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2011년 8월 석사학위논문
토란 추출물이
인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향
Effects of
Colocasia esculenta L. schott
Extracts on Thyroid Cancer Cells조선대학교 보건대학원
대체의학과
조 기 숙
토란 추출물이
인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향
Effects of
Colocasia esculenta L. schott
(Taro) Extracts on Thyroid Cancer Cells2011년 8월
조선대학교 보건대학원
대체의학과
조 기 숙
토란 추출물이
인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향
지도교수 문 경 래
이 논문을 대체의학 석사학위 신청 논문을 제출함
2011년 4월
조선대학교 보건대학원
대체의학과
조 기 숙
조기숙의 석사학위 논문을 인준함
위원장 조선대학교 교수 서 재 홍 (인)
위 원 조선대학교 교수 박 상 학 (인)
위 원 조선대학교 교수 문 경 래 (인)
2011 년 5월
조선대학교 보건대학원
목 차
표 목차 ... 6
영문 초록 ... 7
Ⅰ. 서 론 ... 10
Ⅱ. 재료 및 연구 방법 A. 실험을 위한 재료 ... 12
B. 시 약 ... 12
C. 세포 배양 및 화학적 처리 ... 12
D. 시료 준비 ... 13
E. MTS 분석 ... 14
F. Western blot분석 ... 15
G. 통계 처리 ... 15
Ⅲ. 결 과 A. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율) ... 16
B. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향 (열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율) ... 17
C. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 Western Blotting에서 iNOS 및 COX-2 발현량) ... 18
D. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향 (열수 추출물에서 Western Blotting에서 iNOS 및 COX-2 발현량) ... 19
Ⅳ. 고 찰 ... 21
Ⅴ. 결 론 ... 23
표 목 차
Fig 1. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향
(메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)
... 16
Fig 2. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향 (열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율)
... 17
Fig 3. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향 (메탄올 추출물에서 Western Blotting에 의한
iNOS와 COX-2 발현량 측정)
... 18
Fig 4. 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향 (열수 추출물에서 Western Blotting에 의한
iNOS와 COX-2 발현량 측정)
... 19
ABSTRACT
Effects of Colocasia esculenta L.schott(Taro) Extracts on Thyroid Cancer Cells
Jo
Kee Sook
Advisor: Prof. Moon Kyung-Rye, M.D., Ph.D Department of Alternative Medicine
Graduate School of Health Science Chosun University
Objective : This study is on the effects of the anti-cancer activity of Colocasia esculenta L. schott extract in thyroid cancer cells.
Methods : MTS assay was used to detect the effects of Colocasia esculenta L. schott extracts on thyroid cancer cells viability. And Western Blotting was used to see the effects of Colocasia esculenta L. schott extracts on inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression.
Results : Methanol extracts of colocasia esculenta L. schott reduced
human thyroid cancer cells depending on time and concentration. Also it
reduced slightly cyclooxygenase-2 (COX-2) of 300 μg/ml concentration.
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MTS assay results,
1. Methanol extracts of Colocasia esculenta L. schott reduced thyroid cancer cells depending on time.
2. Methanol extracts of Colocasia esculenta L. schott reduced thyroid cancer cells depending concentration.
Cell survival rate decrease depending on time and concentration especially, it reduced slightly at 800 and 1000 μg/ml.
3. Hot water extracts of Colocasia esculenta L. schott do not reduced thyroid cancer cells depending on time.
4. Hot water extracts of Colocasia esculenta L. schott do not reduced thyroid cancer cells depending concentration.
Cell survival rate do not decrease depending on time and concentration especially.
Western blot results,
5. Methanol extracts of Colocasia esculenta L. schott reduced slightly inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) in 300μg/ml concentration.
6. Hot water extracts of Colocasia esculenta L. schott do not reduced
inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2)
expression in various concentrations.
Conclusion :
Methanol of colocasia esculenta L. schott has slightly implied that it was expected that isolation and purification test would bring out more various anti-cancer food effects.
Key words: Colocasia esculenta L. schott, thyroid cancer, MTS, iNOS,
COX-2
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Ⅰ. 서 론
갑상선은 인체대사에 절대적으로 필요한 갑상선호르몬을 만들고 저장하며 분비하는 곳이다. 뇌하수체에서는 갑상선자극호르몬이 분비되는데, 1)갑상선자극호르몬은 갑상선 기능의 기본 생리적 조절기이며 갑상선 세포에서 갑상선자극호르몬의 효과와 갑상선자 극호르몬 수용체의 활성화를 통해 중재된다. 갑상선은 칼슘농도를 조절하는 기능이 있 으며 생체대사 속도를 조절하여 신체 여러 기관의 기능에 영향을 미치는데 갑상선암은 위와 같은 기능을 하는 갑상선에서 생기는 종양으로 최근 들어 급격히 증가하고 있는 추 세이다. 또한 최근 일본대지진으로 발생한 원자력발전소 사고로 방사성원소들이 인체 에 유해한 암의 발생 특히 갑상선암과 관련하여 사람들의 많은 관심이 모아지고 있어 갑상선암에 관한 실험을 시행하였다.
갑상선암에 관한 연구 중 2)생체 내 단백질이 방사선 피폭에 의해 산화적 손상을 받 으며 지속적인 저선량 방사선에의 노출은 TSH 검사상 생체 내에 영향을 줄 수 있다는 결과의 연구가 있었으며 3)갑상선암 예방과 치료에 Flavonoid는 Thyroperoxidase의 활 동을 금하여 갑상선호르몬에 효과적이며 4)Melatonin ( N - acetyl - 5 - methoxytryptamine )은 항산화작용과 활성산소 제거작용이 있어 Melatonin이 갑상선 성장을 억제하고 갑상선 세포의 산화스트레스에 대해 항산화작용이 있다고 보고되어 실험을 한 결과 갑상선세포에서 세포독성을 억제하지 못하였고 4)시험관내 실험에서 갑상선세포는 유발된 산화스트레스에 대하여 비타민 A, C, D, E에 의해 보호효과를 나 타내었으나 오히려 고농도에서 비타민 A, D는 오히려 세포독성을 유발할 가능성이 있 어 항산화제의 섭취 시 주의를 기울여야한다는 선행연구도 있었다. 토란에 관한 연구 중 5)토란(Taro, the corns of Colocasia esculenta L. schott)은 이용가치가 매우 높 은 구황작물로 천남성과(Araceae)에 속하는 다년생 초본으로 전 세계적으로 식물체의 대부분 또는 구경(알뿌리)만을 식용 및 약용으로 이용하는 작물이며 5)세균이나 이물 질을 탐식, 제거하는 과정에서 여러 가지 Cytokine을 분비하여 면역현상을 조절하는 Macrophage는 항원에 대한 면역작용 역할을 하며 항원제시와 림프구의 비특이적 면역
작용에 관계하며 종양세포에 직접적인 상해활성을 나타내는 데 토란에는 이러한 세포 성 면역능의 활성화와 직접 관련이 있는 생체방어에 작용하는 면역기구를 활성화하는 기능이 있으며 5)토란 내 바이러스 감염세포나 암세포를 파괴시키는 자연 면역기능을 갖는 세포인 NK cell 자극활성에 의한 항암활성을 갖고 5)토란 내 Macrophage의 생산 자극에 의해 NK cell의 활성화를 유도, 강력한 항전이 효과를 나타낸다는 연구가 있었 으며 6)시험관내 실험에서 토란 추출물이 결장의 상피세포와 접촉하여 결장암의 위험 요인을 줄여주는 기능성식품으로 대장암에 효과가 있으며 7)토란잎의 Hydroalcoholic 추출물은 신경 약리학적으로 불안, 우울증, 수면유도시간에 효과가 있다. 또한 8)토란 줄기에 Anthocyanin 성분이 함유되어 있고 9)토란추출물은 요구르트보다 많은 박테리 아를 포함하고 있으며 10)토란 내에는 단백질, 아연, 칼슘, 칼륨, Anthocyanin 등이 들 어있고 11)토란추출물의 적혈구 응집소는 Interleukin, Interferon 등 종양괴사인자를 유도한다는 연구도 있었다. 12)토란잎의 나노구조는 식물의 자기정화기능을 가지고 있 어 세균의 오염을 줄이고 방지하는 효과가 있으며 13)토란 뿌리와 잎의 추출물은 시험 관내 실험에서 비장세포와 골수세포 증식을 강하게 자극하고 14)토란을 요리 후 수분함 유량, 단백질, 지질, 탄수화물 및 열량이 강화되었다는 연구 결과들을 토대로 갑상선 암에 대한 토란의 연구는 아직 확인 된바가 없어 토란 추출물을 활용하여 토란과 갑상 선암에 관한 실험을 실시하게 되었다.
본 연구에서는 인체 갑상선암 암세포주에 토란 천연추출물 두 종류인 열수추출물과 메탄올추출물을 처리하여 1. 암세포주 억제효과와 2. 암표적인자 발현억제능 (COX-2 or iNOS)을 확인하고자 한다.
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Ⅱ. 재료 및 연구 방법
1. 실험을 위한 재료
토란은 전라남도 화순군 일대에서 채취하여 수집된 것으로 광주광역시 남광주 시장에 서 국산토란을 구입하여 절편한 후 응달에서 충분히 건조한 상태에서 분말로 만들어 실험에 사용하였다.
2. 시 약
본 실험에 사용한 메탄올 시약은 1급 시약을 사용하였다. LPS, (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-caroboxymeh-oxyphenyl)-2H-tetra-zolium Inner Salt (MTS) 및 1% Penicillin과 Streptomycin 등은 Sigma사(USA)로부터 구입하였다.
더불어 10% FBS, 1% 항생제 (Gibco, USA), Minimum Essential Medium (MEM)과 Serum Free Media 등은 Gibco사(USA)의 시약을 구입하여 본 실험에 사용하였다.
3. 세포 배양 및 화학적 처리
갑상선암 세포주는 American Tissue Culture Collection (Manassas, VA)에서 구입하 여 본 실험에 사용하였다. 갑상선암 세포주는 5% Fetal Bovine Serum (FBS), 100 U/ml Penicillin 및 100 U/ml Streptomycin 등을 첨가한 DMEM으로 5% CO2의 상태에서 배양 하였다.
4. 시료 준비
1) 열수 추출
토란의 분말 100g과 증류수 1.3L를 이용하여 약탕기(대웅, DWP-5000M)에서 3시간 동 안 가열하여 열수 추출을 하였다. 추출이 끝나고 나면, 부직포 여과질을 이용하여 압 착 여과하였다. 여과된 추출물을 50ml 튜브로 나누어 담고 4,000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 여분의 분말 찌꺼기를 침전시켰다. 원심 분리 후 상층액 만을 두 겹의 여과지 (Whatman No.1)를 이용하여 감압여과 하였다. 감압여과 된 추출물을 회전증발농축기를 이 용하여 농축한 후, 동결건조기를 이용하여 동결 건조하였다. 동결건조가 끝난 후 곱게 분쇄하여 실험에 사용하도록 하였다.
2) 메탄올 추출
99% 메탄올 1L에 토란 분말 100g을 24시간 침지시켰다. 이 때 2 ~ 3 시간 단위로 교 반하여 시료가 골고루 섞이도록 하면서 추출물을 유도하였다. 추출 후 두 겹의 여과지 를 이용하여 감압 여과한 후 1차적인 메탄올 추출액을 만들었다. 여과된 추출액을 회 전증발농축기를 이용하여 감압 농축하였다. 이 때 Water Bath 의 온도를 35 ~ 37 ͦC를 유지하여 메탄올을 제거하며 농축하였다.
추출농축액을 Chloroform과 1:1의 비율로 혼합하여 강하게 Vortexing 한 후 4,000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 엽록소 및 여분의 잔여 미세 시료를 층 분리하였으며, 하층 의 Chloroform이 무색이 될 때까지 3회 이상 반복적으로 과정을 수행하였다.
원심분리를 통하여 엽록소를 완전히 제거한 후 상층액 만을 수거하여 회전 증발 농축 시켰다. 증발 농축 시킬 때 소량의 메탄올을 넣어 농축효율을 증대시켰다. 농축 추출 액을 동결 건조한 후 분쇄하여 실험에 사용하였다.
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또한 Ethyl acetate 처리를 위하여 상기 방법으로 동일하게 처리한 후 Chloroform 층 이 무색이 되면, 상층액 만을 새로운 튜브로 옮긴 후 Ethyl acetate와 1:1의 비율로 혼 합한 후 4,000 rpm에서 2분간 원심분리 하였다. 상층액 만을 새로운 용기로 옮겨 담고 원심분리 후 남겨진 하층부에 다시 Ethyl acetate를 처리하여 상기 방법으로 반복하여 상층부만을 기존에 옮겨 담은 용액이 있는 용기로 수합 하였다. 상기 과정을 총 3회 반복하여 Ethyl acetate를 이용한 폴리페놀화합물을 완전히 얻어내도록 하였다.
옮겨져서 수합된 상층부액을 회전 감압 농축기를 이용하여 감압농축하고 Ethyl acetate를 완전히 제거되고 얻어진 고체 화합물의 질량을 측정하여 DMSO를 이용 100 mg/ml이 되도록 희석하여 사용하도록 하였다.
5. MTS 분석
토란 추출물을 이용한 세포생존율(Cell Viability) 측정은 CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit (Promega, Madison, WI)로 제작사의 실험 매 뉴얼에 따라 측정하였다.
갑상선암 세포들은 96-Well Plate에 분주하고 토란 추출물의 농도별 처리 후에 72 시간 후에 시간 경과에 따른 세포생존율 반응을 조사하였다.
MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-20yl)-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H- tetrazolium) Solution을 첨가하여 ELISA Microplate Reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 490nm에서 흡광도와 변화를 측정하여 대조구에 대한 세포생존율 을 백분율로 표시하였다.
각 농도별로 약재가 갖는 흡광도를 보정하기 위하여 세포를 뺀 배지를 같이 배양하여 대조구와 실험구의 흡광도를 비교 보정하여 세포 생존율을 백분율로 표시하였다.
6. Western Blot 분석
토란 추출물은 처리한 후 갑상선암 세포들을 수확하고 분쇄하였다. 단백질 상등액 Fraction은 SDS-PAGE로 전기영동한 후 Membranes으로 옮기고 5% Skim Milk로 Blocking하였으며, Indicated Antibodies로 Hybridization 하였다. Horse Radish Peroxidase-conjugated Secondary Antibody 된 Protein Bands는 Chemiluminescence Detection Kit로 관찰 측정하였다.
7. 통계 처리
각각의 실험들은 3차례 반복 이상으로 실험 하였으며 실험결과는 평균값 ± 표준편차 로 계산하여 측정하였다. 실험결과의 통계분석은 Student's t-test를 이용했으며, p값이 0.05 이하인 경우에 실험결과가 통계적으로 유의한 것으로 판정하였다.
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Ⅲ. 결 과
1. 토란 메탄올 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율
인체 갑상선암 세포주의 세포독성을 알아보기 위하여, 토란 메탄올 추출물을 농도를 달리하여 0, 25, 50, 75, 100, 200, 400, 800, 1000㎍/㎖에서 처리 후 72시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다. Fig. 1과 같이 농도 400, 800, 1000㎍/㎖에서 처리 후 72시간 경과 후 각각 30%, 35%, 35%의 암세포 성장 억제율을 보였다. 이 결과로 토 란 메탄올 추출물은 고농도에서 세포항암활성을 미미하게 가진다고 보여 진다.
< Fig.1 > Effect of methanol extracts of Taro on the viability of human thyroid cancer cells. The cells were incubated for 72hours with medium according to the concentration(0, 25, 50, 75, 100, 200, 400, 800, 1000 ㎍/㎖) of Taro. The cell viability was estimated by MTS assay.
2. 토란 열수 추출물에서 MTS assay에 의한 세포생존율
인체 갑상선암 세포주의 세포독성을 알아보기 위하여, 토란 열수 추출물을 농도를 달리하여 0, 25, 50, 75, 100, 200, 400, 800, 1000㎍/㎖에서 처리 후 72시간 경과한 다음 암세포 생존율을 측정하였다. Fig. 2와 같이 농도 400과 800, 1000㎍/㎖에서 그 억제율은 20%, 20%, 20%의 암세포 성장 억제율로 이 결과로 토란 열수 추출물은 농도와 시간의 의존성을 가지지 않는다고 보여 진다.
< Fig. 2 > Effects of hot water extracts of Taro on the cell viability of human thyroid cancer cells after cultivation with Taro hot water extracts of 72hours.
The cells were incubated for 72hours with medium of Taro. The cell viability was determined by MTS assay.
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3. 토란 메탄올 추출물에서 Western Blotting의한 iNOS 와 COX-2 발현량
COX-2 및 iNOS 발현량을 측정하기 위하여, 실험군과 대조군을 나누고, 대조군에서 House Keeping Gene인 β-actin (Indicating Non-interference In Cellular Mechanism)을 측정하여, 실험군의 COX-2 및 iNOS 발현량과 비교하였다. Fig. 3과 같이 토 란 메탄올 추출물에서 48시간 경과한 다음 농도 150, 300, 600㎍/㎖에서 17%, 23%, 22%의 세포생존율을 보이며 밴드가 보이지 않을 정도의 유의적인 억제효과를 보이지 않았으나 억제경향을 보이는 것으로 추가실험이 필요할 것으로 보여 진다.
< Fig. 3 > Inhibitory effects of Taro on COX-2 expression and iNOS expression(methanol extracts) in Taro human thyroid cancer cells. The cells were pre-treated for 48hours with either phosphate-buffered saline or Taro at incubated concentrations. Actin was probed to determine of the loading protein extracts form each treatment.
4. 토란 열수 추출물에서 Western Blotting의한 iNOS 와 COX-2 발현량
COX-2 및 iNOS 발현량을 측정하기 위하여, 실험군과 대조군을 나누고, 대조군에서 House Keeping Gene인 β-actin (Indicating Non-interference In Cellular Mechanism)을 측정하여, 실험군의 iNOS 및 COX-2 발현량과 비교 하였다. Fig. 4와 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다. 이 결과는 토란 열수 추출물의 경우는 농 도 의존성이 없는 것으로 보여 진다.
< Fig. 4 > Effects of Taro on COX-2 expression and iNOS expression(hot water) in human thyroid cancer cells. The cells were pretreated for 48hours with either phosphate buffered saline or Taro at indicated concentrations and then
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이러한 토란의 인체 갑상선암 세포주의 세포독성을 알아보기 위한 실험에서, Fig. 1 과 같이 토란 메탄올 추출물 농도 400㎍/㎖과 800㎍/㎖에서 처리 후 72시간 경과 후 각각 20%와 30%의 암세포 성장 억제율을 보였다. 이 결과로 토란 메탄올 추출물은 고 농도에서 세포항암활성을 미미하게 가진다고 보여 진다.
토란 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정 결과, 토란 메탄올 추출물에서 48시간 경과한 다음 농도 150, 300, 600㎍/㎖에서 17%, 23%, 22%의 세포 생존율을 보 이며 밴드가 보이지 않을 정도의 유의적인 억제효과를 보이지 않았으나 억제경향을 보 이는 것으로 추가실험이 필요할 것으로 보여 진다.
한편 토란 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정 결과, Fig. 4와 같이 모든 농도에서 억제 효과를 보이지 않았다는 것은 토란 열수 추출물의 경우는 농도 의존성 이 없는 것이므로 항암효과가 없는 것으로 보여 진다.
Ⅳ. 고 찰
토란에 관한 연구 중 5)토란(Taro, the corns of Colocasia esculenta L. schott)은 이용가치가 매우 높은 구황작물로 천남성과(Araceae)에 속하는 다년생 초본으로 전 세 계적으로 식물체의 대부분 또는 구경(알뿌리)만을 식용 및 약용으로 이용하는 작물이 며 5)세균이나 이물질을 탐식, 제거하는 과정에서 여러 가지 Cytokine을 분비하여 면 역현상을 조절하는 Macrophage는 항원에 대한 면역작용 역할을 하며 항원제시와 림프 구의 비특이적 면역작용에 관계하며 종양세포에 직접적인 상해활성을 나타내는 데 토 란에는 이러한 세포성 면역능의 활성화와 직접 관련이 있는 생체방어에 작용하는 면역 기구를 활성화하는 기능이 있으며 5)토란 내 바이러스 감염세포나 암세포를 파괴시키 는 자연 면역기능을 갖는 세포인 NK cell 자극활성에 의한 항암활성을 갖고 5)토란 내 Macrophage의 생산자극에 의해 NK cell의 활성화를 유도, 강력한 항전이 효과를 나타 낸다는 연구가 있었으며 6)시험관내 실험에서 토란 추출물이 결장의 상피세포와 접촉 하여 결장암의 위험요인을 줄여주는 기능성식품으로 대장암에 효과가 있으며 7)토란잎 의 Hydroalcoholic 추출물은 신경 약리학적으로 불안, 우울증, 수면유도시간에 효과가 있다. 또한 8)토란 줄기에 Anthocyanin 성분이 함유되어 있고 9)토란추출물은 요구르트 보다 많은 박테리아를 포함하고 있으며 10)토란 내에는 단백질, 아연, 칼슘, 칼륨, Anthocyanin 등이 들어있고 11)토란추출물의 적혈구 응집소는 Interleukin, Interferon 등 종양괴사인자를 유도한다는 연구도 있었다. 12)토란잎의 나노구조는 식물의 자기정 화기능을 가지고 있어 세균의 오염을 줄이고 방지하는 효과가 있으며 13)토란 뿌리와 잎의 추출물은 시험관내 실험에서 비장세포와 골수세포 증식을 강하게 자극하고 14)토 란을 요리 후 수분함유량, 단백질, 지질, 탄수화물 및 열량이 강화되었다는 연구 결과 들이 있었다.
이러한 연구 성과에 비추어 토란 추출물이 갑상선암 세포주에 항암효과를 기대하여
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50, 75, 100, 200, 400, 800, 1000㎍/㎖에서 처리 후 72시간 경과 후 고농도인 400, 800, 1000㎍/㎖에서 각각 30%, 35%, 35%의 암세포 성장 억제율을 보였으며 토란 메탄 올 추출물은 고농도에서 세포항암활성을 미미하게 가진다고 보여 지며 토란 열수 추출 물의 경우, 농도 0, 25, 50, 75, 100, 200, 400, 800, 1000㎍/㎖에서 처리 후 72시간 경과 후 고농도인 400, 800, 1000㎍/㎖에서 그 억제율은 20%, 20%, 20%의 암세포 성장 억제율로 이 결과로 토란 열수 추출물은 농도와 시간의 의존성을 가지지 않는다고 보여 진다. 토란 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 실험군과 대조군을 나 누고, 대조군에서 House Keeping Gene인 β-actin (Indicating Non-interference In Cellular Mechanism)을 측정하여, 실험군의 COX-2 및 iNOS 발현량과 비교하여 토란 메탄 올 추출물에서 48시간 경과한 다음 농도 150, 300, 600㎍/㎖에서 17%, 23%, 22%의 세 포생존율을 보이며 밴드가 보이지 않을 정도의 유의적인 억제효과를 보이지 않았으나 억제경향을 보이는 것으로 추가실험이 필요할 것으로 보여 진다. 토란 열수 추출물에 서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 모든 농도에서 억제효과를 보이지 않았으므로 토란 열수 추출물의 경우는 항암효과가 없는 것으로 보여 진다. 토란추출물이 인체 갑 상선암 세포주에 미치는 영향으로 MTS분석에 의한 메탄올 추출물검사결과상 고농도에 서 세포항암활성이 미미하나 토란추출물은 Anthocyanin, Interleukin, Interferon 성 분 등을 함유하고 있어 항산화작용, 항암작용, 혈중콜레스테롤 감소 등 의학적 성분을 가지고 있어 토란추출물을 유리화하고 정제한다면 화학적 예방을 위한 갑상선암에 더 높은 항암식품의 효과를 기대할 수 있을 것이다.
Ⅴ. 결 론
소재 토란을 가지고 인체 갑상선암 세포주 실험에서 MTS assay 방식에 의해 세포 생 존율을 측정 시 토란 메탄올 추출물에서 미미한 암세포 성장 억제율이 측정되었으며 Western Blotting 방식으로 COX-2와 iNOS 발현량을 측정하였던바, 토란 메탄올 추출물 에서 밴드가 보이지 않을 정도의 유의적인 억제효과를 보이지 않았으나 억제경향을 보 이는 것으로 추가실험이 필요할 것으로 보여 진다.
1. 토란 메탄올 추출물의 경우, 농도 0, 25, 50, 75, 100, 200, 400, 800, 1000㎍/㎖
에서 처리 후 72시간 경과 후 고농도인 400, 800, 1000㎍/㎖에서 각각 30%, 35%, 35%
의 암세포 성장 억제율을 보였다. 이 결과로 토란 메탄올 추출물은 고농도에서 세포항 암활성을 미미하게 가진다고 보여 진다.
2. 토란 열수 추출물의 경우, 농도 0, 25, 50, 75, 100, 200, 400, 800, 1000㎍/㎖에 서 처리 후 72시간 경과 후 고농도인 400, 800, 1000㎍/㎖에서 그 억제율은 20%, 20%, 20%의 암세포 성장 억제율로 이 결과로 토란 열수 추출물은 농도와 시간의 의존성을 가 지지 않는다고 보여 진다.
3. 토란 메탄올 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 실험군과 대조군을 나누 고, 대조군에서 House Keeping Gene인 β-actin (Indicating Non-interference In Cellular Mechanism)을 측정하여, 실험군의 COX-2 및 iNOS 발현량과 비교하여 토란 메탄 올 추출물에서 48시간 경과한 다음 농도 150, 300, 600㎍/㎖에서 17%, 23%, 22%의 세 포생존율을 보이며 밴드가 보이지 않을 정도의 유의적인 억제효과를 보이지 않았으나 억제경향을 보이는 것으로 추가실험이 필요할 것으로 보여 진다.
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4. 토란 열수 추출물에서 COX-2 및 iNOS 발현량 측정의 경우, 모든 농도에서 억제효과 를 보이지 않았으므로 토란 열수 추출물의 경우는 항암효과가 없는 것으로 보여 진다.
토란추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향으로 MTS분석에 의한 메탄올 추출물 검사결과상 고농도에서 세포항암활성이 미미하나 토란추출물은 Anthocyanin, Interleukin, Interferon 성분 등을 함유하고 있어 항산화작용, 항암작용, 혈중콜레 스테롤 감소 등 의학적 성분을 가지고 있어 토란추출물을 유리화하고 정제한다면 화학 적 예방을 위한 갑상선암에 더 높은 항암식품의 효과를 기대할 수 있을 것이다.
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저작물 이용 허락서
학 과 대체의학과 학 번 20088640 과 정 석사과정
성 명 한글 : 조 기 숙 한문 : 趙 起 熟 영문 : Jo Kee Sook 주 소 광주광역시 동구 학동 615-14
연락처 E-MAIL : goolbee73@hanmail.net (010-6654-4050)
논문제목
한글 : 토란 추출물이 인체 갑상선암 세포주에 미치는 영향
영어 : Effect of Colocasia esculenta L. schott Extacts on Thyroid Cancer Cells
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2011년 8월 일
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