열수추출물 Hot-Water Extracts 와 메탄올추출물 Methanol Extracts을 처리하여 암 세포주 억제 효과 와 암 표적인자 발현 억제능 (COX-2 or iNOS)을 확인하고자 한다.
Ⅱ. 재료 및 연구 방법
1. 실험을 위한 재료
천마는 전남 화순군 일대에서 채취하여 수집된 것으로 절단 후 충분히 건조한 상태에서 분말로 만들어 실험에 사용하였다.
2. 시 약
본 실험에 사용한 메탄올 시약은 1급 시약을 사용하였다. LPS, (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-caroboxymeh-oxyphenyl)-2H-t etra-zolium inner salt (MTS) 및 1% penicillin과 streptomycin 등은 Sigma사(USA)로부터 구입하였다. 더불어 10% FBS, 1% 항생제 (Gibco, USA), minimum essential medium (MEM)과 serum free media 등은 Gibco사(USA)의 시약을 구입하여 본 실험에 사용하였다.
3. 세포 배양 및 화학적 처리
피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)는 American Tissue Culture Collection (Manassas, VA)에서 구입하여 본 실험에 사용하였다. 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)는 5% fetal bovine serum (FBS), 100 U/ml penicillin 및 100 U/ml streptomycin 등을 첨가한 DMEM으로 5% CO2의 상태에서 배양하였다.
4. 시료 준비
1) 열수 추출
천마의 분말 100g과 증류수 1.3L를 이용하여 약탕기(대웅, DWP-5000M)에서 3시간 동안 가열하여 열수 추출을 하였다, 추출이 끝 나고 나면, 부직포 여과지를 이용하여 압착 여과하였다. 여과된 추출물 을 50ml 튜브로 나누어 담고 4,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 여 분의 분말 찌꺼기를 침전시켰다.
원심분리 후 상층액 만을 두 겹의 여과지 (Whatman No.1)를 이용하여 감압여과 하였다. 감압 여과된 추출물을 회전증발농축기를 이용하여 농 축한 후, 동결건조기를 이용하여 동결 건조하였다. 동결건조가 끝난 후 곱게 분쇄하여 실험에 사용하도록 하였다.
2) 메탄올 추출
99% 메탄올 1L에 천마 분말 100g을 24시간 침지시켰다. 이 때 2~3 시간 단위로 교반하여 시료가 골고루 섞이도록 하면서 추출물을 유도하 였다. 추출 후 두 겹의 여과지를 이용하여 감압 여과한 후 1차적인 메탄 올 추출액을 만들었다. 여과된 추출액을 회전증발농축기를 이용하여 감 압 농축하였다. 이 때 water bath 의 온도를 35~37 ͦC를 유지하여 메탄 올을 제거하며 농축하였다.
추출농축액을 chloroform과 1:1의 비율로 혼합하여 강하게 vortexing 한 후 4,000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 엽록소 및 여분의 잔여 미 세 시료를 층 분리하였으며, 하층의 chloroform이 무색이 될 때까지 3 회 이상 반복적으로 과정을 수행하였다.
원심분리를 통하여 엽록소를 완전히 제거한 후 상층액 만을 수거하여 회전 증발 농축시켰다. 증발 농축 시킬 때 소량의 메탄올을 넣어 농축 효율을 증대시켰다. 농축 추출액을 동결 건조한 후 분쇄하여 실험에 사 용하였다.
또한 ethyl acetate 처리를 위하여 상기 방법으로 동일하게 처리한 후 chloroform 층이 무색이 되면, 상층액 만을 새로운 튜브로 옮긴 후 ethyl acetate와 1:1의 비율로 혼합한 후 4,000 rpm에서 2분간 원심분 리 하였다.
상층액 만을 새로운 용기로 옮겨 담고 원심분리 후 남겨진 하층부에 다 시 ethyl acetate를 처리하여 상기 방법으로 반복하여 상층부만을 기존 에 옮겨 담은 용액이 있는 용기로 수합하였다. 상기 과정을 총 3회 반복 하여 ethyl acetate를 이용한 폴리페놀화합물을 완전히 얻어내도록 하였 다.
옮겨져서 수합된 상층부액을 회전 감압 농축기를 이용하여 감압농축하 고 ethyl acetate를 완전히 제거되고 얻어진 고체 화합물의 질량을 측정
하여 DMSO를 이용 100 mg/ml이 되도록 희석하여 사용하도록 하였다.
5. MTS 분석
천마 추출물을 이용한 세포생존율(Cell Viability) 측정은 Cell titer 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit (Promega, Madison, WI)로 제작사의 실험 매뉴얼에 따라 측정하였다.
피부암 세포들은 96-well plate에 분주하고 천마 추출물의 농도별 처 리 후에 24시간과 48시간 후에 시간 경과에 따른 세포생존율 반응을 조 사 하였다.
MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-20yl)-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4 -sulphophenyl)-2H-tetrazolium) solution을 첨가하여 ELISA microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 492 nm와 690 nm에서 흡광도와 변화를 측정하여 대조구에 대한 세포생존 율을 백분율로 표시하였다.
각 농도별로 약재가 갖는 흡광도를 보정하기 위하여 세포를 뺀 배지를 같이 배양하여 대조구와 실험구의 흡광도를 비교 보정하여 세포 생존율 을 백분율로 표시 하였다.
6. Western blot 분석
천마 추출물은 처리한 후 피부암 세포들을 수확하고 분쇄하였다. 단백 질 상등액 fraction은 SDS-로 전기영동한 후 membranes로 옮기고 5%
skim milk로 blocking하였으며, indicated antibodies로 hybridization 하였다. Horse radish peroxidase-conjugated secondary anti-body 된 protein bands는 chemiluminescence detection kit로 관찰 측정하 였다.
7. 통계 처리
각각의 실험들은 3 반복 이상으로 실험 하였으며 실험결과는 평균값±
표준편차로 계산하여 측정하였다. 실험결과의 통계분석은 Student's t - test를 이용했으며, p값이 0.05 이하인 경우에 실험결과가 통계적으로 유의한 것으로 판정하였다.
Ⅲ. 결 과
1. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)
피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)의 세포독 성(Cytotoxicity)을 알아보기 위하여, 천마 메탄올 추출물을 농도를 달리 하여 0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖에서 처리 후 24시간과 48시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다. 도표 1과 같이 각 농도에서 모두 미 미한 암세포 성장 억제율을 보였다. 이 결과로 천마 메탄올 추출물은 농 도와 시간에 대해 낮은 의존성을 가진다고 보여 진다.
Figure 1. Effects of methanol extracts of Gastrodia elata Blume on the inhibitory activity of human colorectal cancer cell lines of 24 and 48 hours after treatment with dependence on the concentration (0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖).
2. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향 (열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)
피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)의 세포독성 (Cytotoxicity)을 알아보기 위하여, 천마 열수 추출물을 농도를 달리하여 0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖에서 처리 후 24시간과 48시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다. 도표 2와 같이 각 농도에서 모두 미미한 암세포 성장 억제율을 보였다. 이 결과로 천마 열수 추출물은 농도와 시 간에 대해 낮은 의존성을 가진다고 보여 진다.
Figure 2. Effects of hot water extracts of Gastrodia elata Blume on the inhibitory activity of human colorectal cancer cell lines of 24 and 48 hours after treatment with dependence on the concentration. (0, 50, 100, 200, 400㎍/㎖).
3. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 인체 대장암 세포주에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 Western Blotting의한 iNOS 와 COX-2 발현량)
COX-2 및 iNOS 발현량을 측정하기 위하여, 실험군과 대조군을 나누 고, 대조군에서 house keeping gene인 β-actin (indicating non-interference in cellular mechanism) 을 측정하여, 실험군의 COX-2 및 iNOS 발현량과 비교 하였다. 도표 3과 같이 농도 200㎍/㎖
에서 95% 이상의 억제효과를 보였다. 이 결과는 천마 메탄올 추출물의 경우는 농도 200㎍/㎖이 최적의 조건임을 보여 주는 것이다. COX-2의 발현량은 변화가 없는 것으로 보아 천마의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아니라 iNOS 경로(pathway)인 것으로 보여 진다.
Figure 3. Inhibitory effects of classified methanol extracts of Gastrodia elata Blume on the COX-2 and iNOS expression of human colorectal cancer cell lines.(0, 50, 100, 200㎍/㎖)
4. 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 인체 대장암
세포주에 미치는 영향 (열수 추출물에서 Western Blotting에 의한 iNOS 와 COX-2 발현량)
COX-2 및 iNOS 발현량을 측정하기 위하여, 실험군과 대조군을 나누 고, 대조군에서 house keeping gene인 β-actin (indicating non-interference in cellular mechanism) 을 측정하여, 실험군의 COX-2 및 iNOS 발현량과 비교 하였다. 도표 4와 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다. 이 결과는 천마 열수 추출물의 경우는 농도 의존성이 없는 것으로 보여 진다.
Figure 4. Inhibitory effects of classified hot water extracts of Gastrodia elata Blume on the COX-2 and iNOS expression of human colorectal cancer cell lines.(0, 50, 100, 200㎍/㎖)
Ⅳ. 고 찰
천마(Gastrodia elata Blume)는 난초과의 식물로서 덩이줄기 역시 천마라는 생약명으로 약용하는데 주로 항경련효과를 나타낸다. 마는 마 과의 식물로서 학명은 Dioscorea batatas이고 식물의 뿌리를 산약이라 는 생약명으로 약용하는데 주로 강장의 효과를 지니는 것으로 천마와 구 별된다.
천마의 자양강장제로서 성기능 개선에 효과로서, 천마는 근육과 뼈를 튼튼하게 하고, 장부를 튼튼하게 하며, 오래먹으면 자양강장제로서 기운 을 돋우고 체력을 증강시켜 준다. 만성피로나 신경쇠약에도 좋고, 허리 와 무릎이 약한 사람들에게도 좋은 효과를 내는 것으로 알려져 있다 .18)19)
또한 뇌출혈, 뇌졸중 등 뇌질환 계통의 질병에 효과로서,20) 천마는 뇌 출혈, 뇌졸중, 우울증, 치매 등 뇌혈관질환 계통의 질병에 효과가 뛰어 나, 천마는 예로부터 ‘기사회생(起死回生)’의 약초로, 중풍을 치료하는
‘정풍초’로, 두뇌의 질환에는 불가사의하다 할 만큼 효과가 뛰어난 것으 로 알려져 있다.21)
천마는 고혈압, 심장병 등 순환기 질환의 치료에 효과가 알려져 있어서, 천마는 고혈압, 고 콜레스테롤, 심장병 등 순환기 질환의 치료에 효과적 이며, 천마는 피를 맑게 하고, 어혈을 없애며, 콜레스테롤의 수치를 낮추 는 역할을 하여 고혈압이나 당뇨병 등 순환기 이상에 의한 질병들을 예 방해줄 뿐만 아니라 증상을 개선시켜 준다고 보고되고 있다.22)23)
또한 스트레스나 두통, 어지럼증에 효과로서, 천마는 스트레스 해소, 뇌
동맥 경화증이나 허약체질에 의한 어지럼증에 효과가 있으며, 담과 습에 의해 생기는 편두통 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.24)25)
천마는 마비, 손발저림 등 항 경련작용에 효과로서, 간질, 근육 경련, 손발저림, 마비, 반신마비, 통증완화 등에 효과가 있으며, 천마는 경련을 빠른 시간 안에 억제시키며, 특히 뇌신경 자극 증세로 인한 근육 경련에 효과가 있다. 또한 천마는 경락을 소통시켜 통증을 완화 시키며, 저림증 이나 마비, 운동장애의 치료를 돕는다고 보고되고 있다.26) 27)
또한 천마를 쪄서 말린 것은 설사 치료에 좋으며 생즙은 변비를 치료하 는데 제격이고, 열독과 옹종에 줄기와 잎을 찧어 붙이고 또 씨로 밥을 지어 먹으면 열기가 없어지기도 하며, 신경통에는 천마술이나 생즙을 먹 어 땀을 흠씬 내고 관절통에는 아픈 부위에 생즙을 붙이거나 술에 담가 우러난 천마를 갈아서 붙여도 된다. 어혈이나 멍이 든 곳에는 강판에 갈 아 붙이기도 한다.
천마의 성분은 무기질의 경우 다른 식품에 비해 칼슘, 마그네슘, 칼륨 의 함량이 높다. 반대로 인의 함량이 아주 적어 인산의 흡수로 체액이 산성으로 되는 것을 방지, 혈중 콜레스테롤 함량을 줄여주는 효과가 인 정되고 있다. 잘만 개발하면 필수 건강식품으로 이만한 것이 없을 정도 라고 한다. 일본에서는 주로 신경질환에 미치는 연구 및 성분 분리가 이 뤄지고 있으며 중국은 재배에서부터 약리 효능까지 다양한 연구가 이뤄 지고 있다. 28)29)
동의보감 탕액편에 모든 허(虛)와 어지러운 증세에 천마가 아니면 치료 하기 어렵다(非天麻不能治)고 기록되어 있으며, 특히 천마는 고혈압, 뇌 졸중(중풍), 심근경색, 당뇨, 고지혈증, 고콜레스테롤, 관절염, 두통, 이밖
에 혈액순환개선 근육과 뼈를 튼튼하게 하고 피를 맑게 하며, 어혈을 풀 어주고, 담과 습을 제거하고, 장부를 굳세게 하며 오래 먹으면 기운을 돋우고 체력을 늘리는 등의 효과가 알려져 있고, 또 천마는 뇌신경이나 혈관계통의 영약으로 동의보감 등 각종 의서에서 산삼에 버금가는 귀한 약초라 풀이하고 있다.30)
이러한 천마의 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)의 세포독성(Cytotoxicity)을 알아보기 위한 실험에서, 도표 1과 도표 2와 같이 각 농도에서 모두 미미한 암세포 성장 억제율을 보였다 는 것은, 천마의 메탄올 및 열수 추출물은 모든 농도와 시간에 대해 낮 은 의존성을 가진다고 보여 진다.31)
천마 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정 결과, 농도 200㎍/㎖에서 95% 이상의 억제효과를 보였다는 것은 천마 메탄올 추 출물의 경우는 농도 200㎍/㎖이 최적의 조건임을 보여 주는 것이며,32) COX-2의 발현량은 변화가 없는 것으로 보아 천마의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아니라 iNOS 경로인 것으로 보여 주며33) 이 는 천마 메탄올 추출물을 피부암 항암보조제로 사용할 경우 중요한 단서 로 작용될 수 있음을 시사한다.34)
한편 천마 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정 결과, 도 표 4와 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다는 것은 천마 열 수 추출물의 경우는 농도 의존성이 없는 것이므로 천마 추출물은 분자량 40,000 KDa 이상에서는 항암효과가 없는 것으로 보여 진다.
Ⅴ. 결 론
소재 천마을 가지고 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines) 실험에서 MTS assay 방식에 의해 세포 생존율을 측정하였고, Western Blotting 방식으로 iNOS 와 COX-2 발현량을 측정하였던바, 농도 200㎍/㎖에서 95% 이상의 iNOS 발현량 억제효과를 보였다. 이 결과는 천마 메탄올 추출물의 경우는 농도 200㎍/㎖이 iNOS 발현량 억 제의 최적의 조건임을 보여 주는 것이다.
1. 천마 메탄올 추출물은, 각 농도에서 모두 미미한 암세포 성장 억제율 을 보였다. 이 결과로 천마 메탄올 추출물은 농도와 시간에 대해 낮은 의존성을 가진다고 보여 진다.
2. 천마 열수 추출물의 경우, 각 농도에서 모두 미미한 암세포 성장 억 제율을 보였다. 이 결과로 천마 열수 추출물은 농도와 시간에 대해 낮은 의존성을 가진다고 보여 진다.
3. 천마 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 농도 200㎍/㎖에서 95% 이상의 억제효과를 보였다. 이 결과는 천마 메탄올 추출물의 경우는 농도 200㎍/㎖이 최적의 조건임을 보여 주는 것이다.
COX-2의 발현량은 변화가 없는 것으로 보아 천마의 항암기작은 COX-2 경로 (pathway)가 아니라 iNOS 경로(pathway)인 것으로 보여 진다.
4. 천마 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 모든 농 도에서 억제 효과를 보이지 않았다.. 이 결과는 천마 열수 추출물의 경 우는 농도 의존성이 없는 것으로 보여 진다.
Ⅵ. 참 고 문 헌
1) 마이클 로이젠, 유태우 역 : “내몸 사용설명서” 김영사, 2007, ISBN 8934923695, 348쪽
2) 이광호 : “인간과 기후 환경” 시그마프레스, 2004, ISBN 8958320370, 190쪽
3) Wölfle U, Esser PR, Simon-Haarhaus B, Martin SF, Lademann J, Schempp CM. : “UVB-induced DNA damage, generation of reactive oxygen species, and inflammation are effectively attenuated by the flavonoid luteolin in vitro and in vivo.” Free Radic Biol Med. 2011 May 1;50(9):1081-93.
4) Chiang HM, Lin JW, Hsiao PL, Tsai SY, Wen KC. :
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저작물 이용 허락서
학 과 대체의학과 학 번 20108635 과 정 석사과정
성 명 한글 : 이 기 복 한문 : 李 基 福 영문 : Lee Gi-bog
주 소 광주광역시 동구 광산동 77-6(2층)해맑은피부성형외과
연락처 E-MAIL : igb0818@hanmail.net
논문제목
한글 : 천마(Gastrodia elata Blume) 추출물이 피부암 세포주 (Human Cutaneous Cancer Cell Lines)에 미치는 영향
영어 : Effects of Gastrodia elata Blume Extracts on Cutaneous Cancer Cells
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동의여부 : 동의( ○ ) 반대( ) 2011년 11월 일
저작자: 이 기 복 (印)
