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(1)예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구 고광웅. 국민대학교 식품영양학과. 1. 서론 1.1. 연구배경 예덕나무(Mallotus japonicus)는 다량의 폴리페놀을 함유하여 항암, 항산화, 기초대사량 증진 등의 효능이 알려져 있다. 최근 예덕나무 내 유효성분 로틀린(rottlerin)이 지질항상성 조절자인 LRP6를 억제하는 것으로 알려되면서 항비만 소재로서 새롭게 주목받고 있다. 로틀린은 국내 자생종 예덕나무 추출물이라는 강점에 의해 소재, 식품, 의약 산업 등 다양한 분야로 활용이 가능하다. 하지만 항비만 기능과 관련한 로틀린 연구는 아직 초기단계에 머무르고 있어 향후 본격적인 시장화를 대비한 정확한 작용기전 구명이 시급하다. 따라서 본 연구에서는 폴리페놀의 한 종류인 로틀린을 활용하여 1) 분화지방세포에서 체지방 축적에 미치는 영향과 2) 베이지 지방세포에서 기질 산화에 미치는 영향을 종합적으로 검증하였다.. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 7.

(2) 그림 1. 예덕나무의 식물도감. 그림 2. 예덕나무(Mallotus japonicus). 1.2. 로틀린(Rottlerin) 예덕나무(카말라나무)는 인도, 필리핀, 동남아시아, 호주 등지에서 자라며 우리나라에서도 자생하는 식물이다. 예덕나무에는 천연 폴리페놀의 한 종류인 로틀린이 풍부하다. 로틀린의 화학분자식 C30H28O8 이며 분자량은 516.54 g/mol이다. 추출/정제된 로틀린은 오렌지-갈색을 띄며 물에는 불용성이나 DMSO 나 유기용매를 이용해 녹는 특징을 보인다. 로틀린은 다양한 생리활성을 나타내는데 항산화, 이온채널 조절, 항암 효력이 대표적이다.. 그림 3. 로틀린의 화학구조 8. 2016년 기초연구과제 총서.

(3) 1.3. 로틀린의 기능성 연구 로틀린은 예덕나무에서 유래된 천연 폴리페놀의 한 종류이며 다양한 질병모델에서 기능성이 탐색되었다. Park 등은 인간의 대장암 세포에서 로틀린에 의한 항염증 효과에 대한 결과를 발표하였으며(1), Kanou 등은 로틀린이 AMPK라는 단백질의 활성을 촉진시켜 혈관질환의 발병 위험을 낮춘다는 결과를 보고하였다(2). 또한 Phillip 등은 심장비대증의 발병을 억제한다는 연구를 진행하였으며(3), Lee 등은 로틀린이 비알코올성 지방간염의 발병을 억제한다는 연구 결과를 발표하였다(4). 특히 로틀린은 예전부터 항암에 대한 연구가 많이 진행되었는데 이미 여러 논문에서 로틀린이 췌장암 세포, 대장암 세포, 유방암 세포, 피부암 세포, 전립선암 세포 등의 다양한 암세포의 성장을 억제한다는 연구 결과를 보고하고 있다(5-9).. 그림 4. 로틀린의 작용기작(AA Dayem et al., Nutrients, 2016) 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 9.

(4) 1.4. 로틀린과 LRP6의 상관관계 Low density lipoprotein related protein 6 (LRP6)는 지단백질 수용체 및 신호조절 물질 수용체로서 지질항상성에 주요한 기능을 담당한다(10). LRP6 유전자가 삭제된 동물에서 mTOR 기전이 억제되며 인슐린 내성과 비만 지표들이 개선되었다. 또한 Wnt/β-catenin 기전이 약화되면서 UCP1과 PPARα등 기질산화 관련 인자들이 활성화되었다(11). LRP6는 Wnt 신호전달 조절을 통해 중성지질과 콜레스테롤의 흡수와 생성을 조절하는 것으로 알려져 있으며(12), 활성화된 Wnt/LRP6/β-catenin 기전은 지방세포의 발달을 억제하는 것으로 보고되었다(13). 최근 연구에서 로틀린이 LRP6 수용체의 분해를 촉진하는 것으로 보고되었으나 항암 기전에 관한 연구(14)로 지질항상성에 관한 연구 결과는 현재까지 전무하다. 따라서 LRP6 억제 기능을 중심으로 로틀린과 체지방 감소에 관한 연구가 필요한 실정이다.. 그림 5. 로틀린에 의한 체지방 감소에 대한 연구가설. 10. 2016년 기초연구과제 총서.

(5) 1.5. 연구목적 로틀린은 1) LRP6/mTOR/SREBP1c로 이어지는 지질생합성 과정을 제어하고 2) PRDM16/PPARα/ UCP1 조절을 통해 갈색지방세포의 발달 및 기질산화를 촉진할 것으로 가설을 설정하였다. 본 연구를 통해 로틀린에 의한 지질축적 과정 억제와 기질산화 과정 촉진에 대한 작용 기작을 연구하여 로틀린이 체지방 감소에 관한 기능성 원료로서의 가능성이 있는지 탐색하고자 하였다(그림 5).. 2. 실험방법 2.1. 3T3-L1 세포 배양 및 분화 지방전구세포 3T3-L1은 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)에 10% fetal bovine serum (FBS)과 1X의 penicillin-streptomycin이 첨가된 배지를 이용하여 배양하고, O2/CO2 (19:1)의 조성으로 이뤄진 37℃ 세포배양기에서 배양하였다. 세포는 confluency가 70~80% 정도 차면 0.25% trypsin-EDTA solution으로 2~3일에 한 번씩 계대 배양하였다. 지방전구세포 3T3-L1의 분화는 세포가 충분히 밀집되게 배양한 후에 진행하였다. 충분히 자란 3T3-L1 세포를 DMEM에 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), 1 μM dexamethasone (DEX), 10 μg/mL insulin, 및 10% FBS을 첨가한 배지에서 2일 동안 배양하였다. 이후 이틀 간격으로 DMEM에 10 μg/mL insulin, 10% FBS를 첨가한 배지로 교환하며, 총 8일 동안 지방세포로의 분화를 진행하였다. 분화된 3T3-L1 세포는 로틀린을 0, 5, 10, 20 μM로 48시간 동안 처리하였다.. 2.2. D16 세포 배양 및 분화 베이지 지방세포 D16은 10% FBS와 1X penicillin-streptomycin이 첨가된 DMEM/F12로 배지를 이용하여 배양하며, 10% O2/CO2 (19:1)의 조성으로 이뤄진 37℃ 세포배양기에서 배양하였다. Confluency 가 70~80% 정도 차면 0.25% trypsin-EDTA solution으로 2~3일에 한 번씩 계대 배양하였다. 베이지 지방세포 D16의 분화는 세포를 충분히 밀집되게 배양한 후 진행하며, 0.5 mM IBMX, 5 μM DEX, 0.5 μg/mL insulin, 1 μM rosiglitazone, 1 nM 3,3’,5-triiodo-L-thyronine (T3), 10% FBS을 포함하는 배지에서 4일 동안 배양하였다. 이후 이틀마다 0.5 μg/mL insulin, 1 nM T3, 10% FBS를 포함하는 배지로 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 11.

(6) 교체하며 총 12일 동안 분화를 진행하였다. 분화된 D16 세포는 로틀린을 0, 5, 10, 20 μM로 48시간 동안 처리하였다.. 2.3. MTT assay에 의한 세포 독성평가 지방전구세포 3T3-L1과 베이지 지방세포 D16을 96-well plate에 배양한 후에 로틀린을 농도별로 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 로틀린 처리가 끝난 후에 MTT 용액을 세포배양액에 20배 희석한 후에 처리가 끝난 세포에 첨가하여 37℃ 세포배양기에서 2시간 동안 배양하였다. 세포배양액을 제거한 후 MTT 용액에 의해 유래된 결정체인 formazan을 100% dimethylsufoxide (DMSO)로 회수한 후에 540 nm의 파장에서 흡광도를 측정하여 세포 사멸정도를 확인하였다. 또한 지방전구세포 3T3-L1과 베이지 지방세포 D16를 각각 분화시킨 후 로틀린을 농도별로 처리하여 MTT 용액에 의한 세포 생존율을 측정하였다.. 그림 6. MTT assay 원리. 2.4. Oil Red O 염색에 의한 세포 내 축적된 지방의 측정 3T3-L1을 분화시킨 후 최적화된 농도의 로틀린을 처리하였다. 처리가 끝난 3T3-L1 분화세포를 10% formalin을 이용하여 고정한 후에 oil red O 염색약을 고정된 3T3-L1에 처리하여 10분 동안 염색한 후에 광학 현미경으로 관찰하였다. 염색된 지방을 정량하기 위하여 염색된 세포에 100% isopropanol을 첨가하여 색소를 용해시켜 회수한 후에 500 nm 파장의 흡광도를 측정하여 축적된 지방구를 정량하였다.. 12. 2016년 기초연구과제 총서.

(7) 그림 7. 지방전구세포 분화와 Oil Red O 염색에 의한 지방구 정량. 2.5. Western Blot/Immunoblotting 로틀린 처리가 끝난 3T3-L1 분화세포와 D16 분화세포는 세포긁개를 이용하여 긁어내어 1X phosphatase inhibitor와 1X protease inhibitor가 첨가된 RIPA buffer를 넣고 bullet blender를 이용하여 세포를 분쇄하여 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질은 Bradford법으로 단백질 농도를 측정한 후에 2x Laemmli sample loading buffer와 혼합하였다. 준비된 시료는 10% acrylamide gel에서 SDS-PAGE 전기영동을 진행하고 총 단백질을 PVDF막으로 옮겼다. 막은 5% BSA에서 50분 동안 실온에서 blocking 한 후 1차 항체를 4℃ 에서 18시간 처리하였다. 이후 0.1% TBST로 세척한 후 HRP-conjugated 2차 항체를 실온에서 한 시간 처리하였다. 0.1% TBST로 세척한 후 화학 발광시약(ECL)을 적용하여 Bio-Rad ImageLab software로 단백질의 양을 정량하였다. β-actin과 GAPDH는 loading control로 사용하였다. 실험에 사용된 항체는 다음과 같음; ACC1-pS79, ACC1, FAS, SCD1, DGAT1, mTOR-pS2448, mTOR, S6K-pT389, S6K, S6-pS240/244, S6, SREBP1, UCP1, PGC1α, C/EBPβ, PRDM16, LRP6, LRP6-pS1490, β-catenin, TCF7L2, β-actin, GAPDH.. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 13.

(8) 3. 결과 및 고찰 3.1. 지방전구세포 3.1.1 3T3-L1 지방전구세포 분화 로틀린의 지질축적 억제과정 확인을 위한 전처리로 3T3-L1 지방전구세포의 분화를 수행하였다 (그림 8). 0.5 mM IBMX, 1 μM DEX, 10 μg/mL insulin 및 10% FBS을 첨가한 배지에서 2일 동안 분화를 유도하였으며, 4일 후부터 눈에 보이는 지방구가 형성되기 시작하였다. 분화가 끝난 8일 후에는 완성된 지방구(lipid droplet)를 확인하였다.. 그림 8. 3T3-L1 지방전구세포 분화과정. 3.1.2 세포 독성 시험 로틀린을 3T3-L1 지방전구세포에 처리 시 나타나는 독성을 평가하기 위해 세포독성시험(MTT assay) 을 수행하였다(그림 9). 로틀린을 0, 5, 10, 20 μM 처리하였을 때, 각 처리군들의 세포 생존율은 유의적인 차이가 나타나지 않았다. 로틀린을 최대 20 μM로 처리하였을 경우, 세포 생존율에 영향을 주지 않음을 확인하였다. 세포독성 시험 결과를 토대로 지질축적 억제능 확인을 위한 로틀린의 처리 농도를 0, 5, 10, 20 μM으로 설정하였다.. 14. 2016년 기초연구과제 총서.

(9) 그림 9. 지방전구세포 세포독성시험. 3.1.3 지방구 축적 분석 분화된 3T3-L1 지방구에서 로틀린에 의한 지방축적 억제능력을 oil red O 염색으로 확인하였다 (그림 10). 대조군 대비 로틀린 처리군들이 농도 의존적으로 지방구 형성이 감소되었다. Isopropanol 정량 결과 5 μM에서 약 20% 지방 축적이 억제되었고(P < 0.01), 10, 20 μM에서 약 30% 지방 축적이 억제되었다 (P < 0.001).. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 15.

(10) 그림 10. 로틀린 처리에 의한 지방구 축적 (**P < 0.01; ***P < 0.001). 3.1.4 지질합성 효소 분석 로틀린 처리에 의한 3T3-L1 지방구 축적 억제 기작을 확인하기 위해, 지방구 형성에 관여하는 지질합성 효소들을 immunobloting으로 측정하였다(그림 11). Acetyl-CoA carboxylase (ACC), fatty acid synthase (FAS), stearoyl-CoA desaturase-1 (SCD1)은 sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP1) 에 의해 발현이 증가하며 중성지방 합성에 관여하는 효소들이다. ACC1과 FAS는 20 μM에서 대조군 대비 각각 3배, 5배 정도 유의적으로 증가되었다(모두 P < 0.05). SCD1의 발현은 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보였으며, 20 μM에서 유의적으로 약 2배 감소되었다(P < 0.05). Diacylglycerol acyltransferase-1 (DGAT1)은 diacylglycerol (DAG)에 지방산을 붙여triacylglycerol (TAG)로 만드는 효소로, 중성지방 합성의 최종단계를 촉매하는 역할을 한다. 로틀린 5 μM 처리군에서 약 50% DGAT1 발현이 억제되었고(P < 0.05), 10, 20 μM에서 약 60% 발현이 억제되었다(P < 0.01).. 16. 2016년 기초연구과제 총서.

(11) 그림 11. 로틀린 처리에 의한 지질생합성 효소 발현 (*P < 0.05; **P < 0.01). SREBP1은 전사인자로서 지방산과 중성지방 합성을 유도하는 유전자의 발현을 조절하는데, 로틀린을 처리하였을 때 농도 의존적으로 SREBP1 발현이 감소하였다(그림 12). 특히 20 μM에서 약 80% 발현이 억제되었다(P < 0.001).. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 17.

(12) 그림 12. 로틀린 처리에 의한 지질합성 조절인자 발현 (**P < 0.01; ***P < 0.001). 3.1.5 LRP6 신호 기전 분석 지질항상성에 주요한 기능을 담당하는 LRP6와 활성형인 LRP6-pS1490을 immunobloting을 통해 분석한 결과, 로틀린 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보였다(그림 13). 특히 20 μM에서 70% 정도 LRP6 가 유의적으로 감소하였다(P < 0.001). 또한, LRP6-pS1490에서도 농도 의존적으로 감소하였으며, 10, 20 μM에서 각각 40%, 60% 정도 유의적인 감소를 나타냈다(각각 P < 0.05, 0.01).. 18. 2016년 기초연구과제 총서.

(13) 그림 13. 로틀린 처리에 의한 LRP6 발현 (*P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001). LRP6의 하위기전인 mTOR/S6K/S6의 발현을 측정하였다(그림 14). mTOR의 발현은 로틀린 20 μM에서 2배 정도 유의적인 증가를 보였고(P < 0.001), mTOR-pS2448은 20 μM에서 증가하는 경향을 나타내었으나 유의적 차이는 보이지 않았다. S6K는 20 μM에서 2배 정도 유의적 증가를 보였고(P < 0.05), S6K-pT389는 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보였으며, 20 μM에서 2배 정도 유의적 증가를 나타냈다 (P < 0.01). S6는 20 μM에서 80% 정도 유의적 증가를 보였고(P < 0.05), S6K-pS240/244는 유의적인 차이를 나타내지 않았다.. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 19.

(14) 그림 14. 로틀린 처리에 의한 mTOR-S6K-S6 신호기전 단백질 발현 (*P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001). LRP6의 다른 신호 기전인 β-catenin/TCF7L2의 발현을 측정하였다(그림 15). 로틀린 10, 20 μM에서 β-catenin의 발현이 약 30% 억제되었으며(각각 P < 0.05, 0.01), TCF4로 알려진 TCF7L2의 발현은 20 μM에서 약 40% 억제되었다(P < 0.05). 20. 2016년 기초연구과제 총서.

(15) 그림 15. 로틀린 처리에 의한 LRP6/β-catenin 신호기전 단백질 발현 (*P < 0.05; **P < 0.01). 3.2. 베이지 지방세포 3.2.1. D16 베이지 지방세포 분화 D16 베이지 지방세포의 confluency를 100% 가까이 되도록 배양한 후 0.5 mM IBMX, 5 μM DEX, 0.5 μg/mL insulin, 1 μM rosiglitazone, 1 nM T3, 10% FBS, 1X penicillin-streptomycin을 DMEM/ F12에 첨가해 만든 배지를 이용하여 4일 동안 배양하였다. 4일이 지난 후 분화가 시작되면서 지방구가 생성되는 것을 확인하였으며(그림 16), 총 분화는 12일 정도 소요되었다.. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 21.

(16) 그림 16. 베이지 지방세포의 분화 전(좌)과 분화 후(우). 3.2.2. 세포 독성 시험 로틀린을 D16 베이지 지방세포에 처리 시 나타나는 독성을 평가하기 위해 세포독성시험(MTT assay)을 수행하였다(그림 17). 분화하지 않은 베이지 지방세포와 분화가 완료된 베이지 지방세포에 로틀린을 0, 1, 2, 5 μM로 처리하였을 때, 각 처리군 사이 세포 생존율은 유의적인 차이가 나타나지 않았다. 세포독성시험 결과를 토대로 기질 산화 측정 확인을 위한 로틀린 처리 농도를 0, 1, 2, 5 μM로 설정하였다.. 그림 17. 로틀린 처리에 의한 베이지 지방세포 분화 전(좌)과 분화 후(우) 세포독성시험. 22. 2016년 기초연구과제 총서.

(17) 3.2.3. 열 발생을 통한 기질산화 관련 단백질 분석 분화시킨 베이지 지방세포 D16에 로틀린을 0, 1, 2, 5 μM 농도로 처리한 결과, 갈색 지방세포에서 기질산화를 통한 열 발생에 관여하는 단백질인 PGC1α와 UCP1이 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보였다 (그림 18). 특히 로틀린을 5 μM로 처리하였을 때, PGC1α가 유의적으로 약 70% 증가했고(P < 0.05), UCP1 또한 5 μM에서 유의적으로 2배 가량 증가했다(P < 0.01).. 그림 18. 로틀린 처리에 의한 열발생 단백질 발현 (*P < 0.05; **P < 0.01). 3.2.4. 열 발생을 통한 기질산화 관련 전사인자 분석 단백질 발현을 분석한 결과, 기질산화를 통해 열을 발생시키는 것에 관여하는 PGC1α와 UCP1의 발현을 조절하는 전사인자인 C/EBPβ와 PRDM16을 로틀린이 조절하는 것으로 나타났다(그림 19). PRDM16은 농도 의존적으로 증가하지는 않았지만 2 μM로 처리했을 때 유의적으로 약 2배 증가했다(P < 0.01). C/EBPβ는 농도 의존적으로 감소했고, 특히 5 μM에서 대략 30% 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다(P < 0.05).. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 23.

(18) 그림 19. 로틀린 처리에 의한 열 발생 단백질관련 전사인자 발현 (*P < 0.05; **P < 0.01). 3.2.5. LRP6 신호 기전 분석 지질항상성에 주요한 기능을 담당하는 LRP6와 활성형인 LRP6-pS1490을 분석한 결과, 로틀린 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보였다(그림 20). LRP6는 농도 의존적으로 감소하지는 않았지만 2 μM에서 대략 60% 유의적으로 감소했고(P < 0.001), LRP6가 인산화되는 정도 또한 2 μM에서 대략 80% 감소했다 (P < 0.001).. 24. 2016년 기초연구과제 총서.

(19) 그림 20. 로틀린 처리에 의한 LRP6 발현 (*P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001). 4. 요약 3T3-L1과 D16 세포주를 이용하여 로틀린에 의한 지질대사 개선 효과 검증하였다. 이를 위해 분화지방세포 및 갈색지방세포에 로틀린을 처리하고 세포독성, 지방축적, 지질생합성, 지방분해, 관련 전사인자를 분석하였다. 3T3-L1 세포주를 이용한 실험 결과, 로틀린은 처리 농도 20 µM 까지 세포독성이 없었다. 로틀린은 3T3-L1 세포주의 지질 축적을 농도 의존적으로 감소시켰다(5, 10, 20 µM, P < 0.01); 주요 지질합성 효소인 SCD1과 DGAT1의 단백질 발현량도 감소하였다(P < 0.05). SREBP1은 지질대사를 조절하는 전사인자인데, 그 발현량이 로틀린 처리 농도에 비례하여 유의적으로 감소하였다(P < 0.01). D16 세포주 실험 결과, 로틀린은 5 µM까지 세포독성이 나타나지 않았다. 로틀린은 기질산화를 조절하는 UCP1 과 PGC-1α의 단백질 발현량을 유의적으로 증가시켰다(P < 0.05). 이와 유사하게 갈색지방 분화 및 발달을 조절하는 PRDM16도 발현량이 크게 증가하였다(P < 0.01). 3T3-L1과 D16 세포주 모두에서 지질항상성의 주요 조절자인 LRP6/β-catenin 기전이 유의적으로 감소하였다(모두 P < 0.01). 로틀린의 지방 축적 억제 효과는 LRP6/β-catenin에 의한 효과로 나타났지만 정확한 세부기전에 대해서는 추가적인 연구가 필요하다. 모든 결과를 종합하면, 예덕나무의 대표 유효성분인 로틀린은 1) 3T3-L1 세포주에서 지질합성 전사인자 및 관련 효소를 억제하여 지방구 형성을 억제하며, 2) D16 세포주에서 갈색지방 분화를 촉진하며 기질산화 증가시켰다.. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 25.

(20) 5. 참고문헌 1. Park et al. (2013). Rottlerin induces heme oxygenase-1 (HO-1) up-regulation through reactive oxygen species (ROS) dependent and PKC d-independent pathway in human colon cancer HT29 cells. Biochimie. 92;110-115. 2. Kanou et al. (2008). Rottlerin activates AMPK possibly through LKB1 in vascular cells and tissues. Biochemical and Biophysical Research Communications. 37;434-438. 3. Phillip et al. (2007). Regulation of mTOR and S6K1 activation by the nPKC isoforms, PKCε and PKCδ, in adult cardiac muscle cells. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 43;754766 4. Lee et al. (2013). PKCd as a regulator for TGFb1-induced a-SMA production in a murine nonalcoholic steatohepatitis model. Plos One. 2;1-9 5. Maioli et al. (2009). Rottlerin inhibits ROS formation and Prevents NFκB activation in MCF-7 and HT-29 cells. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 10;1-7. 6. Lim et al. (2009). Rottlerin induces apoptosis via death receptor 5 (DR5) upregulation through CHOP-dependent and PKC d-independent mechanism in human malignant tumor cells.. Carcinogenesis. 30;729-736. 7. C. Torricelli et al. (2015). Phosphorylation-independent mTORC1 inhibition by the autophagy inducer rottlerin. Cancer Letters. 360;17-27. 8. Ugur et al. (2007). Tissue transglutaminase inhibits autophagy in pancreatic cancer cells.. Molecular Cancer Research. 5;241-249. 9. E. Daveri et al. (2016). Inhibitions of mTORC1 and 4EBP-1 are key events orchestrated by rottlerin in SK-Mel-28 cell killing. Cancer Letters. 380;106-113. 10. Go et al. (2012). Low-density lipoprotein receptor (LDLR) family orchestrates cholesterol homeostasis. Yale Journal of Biology and Medicine. 85;19-28. 11. Liu et al. (2012). Low Density Lipoprotein (LDL) Receptor-related Protein 6 (LRP6) regulates body fat and glucose homeostasis by modulating nutrient sensing pathways and mitochondrial energy expenditure. Journal of Biological Chemistry. 287(10);7213-7223. 12. Ye et al. (2012). LRP6 protein regulates low density lipoprotein (LDL) receptor-mediated LDL uptake. Journal of Biological Chemistry. 287(2);1335-1344.. 26. 2016년 기초연구과제 총서.

(21) 13. Go et al. (2014). The combined hyperlipidemia caused by impaired Wnt-LRP6 signaling is reversed by Wnt3a rescue. Cell Metabolism. 19(2); 209-220. 14. Lu et al. (2014). Rottlerin induces Wnt co-receptor LRP6 degradation and suppresses both Wnt/ β-catenin and mTORC1 signaling in prostate and breast cancer cells. Cellular Signalling. 26;1303-1309.. 예덕나무 껍질 추출물 로틀린(rottlerin)의 LRP6 억제에 의한 체지방 감소 효과와 세부기전에 대한 연구. 27.

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