An Experimental Study on Artificial Infection of Olive Flounder Paralichthys olivaceus by Streptococcus parauberis Using Different Injection Sites

한수지 53(4), 628-636, 2020

628

Copyright © 2020 The Korean Society of Fisheries and Aquatic Science pISSN:0374-8111, eISSN:2287-8815

Korean J Fish Aquat Sci 53(4),628-636,2020

Original Article

서 론

넙치

(Paralichthys olivaceus)

는국내 대표적인양식어류 중

하나로

1980

년대넙치종묘생산기술이도입된이후로꾸준하

게생산량이증가하였으며

, 2019

^{년에는넙치양식생산량이약}

41,032

톤으로

,

국내에서가장많이생산되고있는양식품종중

에하나이다

(KOSIS, 2019).

하지만

,

넙치는양식과정중발생 하는다양한바이러스나기생충

,

세균성질병으로인하여폐사 가지속적으로발생하고있으며

,

이로인해국내넙치양식산 업에큰피해를입히고있다

.

^특히

,

^최근

2015

^{년국내의넙치}

양식장이밀집된전남과제주의넙치전체폐사의

9.76%

가연

쇄구균병으로인해서발생하였으며

,

그이후로피해가감소하 고있으나연쇄구균병의검출률은오히려증가하고있다

(Shim

et al., 2019).

이러한피해를최소화하고자국내양식장에서는

연쇄구균병의치료를위해서세균성질병의치료목적으로사 용되는

amoxicillin, florfenicol, oxytetracycline

^{의지속적인사}

용으로인해서항생제에대한내성이높은편이며

(Heo et al.,

2001; Jeong et al., 2006; Jee et al., 2014),

이로인한항생제 남용으로발생하는환경문제나내성균치료에대한어려움으 로인해다른대안으로포르말린으로사균화시킨불활화백신

(Nam et al., 2014)

^{과면역보조제}

(Bennett et al., 1992),

^어류의 면역관련유전자를클로닝해서발현시키는재조합백신

(Kwon

넙치(Paralichthys olivaceus)의 Streptococcus parauberis 인위감염을 위한 공격실험 방법에 관한 연구

김태호·이남실·최혜승·정승희·한현자*

국립수산과학원 병리연구과

An Experimental Study on Artificial Infection of Olive Flounder Paralichthys olivaceus by Streptococcus parauberis Using Different Injection Sites

Tae-Ho Kim, Nam-Sil Lee, Hye-Sung Choi, Sung-Hee Jung and Hyun-Ja Han*

Pathology Division, National Institute of Fisheries Science, Busan 46083, Korea

Streptococcosis in the olive flounder Paralichthys olivaceus can be caused by Streptococcus parauberis . We com- pared three routes of administration for experimental injections of the S. parauberis 19FBSPa0003 strain in the olive flounder. Pathological changes were observed during the experimental infection. Inflammation of the serous mem- brane in the liver, intestine, spleen and heart was the major pathological change found in the infected olive flounder.

No mortality was observed in fish that received intraperitoneal (IP) injection at less than 1×10

⁴

colony-forming unit (CFU)/fish. The lethal dose 50 for olive flounder, given an intravenous (IV) injection, was 7.94×10

⁴

CFU/fish. Fish with a higher concentration of IV injected S. parauberis (1×10

⁸

CFU/fish) died within a maximum of two days. However, serious necrosis and bacterial proliferation in ellipsoidal cells of the spleen and heart tissues were found in moribund or dead fish, 1-2 days after IV injection. Similar histopathological signs were observed in olive flounder inoculated by subcutaneous (SC) infected and naturally infected. In addition, SC was also strongly associated with bacteria concen- tration and cumulative mortality rate. Based on these results, SC is the recommended method for artificial infection by S. parauberis in the olive flounder.

Keywords: Olive flounder, Paralichthys olivaceus , Streptococcus parauberis , Subcutaneous injection, Artificial infection

*Corresponding author: Tel: +82. 51. 720. 2474 Fax: +82. 51. 720. 2498 E-mail address: [email protected]

This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial Licens (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/) which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.

Received 2 March 2020; Revised 26 March 2020; Accepted 18 June 2020

저자 직위: 김태호(연구원), 이남실(연구원), 최혜승(연구관), 정승희(연구관), 한현자(연구사)

https://doi.org/10.5657/KFAS.2020.0628

Korean J Fish Aquat Sci 53(4), 628-636, August 2020

넙치의 S. parauberis 인위감염 실험

629

et al., 2015)

^{에관한다양한연구가진행되고있다}

.

^{어류에서발} 생하는연쇄상구균병은

1957

년일본의무지개송어

(Oncorhyn- chus mykiss)

^{에서처음으로보고되었다}

(Hoshina, 1958).

주로 수온이높은고수온기인

7

월에서

9

월사이

30 cm

이상의성어 에서많이발생한다고보고되지만

(Heo et al., 2002; Meyburgh et al., 2017),

^{해수의수온이떨어지기시작하는저수온기인가}

을철에도발병률이유지되는경향을보이기도한다

(Cho et al.,

2007).

연쇄구균병의 주 원인균으로는

Streptococcus parau- beris, Streptococcus iniae

및

Lactococcus garvieae

가있다고 알려져있으며

(Eldar et al., 1996; Baeck et al., 2006),

연쇄구균 에감염된병어의병리학적증상은

S. iniae

^{는복부팽만}

,

^복수저 류증상

,

탈장이관찰되며

, S. parauberis

^{는체색흑화}

,

무안측발 적증상

,

피부궤양

,

지느러미출혈

,

안구돌출과충혈

,

안구백탁 및탈장등의외부증상이나타나며

, L. garvieae

는내부장기출 혈

,

전안구염

,

염증반응에의한섬유증식증

,

급성뇌수막염등의 증상이나타난다고보고된다

(Eldar and Ghittino, 1999; Chang et al., 2002; Jeong et al., 2006; Kang et al., 2007; Meyburgh et al., 2017).

연쇄구균속에속하는

S. parauberis

는운동성이없는그람양 성구균이며

1993

년에터봇

(Schophtalmus maximus)

^에서발생 이보고되었으며

(Domeenech et al., 1996),

^{연쇄구균중에서불} 완전용혈

(alpha-hemolytic agent)

을일으키고조건혐기성환경 에서자랄수있는특징이있다

(Toranzo et al., 1994; Nho et al., 2009, 2011).

또한

,

세포표면에두꺼운

capsule layer

를가지고 있어서숙주세포의식작용에대한저항성을보이기때문에항 원성이강한편이다

(Yoshida et al., 1997). Kanai et al. (2009)

는

S. parauberis

^{를토끼의항혈청을사용해서}

serotype I

과

II

의

2

가지혈청형으로구분하였으며

,

최근에는기존에

2

가지혈청 형으로구분할수없었던

S. parauberis

를

serotype III

으로추 가분류함으로써혈청형에관한활발한연구도진행되고있다

(Yolanda et al., 2019).

본연구는넙치에서질병을일으키는

S. parauberis

^를세가 지다른주사접종부위로인위감염시킨후

2

주동안넙치의생 존율을알아보았으며

, S. parauberis

에감염된넙치의병리조직 학적검경을통하여적절한인위감염실험방법을모색하였다

.

재료 및 방법

실험어 및 실험균주

본연구에서사용한넙치

(Paralichthys olivaceus)

^는평균길 이

18.1±0.9 cm,

^평균체중

53.7±8.6 g

^{으로거제지역 넙치} 양식장에서구입하였고실험전

3

주동안순치시켰다

.

실험어 의건강상태를확인하기위해서실험전감염성질병

(

바이러스

,

세균

,

기생충

)

에대한검사를실시하여질병이없는것을확인 한후실험에사용하였다

.

본연구에사용할넙치의비장과신장 조직의일부를떼어내어

1.5% sodium chloride

^가포함된

brain

heart infusion (BHI) (Difco Laboratories, Detroit, MU, USA)

와

thiosulfate citrate bile salt sucrose (TCBS) (Difco Labora- tories, Detroit, MI, USA)

평판배지에

25°C

에서

24

시간배양 하였으며

,

넙치의조직에서

genomic DNA

와

RNA

를추출해 서

viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), viral nervous necrosis virus (VNNV)

^및

red sea bream iridovirus (RSIV)

의존재여부를

Seo et al. (2016)

의실험방법으로확인하였다

.

증폭된

PCR product

는

1.5% (w/v) agarose gel

상에서확인하 였으며반응조건은

100 V

에서

30

분간전기영동을하였다

.

그 리고

,

넙치의표피층을긁어서멸균한

PBS (phosphate buffer

saline) 0.1mL

^{과섞어서슬라이드글라스위에올려놓은후광}

학현미경

(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)

으로기생충유무 를확인하였다

(data not shown).

실험어는총

288

마리를

24

개 의수조

(250 L)

에동일하게분배하였다

.

사육수는

UltraAqua (Monoray, Aalborg, Denmark)

로

UV

처리해서시간당약

200 L

^{해수를공급하였다}

.

^{사육수온은}

25.3±0.2°C

^{였고넙치상업} 용사료를

1

일

2

회먹이로공급하였다

.

실험에사용된 균주는

2016

년 제주지역에서

S. parauberis

에 감염된넙치로부터 순수분리하여국립수산과학원병리연 구과균주은행에서보관중이던

S. parauberis 19FBSPa0003 serotype Ib

^{균주를사용하였으며}

,

^{혈청형조사는}

Kanai et al.

(2009)

의방법으로수행하였다

. 병원성 시험

S. parauberis 19FBSPa0003

균주를

1.5% sodium chloride

가포함된

brain heart infusion agar (BHIA) (Difco Laborato- ries, Detroit, MI, USA)

^에

25°C

^조건에서

24

^{시간배양하였으} 며

, PBS (Invitrogen, USA)

에희석하여

1×10

²

-1×10

⁸

CFU/

fish

로접종할균액의농도를조정해서넙치

1

마리당

0.1 mL

로 접종하였다

.

인위감염실험에사용한균액은

4,000 rpm

에서

30

분간

4°C

조건에서 원심분리

(LaboGene, Lynge, Denmark)

해 서상등액을버린후

, PBS

^에

3

^{회세척하여사용하였다}

.

^넙치에 접종한균액의농도는

S. parauberis

^를

1×10

¹⁰

cells/mL

까지배 양하였으며단계희석법으로넙치에접종할균액의농도를조정 하였다

.

정확한균접종농도를확인하기위하여인위감염실험 에사용한균액을

plate dilution method

로희석하여

BHI

평판

배지에

25°C

^조건에서

24

^{시간배양해서생균수를확인하였다}

.

실험구는

S. parauberis

^{균주를각농도별로}

3

가지접종방법 인 복강주사

(intraperitoneal injection, IP; Fig. 1a),

경피주사

(subcutaneous injection, SC; Fig. 1b),

정맥주사

(intravenous

injection, IV; Fig. 1c)

로

12

마리씩접종하였으며

, 14

일간하루 에

2

^{번실험어의외부임상증상과폐사어의외부및내부임상} 증상을확인하였다

.

또한

,

공격접종

10

일후각실험구당

2

마 리를대상으로살아있는실험어의간

,

장

,

비장및심장조직을

sampling

하였으며

,

공격접종

14

일후에는각실험구별로실험 어의생존율을산출하였다

.

폐사어와인위감염실험종료후살

김태호

ㆍ

이남실

ㆍ

최혜승

ㆍ

정승희

ㆍ

한현자

630

아있는실험어와대조구의비장및신장내부장기조직을분리

하여

BHI

평판배지에균을배양하였으며

,

인위감염에의한조

직내세균의존재여부를확인하였다

. S. parauberis

^균주를접 종한실험구와비교하기위한대조구는실험구와같은접종부 위인복강

,

경피및꼬리정맥에넙치

1

마리당멸균한

PBS 0.1 mL

을접종하였다

.

반수치사농도(LD

₅₀

)

세가지접종방법의병원성을비교하기위해

S. parauberis

를넙치에접종

14

일후실험구별로폐사한넙치의수를카운

팅하여반수가치사되는균액의농도를확인하였다

. LD

₅₀^값은

Finney

의

probit analysis program

을사용해서계산하였으며

, Finney’s table

의

probits

퍼센트값을참고하였다

(Randhawa, 2009).

병리조직학적 관찰

폐사어및

S. parauberis

^접종

10

^{일후살아있는실험어의간}

,

장

,

비장및심장조직의일부를떼어내어

10% neutral buffered formalin (Globe Scientific, Mahwah, NJ, USA)

용액에조직을 전고정하였다

. 18-24

시간고정된간

,

장

,

비장및심장조직의일 부를각각세절하여

10% neutral buffered formalin

용액에재 고정하였으며

,

^수세

,

^탈수

,

^{투명화및파라핀침투의순차적과정} 을거쳐

paraffin block

을제작하였다

.

조직표본제작을위해완 성된

paraffin block

을

microtome (RM 2235, LEICA, Wetzlar, Germany)

으로 박절

(4 μm thickness)

하고 슬라이드글라스에 부착시켜

45-50°C

의

hot plate

에서하룻밤건조후

, hematoxy- lin and eosin (H&E)

^{염색하여봉입제로봉입및건조과정을} 거쳐 보관하였다

.

조직표본의 관찰은광학현미경

(Carl Zeiss,

Oberkochen, Germany)

을사용하였으며관찰한실험구와대

조구의조직은

ZEN 2.3 lite software

를이용하여저장하였다

.

S. parauberis

^{에 인위감염된 넙치와 자연감염된 넙치의 병}

리조직상을 비교하기 위해 본 인위감염실험에서 고농도인

1×10

⁸

CFU/fish

로

IV

접종해서

2

일이내에빈사상태에이른 넙치의조직표본과

2017

년거제지역에서

S. parauberis

^에자연 감염되어중증도의감염을나타내면서폐사에이른넙치성어

(

평균체중

1.59±0.5 kg)

에서채취한비장과심장조직표본및

각접종방법별로

1×10

⁷

CFU/fish

^{농도로접종해서살아있는} 실험어의조직표본을사용하였다

.

결 과

접종방법에 따른 병원성

인위감염을통한감염실험에사용한

S. parauberis

^균액의농 도를

plate dilution method

로확인한결과실제접종한균액의 농도는

1×10

²

-1×10

⁸

CFU/fish

였다

. PBS

를접종한대조구는 실험기간동안폐사가발생하지않았으며

,

분리한비장및신 장조직은어떠한종류의세균도자라지않았다

.

^{실험중폐사} 한실험어와공격실험종료후살아있는실험어의비장및신 장조직에서

S. parauberis

^가자랐다

.

실험구는

S. parauberis

^균 주를

1×10

⁸

CFU/fish

농도로접종하였을때실험어의생존율 이가장낮았으며

(IP, 50%; SC, 10%; IV, 0%),

접종하는균의 농도가낮아질수록생존율이높아지는경향을보였다

. IP

^접종 한실험구는다른실험구들에비해서상대적으로높은생존율 을보이며

7

일간폐사가발생하지않았다

. S. parauberis

^균주

IP

접종

14

일후고농도인

1×10

⁸

CFU/fish

에서

50%

의누적폐사 율을보였으며

1×10

⁷

CFU/fish

와

1×10

⁶

CFU/fish

농도에서 Fig. 1. Different inoculation sites of olive flounder Paralichthys

olivaceus. A, Intraperitoneal (IP) injection; B, Subcutaneous (SC) injection; C, Intravenous (IV) injection; Scale bar, 1 cm.

(a)

(b)

(c)

IS IS

IS P

IS

P

IS

P

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

넙치의 S. parauberis 인위감염 실험

631

40%

의누적폐사율을보였다

.

또한

, 1×10

⁵

CFU/fish

농도에서

30%

의누적폐사율을보였으며

1×10

⁴

CFU/fish

이하의접종농

도에서폐사어가발생하지않았다

(Fig. 2a). SC

^{접종한실험구}

는고농도인

1×10

⁸

CFU/fish

에서

2

일간폐사가발생하지않았 으며접종

14

일후

90%

의누적폐사율을보였다

. 1×10

⁷

CFU/

fish

농도는

50%

의누적폐사율을보였다

. 1×10

⁶

CFU/fish

농 도와

1×10

⁵

CFU/fish

농도에서

40%

의누적폐사율을보였으 며

, 1×10

⁴

CFU/fish

^농도와

1×10

³

CFU/fish

^및

1×10

²

CFU/

fish

농도에서는

30%

의누적폐사율을보였다

(Fig. 2b). IV

접종 한실험구는고농도인

1×10

⁸

CFU/fish

로접종을하였을때

, 1

일후

80%

가폐사하였으며접종후

2

일째에

100%

의누적폐사 율을보였다

. 1×10

⁷

CFU/fish

농도로접종하였을때

70%

의누 적폐사율을보였으며

1×10

⁶

CFU/fish

^와

1×10

³

CFU/fish

^농 도에서는

40%

의누적폐사율을보였다

. 1×10

⁵

CFU/fish

농도 에서는

50%

의누적폐사율을보였다

. 1×10

⁴

CFU/fish

농도에 서는

20%

의폐사율

, 1×10

²

CFU/fish

농도에서는

10%

의폐사 율을보였다

(Fig. 2c).

반수치사농도(LD

₅₀

)

각 접종방법별로 실험구의 반수치사농도

(LD

₅₀

)

는

IP

는

2×10

⁸

CFU/fish

^이고

SC

^는

3.16×10

⁵

CFU/fish

^였으며

IV

^의

LD

₅₀은

7.94×10

⁴

CFU/fish

였다

. IV

와

SC

는

IP

에비해서상대 적으로병원성이강하게나타났다

.

병리조직학적 분석

PBS

를접종한대조구의조직표본은병원체감염에의한조 직괴사나 염증반응이관찰되지않았다

(Fig. 3). S. parauberis

를

1×10

⁷

CFU/fish

농도로접종한실험구조직표본에서세균 Fig. 2. Survival rates of olive flounder Paralichthys olivaceus in-

oculated with Streptococcus parauberis 19FBSPa0003 serotype Ib strain. A, Intraperitoneal (IP) injection; B, , Subcutaneous (SC) injection; C, Intravenous (IV) injection.

Fig. 3. Non-disease olive flounder Paralichthys olivaceus after 10 days injected with PBS. A, liver; B, intestine; C, spleen; D, heart;

Staining, hematoxylin and eosin staining (H&E); PBS, phosphate buffer saline.

(a)

(b)

(c)

IS IS

IS P

IS

P

IS

P

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

김태호

ㆍ

이남실

ㆍ

최혜승

ㆍ

정승희

ㆍ

한현자

632

성병원체의감염에의한부분적조직괴사와세포변성이모든 장기의조직표본에서관찰되었으며

,

특히간

,

소화관

,

비장과 심장을감싸거나연결하는장막에서염증반응이주로관찰되 었다

(Fig. 4, 5, 6). IV

접종과

SC

접종한실험어소화관의점막 고유층

(lamina propria)

에서염증성세포의침윤이뚜렷하게관 찰되었다

(Fig. 5b, 6b).

^또한

, 2017

^{년거제지역}

S. parauberis

^자

연감염어의심장조직에서심막염이확인되었고

(Fig. 7b),

^비장 조직에서는협조직

(ellipsoid)

주위로림프성세포의침윤을제 외하고특이적인세포변성은없었다

(Fig. 7a).

또한

,

고농도의 Fig. 4. Experimentally infected olive flounder Paralichthys oli-

vaceus after 10 days inoculated with Streptococcus parauberis (1×10⁷ CFU/fish) using intraperitoneal (IP) injection method. A, liver; B, intestine; C, spleen; D, heart; IS, inflammation of serous membrane; P, pericarditis; Staining, hematoxylin and eosin stain- ing (H&E).

(a)

(b)

(c)

IS IS

IS P

IS

P

IS

P

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

Fig. 5. Experimentally infected olive flounder Paralichthys oli- vaceus after 10 days inoculated with Streptococcus parauberis (1×10⁷ CFU/fish) using intravenous (IV) injection method. A, liver; B, intestine; C, spleen; D, heart; IS, inflammation of serous membrane; Circle, inflammation of lamina propria; P, pericarditis;

Staining, hematoxylin and eosin staining (H&E).

(a)

(b)

(c)

IS IS

IS P

IS

P

IS

P

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

Fig. 6. Experimentally infected olive flounder Paralichthys oliva- ceus after 10 days injection with Streptococcus parauberis(1×10⁷ CFU/fish) using subcutaneous (SC) injection method. A, liver; B, intestine; C, spleen; D, heart; IS, inflammation of serous mem- brane; Circle, inflammation of lamina propria; P, pericarditis;

Staining, hematoxylin and eosin staining (H&E).

(a)

(b)

(c)

IS IS

IS P

IS

P

IS

P

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

Fig. 7. Spleen and heart of dead olive flounder Paralichthys oliva- ceus infected with Streptococcus parauberis. A, Naturally infected spleen; B, Naturally infected heart; C, Experimentally infected spleen after 2 days injection with S. parauberis (1×10⁸ CFU/fish) using intravenous (IV) injection method (circles; cells in hyaline degeneration, arrows; cells in vacuolar degeneration); D, Experi- mentally infected heart after 2 days injection with S. parauberis (1×10⁸ CFU/fish) using IV injection method (circle; congestion);

P, pericarditis; Staining, hematoxylin and eosin staining (H&E).

(a)

(b)

(c)

IS IS

IS P

IS

P

IS

P

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

a b

c d

넙치의 S. parauberis 인위감염 실험

633

IV

^접종방법

(1×10

⁸

CFU/fish)

^{으로접종후}

2

^{일이내에빈사} 상태에이른실험어의비장조직은세포변성에따른유리질변 성

(hyaline degeneration)

과액포변성

(vacuolar degeneration)

이관찰되었으며

(Fig. 7c),

심장조직에서는조직전반에울혈

(congestion),

심근의 위축

(atrophy)

과 괴사가 나타났다

(Fig.

7d).

고 찰

본연구는일반적으로사용하는

3

^{가지주사접종부위로넙치} 의복강

,

경피

,

꼬리정맥에

S. parauberis

^{를접종하여}

(Lee et al.,

2007),

생존율과병리조직검경을통해넙치에인위감염실험으

로가장적합한주사방법을모색하였다

. S. parauberis

를주사 접종후살아있는병어의외부증상은눈에띄게체색흑화및복 부팽만현상을보였으며

,

^폐사어는

Kim et al. (2006)

^의보고와 같이안구와가슴지느러미

,

입주변에서출혈이보였으며다른 뚜렸한외부증상은나타나지않았다

.

또한

,

감염된병어의내 부증상은비장종대

,

간퇴색및비대

,

심장과신장에서염증이 관찰되었다

(Domeenech et al., 1996).

대조구의넙치는폐사가 발생하지않았으며

SC

^와

IP

^{접종한실험구는}

Lee et al. (2007)

의보고와같이점진적으로폐사가발생하였다

.

반면에

,

고농도

(1×10

⁸

CFU/fish)

의

S. parauberis

^를

IV

접종한실험구는접종

후

2

일이내에

100%

의누적폐사율을보이는급성폐사가발생

하였다

.

이는일반적으로어류에서세균성병원체로인한자연 적인초기감염이점진적으로폐사가발생한다는보고와상반되 는결과로볼수있다

(Yanong and Francis-Floyd, 2002).

본연 구에서

IV

접종방법은

S. parauberis

^를

1×10

⁸

CFU/fish

농도로 넙치에접종을하였을때급성폐사를일으켰기때문에

,

고농도 인

1×10

⁸

CFU/fish

을접종한넙치의조직표본을비교하는것 은자연감염경로를통해감염된넙치의조직표본과비교하는 것은적합하지않다고판단된다

. S. parauberis

^{를인위적인접} 종방법에따른넙치조직표본의비교및분석은

1×10

⁷

CFU/

fish

농도로접종

10

일후살아있는실험어의병리조직을사용

하였다

.

그리고

,

자연감염어의조직샘플은

S. parauberis

^에자연 감염된살아있는넙치표본을구하는데어려움이있어서중증도 의감염증상을보이며폐사에이른넙치의조직표본을사용하 였으며

,

이와비교하기위해

IV

접종방법으로

1×10

⁸

CFU/fish

농도에서중증도의감염증상을보이며빈사상태에이른넙치 의조직표본을사용하였다

.

세 가지 주사방법 모두

S. parauberis

^{를 고농도인}

1×10

⁸

CFU/fish

로접종하였을때가장생존율이낮았으며

,

접종하는

병원체의농도가낮아질수록생존율이높아지는경향을보였 다

(Fig. 2). SC

로주사했을때

, Mori et al. (2010)

에서보고한 다소낮은농도인

1×10

⁴

CFU/fish

에서

100%, 1×10

³

CFU/

fish

^농도에서

80%, 1×10

²

CFU/fish

^농도에서

60%

^의높은폐 사율을나타낸다고하였으나

,

본연구결과는

1×10

⁴

CFU/fish

농도와

1×10

³

CFU/fish

및

1×10

²

CFU/fish

농도에서 상대

적으로낮은

30%

^{의폐사율을보인것과는상반된결과를보} 였다

(Fig. 2b). IP

로주사했을때

, 1×10

⁸

CFU/fish

농도에서의 폐사율은

50%

를보였으며

, 1×10

⁷

CFU/fish

농도에서

30%

의 폐사율

, 1×10

⁶

CFU/fish

농도에서

40%

의폐사율이나타났다

(Fig. 2a). Won et al. (2010)

에서보고한

1×10

⁸

CFU/fish

농도 에서

70%

^의폐사율

, 1×10

⁷

CFU/fish

^농도에서

20%

^의폐사율 을보인것과는차이가있었으나

, Han et al. (2011)

에서보고한

1×10

⁸

CFU/fish 50%

의폐사율과

1×10

⁷

CFU/fish

과

1×10

⁶

CFU/fish

에서

30%

의폐사율을보인

S. parauberis S1735

균주 와거의비슷한폐사율을보였다

.

본실험에서

IV

로넙치에접 종했을때

1×10

⁴

CFU/fish

^{농도에서는}

20%

^{의다소낮은폐} 사율을보였으나

Mori et al. (2010)

의

3.2×10

⁴

CFU/fish

농도 에서

85%

의높은폐사율을보인것과는차이가있었다

.

이러한 차이는어류에서병원성질병을일으키는다양한요인들로써 숙주생물체의면역시스템과병원체와의상호작용및환경적인 부분을생각했을때

,

^{실험어의길이나체중및실험조건이다}

르기때문에단순한방법으로비교할수없었다

(Yanong and

Francis-Floyd, 2002). Fortier et al. (1991)

은사람의야토병의 병원균인

Francisella tularensis

를

BALB/c (bagg albino strain

C mice)

마우스에다양한방법으로주사접종하여비교하였다

.

복강주사후낮은농도인

1×10

²

CFU/mouse

^에서도

7

^일이내 에

100%

의폐사율

,

정맥주사후

1×10

⁶

CFU/mouse

농도에 서

100%

폐사율

,

피내주사

(intradermal injection)

후

1×10

⁶

CFU/mouse

농도에서도폐사가발생하지않았다

.

하지만

,

본 연구에서넙치의복강에접종하였을때상대적으로낮은폐사 율을나타내었고

,

^{정맥및경피에접종하였을때상대적으로높} 은폐사율을보인것과차이가있었다

.

또한

, BALB/c

마우스의 비장과간조직에서심각한괴사반점과염증이나타났고심장 조직에서는병원체침입에의한조직변이가나타나지않았다 고하였으며

,

본연구에서넙치의심장조직에심각한조직괴사 와염증이보인것과는차이가있었다

.

^{이는숙주와병원체의종} 류및인위감염시주사접종부위에따라폐사율이다르게나타 나고

,

병원체의전이양상또한다르게일어날수있다는것으로 도볼수있다

.

이러한경향은

S. parauberis

에감염된넙치의병 리학적특성을연구하는데있어서일반적으로동물임상실험 중면역유전학분야연구에주로사용하는

BALB/c

^{마우스와는} 다른관점으로접근해야된다는것을시사한다

.

S. parauberis

^{는어류뿐만아니라소의유방염의원인체로도} 알려져있으며

, S. uberis

유전형

type II

에속한다

(Woo et al., 2006). King (1981)

에따르면소의유방조직이외의다른조직

에서는

S. uberis

^{가보균상태로존재하지만병증을나타내지는}

않았다

. Mori et al. (2010)

의연구는넙치의등지느러미와배지 느러미에

SC

접종하였을때

,

접종한부위의근육조직보다주변 피하결합조직및지방조직에서강한염증성세포의침윤이관 찰된다고하였다

.

이러한염증은숙주에서연쇄구균이감염된 병변부위에서나타난다

.

^{연쇄구균이가지고있는균체외독소}