대 한 류 마 티 스 학 회 지
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원 저
□ Vol. 12, No. 1, March, 2005― 38 ―
한국인 섬유근통 증후군 환자에서 Human Parvovirus B19 감염에 관한 연구
전남대학교 의과대학 류마티스내과학교실
윤 현 정․이 신 석
= Abstract =
Human Parvovirus B19 Infection in Patients with Fibromyalgia
Hyun-Jung Yoon, M.D., Shin-Seok Lee, M.D.
Department of Rheumatology, Chonnam National University Medical School, Gwangju, Korea
Objective: The association of parvovirus B19 infection with many rheumatologic disease, including systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, Sjogren's syndrome, polymyositis has been suggested, although the exact relationship between the infection and these disorders is not understood. Several cases of fibromyalgia have been reported after parvovirus B19 infection, but systemic investigation of parvovirus B19 infection in Korean patients with fibromyalgia has not been performed. This study was designed to investigate the clinical significance of human parvovirus B19 infection in Korean patients with fibromyalgia.
Methods: Serum from 54 patients with fibromyalgia and 61 age and sex matched healthy controls were tested for IgM and IgG anti-parvovirus B19 antibodies by two different commercially available ELISA kits and presence of parovovirus B19 DNA was measured by PCR.
Results: IgM antibodies to parvovirus B19 were detected 1 fibromyalgia patient in one assay and 1 patient in the other assay. No controls had positive IgM antibodies. No difference was seen between fibromyalgia patients and controls with the IgG andtibodies to parvovirus B19 in two different assays. Parvovirus B19 DNA was detected in 3 fibromyalgia patients, but not in controls.
Conclusion: Our data showed that fibromyalgia could be triggerd by parvovirus B19 infection, but parvovirus B19 is unlikely to play a significant role in the pathogenesis of Korean patients with fibromyalgia.
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＜접수일：2005년 1월 28일, 심사통과일：2005년 3월 4일＞
※통신저자：이 신 석
광주광역시 동구 학1동 8번지
전남대학교 의과대학 류마티스내과학교실
Tel：062) 220-6590, Fax：062) 225-8578, E-mail：[email protected]
― 윤현정․이신석 : Human Parvovirus B19와 섬유근통 증후군 ―
― 39 ― 서 론
Parvovirus B19은 최근 여러 질환과 관련되는 원인 바이러스로 지목되어 왔다. 주요 관련 질환으로는 일과성 무조혈성 위기(transient aplastic crisis), 소아의 전염성 홍반(erythema infectiosum, fifth disease), 태아 수종(hydrops fetalis), 급성 및 만성 류마티스양 관절 병증, 루푸스, 쇼그렌증후군, 그리고 다발성 근염과 의 관련성이 보고되고 있다1,2). 섬유근통 증후군(이 하 섬유근통)은 피로, 광범위한 근골격계의 통증과 강직 및 수면장애, 감각이상, 두통 등의 전신증상을 일으키며 특정부위의 압통점을 갖는 만성질환이다3). 아직까지 정확한 원인이나 발병기전이 알려져 있지 않으나 바이러스 감염에 의한 유발가능성이 제기되 고 있다. 관련된 바이러스 감염으로는 Epstein-Barr virus, Parvovirus B19, 마이코플라즈마, Chlamydia pneumoniae, 인간면역결핍바이러스 감염, coxsackie B 바이러스, C형간염과의 연관성이 보고되고 있다4-7). 저자들은 한국인 섬유근통 환자에서 Parvovirus B19 의 감염에 관한 연구가 아직까지 진행된 적이 없어 한국인 섬유근통 환자들을 대상으로 Parvovirus B19 감염과 섬유근통과의 연관성을 알아보고자 하였다.
대상 및 방법 1. 대상
2001년 12월부터 2002년 5월까지 전남대학교병원 류마티스 내과에 내원한 환자를 대상으로 하였다.
54명의 섬유근통 증후군 환자들은 1990년 미국류마 티스학회에서 정한 진단기준을 만족하였고, 대조군 으로는 환자군과 나이와 성별로 짝지은 61명을 무작 위로 추출하여 선정하였다.
2. 방법
1) Parvovirus B19의 IgG, IgM 항체측정: Parvovirus B19의 IgG와 IgM 항체는 각각 Parvovirus B19 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) IBL kit (KMI Diagnostics, Inc. USA)와 Parvo-EIA (enzyme immuno- assay) “SEIKEN” kit (DENKA SEIKEN Co.,LTD. Ja- pan)를 이용하였으며 제조사의 지시대로 시행하였다.
IBL사의 Parvovirus B19 ELISA에 대해 간략히 기 술하면, 대상 환자의 혈청을 희석액으로 1：101으로 희석하여 RF Adsorbens 처리 후에 37oC에 한시간 동 안 반응시킨 다음 200μL의 세척용액으로 5회씩 세 척한 후 각각 IgM enzyme conjugate (anti-human IgM conjugated to peroxidase) 또는 IgG enzyme conjugate (anti-human IgM conjugated to peroxidase)을 100μL/
well씩 넣고 37oC에 30분간 반응시켰다. 세척 과정을 한번 더 반복한 후에 TMB-substrate solution (tetrame- thylbenzidine (TMB) with stabilizers) 100μL/well씩 넣 고 20oC에 10분간 반응시키고 stop solution (1 M sulfuric acid (H2SO4))을 100μL/well을 넣은 후 15분 이내에 450 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 같이 검사한 표준액의 흡광도를 이용하여 10∼150 U/mL 범위의 표준곡선을 마련하였고 이 표준곡선을 이용 하여 각 검체의 IgG와 IgM의 양을 U/mL로 결정하 였다. IgM 항체는 VP2 단백에 대한 반응으로 측정 하였으며, IgG 항체는 VP1 단백에 대한 반응으로 측정하였다.
SEIKEN사의 Parvo-EIA kit에 대해 간략히 기술하 면, 대상 환자의 혈청 10μL에 희석액 2 mL로 희석 하여 100μL/well씩 넣어 실온에서 1시간 배양하였다.
200μL의 세척액으로 3회 세척한 후 각각 IgM enzy- me conjugate 또는 IgG enzyme conjugate를 100μL/
well씩 넣고 실온에서 60분간 반응시켰다. 다시 200 μL의 세척액으로 3회 세척한 뒤 Substrate Solution 100μL/well을 넣은 후 450 nm 파장에서 흡광도를 측 정하였다. 같이 검사한 표준액의 흡광도를 이용하여 각 검체의 IgG와 IgM의 양을 U/mL로 결정하였다.
2) Parvovirus B19 PCR: Parvovirus B19 DNA PCR 의 시발체는 Clewley 등8)에서 사용했던 것을 사용하 였으며, 염기서열은(Z:5’-GGA ACA GAC TTA GAG CTT ATT C-3’, Y: 5’-GCT TGT GTA AGT CTT CAC TAG-3’)였다. 대상 환자의 혈청을 microcentrifuge tube 에 옮긴 후 PBS buffer로 검체를 세척하고, prote- nase K로 용해시킨 후 25：24：1로 phenol：chloro- form：isomylacohol extraction을 추가한 뒤 70% 에탄 올로 세척한 후 PCR master mix (1.5 mM MgCl2, 50 mM KCL, 25 pmol primer)와 증류수로 최종부피를 40μL로 만든 후 94oC에서 1분, 55oC에서 1분, 72oC 에서 1분 동안 35회 반응시켜 증폭시킨 후에 전기영
― 대한류마티스학회지 제 12 권 제 1 호 2005 ―
― 40 ― 동을 시행하여 Thermal cycler (Perkin Elmer DNA thermal cycler 480 USA)를 이용하여 분석하였다.
3. 통계
질환별 항체 양성률 비교는 SPSS (Window용 SPSS 11.0)를 이용한 Chi-square test와 Fisher's exact test를 시행하여 분석하였고, 통계학적 유의성의 수준은 p
＜0.05인 경우로 하였다.
결 과
1. Parvovirus B19 IgM 항체 양성률 비교
IBL사의 Parvovirus B19 ELISA검사에서 Parvovirus B19 IgM 항체는 전체 섬유근통 환자 54명 중 1명의 환자에서 양성으로 나왔으며, SEIKEN사의 Parvo- EIA에서는 1명의 환자에서 양성으로 나타났다. 대조 군에서는 두 가지 검사 모두에서 Parvovirus B19 IgM 항체 양성인 경우는 없었다.
2. Parvovirus B19 IgG 항체 양성률 비교
IBL사의 Parvovirus B19 ELISA에서 Parvovirus B19 IgG 항체 양성률은 섬유근통 환자에서 36명, 대조군 에서 27명이 양성으로 나타났다(36/54 (66.7%) vs. 27/
46 (58.7%) p=0.118). SEIKEN사의 Parvo-EIA 검사에 서는 섬유근통 환자에서 40명, 대조군에서는 40명이 양성으로 나타났으며(40/54 (74.1%) vs. 45/61 (73.8%) p=1.00) 두 가지 검사 모두에서 두 군 간에 유의한 차이는 없었다.
3. Parvovirus B19 DNA PCR 양성률 비교
Parvovirus B19 DNA PCR은 섬유근통 증후군 환자 에서 3명이 양성이었으며, 대조군에서는 양성인 환 자가 없었다.
고 찰
Parvovirus B19 감염은 여러 류마티스 질환과 관련 이 있다고 보고되고 있으나 Parvovirus B19 감염이 이들 질환을 유발하는 데 어떠한 역할을 하는지에 대해서는 아직 잘 알려져 있지 않다. 섬유근통과의 연관성은 일부 증례보고에서만 보고되어 있고 전반
적인 감염률에 관한 연구는 많지 않은 실정이다. 국 내에서는 류마티스 관절염, 골관절염, 루푸스 환자를 대상으로 Parvovirus B19 감염에 관한 연구가 있었으 며, 각 질환에서 통계적으로 유의한 Parvovirus B19 감염은 관찰할 수 없는 것으로 보고되었다.
Berg 등10)은 26명의 섬유근통 환자를 대상으로 Parvovirus B19의 감염률을 조사하였는데 환자군과 대조군 사이의 통계학적으로 유의한 차이점을 찾지 못하였고, 52명의 섬유근통 환자를 대상으로 한 Bra- nco 등11)의 연구에서는 Parvovirus B19 IgG 항체의 양성률이 더 높은 경향을 보였으나 통계학적으로 유 의한 결과는 아니었다. 본 연구에서도 IBL사의 Par- vovirus B19 IgG 항체 양성률은 섬유근통 환자에서 66.7%, 대조군에서 58.7%로 대조군에 비해 유의하게 높지 않았고, SEIKEN사의 Parvo-EIA 검사에서도 Par- vovirus B19 IgG 양성률은 섬유근통 환자에서 74.1%, 대조군에서 73.8%로 두 군 간에 유의한 차이는 없 었다. 실험의 오차를 줄이기 위해 두 가지 방법으로 감염여부를 조사하였으나 두 가지 검사 모두 두 군 간에 차이는 관찰할 수 없었다.
Human parvovirus B19에 대한 항체 보유율은 연령 이 증가할수록 점차 증가하는 것으로 알려져 있다.
5세 이전에는 대략 2∼10%에 불과하지만 5∼18세를 지나면서 증가하여 20세 이상 성인이 되면 정상인의 40∼60%가 항체를 보유한다고 알려져 있다1,2). 본 연구에서도 환자군이나 대조군 모두에서 60∼75%
정도의 항체 보유율을 보이고 있어 이전의 보고에 비해서는 높으나 전 등9)이 보고한 77%와는 비슷한 수준으로 외국에 비해 국내에서 Parvovirus B19의 감 염률이 높음을 확인할 수 있었다.
Parvovirus B19 감염의 증거는 ELISA, immunoblot- ting, PCR방법을 통해서 검사하는데 감염 후 20주 까지는 IgM 항체의 측정이 가능하고 이후에는 주로 IgG 항체를 검출할 수 있다12-14). PCR 방법은 IgM 항체에 비해서 더 오랜시간 동안 검출이 가능하기 때문에 지속적인 감염과 재활성화된 경우의 진단에 더 유용하게 사용될 수 있다15-17). 본 연구에서 IgM 항체검사가 양성으로 나온 환자는 두가지 검사에서 각각 한 명씩 다른 환자였으며, 증상 발현 후 12개 월과 18개월 후에 검사가 이루어졌음에도 양성 소견 을 보였다. PCR 양성인 환자 3명은 증상 발현 30개
― 윤현정․이신석 : Human Parvovirus B19와 섬유근통 증후군 ―
― 41 ― 월, 32개월, 그리고 36개월 후에 시행한 검사였음에 도 양성반응을 나타냈으며 이들 모두 IgM 항체는 음 성이었다.
이상의 결과로 미루어보아 IgM 항체가 양성인 경 우가 섬유근통 환자에서만 있었지만 각각 다른 환자 였고, PCR 결과와 일치하지 않는 것을 고려하면 Parvovirus B19 감염과 섬유근통과는 서로 관련이 없 어 보인다.
본 연구의 제한점으로는 첫째, 증상 발현 후 내원한 시점이 모두 달라 증상 발생 20주 이내에 검사를 시 행할 수 없었다는 것, 둘째 20주 이후까지 Parvovirus B19 감염의 증거로 이용될 수 있는 골수에서의 PCR 검사를 시행하지 못한 것과 셋째, Parvovirus B19 감염 시 증가될 수 있는 IgG 항체 역가 변화를 추적 검사 하지 못한 것을 들 수 있어 대상 환자들의 IgG 항체 역가의 추적 검사가 필요할 것으로 사료된다.
결 론
본 연구에서 Parvovirus B19 감염과 섬유근통 유발 과의 연관성은 명확하게 보여지지는 않았으나 섬유 조직염의 병태생리에 어뗜 역할을 하는지에 대해서 는 연구가 지속되어야 할 것으로 사료된다.
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