A Study of the Oncological Characteristics Affecting the Growth Patterns of the Gastric Cancer

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서 론

위암의 예후는 종양의 위벽 침윤도, 위 주변 림프 절 전이 유무, 원격 전이유무에 의해 결정되며 림프절 전이와 관계 없이 위벽 침윤도가 점막(mucosa) 또는 점막하층(submu- cosa)에 국한된 경우 조기위암으로, 그 이상 고유근 층 (muscle layer) 이상을 침윤한 경우 진행성위암으로 분류한 다.(1) 전자의 경우 후자에 비해 좋은 예후를 보이며 위벽 침윤도와 림프절 전이는 서로 상관관계를 보인다. 그러나 조기위암에서도 림프절 전이를 보이는 경우가 있으며 진행 성위암으로 장막을 침윤하였으나 림프절 전이를 보이지 않 는 경우도 있다. 위암의 성장 과정에 있어서 조기위암이 진 행되어 진행성 위암이 된다는 주장(2,3)과 조기위암과 진행 성 위암은 발견되는 시차에 따른 것이 아니라 서로 다른 암의 특성을 갖는다는 주장(4)도 있다. 그러나 림프절 전이

위암의 성장형태와 관련된 종양인자 연구

제주 한라병원 외과, 고려대학교 ¹병리학교실, ²외과학교실 민연기․조성진¹․채양석¹․김승주²․목영재²․김종석²

A Study of the Oncological Characteristics Affecting the Growth Patterns of the Gastric Cancer

Youn Ki Min, M.D., Seong Jin Cho, M.D.¹, Yang Seok Chae, M.D.¹, Seung Joo Kim, M.D.², Young-Jae Mok, M.D.²and Chong-Suk Kim, M.D.²

Purpose: In general, the depth of tumor invasion correlates with lymph node metastasis in gastric cancer, but some cases show a discrepancy between the tumor depth and nodal status. Therefore, this study was designed to inves- tigate the factors affecting tumor growth patterns including the depth of invasion and lymph node metastasis.

Methods: The clinico-pathological characteristics of 1048 gastric cancer, from 1993 to 1999, were investigated. These cancer cases were divided into three groups: the early gastric cancer with lymph node metastasis (EP), the serosa infiltrated advanced cancer with no lymph node metastasis (SN), and the serosa infiltrated advanced gastric cancer with lymph node metastasis (SP) groups. The expression status of the proteins related with tumor growth, including matrix metalloproteinase-2 and 9 (MMP-2 and MMP-9), VEGF, nm23 and p53, were compared using immunohistochemical stain, p53 gene mutation, Microsatellite instability (MSI) and Loss of heterozygosity (LOH).

Results: There were 35 (3.4%) of the total cases in the EP group, and 10.1% in Eearly gatric cancer cases. The female ratio in the EP group was higher than in the SN group but this was not statistically significant. The most common gross types in the EP and SN groups were IIc and Borrmann type III, respectively, and the mean tumor size was largest in the SN group. The cell differentiation of the SN group was better than that in the EP group (68.6 vs. 41.2%). The levels of MMP-2 and -9 were higher in the SN and SP groups

than those in the EP group. However, the levels of VEGF and nm23 between the groups were no different. The EP group had the highest degree of p53 mutation. There was no difference in the MSI and LOH expression status between the groups.

Conclusion: There were some different growth patterns in the gastric cancers between the lymph node metastasis dominant (EP) and depth of infiltration dominant (SN) groups. MMP-2 and -9, tumor differentiation and mutated p53 gene exon may correlated with the tumor growth pattern.

Further study is suggested to find the difference between the EP and SN groups, which could provide information on which factors determine nodal metastasis or the depth of a infiltration dominant growth pattern. (J Korean Surg Soc 2005;68:15-23)

Key Words: Gastric cancer, Tumor growth factor, MMP-2, 9, p53, nm23, VEGF, MSI and LOH

중심 단어: 위암, 종양성장인자, 이형성 소실, 현미부 수체 불안정성

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책임저자：민연기, 제주시 연동 1963-2 ꂕ 690-170, 제주 한라병원 외과

Tel: 064-740-5113, 5190, Fax: 064-743-3110 E-mail: [email protected]

접수일：2004년 3월 15일, 게재승인일：2004년 10월 2일 이 논문의 요지는 2002년 추계외과학회에서 구연되었음.

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를 보이지 않은 진행성위암은 서로 시차에 따른 상관관계 가 없어 보인다. 그러므로 저자들은 이 두 종류의 위암 군은 각각 위벽의 수직침윤을 우선하는 종양 성장형태와 림프절 전이를 우선하는 성장형태를 갖는다는 가설 하에 이 두 위 암 군의 비교 연구를 통해 림프절 전이 및 위벽 수직침윤의 각각 다른 성장형태를 결정짓는 인자들에 대하여 알아보고 자 하였다.

방 법

1) 연구 대상

고려대학교 의료원에서 1993년 1월부터 1999년 12월까지 위암으로 위절제술과 위 주변 림프절 곽청을 통해 위벽 침 윤도와 위 주위 림프절 전이 상태를 알 수 있었던 1048명 환자의 임상 기록을 검토하였다. 전체 환자 중 림프절 전이 를 보인 조기위암 35예(3.4%, 이하: EP)중 34예와 장막 층 이상을 침윤하였으나 림프절 전이를 보이지 않은 72예 (6.9%, 이하: SN) 중 36예를 그리고 장막 침윤과 함께 림프 절 전이를 보인 351예(33.4%, 이하: SP) 중 26예를 대상으로 하였으며 표본 추출은 수술이 이루어진 년도간의 차이는

없다는 가정 하에 조직의 보관상태가 양호한 최근의 것들 을 추출하였다. 각 군의 임상적 특성, 면역 병리학적 인자 및 분자병리학적 종양 인자들을 비교하였다. 그리고 각 군 간 비교를 통해 위암의 성장 형태 중 림프절전이 및 위벽침 윤 성장과 관련된 인자를 알아보았다.

2) 실험 방법

(1) 임상적 특성 및 조직 병리학적 검사

전체 위암 환자의 수술 후 절제된 조직 및 위 주변 림프절 의 육안적 소견과 광학 현미경적 소견을 통해 위벽의 침윤 도와 위 주변 림프절 전이 유무를 판정하였으며 전체 환자 군에서 각 대상군의 범주에 속하는 환자 수와 그 비율, 평균 연령, 성비 등을 조사하였다. 대상 환자들의 임상 정보는 의 무기록 검토를 통하여 조사하였다. 이외에도 종양의 위치, 크기, 형태적 분류, 림프관 종양 색전 유무, 림프절 전이 유 무 및 종양의 조직학적 분화도 및 육안적 형태 등을 정리하 였다. 위암의 육안적 형태로는 조기위암에서는 일본 내시 경학회 분류를, 진행성 위암에 있어서는 Borrmann 분류법 을 사용하였다. 종양의 크기 측정은 종양의 장경을 측정하 였다. 종양의 조직 형은 고분화 관상 선암종, 중분화 관상 선암종, 유두상 선암종 및 점액암종은 좋은 분화형(well)으 로, 저분화 관상 선암종 및 인환 세포암종 등은 나쁜 분화형

Fig. 1. Immunohistochemical staining (×200) of MMP-2,9, VEGF, nm23, and p53 protein).

MMP 2- MMP-9

VEGF nm23 p53 protein

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(2) 면역화학염색법을 이용한 Matrix metalloproteinase-2, 9 (MMP-2, 9), p53 단백, VEGF 및 nm23 단백 발현상 태 연구(Fig. 1)

파라핀 포매 조직을 5∼6μm 두께로 연속절편을 만들어 100% xylene으로 3∼5분간 탈파라핀하고, 증류수로 함수 시킨 후 MMP-2, MMP-9 (Oncogene science, New York, USA), p53 단백(Neomarker, Fremont, CA), VEGF (Santa Cruz Biothec., Callifornia, USA), 그리고 nm23 (Zymed, South San Francisco, California, USA) 단백의 면역조직화학 염색을 시 행하였다. 이들 단백에 대한 면역조직 화학 염색은 단백의 항원성을 유지하기 위해 pressure cooker를 이용, 끓는 phos- phate buffered saline에 5분간, 4^oC의 PBS에서 5분간 처리 후, 3%의 과산화수소를 도포한 후, 1：100으로 희석된 단클론 성의 1차 항체들을 상온에서 2시간 반응시킨 후 PBS액으로 세척하였다. 2차 항체인 biotinylated link antibody (LSAB kit, DAKO, Colorado, USA)와 20분간 반응시킨 후 PBS로 세척 하였다. Streptavidin (Zymed, South San Francisco, California, USA)과 peroxidase가 결합된 용액에 30분간 반응시킨 후 발 색반응은 3, 3-diaminobenzidine tetrachloride (DAB sigma)로 발색시키고 Meyer's hematoxylin 대조염색 후 흐르는 물에 세척 실온에 건조 후 봉입하였다. 결과 판정은 MMP-2와 9 의 결과 판정에 있어 정상 조직의 대조군과 같은 염색 양상 을 보일 경우 음성(negative)으로 종양세포의 50% 미만 세포 가 염색되거나 염색강도가 미약하여 고배율로만 관찰될 때 1+로 50% 이상에서 양성을 보이거나 50% 미만이라도 강 한 염색 강도를 보일 경우 2+로 판정하였다. p53단백은 암 세포의 핵이 염색되는 것을 기준으로 양성인 핵이 전체 절 편의 5% 미만인 경우 음성, 5∼30% 인 경우 1+, 30∼60%

인 경우 2+ 그리고 60% 이상의 경우 3+로 판정하였다.

nm23 단백 발현은 위암조직의 염색 강도와 양상(초점성, 국 소적, 미만성)을 고려하여 음성발현과 양성발현으로 판정 하였다. VEGF는 종양세포의 10% 이상에서 세포질 또는 세 포막에 염색된 경우 양성으로 판정하였다.

(3) 분자생물학적 종양 특성 연구

DNA추출을 위하여 각 증례별 암 종의 파라핀 포매 조직 을 탈 파라핀하고 H&E 염색한 후 충분한 양의 종양 조직을 미세 절제하였다. 조직을 각각 DNA extraction buffer가 들어 있는 1.5 ml eppendorf tube에 넣은 후, 0.1 mg/ml proteinase K를 처리하여 water bath에서 52ôC를 유지하며 24시간 동안 보관한다. 반응이 끝난 시료는 끓는 물에 10분간 담가 proteinase K의 반응을 불활성화시킨 후, 4ôC에서 냉장 보관 하면서 중합효소연쇄반응(이하 PCR) 수행 시 template DNA 로 사용하였다. 이 중 500μl를 새 튜브로 옮기고 여기에 동 일 부피의 phenol/chloroform (1：1)을 넣고 추출하였다. 깨 끗한 DNA용액을 얻을 때까지 계속 반복하여, 50μl의 3.5 M sodium acetate와 1 ml의 100% ethanol을 넣고 -20ôC에서

30분간 방치한 후 14,000 rpm, 4^oC로 30분간 원심 분리하여 DNA를 침전시키고 1 ml의 70% ethanol로 wash 한 후 Speed-Vac concentrator로 건조시키고, DNA pellet을 증류수 200μl로 녹이고 4^oC에서 보관하였다.

① p53 유전자 돌연변이 검출: PCR은 Premix-top을 이용 하여 수행하고, DNA integrity 측정용(internal amplification control)으로서 humanβ-globulin specific primer를 사용하였 다. p53 유전자 돌연변이 검출을 위한 PCR은 Table 1의 4가 지 primer를 사용하였다.

PCR 반응액 총량은 시료 당 25μl로 하고, reaction buffer (10 mM Tris-HCl, pH 8.3, 50 mM KCl, 1.5 mM MgCl2 , 0.001%

gelatin), 각각 20μM 씩의 dATP, dCTP, dGTP, dTTP (Boehringer Mannheim, Germany), primer, template DNA 및 Taq DNA polymerase (Biogrand, Korea)와 증류수를 차례로 혼합하고, PCR용 premixed 용액에 조직에서 분리한 DNA 200 ng과 forward 및 reverse primer 각 50 pmole을 넣고, mineral oil로 반응 액을 덮은 후 denaturation, annealing, extension을 계획하고 thermal cycler (Perkin Elmer Cetus 9700, USA)에서 PCR을 수행하였다. PCR 산물의 일부를 취 하여 agarose gel 전기영동하고 ethidium bromide 용액에 염 색하여 ultra-violet light하에서 DNA 증폭 여부를 확인한 다 음 -20^oC에 보관하였다. 유전자 변이를 검출하는 Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP)은 15μl의 PCR 산 물에 denaturing solution (95% formamide, 0.05% bromophenol blue) 15μl를 넣고 끓는 물에서 3분간 둔 후 얼음물에 급히 식힌 후, 12.5% polyacrylamide gel에 load하여 전기영동하였 다. 전기영동이 끝난 후 gel의 염색과정을 거쳐 DNA band가 염색되면 Trans-illuminator를 사용 band의 형태를 관찰하였 다.

② 이형성 소실(Loss of heterozygosity: LOH)과 현미부 수체 불안정성(Microsatellite instability: MSI) 분석: 분석 하려는 각 염색체별 microsatellite 표식자의 종류는 Table 2 와 같으며 Research Genetics (Huntsville, AL, USA)에서 제작 된 것을 사용하였다. 종양 세포에서 추출한 DNA를 주형으 로 각각의 PCR을 시행하였다. PCR은 각 표본에 대하여 3 5∼40주기를 반복 실시하였으며, 모든 반응은 thermal

Table 1. The primers used for detection of p53 gene mutation ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ p53 Exon 5 forward: 5’ CTCTTCCTGCAGTACTCCCCTGC 3'

reverse: 5' GCCCCAGCTGCTCACCATCGCTA 3' 211 bp Exon 6 forward: 5’ GATTGCTCTTAGGTCTGGCCCCTC 3'

reverse: 5' GGCCACTGACAACCACCCTTAACC 3' 185 bp Exon 7 forward: 5’ GTGTTGTCTCCTAGGTTGGCTCTG 3'

reverse: 5’ CAAGTGGCTCCTGACCTGGAGTC 3' 139 bp Exon 8 forward: 5’ TGGTAATCTACTGGGACGGA 3'

reverse: 5’ CGGAGATTCTCTTCCTCTGT 3' 86 bp ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ

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cycler (Perkin Elmer Cetus 9700, USA)에서 시행하였다. 각 주기 당 변성 반응은 94ôC에서 30초, 결합반응은 55∼60ôC 에서 30초, 연장반응은 72ôC에서 40초씩 시행하였고 마지 막 주기의 연장반응은 72ôC에서 10분간 반응시켜 증폭된 PCR 산물 3μ를 2% agarose gel 전기영동으로 확인하였다.

3μl의 PCR 산물과 formamide loading dye (95% formamide, 20 mM EDTA, 10 mM NaOH, 0.05% bromphenol blue, 0.05% xylene cyanol) 3μl를 취해 98^oC에서 5분간 끓여 변성 시킨 후, 얼음으로 급히 냉각시킨 다음 3μl만 전기영동에 사용하였다. 전기영동을 1400V에서 1 시간 반 동안 시행 후 은 염색을 하였으며 Gel 상의 band는 밀도측정기를 이용하 여 측정하고 정상 조직에 비해 종양조직에서 50% 이상의 소실이 있는 경우를 LOH로 판정하고 정상조직에 비해 추 가 띠가 생긴 경우는 MSI로 판정하였다(Fig. 2).

4) 통계학적 분석

각 대상 군의 면역조직학적 검사 및 분자병리학적 검사

결과 중 연속변수로 기술되는 항목에 대하여 분산분석을 시행하고 후향 검사(ANOVA)를 통해 각각 대상 군간의 차 이를 검증하고 구간 변수로 기술되는 항목에 대하여는 각 대상 군간 Chi-square test를 통해 P값이 0.05 미만인 경우 통계적으로 유의한 차이로 인정하였다.

결 과

1) 임상, 병리 조직학적 특성

(1) 성비(sex ratio): EP, SN, 그리고 SP 군의 남․여 비는 각각 0.9：1, 2.3：1 그리고 1.8：1로 림프절 전이와 관계없 이 장막 침윤 암에서 남자의 비율이 높았으나 세 군간 남․

녀 비율은 통계적으로 유의한 차이가 없었다(Table 3).

(2) 연령: 세 군의 나이는 EP 군은 56.4±12.2세, SN 군은 60.1±11.1세, 그리고 SP 군은 56.4±13.3세로 SP 군의 평균 연령이 가장 높았으나 통계적으로 유의한 차이는 아니었다 (Table 3).

(3) 종양의 형태적 분류: 위암의 형태적 분류에 있어서 EP 군의 가장 많은 형태로는 IIc형이 9예(26.5%)로 가장 많았고 그다음으로는 IIb+IIc가 6예(17%)였다. SN 군은 Borrmann 분류 3형이 27예(75.0%)로 가장 많았고 다음으로 2형이 6예 (16.7%)로 두 번째 빈도를 보였다. SP 군도 Borrmann 3형이 14예(53.8%)로 가장 많았고 4형이 6예(23.1%)로 두 번째 많 은 유형이었다(Table 3).

(4) 종양의 크기: 종양의 크기에 있어서 장경의 평균값은 EP 군은 3.6±2.0 cm, SN 군은 5.9±4.9 cm 그리고 SP 군은 6.2±2.4 cm로 세 군간 유의한 차이를 보였다(P=0.007). 후 향 검사 상 장막 침윤 암에 있어서 림프절전이 유무에 따라 크기에 유의한 차이를 보이지 않았으며 EP 군과 SN 및 SP 군 사이에는 유의한 크기의 차이를 보여 주었다(P=0.007) (Table 3).

(5) 종양의 위치: 위를 상 1/3, 중 1/3, 하 1/3로 나눌 때 종양의 위치별 빈도는 세 군에서 유의한 차이가 없었다 (Table 3).

Table 2. DNA sequences used for detection of MSI (upper 5) and LOH (lower 9)

ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ BAT25 (f) 5'-TCGCCTCCAAGAATGTAAGT-3'

(r) 5'-TCTGCATTTTAACTATGGCTC-3' BAT26 (f) 5'-TGACTACTTTTGACTTCAGCC-3' (r) 5'-AACCATTCAACATTTTTAACCC-3' D2S123 (f) 5'-AAACAGGATGCCTGCCTTTA-3'

(r) 5'-GGACTTTCCACCTATGGGAC-3' D5S346 (f) 5'-ACTCACTCTAGTGATAAATCGGG-3'

(r) 5'-AGCAGATAAGACAGTATTACTAGTT-3' D17S250 (f) 5'-GGAAGAATCAAATAGACAAT-3'

(r) 5'-GCTGGCCATATATATATTTAAACC-3' D9S171 (f) 5'-AGCTAAGTGAACCTCATCTCTGTCT-3'

(r) 5'-ACCCTAGCACTGATGGTATAGTCT-3' D9S1747 (f) 5'-GGCTTTCTCTCTTTTTGTCTC-3'

(r) 5'-GGAATAAATCAGGCTACCAGG-3' D13S153 (f) 5'-AGCATTGTTTCATGTTGGTG-3'

(r) 5'-CAGCAGTGAAGGTCTAAGCC-3' D13S156 (f) 5'-ATTAGCCCAGGTATGGTGAC-3'

(r) 5'-GCTGTGGTATGAGTTACTTAAACAC-3' D16S419 (f) 5'-ATTTTTAAGGAATGTAAAGNACACA-3'

(r) 5'-GACGTTAGACCAGGAGTCAG-3' D16S3106 (f) 5'-GAGACCTACAGTCTTTTGCATTTAC-3'

(r) 5'-TTTTGAAGCTGAGCAGAAGG-3'

TP53 (f) 5'-TGGATCCTCTTGCAGCAGCC-3' (17p13.1) (r) 5'-TP53.A2 AACCCTTGTCCTTACCAGAA-3' D17S796 (f) 5'-CAATGGAACCAAATGTGGTC-3' (17pter)

(r) 5'-AGTCCGATAATGCCAGGATG-3' D17S513 (f) 5'-TTCACTTGTGGGCTGCTGTC-3'

(r) 5'-TAAGAAAGGCTCCCACAAGCA-3' ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ

Fig. 2. Microsatellite instability (MSI) and loss of heterozygosiy (LOH) and in BAT 26, and D17S250.

BAT26 D17S250

N T N T N T N T

LOH MSI LOH MSI

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(6) 분화도: 조직학적 분화도에 있어서 EP 군은 나쁜 분화 형(poor)을 보인 예는 20예(58.8%)였고 SN 군은 11예(31.4%), 그리고 SP 군은 15예(60.0%)를 보여 EP 군과 SP 군이 SN 군에 비해 나쁜 분화형의 비율이 높게 나타났으며 이는 통 계적으로 유의한 차이였다(P=0.033). 그러나 EP 군과 SP 군 사이에는 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 장막 침윤 유 무에 관계없이 림프절 전이를 보인 경우 전이 없는 경우에 비해 나쁜 분화형의 빈도가 높았다.

(7) 림프관 종양 색전(lymphatic tumor emboli): 종양의 림프관내 색전(lymphatic tumor emboli)은 EP군의 20.6%에 서 보였고, SN군의 22.2%, 그리고 SP 군에서는 42.3%로 가 장 많았고 세 군간에 통계적으로 유의한 차이를 보이지 않 았으나 SP 군에 있어서 EP 군에 비해 림프관내 종양 색전을 더 많이 보이는 경향을 보였다(Table 3).

2) 면역조직병리학적 연구 결과

(1) Matrix metalloproteinase-2, 9 발현: 단백분해 효소 matrix metalloproteinases (MMP)의 일종인 MMP-2와 9의 종 양조직 내 발현정도는 MMP-2에 있어서 EP 군에서 1+이상 의 양성 발현은 44.1%, SP 군에서는 61.5%, 그리고 SN 군에 서 63.9%로 나타났으며 장막 침윤암 간에는 림프절 전이유

무에 따른 차이가 없었으나 EP 군에 비해 SN 군에서 높은 양성률과 함께 염색강도가 높게 나타나는 경향을 보였다 (P=0.087). MMP-9은 SN군에서 가장 높은 발현율과 염색강 도를 보였으며 EP 군과 SN 군에 비해 통계적으로 유의하게 높은 발현율과 높은 염색강도를 보였다, 그러나 EP 군과 SP 군간에는 통계적으로 유의한 차이를 보이지 않아 림프절 전이 없이 수직 침윤을 우선하는 성장 형태를 보이는 위암 종의 특성에 밀접한 관계가 있는 것으로 보인다(Table 4).

(2) 혈관내피세포 증식인자(VEGF) 발현: 혈관내피세포 증식인자(VEGF)의 면역화학조직염색법에 의한 발현은 SP 군에서 가장 높게 나타났으며 다음으로 SN 군, EP 군의 순 으로 나타나 조기위암보다는 장막 침윤 암에서, 장막 침윤 암 중에서는 림프절 전이가 있는 경우에 양성 발현율이 높 은 것으로 보였으나 세 군 간에 통계적으로 의의 있는 차이 는 아니었다(Table 4).

(3) nm23 단백 발현: nm23은 통계적으로 의의 있는 차이 는 아니었으나 SN 군에서 가장 높은 양성 발현을 보였다 (Table 4).

(4) p53 단백 발현: p53 단백 발현은 SP군이 69.4%와 SN 군이 61.4%에서 양성 발현을 보여 서로 통계적으로 유의한 차이를 보이지 않았으나 장막 침윤 암에서 EP 군에 비해 Table 3. Clinicopathological characteristics

ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ

Tumor characteristics EP (n=34) SN (n=36) SP (n=26) P-value

Mean age 56.4±12.2 60.1±11.1 56.4±13.3 0.365

Gender ratio (male; female) 0.9：1 2.3：1 1.8：1 0.089

Tumor size(cm) 3.6±2.0 5.9±4.9 6.2±2.4 0.007

Differentiation well 14 (41.2%) 25 (68.6%) 11 (40.0%) 0.033

poor 20 (58.8%) 11 (31.4%) 15 (60.0%) 0.571 (EP vs. SP)

Lymphatic tumor emboli 20.6% 22.2% 42.3% 0.09

IIc Borr. III Borr. III

1st (9, 26.5%) (27, 75.0%) (14, 53.8%)

Common gross type ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ

IIb+IIc Borr. II Borr. IV

2nd (6, 17%) (6, 16.7%) (6, 23.1%)

Tumor location upper 1/3 16 (47.1%) 22 (61.1%) 16 (61.5%)

middle 1/3 18 (52.9%) 12 (33.3%) 7 (26.9%) 0.255

low 1/3 1 (2.8%) 1 (3.8%)

linitis plastica 1 (2.8%) 2 (7.7%)

ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ EP = early gastric cancer with node metastsis; SN = serosa infiltrated advanced gastric cancer with node no metastsis; SP = serosa infiltrated advanced gastric cancer with node metastasis; Borr = borrmann type.

(6)

(SN, SP vs. EP) 높은 염색 강도를 보인 예가 많았다(Table 4).

3) 분자병리학적 연구결과

(1) p53 유전자 변이: p53 유전자 돌연변이 연구에 있어서 EP 군은 26.5%, SN 군은 50.0% 그리고 SP 군은 46.2%의 발 현을 보였고 EP 군과 SN 군간에는 경계성 유의 수준의 차 이를 보여주었다(P=0.05). EP 군에서 돌연변이를 보인 9예 의 변이 exon으로는 exon 5가 4예로 가장 많았고 다음으로 exon 7이 3예이었으며, SN 군에서는 17예 중 exon 7이 5예 로 가장 많았고 다음으로 exon 5와 exon 6이 각각 4예씩 있 었다. SP 군에서는 EP 군과 유사하게 exon 5에서 가장 많은 변이를 보였고 다음으로 exon 7에서 변이를 보인 예가 3예 있었다(Table 5).

(2) Microsatellite instability (MSI)와 Loss of hetero- zygosity (LOH) 발현: Microsatellite instability 는 EP 군에서

5예(14.7%), 그중 4곳 미만이 4예, 4곳 이상이 1예에서 있었 고 SN 군에서는 10예(25%)에서 보였으며 그중 4곳 미만이 5예, 4곳 이상이 4예에서 있어 SN 군에서 더 많은 빈도를 보였으나 통계적으로 의의 있는 차이는 아니었다. SP 군에 서는 3예(11.5%)에서 보였으며 4곳 미만과 4곳 이상이 각각 1예, 2예 있었다. 세 군에 있어서 MSI의 발현빈도는 통계적 으로 의미 있는 차이를 보이지 않았다(Table 6).

Loss of heterozygosity 소견을 보인 예는 EP 군에서 12예 (35.2%)이었으며 그중 4곳 미만의 LOH를 보인 예가 6예, 4곳 이상의 LOH를 보인 예가 6예 있었다. SN 군에서는 36 예 중 15예(41.6%)에서 한곳 이상의 LOH를 보였으며 4곳 미만의 LOH를 보인 예(Low)가 12예, 4곳 이상의 LOH를 보 인 예(high)가 3예로 EP 군에 있어서 LOH의 빈도는 낮았으 나 4곳 이상의 LOH를 보인 예는 6예(17.6%)로 SN 군의 3예 (8.3%)에 비해 더 많았다. 그리고 SP 군에서 한 곳 이상의 Table 4. Immunohistochemical stain according to gastric cancer growth patterns

ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ

Expression status EP (n=34) SN (n=36) SP (n=26) P-value

MMP-2 negative 19 (55.9%) 13 (36.1%) 10 (38.5%) 0.087

1+ 12 (35.3%) 13 (36.1%) 9 (34.6%)

2+ 3 (8.8%) 10 (27.8%) 7 (26.9%)

MMP-9 negative 23 (67.6%) 9 (25.0%) 18 (69.2%) 0.000

1+ 10 (29.4%) 7 (19.4%) 6 (23.1%)

2+ 1 (2.9%) 20 (55.6%) 2 (7.7%)

VEGF negative 18 (52.9%) 17 (47.2%) 8 (30%) 0.307

positive 16 (47.1%) 19 (52.7%) 18 (70%)

nm23 negative 15 (44.1%) 11 (30.5%) 9 (34.6%) 0.561

positive 19 (55.9%) 25 (69.5%) 17 (65.4%)

negative 11 (32.4%) 11 (30.6%) 10 (38.5%) 0.019

1+ 15 (44.1%) 5 (13.9%) 4 (15.4%)

p53 protein

2+ 4 (11.8%) 8 (22.2%) 2 (7.7%)

3+ 4 (11.8%) 12 (12.5%) 10 (38.5%)

Table 5. p53 gene mutations according to gastric cancer gro wth patterns

ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ EP(n=34) SN(n=36) SP(n=26) P-value ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ

p53 gene

negative 9 (26.5%) 18 (50.0%) 12 (46.2%)

mutation ＜0.05

positive 25 (73.5%) 18 (50.0%) 14 (53.8%) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ There were statistically significant difference betwe en group EP and SN (P=0.037),but there were no significant difference between EP and SP (P=0.095), between SN and SP (P=0.404) in p 53 gene mutation rate. The most common mutated exon were exon 5 in EP and SP group and exon 7 in SN group.

Table 6. Microsatellite instability (MSI) and Loss of heterozy- gosity (LOH) expression according to gastric cancer growth patterns

ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ Expression status EP n=34 SN n=36 SP n=26 P-value ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ

MSI negative 29 (85.3%) 27 (75.0%) 23 (88.5%) low 4 (11.8%) 5 (13.9%) 1 (3.8%) 0.470 high 1 (2.9%) 4 (11.1%) 2 (7.7%) LOH negative 22 (64.7%) 21 (58.3%) 11(42.3%)

low 6 (17.6%) 12 (33.3%) 9 (34.6%) 0.226 high 6 (17.6%) 3 (8.3%) 6 (23.1%) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ MSI = microsatellite instability; LOH = loss of heterozygosity.

(7)

ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ LOH를 보인 예는 15예 (57.7%)에서 볼 수 있었으며 4곳 미

만의 LOH는 9예(34.6%), 4곳 이상의 LOH는 6예(23.1%)에 서 보여 EP 군 또는 SN 군에 비해 높은 발현율을 보여 주었 다(Table 6).

고 찰

위암은 국내에서는 가장 많은 발생빈도를 보이는 암으 로, 최근 위암에 대한 관심과 위 내시경 검진의 증가로 전체 위암 중 조기위암이 진단되는 비율이 높아지고 있다. 특히 일본의 경우 조기위암의 비율이 50% 이상을 차지하고 있으 며(5) 국내의 경우도 과거에 비하여 점차 조기위암의 비율 이 높아지는 경향을 보고하고 있다.(6) 조기위암의 림프절 전이 빈도는 국내인을 대상으로 한 연구에 따르면 약 15.7%

로 보고되었으며, 문헌들마다 조금씩 다르나 점막에만 국 한된 경우 3∼5%, 점막하층에 침윤된 경우 15∼20%에서 림프절 전이를 보이는 것으로 보고하고 있다(7-10)본 연구 에서 조사된 림프절 전이 조기위암의 빈도는 조기 위암 중 10.1%, 전체 위암의 3.4%의 빈도를 보였다. 림프절 전이 없 이 장막 침윤을 보인 위암은 장막 침윤 암의 17.0%, 그리고 전체 위암의 6.9%로 그 빈도가 매우 낮았다.

각 성장 형태별 위암군의 평균 나이는 세 군 간 차이를 보이지 않았으나 성 비(gender ratio)에 있어서 장막 침윤 암 의 여성 비율이 남성 환자의 절반 정도의 분포를 보였으나 림프절 전이 조기위암에 있어서는 여성의 비율이 상대적으 로 높게 나타났다. 여자의 위암 발생률은 20∼40세에서는 남성보다 높고 전체적인 발생률은 남자의 1/2 수준을 보이 는 것이 전 세계적 추세인 것으로 알려져 있다.

조기위암 중 림프절 전이를 보인 경우 육안적 형태상 크 기가 크고, 점막하층 암, 형태상 I 또는 IIa, IIb 에 비해 IIc, III 등의 함몰형(depressed type) 또는 육안적으로 진행위암 처럼 보인 경우 등에서 림프절 전이를 보인 예가 많았음을 보고하였다.(10) 본 연구 결과에 있어서 육안적 형태상 림 프절 전이를 보인 조기위암의 경우 IIc 형태가 가장 많았다.

그리고 EP 군과 SP군은 SN 군에 비해 분화도가 나쁜 유형 이 많아 림프절 전이와 분화도는 밀접한 관련이 있는 것으 로 보인다. Morita 등(11)은 조기위암에 있어서 림프절 전이 를 보인 군에서 림프절 전이를 보이지 않은 군에 비해 림프 관 침윤과 혈관 침윤을 더 많이 나타내었다고 보고하였으 나 본 연구에서 림프관 종양 색전은 SN 군보다 EP 군에서 더 높지는 않았다. 그러나 장막 침윤 암에 있어서 림프절 전이 유무에 따라(SN vs. SP) 전이를 보인 경우에 더 많이 나타나는 경향을 보였다(P=0.09). 그러므로 비록 통계적 유 의한 관련성을 보이지 않았으나 림프관 종양 색전은 종양 의 위벽 침윤 및 림프절 전이와도 연관이 있는 것으로 생각 된다.

다른 암의 발생과 마찬가지로 위암도 암억제 유전자 및

성장인자 그리고 환경적 인자와의 관계에 의해 발생하고 성장하는 것으로 알려져 있는데 최근 분자생물학적 기법의 발전으로 위암의 발생과정에 관여하는 분자생물학적 예후 인자에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있으나 아직은 그 실적이 미미한 형편이다. Tahara 등(12)의 보고에 따르면 위 암의 분자생물학적 유전인자로 replication error, DNA aneu- ploidy 등의 유전적 불안정성과 관련된 인자, p53, Rb, D7S95 locus의 LOH 등의 종양억제 유전자, cyclin E, CDC25B, p16, p27, PCNA 등의 세포주기 조절인자, EGF, TGF alpha, cripto, VEGF, EGFR, c-met, K-sam, c-erbB2 등의 성장 인자 및 수용체와 함께 기타 예후인자로 nm 23, CD44, u-PA, PAI-1 등을 들고 있으며 이중 CyclinE1, CDC25B, p16, nm23 등은 위암의 진행정도와 관계 있으나 예후인자로 확 정되지는 않은 상태이며 p27 등은 위암의 예후인자로서의 가능성이 있어 연구 중에 있다. 여러 분자 생물학적 인자 중 혈관내피세포 성장인자(VEGF)는 혈관신생과 밀접한 연 관이 있는 성장인자로 본 연구에서 비록 경계성 유의치를 보였으나 가장 공격적 성장 형태를 갖는 SP 군에서 양성 발현율(70%)이 가장 높게 나타났다. p53 유전자는 종양억 제 유전자로 손상된 DNA의 복제를 멈추게 하여 세포의 고 사를 유발하나 p53 유전자의 결손이나 과오돌연변이에 의 한 p53 단백의 이상은 암으로의 변화에 관여하고 위암의 60% 이상에서 p53 위치의 이종접합성의 소실을 보이며 위 암주변의 정상조직에서는 발견되지 않아 암 발생의 마지막 단계에 관여한다고 여겨진다.(13) p53 유전자 변이와 p53 단 백 발현 양성률은 보고자에 따라 조금씩 다르며 본 연구에 서는 p53 유전자 변이는 EP 군에서 73.5%의 양성률을 보여 가장 많은 양성 변이율을 보였고, 장막 침윤 암에서 림프절 전이가 없는 군과 있는 군 사이에는 유사하였으나 림프절 전이가 있는 군에서 약간 높았다. 그러나 p53 단백의 양성 발현율은 세 군간에 차이가 없었으며 염색강도에 있어서 3+의 강한 염색강도를 보인 군은 SP 군에서 가장 높고 EP 군에서 가장 낮았다. 하지만 EP 군과 SN 군간에 유의한 차 이는 아니었다. 따라서 p53 유전자 변이와 p53 단백 발현은 림프절 전이나 장막침윤 어느 한 성장 형태에만 관여하는 인자로 보이지 않는다. 면역 화학 염색을 통해 알아본 MMP-2와 MMP-9의 발현은 림프절 비전이 장막 침윤 암에 서 유의하게 높게 발현되었으며 특히 림프절 전이를 보였 으나 위벽침윤도가 낮은 조기위암에서(EP)는 낮게 발현되 어 림프절 전이보다는 종양의 위벽침윤과 연관이 있다고 보여 진다. 특히 MMP-9의 경우 EP 군과 SP 군에 비하여 양성 발현율과 2+ 이상의 강한 염색강도를 보인 빈도가 높아 위벽침윤을 우선하는 성장 형태와 연관성을 보여주었 다.

Steeg 등(14)에 의해 최초 발견된 nm23 유전자는 설치류 의 흑색종 중 전이가 잘되는 암세포에서 잘 안 되는 암세포 에 비해 그 발현율이 감소되어 나타남을 보고하였으나 정

(8)

ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ 확히 어떤 작용을 통하여 전이를 억제하는지 아직 정확히

밝히지 못하고 있다. 위암에서도 nm23 유전자의 발현이 림 프절 전이를 억제한다는 연구결과들이 있으며(15,16)이 등 (17)의 연구결과에서 림프절 전이를 보인 경우 종양 조직에 서 nm23 단백 발현율이 낮으며 위벽 침윤이 깊을수록 발현 율이 낮은 것으로 보고하였으나 본 연구에서 장막 침윤 암 에서 림프절 전이유무에 따라 그 발현율의 차이를 볼 수 없었으며 림프절 전이 암에서 조기위암과 장막 침윤 암 간 (EP vs. SP)에 그 발현율의 차이가 없었다. 그러나 이는 원발 종양 조직에서 nm23 단백발현을 시도한 것으로 원발 종양 보다 전이된 종양조직에서 발현율이 떨어진다는 보고¹⁸⁾를 고려할 때 본 연구결과만으로 nm23의 전이 또는 침윤과의 관련성을 부정할 수는 없다.

Microsatellite는 유전체에 산재하는 1∼6개의 단순 염기 서열이 반복되는 DNA부위를 일컫는 것으로 유전체의 1만 여 군데에서 발견되었으며 DNA 복제가 정상적으로 이루어 지지 못하고 오류가 있을 경우 Microsatellite의 크기가 커지 거나 줄어들게 되는데 이를 Microsatellite instability 또는 DNA 복제오류(DNA replication error)라 한다.(19,20) 그리고 Microsatellite는 세대간에 걸쳐 잘 유지되며 복수 염기서열 의 단순한 반복 구조이며 다형성(polymorphism)이 심하고 한 쌍의 대립 유전자 내에서도 염기 반복 배열 수가 차이가 나는 특성이 있어서 primary gene mapping과 genetic linkage analysis에 사용되어 왔고 LOH의 검출로 염색체에서의 어 느 특정 부분의 결손과 MSI를 파악할 수 있다.(21-23) 본 연 구에서 림프절 전이 및 위벽 수직침윤과 관련하여 이러한 MSI와 LOH의 발현과 연관성을 알아보기 위하여 각 군의 위암조직에서 이들의 발현유무를 조사하였다. 그러나 본 연구에 앞서 위암 조직을 대상으로 이에 관한 연구를 시행 하였던 오 등(24)의 보고와 유사하게 MSI는 림프절 전이 조 기위암과 장막 침윤암 간(EP vs. SN, SP)에 유의한 차이를 볼 수 없었으며 장막 침윤 암에서도 림프절 전이 유무에 따라 발생 빈도의 차이를 보이지 않았다. LOH 역시 세 군간 차이를 보이지 않아 림프절 전이 및 위벽 침윤정도와는 연 관성을 보이지 않는다고 본다.

결 론

림프절 전이 조기위암과 림프절 비전이 장막 침윤 위암 은 위암의 성장과정에서 상관성을 찾기 어려우며 각각 림 프절 전이와 위벽 수직침윤 성장을 우선하는 위암으로 그 두 위암군의 특징적 성장형태를 결정짓는 인자를 알아보기 위하여 본 연구에서 조사한 일부인자들 중 조직 분화도는 림프절 전이 조기위암에서 림프절 비전이 장막 침윤 암에 비해 나쁘게 나타났으며, MMP-2, 9는 림프절 전이와 관계 없이 장막 침윤 암에서 높게 나타나 위벽의 수직침윤과 관 련이 있는 인자로 보인다 그리고 p53 gene 돌연변이는 림프

절 전이를 보인 조기위암에서 가장 많은 변이를 보였다. 이 와 같이 두 위암 군에서 서로 다른 특성과 발현상태를 보였 고, 본 연구에서 조사된 인자들 외에도 성장 형태를 결정짓 는 많은 다른 인자들이 관여하리라 생각되며 이 두 위암 군의 비교 연구는 위암의 림프절 전이 및 위벽 수직침윤과 관련된 위암의 종양특성 인자를 알아볼 수 있는 유용한 방 법이라고 생각한다.

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