경희대학교 의과대학·의학전문대학원

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Hematological Tests &

Bone Marrow Examination

진단검사의학과

이 우인

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Hematological Tests

•Anticoagulants

•CBC with Differential count •Reticulocyte

•ESR •PBS

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I. Anticoagulants

• Tri-sodium citrate

• calcium chelating

• PT, aPTT, Platelet aggregation test

• 항응고제 1 : 혈액 9 의 비율로 채혈

• Hematocrit 에 따른 항응고제 비율 조정

• [1:5 ~ 1:6~~~~1:9(45%) ~ 1:11]

• EDTA

• Calcium chelating

• Blood cell count, cell morphology

• Heparin

• Anti-thrombin III 와 결합하여 thrombin 억제

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( 혈장 )

• Serum ( 혈청 )

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(CBC)

CBC

Traditional Unit

Internationa

l Unit

Hemoglobin g/dL (12~16) g/dL Hematocrit dL/dL(%) (45%) L/L(%) Red Blood Cells(RBC) 106/uL (3.8 ~ 5.4) 1012/L White Blood Cells 103/uL (4.0 ~ 10.0) 109/L

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CBC

RBC index

Formula

Traditional * International Unit MCV ( 평균용적 )

Mean corpuscular volume

MCH ( 평균혈색소 ) Mean corpuscular Hb 적혈구 한개당 혈색소량 Hct(%) x10 RBC count(106/uL) Hb(g/dL) x10 RBC count(106/uL) 80~96 fl 27~33 pg MCHC ( 평균 혈색소농도 )

Mean corpuscular Hb conc.

Hb x 100

Hct _{33~36 g/dL}

RDW ( 크기분포의 변이계수 )

Red Cell distribution Width

SD x 100 MCV

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WBC Differential Count(D/C)- 백혈구감별계산

• Automated or manual

• Granulocyte

– Segmented neutrophil – Eosinophil – Basophil

• Lymphocyte

• Monocyte

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Platelet ( 혈소판 )

• 혈소판수

– 검체의 부적절한 상태에 따라 실제보다 높게 혹은 낮게 측정 – Pseudothrombocytopenia

– Ex) EDTA - induced pseudothrombocytopenia

• 말초혈액도말검사

• Citrate 항응고제 , 헤파린 등 다른 항응고제 이용하여 다시 측정

• Reticulated platelet

– 골수의 보상적인 혈소판생성능력 예측

• Mean platelet volume(MPV)

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III. Reticulocyte 망상적혈구

• Definition

– 미성숙 무핵 적혈구 , RNA 는 남아있고 Hb 합성이 계속되는 세포 – 골수의 조혈 능을 평가 – 0.5 ~ 1.5% ( 신생아 2.5% ~ 6%, 생후 2 주 )

• Interpretation

– Increase : 출혈 , 용혈성빈혈 – Decrease : 골수기능장애 , 신질환

• DDx

– Normoblasts (nucleated RBC)

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• Corrected Reticulocyte Count

= Reticulocyte count x patient Hct

정상 Hct(0.45)

• Reticulocyte Production Index

= Corrected reticulocyte / maturation time

** Hct 에 따른 maturation time (days)

45% - 1.0, 35% - 1.5, 25% - 2.0, 15% - 2.5 RPI 가 2 라면 정상에 비해 적혈구 생산이 2 배 증가

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Bone Marrow PB Normoblast _Reticulocyte _RBC Wright stain - polychromasia Supravital stain - reticulocyte

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IV. Erythrocyte Sedimentation Rate

(ESR)

• 염증 , 외상 , 암 등에 이용되는 비특이적인 검사 • 관련인자

– 혈장인자

• 섬유소원, alpha2, beta, gamma globulin 상승

적혈구 막의 음전하(zeta potential) 저하 Rouleaux formation( 연전 ) ESR 증가

• Albumin, lecithin 은 ESR 감소 – 적혈구인자

• 빈혈 , 적혈구 크기 , 모양

• Interpretation

– 0 ~ 9 mm/hr(M) – 0 ~ 20mm/hr(F)

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V. Peripheral Blood Smears (PBS)

• CBC 검사 결과를 추정

– Hb, Hct, RBC index (MCV,MCH,MCHC, RDW) – WBC count • 200 배 시야 field 당 평균 WBC No. x 1,000/μL – Platelet count • 1,000 배 시야 field 당 평균 혈소판 수 x 20,000/ μL

– Reticulocyte count : polychromasia

• 각 cell 의 shape, size, 분포 등을 관찰

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Ideal zone

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• 적혈구 크기의 이상 (Anisocytosis)

– normocytic, microcytic, macrocytic

• 적혈구 염색성의 이상 (Hemoglobin 양 )

– normochromic, hypochromic, hyperchromic

Normocytic normochromic Microcytic hypochromic Macrocytic hyperchromic Dimorphic normochromic

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• 적혈구 구조의 이상

Howell Jolly Body Basophilic Stippling Normoblast

Malaria infection & Stippling(Schuffner’s granules)

Megaloblastic anemia

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Iron deficiency anemia 정상 성인 10% Elliptocyte Spherocyte Cong. Spherocytosis Autoimmune hemolytic anemia Target cell 폐쇄성 황달 비장 절제술 후

Tear drop cell

Myelofibrosis

Schistocytes

(fragmented cell) Hemolysis (MAHA)_Burn

Megaloblastic anemia DIC Acanthocytes Abetalipoproteinemia Liver Disease Crenated cell Sickle cell Artifact

DDx. Burr cell(kidney dis)

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• 기타

Rouleaux formation Agglutination

Platelet clumping Giant Platelet

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Bone Marrow Examination

• Indication

• Bone Marrow Aspiration & Biopsy

• Stain

– Wright, Giemsa, Prussian blue(iron) – Reticulin(fibrosis), etc

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– BM, spleen, liver, lymph node, thymus, etc – Red vs. yellow marrow

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– stem cell & hemopoietic cell • Microenvironment – stroma • Vessels of BM – Nutritient a, arterole. capillary-sinus fistula, venule • Fat • Trabecula bone • Paratrabecula area

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• Hematopoiesis

– Production of a day

• RBC 20 억 /kg • Platelet 70 억 /kg • Granulocyte 8.5 억 /kg

– Time

• RBC 5 일 • Platelet 7 일 • Granulocyte 5 ~ 6.6 일

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Myeloid Stem Cell Lymphoid Stem Cell B,T Lympho-blast Lympho-cyte B, T CFU-GM BFU-E CFU-E CFU-Meg

Monoblast Myeloblast Pro-normoblast Mega-karyoblas t Pro-myelocyte Mega-karyocyte Myelocyte Meta-myelocyte Normoblast Band neutrophil Reticulocyte Monocyte Segmented Neutrophil Erythrocyte Platelet

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Normoblast

Reticul-ocyte

RBC

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BM

PB

Shift to left maturation in PB

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• Most important diagnostic test

– Dx for hematologic abnormalities

• Indication

– Anemia

– Malignancy

• Leukemia, Myelodysplastic syndrome, Lymphoma • Cancer metastasis, etc

– Myeloproliferative disorders – FUO

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① 혈액질환이 의심되고 임파절 , 간비종대 ② 말초혈액소견이 골수이형성증후군 또는 백혈병 ③ 원인을 알 수 없는 빈혈 , 혈소판 감소 , 백혈구 감소 ④ 방사선 소견에서 혈액질환 의심 ⑤ 암의 전이여부 (metastasis) 확인 ⑥ 육아종 (granuloma) 의 세균학적 또는 병리조직학적 검사 ⑦ Storage disease 나 골질환의 진단 ⑧ 빈혈 , 백혈병 등의 치료효과와 예후 판정 ⑨ 다발성골수종의 진단 및 면역글로불린의 이상 ⑩ 철결핍성빈혈 , 거구성빈혈 등 혈액질환의 추적검사 , 골수배양 , 세포유전학적검사

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PB Myeloblast Megakaryoblast Promyelocyt e Myelocyte (N, E, B) Metamyelocyte (N, E, B) Megakarycyte Lymphoblast (Monoblast) (Promonocyte) S h if t to le ft m a tu ra ti o n H e m a to lo g ic M a lig n a n c ie s Promormoblast Leuko-erythoblastic Reaction

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Promyelocyte Primary granule(azurophilic) Secondary granule Pink Nucleus indentation 시작 Myelocyte Metamyelocyte B e n ig n vs.

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Tibia(newborn)

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abnormal cell, etc – Normal cells

– M(myeloid):E(erythroid) ratio

= 정상 2 ~ 4 : 1

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Myeloblast 0.1- 3.5 Promyelocyte 0.5- 5.0 Myelocyte 5.0-20.0 Metamyelocyte 10.0-30.0 Band N 5.0-20.0 Segmented N 7.0-25.0 Eosinophils 0.3- 6.0 Basophils 0 –1.0 Lymphocyte 5.0-20 Monocyte 0-0.2 Proerythroblast 0.5-5.0 Erythroblast 4.0-30 Plasma cell 0.1-3.5 Megakaryocyte 0.1-0.5 Reticulum cell 0.1-2.0

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- Distribution of cells, Abnormal cell - Tumor invasion, Granuloma,

- Lymphoma stage Work-up - Etc

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