TLC 전개전준비

(1)

TLC 전개 전 준비

• 건조한 상태 유지

• 선 적심 (선 세척; prewashing)

• 활성화 (Activation : 10 – 30 min, 120

^o

C)

기기분석

기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)

1

(2)

• 컨디셔닝 (일정한 습도 유지)

TLC 전개 전 준비

기기분석

2

(3)

시료 점적 하기

• 극성도가 시료 분포에 중요함

• 용매선 지키기도 중요함

_{끌림 현상 발생}

기기분석

3

(4)

용매 조건 (Solvent system)

• 시료를 완전히 용해 시킬 것

• 지지체를 통해 시료를 적당히 운반할 것

• 가능한 중간 혹은 적당한 hRf 값을 가질 것

• 시료들에 대한 적정한 분리도를 가질 것 기기분석

4

• 시료들에 대한 적정한 분리도를 가질 것

• 안정하고 순도가 높을 것

• 점도가 낮을 것

• 적당한 증기압을 가질 것

• 가능한 무독성

(5)

극 성 도

• 용질의 극성도 ; 극성/비극성

• 극성 용질: 알콜 (ROH), 산 (RCOOH), 아민류 (RNH

²

)

기기분석

5

• 극성 용매: 메탄올, 에탄올, 아세트산

• 비극성 용질 : 탄화수소, 케톤류 (메탄올대비임)

• 비극성 용매 : 헥산, 톨루엔 (메탄올대비임)

(6)

Solvent Eluotropic Series (용매 용리 세기)

Solvent E-value

– Toluene 0.29

– Chloroform 0.40 기기분석

6

– Acetone 0.56

– Ethyl Acetate 0.58

– Ethanol 0.88

– Methanol 0.95

– Acetic Acid/Ammonia High

– Water High

(7)

용매 극성도 계산법

• E^final ⁼ xE¹ + xE² + ……..xEⁿ

• x = 용매의 부피분율

• E = 용매의 E 값

– 예제

기기분석

7

– 예제

– 25 mL CHCl³ + 75 mL EtOH

– 0.25 x 0.40 + 0.75 x 0.88 = 0.76

(8)

Flow constant (κ) κ = ZF²/t

κ = flow constant [mm²/s]

ZF = distance between the solvent front and the solvent level [mm]

t = development time [s]

기기분석

8

(9)

챔버 증기 포화에 대한 영향

기기분석

9

(10)

챔버 증기 포화에 대한 영향

기기분석

10

(11)

챔버 증기 포화에 대한 영향

기기분석

11

(12)

2차원 전개법

• 1 차원 전개 : 일반적

• 2 차원 전개 : 많은 시료를 빠른 시간에 분석할 경우 적용

기기분석

12

(13)

정상/역상 용매 비교

기기분석

13

(14)

역상(지지체) TLC

기기분석

14

(15)

TLC vs HPLC

기기분석

15

(16)

일반적인 TLC 문제 해결법

• Over migration Developer too polar Reduce polarity

• Under migration Developer too non-polar Increase polarity

• Distorted solvent front Developer not equilibratedEquilibrate

• Distorted spots Wrong adsorbent Change plates

• Distorted spots Spotted too much Change concentration

기기분석

16

• Distorted spots Spotted too much Change concentration

• No separation Wrong developer Change developer

• No separation Wrong adsorbent Change plate type

• Tailing Spot overloading Reduce concentration

• Tailing Component is basic Increase acidity

• Tailing Component is acidic Increase basicity

• Tailing/no separation Decomposition Developer/plate

(17)

HPTLC

기기분석

17

(18)

HPTLC

기기분석

18

(19)

Sample application

기기분석

19

(20)

기기분석

20

(21)

254 nm

366 nm

기기분석

21

White light

Phosphomolybdic acid derivatization

(22)

Radio-TLC

기기분석

22

(23)

Principle of Radio-TLC

P10 Gas

(90% Ar/10% Methane)

기기분석

23

Collimator

Sample

(24)

Radio-labelled compound

O

OH

18F HO

HO HO O

OAc

18F AcO

AcO AcO O

OAc AcO

AcO AcO

OTf

MeCN

18F^-,PTC 1N HCl

(¹⁹F) (¹⁹F)

기기분석

24

Z_S

Solvent level Start line

Z_St

Z₀ Z_F

TLC Radio-TLC

(25)

Sample chromatogram

기기분석

25