A Study on the Antioxidant Effectiveness of the Extracts from Superheated Steaming Torrefied Wood

(1)

과열증기처리 반탄화 추출물의 항산화 효과 검증에 관한 연구

오근혜·남정빈·양승민·정원희·정진산·신종민·강석구

^† 접수일(2017년 11월 17일), 수정일(2018년 3월 8일), 채택일(2018년 3월 16일)

A Study on the Antioxidant Effectiveness of the Extracts from Superheated Steaming Torrefied Wood

Geun Hye Oh, Jeong Bin Nam, Seung Min Yang, Won Hee Joung, Jin San Jeong, Jong Min Shin and Seog Goo Kang

^†

Received November 17, 2017; Received in revised form March 8, 2018; Accepted March 16, 2018

ABSTRACT

The antioxidant properties of the extracts from torrefied wood subjected to superheated steam treatment were investigated. Total polyphenolics, total flavonoids, DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) free radical scavenging activity, reducing power, and FRAP (Ferric reducing antioxidant power) were determined to evaluate antioxidant activity. The total polyphenol content was 879.67±40.41 mg/mL at a concentration of 25 g/mL when the extract was subjected to a temperature of 300°C for 10 min, and 759.67±25.17 mg/mL at a concentration of 25 g/mL at 350°C for 10 min. The value of at 300°C was 15.79%

higher than that obtained at 350°C. Total flavonoid content was 111.18±3.55 mg/mL at a concentration of 25 g/mL at 300°C for 10 min, and 80.58±2.58 mg/mL at a concentration of 25 g/mL at 350°C for 10 min. The value at 300°C was 37.97% higher than that obtained at 350°C. For the DPPH free radical scavenging activity, the highest scavenging activity was observed at a concentration of 6 g/mL. DPPH free radical scavenging activity at a concentration of 6 g/mL at 300°C for 10 min was 89.83±0.03%, whereas at 350°C for 10 min at the same concentration, it was found to be 87.99±0.1%. The value at 300°C was 2.09% higher than that obtained at 350°C. Reducing power was determined to be 3.59±

0.04 at a concentration of 25 g/mL at 300°C for 10 min, and 2.92±0.1 at a concentration of 25 g/mL at 350°C for 10 min. The value at 300°C was 22.94% higher than that obtained at 350°C. FRAP was 1742±37 μM at a concentration of 25 g/mL at 300°C for 10 min, and 1106±8 μM at a at 350°C for 10 min. At 300°C, the FRAP value was 57.50% higher than that obtained at 350°C. Based on these results, we suggest that torrefied wood treated

• 충남대학교 농업생명과학대학 환경소재공학과(Department of Biobased Materials, College of Agriculture and Life Science, Chungnam National University, Daejeon, 34134, Republic of Korea)

† 교신저자(Corresponding Author): E-mail: [email protected]

Printed in Korea http://dx.doi.org/10.7584/JKTAPPI.2018.04.50.2.5

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1. 서 론

반탄화(torrefaction)란 이산화탄소, 물, 유기산과 같 이 발열량을 낮추는 반탄화 가스를 200~300°C의 온도 범위에서 노출시켜 산소를 제거한 공정을 말하며,

¹⁾

이러 한 공정을 목재에 적용시킨 것을 반탄화 목재라고 한다.

반탄화는 목질계 바이오매스의 열적 전처리 방법 중의 하나로 탄화에서 발생하는 원료의 손실을 개선시키기 위 해 연구되고 있으며, 반응 온도 및 반응 시간의 변화에 따른 반탄화 생성물의 특성이 평가되고 있다. 주로 이용 되는 목재 반탄화 방법으로는 일정량의 목재를 Kiln 내 적재한 후 장시간 동안 건조 및 고온처리를 하여 회수하 는 건식방법과 과열증기를 이용한 digester를 이용한 방 법 등이 있으며 이를 통해 목질원료 내 탄소함량을 증가 시켜 여러 특성을 부여하고 있다.

산화적 스트레스와 그로 인해 유발되는 질병 및 예방과 치료를 위한 항산화 활성의 측정은 매우 중요하다. 항산 화능 측정에 가장 보편적으로 이용되는 방법은 총 폴리 페놀 함량 및 DPPH 라디칼 소거 활성 측정이 있다. 폴리 페놀 화합물은 flavonoids, anthoxyanins, tannins, catechins, isoflavones, lignans, resveratrols 등을 총 칭하며, 식물계에 널리 분포되어 있다.

^2,3)

폴리페놀에 존 재하는 다수의 히드록실기(-OH)는 여러 화합물과 쉽게 결합하는 특성을 가지고 있어 항산화 효과 및 항암 효과 가 뛰어나다.

^4,5)

플라보노이드는 폴리페놀에 속하는 성분 으로, 플라보노이드의 C6-C3-C6를 기본 골격으로 하 며 노란색 내지는 담황색을 나타내는 페놀계 화합물의 총칭으로 자연계에 널리 분포하고 있다. 플라보노이드는 활성산소종을 효과적으로 제거하여 항산화능이 높다고 알려져 있으며 폴리페놀과 마찬가지로 항바이러스, 항염 증, 항암효과가 있는 것으로 알려져 있다.

^6-9)

한편 DPPH 는 분자 내 radical을 함유하고 있어서 토코페롤, 아스코

르빈산, polyhydroxy 방향족 화합물 및 방향족 아민류 에 의해 환원시 radical이 소거되어 짙은 자색이 탈색되 는데, 이 정도를 항산화 물질의 전자공여능으로 측정하 는 방법이 DPPH assay법이다.

¹⁰⁾

이때 DPPH 분자의 움 직임은 hydroxyl radical과 유사하여 free radical 소거 실험에 활용 된다.

¹¹⁾

이러한 DPPH에 의한 항산화 활성 측정법은 항산화 물질의 전자공여능으로 인하여 방향족 화합물과 아민류 등이 환원되는 것을 지표로 하여 항산 화 활성을 측정하는 유용한 방법이다.

¹²⁾

Ahajji 등

¹³⁾

의 연 구에 따르면 열처리 한 반탄화 목재는 페놀 함량, 페녹시 라디칼 농도 및 항산화 작용을 증가시키며, 이러한 증가 는 페놀 기능의 수소 공여 능력으로 리그닌 및 목재 추출 물에 대해서 반탄화 목재가 항산화 기능을 가지고 있다 고 밝힌 바 있다. 또한, 반탄화 목재에는 리그닌에서 유 래된 vanillin, syringaldehyde, acetosyringone 및 총 페놀성분과 특유의 냄새성분으로 sinapaldehyde, ace- tic acid 등의 성분을 포함하고 있으며, 이 중 vanillin, syringaldehyde, acetosyringone의 성분은 항산화 성 분으로 알려져 있다.

¹⁴⁾

따라서 본 연구에서는 반탄화 목분 추출물의 항산화 활 성을 검증하기 위하여, 열처리온도를 달리하여 과열증기 처리를 한 반탄화 목분 추출물의 항산화 효과 및 항산화 활성을 평가하여 그 이용성을 증대시키고자한다.

2. 재료 및 방법

2.1 공시재료

과열증기처리는 과열증기처리장치를 이용해 300°C 이 상의 고온 증기로 반탄화 분말을 만드는 목재의 부가가 치 향상을 위하여 연구되고 있는 열처리 방법으로,

¹⁵⁾

본 실험에 사용된 재료는 구미소재의 S사에서 과열증기처

with superheated steam can be used in various applications because of its effective antioxidant properties.

Keywords: Torrefied wood, superheated steam treatment, antioxidant activity, total polyphenol content, DPPH free radical scavenging activity

(3)

리가공을 거친 반탄화 칩을 사용하였다. 분양받은 반탄 화 칩의 수종은 굴참나무(Quercus variabilis Blume)이 며, 반탄화 추출물의 항산화 특성을 조사하기 위하여 처 리시간은 10분으로 처리온도는 300°C와 350°C로 실험구 를 설정하여 과열증기처리한 반탄화 칩을 사용하였다.

2.2 실험방법

2.2.1 시료의 제조

각 조건별 시료는 분쇄기(WB-1, Wonder Blender, Japan)로 분쇄한 다음 분쇄한 시료 25 g에 증류수 100 mL를 가하여 24시간 동안 상온 추출하였으며, 추출물은 여과지(chm. F1001 filter paper)로 여과하여 1.5, 3, 6, 12, 25 g/mL로 희석하고 이 여과액을 냉장보관 하면서 실험에 사용하였다.

2.2.2 총 폴리페놀 함량 측정

총 폴리페놀 함량 측정은 Folin-Denis법

¹⁶⁾

을 응용하여 측정하였다. 각 시료 추출물 1 mL에 1 N Folin-Ciocal- teu reagent(Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA) 1 mL를 혼합하고, 20% sodium carbonate 1 mL 를 첨가하고 실온의 암소에서 1시간 반응 시킨 후 UV- vis spectrophotometer(HS-3300, Humas, Korea)를 이용하여 725 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 폴리페 놀 함량은 gallic acid를 이용하였으며 표준 검량 곡선 (y=0.0001x+0.0067, R

²

=0.9739)으로부터 총 폴리페 놀 함량을 계산하였다.

2.2.3 총 플라보노이드 함량 측정

총 플라보노이드 함량 측정은 Davis법

¹⁷⁾

을 변형한 방법 에 따라 시료 추출물 1 mL에 diethylene glycol 10 mL를 첨가하고, 1 N NaOH 1 mL를 가한 다음 37°C 항온수조 에서 1시간 동안 방치한 후 UV-vis spectrophotometer (HS-3300)를 이용하여 420 nm에서 흡광도를 측정하였 다. 총 플라보노이드 함량 측정은 Quercetin을 이용하였 으며 표준 검량 곡선(y=0.0022x+0.0334, R

²

=0.9618) 으로부터 총 플라보노이드 함량을 계산하였다.

2.2.4 DPPH 라디칼 소거 활성 측정

DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼에 대한 소거 활성은 Blois의 방법

¹⁸⁾

을 본 실험에 맞게 변형 하여 측정하였다. 각 시료 추출물 1 mL에 0.15 mM

DPPH(Sigma-Aldrich Co.) 4 mL를 첨가하여 혼합한 후 실온에서 30분간 반응시킨 다음 UV-vis spectro- photometer(HS-3300)를 이용하여 517 nm에서 흡광 도를 측정하였다. DPPH 라디칼 소거능은 다음 식으로 나타내었다.

DPPH radical

소거능(%) = control, abs-sample, abs control, abs ×100

2.2.5 환원력 측정

환원력은 potassium ferricyanide법

¹⁹⁾

을 본 실험에 맞 게 변형하여 측정하였다. 각 시료 추출물 0.5 mL에 0.2 M sodium phosphate buffer(pH 6.6) 2.5 mL와 1%

potassium ferricyanide 2.5 mL를 혼합한 후 50°C 항 온수조에서 20분 동안 반응시켰다. 반응 후 10% tri- chloroacetic acid(TCA) 2.5 mL를 첨가하고, 이 혼합액 을 1,790 rpm에서 10분간 원심분리하였다. 원심분리하 여 얻은 상층액 2.5 mL에 증류수 2.5 mL와 1% ferric chloride 0.5 mL를 혼합한 다음 UV-vis spectropho- tometer(HS-3300)를 이용하여 700 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 측정한 흡광도의 값으로 환원력을 나타내 었다.

2.2.6 FRAP 측정

FRAP(ferric reducing antioxidant power)는 Benzie 와 Strain의 방법

²⁰⁾

을 본 실험에 맞게 변형하여 측정하였 다. FRAP reagent는 300 mM acetate buffer(pH 3.6) 300 mL와 40 mM hydrochloric acid에 용해한 10 mM TPTZ(2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine)(Sigma- Aldrich Co.) 30 mL와 20 mM ferric chloride 30 mL 첨가하여 제조하였다. 각 시료 추출물 0.3 mL에 제조된 FRAP reagent 6 mL를 혼합하여 37°C 항온수조에서 5 분간 반응시킨 후에 UV-vis spectrophotometer(HS- 3300)를 이용하여 593 nm에서 흡광도를 측정하였다.

FRAP 함량은 Trolox를 이용하였으며 표준 검량 곡선 (y=0.0015x+0.073, R

²

=0.9956)으로부터 총 FRAP 함 량을 계산하였다.

2.3 통계 처리

모든 실험은 3회 반복 실시하였으며, 실험 결과는

SPSS(ver. 24.0, SPSS Inc., USA)를 이용하여 일원배

(4)

치 분산분석(One-way ANOVA)을 실시하였다. 각 측정 평균값의 유의성(P<0.05)은 Duncan’s multiple range test로 검정하였다.

3. 결과 및 고찰

3.1 총 폴리페놀 함량 변화

총 폴리페놀 함량 변화는 시료에 함유되어 있는 폴리페 놀의 화합물의 양을 측정함으로써 항산화능을 예측할 수 있는 방법이다. 반탄화 추출물에 함유된 페놀성 화합물 의 함량을 조사하기 위하여 Folin-Denis법을 응용하여 측정실험을 진행하였다. 300°C-10분과 350°C-10분의 반탄화 추출물을 1.5, 3, 6, 12, 25 g/mL로 희석하여 농 도별 함량을 조사한 결과는 Fig. 1과 같다. 300°C와 350°C 두 조건의 총 폴리페놀 함량은 농도 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다. 300°C-10분 조건의 25 g/

mL 농도의 추출물이 879.67±40.41 mg/mL로 가장 높 은 값을 나타냈으며, 350°C-10분 조건의 25 g/mL 농도 의 추출물은 759.67±25.17 mg/mL를 나타내었다.

300°C 조건의 값은 350°C 조건의 값에 비해 15.79% 더 많은 함량을 나타내었다.

3.2 총 플라보노이드 함량 변화

반탄화 추출물에 함유된 총 플라보노이드 함량 변화를 조사하기 위하여 Davis법을 응용하여 측정실험을 진행

하였다. 1.5~25 g/mL 농도에서 총 플라보노이드 함량 변화를 측정한 결과는 Fig. 2와 같다. 총 폴리페놀 함량 변화와 같은 경향으로 300°C-10분의 25 g/mL의 농도 에서 111.18±3.55 mg/mL로 가장 높은 값을 나타냈으 며, 350°C-10분의 25 g/mL의 농도에서는 80.58±2.58 mg/mL의 값으로 300°C 조건의 값이 350°C 조건의 값 보다 37.97% 더 많은 함량을 나타냈다. 총 플라보노이드 함량 변화의 경우도 총 폴리페놀 함량 변화와 같이 농도 의존적으로 증가하였다.

3.3 DPPH 라디칼 소거 활성 변화

DPPH 라디칼은 식물이나 식품 추출물 또는 단일 화합 물의 항산화능을 측정하기 위해 사용되는 방법으로 빠르 고 간단하게 이용할 수 있는 측정법이다.

²¹⁾

DPPH는 라 디칼을 갖는 물질 중에서 비교적 안정한 화합물로 짙은 보라색으로 발색되며, 항산화 활성을 갖는 물질을 만나 면 항산화 활성 물질이 DPPH의 라디칼을 소거시켜 탈색 되는 점을 이용하여 측정하는 방법이다.

²²⁾

농도별 반탄화 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성을 나 타낸 결과는 Fig. 3과 같다. 300°C-10분의 경우 1.5~25 g/mL 농도 전체에서 높은 수치의 DPPH 라디칼 소거율 로 최저 83.47±1.10%, 최고 89.83±0.03%의 높은 소 거율을 나타냈다. 반면에 350°C-10분의 경우 농도별 차 이가 나타났는데 6, 12, 25 g/mL 농도에서는 300°C 조 건의 값과 유사하게 값을 나타냈으며, 저농도인 1.5, 3 g/mL 농도에서는 낮은 수치의 DPPH 라디칼 소거율을

Fig. 1. Content of total polyphenol content in torrefied wood (All values are expressed as mean±SD (n=3). Means with differ- ent letters (a-g) above the bars are significantly different by Duncan’s multiple range test (P<0.05)).

Fig. 2. Content of total flavonoid content in

torrefied wood (All values are expressed

as mean±SD (n=3). Means with dif-

ferent letters (a-h) above the bars are

significantly different by Duncan’s

multiple range test (P<0.05)).

(5)

나타냈다. 저농도의 1.5, 3 g/mL 농도 값에서는 각각 30.29±1.57%와 76.08±1.65%를 나타냈으며, 가장 높 은 값의 농도를 가지는 6 g/mL에서는 87.99±0.1%를 나타냈다. 반탄화 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성을 검증한 결과, 300°C-10분에서는 농도별 전체적으로 유 사한 값을 가졌으며 350°C-10분에서는 저농도와 고농도 의 값이 차이를 나타냈다. 두 가지 조건에서 가장 우수한 소거율을 나타낸 농도는 동일하게 6 g/mL 로 300°C 조 건의 경우 89.83±0.03%이며 350°C 조건의 경우 87.99

±0.1%로 300°C 조건의 경우가 350°C 조건의 경우보다 2.09% 증가된 소거율을 나타냈다.

3.4 환원력 변화

환원력은 항산화 활성과 밀접한 관련이 있는 항산화능 측정법이며 항산화 활성은 환원력에 의한 free radical 소거능으로 나타내어진다.

²³⁾

항산화 물질의 환원제는 수 소 원자를 제공하여 free radical chain reaction을 중단 시킴으로써 환원력을 제공하며

²⁴⁾

식물 추출물에서 나타 나는 환원력은 항산화 활성과 밀접한 관계를 나타낸다.

²⁵⁾

농도별 반탄화 추출물의 환원력을 나타낸 결과는 Fig. 4 와 같다. 환원력의 결과 또한 총 폴리페놀 및 총 플라보노 이드 함량 결과와 같이 농도 의존적으로 증가하는 것으로 300°C-10분 조건의 추출물이 350°C-10분 조건의 추출 물보다 높은 수치를 가지는 경향을 나타냈다. 300°C-10 분의 추출물의 경우 최저 0.47±0.04, 최고 3.59±0.04 를 나타냈으며, 350°C-10분의 추출물의 경우 최저 0.25

±0.02, 최고 2.92±0.1을 나타냈다. 300°C-10분의 가 장 높은 값은 3.59±0.04로 350°C-10분의 가장 높은 값 인 2.92±0.1보다 22.94% 증가된 환원력을 나타냈다.

3.5 FRAP 변화

FRAP는 대부분의 항산화제가 환원력을 가지고 있다는 점에 착안하여 고안된 분석방법으로 낮은 pH에서 환원 제에 의해 ferric tripyridyltriazine(Fe

³⁺

-TPTZ) 복합 체가 ferrous tripyridyltriazine(Fe

²⁺

-TPTZ)으로 환원 되는 원리를 이용한 것이다.

²⁶⁾

농도별 반탄화 추출물의 FRAP 측정 결과는 Fig. 5와 같다. FRAP 또한 농도 의존적으로 증가하는 것으로 결 Fig. 3. DPPH radical scavenger activity in tor-

refied wood (All values are expressed as mean±SD (n=3). Means with different letters (a-d) above the bars are sig- nificantly different by Duncan’s multi- ple range test (P<0.05)).

Fig. 5. FRAP value in torrefied wood (All val- ues are expressed as mean±SD (n=3).

Means with different letters (a-h) above the bars are significantly differ- ent by Duncan’s multiple range test (P<0.05)).

Fig. 4. Reducing power activity in torrefied wood (All values are expressed as mean

±SD (n=3). Means with different let-

ters (a-f) above the bars are signifi-

cantly different by Duncan’s multiple

range test (P<0.05)).

(6)

과를 나타냈다. 300°C-10분 추출물의 경우 최저 129±6 μM, 최고 1742±37 μM을 나타냈으며, 350°C-10분의 추출물의 경우 최저 84±18 μM, 최고 1,106±8 μM을 나 타냈다. 300°C-10분의 가장 높은 값은 최고 1,742±37 μM로 350°C-10분의 가장 높은 값인 1,106±8 μM보다 57.50% 증가된 FRAP를 나타냈다.

4. 결 론

본 연구에서는 항산화 성분을 함유하고 있는 반탄화 목 분을 사용하여 그 추출물의 항산화 효과를 검증하고자 하 였다. 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량, DPPH 라디칼 소거 활성, 환원력, FRAP를 측정하여 다음과 같 은 결론을 얻었다.

총 폴리페놀 함량을 측정한 결과, 300°C와 350°C 두 조 건의 총 폴리페놀 함량은 농도 의존적으로 증가하는 것으 로 나타났다. 300°C-10분 조건의 25 g/mL 농도에서 879.67±40.41 mg/mL로 가장 높은 값을 나타냈으며, 350°C-10분 조건의 25 g/mL 농도에서 759.67±25.17 mg/mL를 나타내었다. 300°C 조건의 값은 350°C 조건의 값에 비해 15.79% 더 많은 함량을 나타냈다. 총 플라보노 이드 함량을 측정한 결과, 총 폴리페놀 함량과 같은 경향 으로 300°C-10분의 25 g/mL의 농도에서 111.18±3.55 mg/mL로 가장 높은 값을 나타냈으며, 350°C-10분의 25 g/mL의 농도에서는 80.58±2.58 mg/mL의 값으로 300°C 조건의 값이 350°C 조건의 값보다 37.97% 더 많 은 함량을 나타냈다. DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl- hydrazyl) 라디칼 소거 활성을 측정한 결과, 300°C-10 분에서는 농도별 전체적으로 유사한 값을 가졌으며 350°C-10분에서는 저농도와 고농도의 값이 차이를 나타 냈다. 두 가지 조건에서 가장 우수한 소거율을 나타낸 농 도는 동일하게 6 g/mL로 300°C 조건의 경우 89.83±

0.03%이며 350°C 조건의 경우 87.99±0.1%로 300°C 조 건의 경우가 350°C 조건의 경우보다 2.09% 증가된 소거 율을 나타냈다. 환원력을 측정한 결과, 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량 결과와 같이 농도 의존적으로 증가하 는 것으로 나타났다. 300°C-10분의 가장 높은 값은 3.59

±0.04로 350°C-10분의 가장 높은 값인 2.92±0.1보다 22.94% 증가된 환원력을 나타냈다. FRAP를 측정한 결 과, 또한 농도 의존적으로 증가하는 것으로 결과를 나타

냈다. 300°C-10분의 가장 높은 값은 최고 1,742±37 μM 로 350°C-10분의 가장 높은 값인 1,106±8 μM보다 57.50% 증가된 FRAP를 나타냈다.

결론적으로 처리온도 300°C와 350°C 조건의 과열증기 처리가공을 거친 반탄화 추출물에서 두 조건 모두 농도 의존적으로 항산화 활성이 증가함을 알 수 있었으며, 300°C의 조건에서 350°C보다 높은 항산화 활성의 결과 를 나타내었다. 이러한 항산화 활성이 측정된 과열증기 처리가공의 반탄화는 향후 다양한 용도 및 효과적인 소 재로 적용 가능할 것으로 사료된다.

사 사

이 연구는 충남대학교 학술연구비에 의해 지원되었음.

Literature Cited

1. Ohm, T. I., Chae, J. S., Kim, J. K., Choi, S.

A., and Oh, S. C., Study on the characteristics of bio-mass according to various process of torrefaction, Kosco Symposium, pp. 375-378 (2014).

2. Urquiaga, I. N. E. S. and LEIGHTON, F., Plant polyphenol antioxidants and oxidative stress, Biological Research 33(2):55-64 (2000).

3. Dai, J. and Mumper, R. J., Plant phenolics:

extraction, analysis and their antioxidant and anticancer properties, Molecules 15(10):7313- 7352 (2010).

4. Lu, Y. and Foo, L. Y., Antioxidant and radical scavenging activities of polyphenols from ap- ple pomace, Food Chemistry 68(1):81-85 (2000).

5. Cha, J. Y., Kim, H. J., Chung, C. H., and Cho, Y. S., Antioxidative activities and contents of polyphenolic compound of Cudrania tricuspi- data, Journal of Korean Society of Food Sci- ence and Nutrition 28(6):1310-1315 (1999).

6. Tsao, R., Chemistry and biochemistry of di-

(7)

etary polyphenols, Nutrients 2(12):1231-1246 (2010).

7. Heim, K. E., Tagliaferro, A. R., and Bobilya, D. J., Flavonoid antioxidants: chemistry, me- tabolism and structure-activity relationships, Journal of Nutritional Biochemistry 13(10):

572-584 (2002).

8. Williams, R. J., Spencer, J. P., and Rice-Ev- ans, C., Flavonoids: antioxidants or signalling molecules? Free Radical Biology & Medicine 36(7):838-849 (2004).

9. Kim, E. J., Choi, J. Y., Yu, M. R., Kim, M. Y., Lee, S. H., and Lee, B. H., Total polyphenols, total flavonoid contents, and antioxidant ac- tivity of Korean natural and medicinal plants, Korean Journal of Food Science and Technol- ogy 44(3):337-342 (2012).

10. Kang, M. H., Choi, C. S., Kim, Z. S., Chung, H. K., Min, K. S., Park, C. G., and Park, H.

W, Antioxidative Activities of Ethanol Extract Prepared from Leaves, Seed, Branch and Ae- rial Part of Crotalaria sessiflora L., Korean Journal of Food Science and Technology 34(6):

1098-1102 (2002).

11. Cho, S. Y., Han, Y. B., and Shin, K. H., Screening for antioxidant activity of edible plants, Korean Journal of Food Science and Technolog, 30(1):133-137 (2000).

12. Yang, Y. J., Kim, H. J., Kang, S. H., and Kang, S. C., Screening of natural herb re- sources for anti-oxidative effects in Korea, Korean J. Plant Res, 24(1):1-9 (2011).

13. Ahajji, A., Diouf, P. N., Aloui, F., Elbakali, I., Perrin, D., Merlin, A., and George, B., Influ- ence of heat treatment on antioxidant proper- ties and colour stability of beech and spruce wood and their extractives, Wood Sci. Technol.

43:69-83 (2009).

14. Asamarai, A. M., Addis, P. B., Epley, R. J., and Krick, T. P., Wild rice hull antioxidants, J.

Agric. Food Chem. 44:126-130 (1996).

15. Park, Y. G., Eom, C. D., Park, J. H., Chang, Y. S., Kim, K. M., Kang, C. W., and Yeo, H.

Y., Evaluation of physical properties of Korean Pine (Pinus koraiensis Siebold & Zucc) lumber heat-treated by superheated steam, Korean J.

Wood Sci. Technol. 40(4):257-267 (2012).

16. Folin, O. and Denis, W., On phosphotungas- tic-phosoho-mdybdic compounds as color re- agents, J. Biol. Chem. 12:239-249 (1912).

17. Abeysinghe, D. C., Li, X., Sun, C., Zhang, W., Zhou, C., and Chen, K., Bioactive compounds and antioxidant capacities in different edible tissues of citrus fruit of four species, J. Agric.

Food Chem. 104: 1338-1344 (2007).

18. Brand-Williams, W., Cuvelier, M. E., and Berset, C., Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity, LWT-food Sci- ence and Technology 28(1):25-30 (1995).

19. Oyaizu, M., Studies on products of browning reactions: antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucos- amine, The Japanese Journal of Nutrition and Dietetics 44:307-315 (1986).

20. Benzie, IF. and Strain, JJ., The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of “an- tioxidant power”: the FRAP assay, Analytical Biochemistry 239:70-76 (1996).

21. Shi, J., Gong, J., Liu, J., Wu, X., and Zhang, Y., Antioxidant capacity of extract from edible flowers of Prunus mume in China and its ac- tive components, LWT-Food Science and Technology 42:477-482 (2009).

22. Choi, J. H. and Oh, S. K., Studies on the anti- aging of Korean Ginseng, Korean J. Food Sci.

Technol. 17:506-515 (1985).

23. Siddhuraju, P., Mohan, P. S., and Becker, K.,

Studies on the antioxidant activity of Indian

Laburnum (Cassia fistula L.): A preliminary

assessment of crude extracts from stem bark,

leaves, flowers, and fruit pulp, Food Chemis-

try 79:61-67 (2002).

(8)

24. Kumaran, A. and Karunakaran, R. J., In vitro antioxidant activities of methanol extracts of five Phyllanthus species from India, LWT- Food Science and Technology 40:344-352 (2007).