3- 참고문헌

(1)

대한임상뱅리사회지 : 제 13권 제 2 호 1981

=Abstract=

사쿠체 병변을 보기위한 Jones염색밥

경희대학교 의파대학 부속뱅원 임상뱅리과

지도:李重達교수

張學 JI頂

Jones’ Staining Method on Renal Glomerular Lesions

Directed by Prof: J ung Dal Lee

,

M.D.

Hak Soon Chang, M.T.

Dept. of Cliγzical Pathology, Kyung Hee University Hospital^‘

Jones' method (periodic acid-methanamine silver) has been used for the staining of renaf glomerular basement membrane. There are considerable discrepancies according to pH and temperature of methanamine silver solution, thickness of paraffin sections and to the fixatives used in this method. Therefore, for the selection of optimal environment for the staining, 20 cases were selected from the recently performed renal biopsies at Kyung Hee University HospitaI and were stained at 4 different pHs of the methanamine-silver solution at various length of staining times.

Followings were the resu^Its obtained.

1. At pH 8.95""'9.00, it took 55 minutes for the optimal result of staining and the solution was very stable. Good specimens were obtained with clear staining solution.

2. At pH 9. 15""'9.20, it took 45 minutes for obtaining optimal specimens.

3. At pH 9.35""'9.40, it required much shorter time, but good results couldn’t be obtained because the staining solution became turbid and it lead precipitate to impregnate on the speclmens.

1.

^서 ^론

망상섬 유 (reticulum fiber)의 변화를 보기 위 한 특수 염색방볍은 그 조직의 종류에 짜라 여러가치가 있다.

Gomori, Snook, Wilder, Manuel, periodic acid-silver (Jones), Heidenhain’s aniline blue, 그러 고 신경 섬 유 염 색 에 쓰이 는 Bielchowsky와 Sevier-Munger 망볍 등 을 들수있다.

특히 신장의 사구체 병변을 이해하고 진단하는데에 는 periodic acid schiff (P.A.S)만응， Masson’s tric- hrome 그리 고 Jones 염 색 등이 흔히 실시 되 고 있 다. 연 자는 사쿠체 혈관의 기저막을 섬세하게 염색시켜 주는 Jones염 색 볍 을 질시 함에 있 어 염 색 액 언 methenamine-

silver용액의 pH 및 염색시간의 차이가 사쿠체 꺼저막 의 염색성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 이 연구

를 질시하였다.

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(2)

II. 재료 및 방법

재료

:

최근 정휘의료원 엄상뱅러과어1 의뢰된 신장의

생 검 조직 을 alcohol Boiun용액 에 고정 한후 paraffin어1

포애하고 2μm의 두께로 연속철펀을 제착하였다. 여기

에 Jones염 색 을 싣시 하였 는데 methenamine-silver용

액의 pH와 온도어1 짜라 염색도가 상당한 차야를 나타 내는 것을 얄게 되었다. 저자는 이것을 감안하여 최근

20 례 의 신장 생 검 조직 을 선청 하여 methenamine-silver

염색액의 여러 상야한 pH(8. 95^{" ,}9. 00, 9.15"'9.20, 9.35"'9.40,

9.55"'9.60) 에 서 각 pH마다 4 례 씩

60⁰C oven에서 염색을 살시하고 그염색성을 평가 하였다.

천 례 에 서 조직 의 고정 액 은 alcohol Boiun용액 을 사용 하였 다 Methenamine-silver 염 색 액 은 3% methenamine 수용액 42.5ml와 5%silver nitrate수용액 2.5ml

블 흔합하고， 0.05M borate(sodium borate 1 ， 907g을 100.0ml증류수에 녹임 ) 7.0ml를 첨 가 하였 다. 01 혼 합액 을 pH71 로 1N NaOH용액 으로 가하면서 각각 상 야한 pH를 조정하였다.

땅뱀 : 통상의 탈 paraffin정 펀을 O. 5% periodic acid 에 먼저 산화시 키 고 methenamine silver용액 에 20분

경파후부터 염싹펀 표본을 5분 간격으로 현미경 하에

서 관찰하여， 그 염색성을 비교 판찰하였으며， 가장 찰 염 색 이 된 시 간을 택 하여 O. 1 % gold chloride블 거 쳐 hypo로 처 라 하였 다. 대 조염 색 으로 eosin-윤 사용하 였고， 탈수， 청맹， 맞 봉엽은 꽁성-방뱀으로 삽시하였 다.

염색결과의 판정은 가장 잘 염색된 표본이 사구체의

기저막은 흑색으로 염색 되었고， 서]포잘은 적색이며 탄력 섬 유는 흑색 으로 나다났다.

1lI. 관찰성적

이 상의 방럽에 의 해 methenamine silver용액 의 pH 및 염색시간의 차이로 그 염색성을 관찰한 성적융 요 약하면 마음표(표 1) 와 같마. 염 색 시 간은 20분부터 60 분까지 5분 간걱으로 캠경하켜 그 정도를 판정하였마.

pH 8.95 ，....， 9.00 안 염색용액에서는 35분부터 황색으 흑 염색되기 시작하여 55분에 농염 되었다. 염색용액 은 아주청 명 하였 마. pH 9.15 "， 9.20 에 서 는 30분이 경 과 하연서 황색만융。 1 나다나기 시작하였고， 45분어1 서 흑 색으로 농염되었다. 표본。1 일정하게 농엽되어 가는 과청을 그 시간차에 따라 구분할 수 았었고， 더욱이 염색용액자체가 아주 청명하여 s Ii de어1 첨선물이 없이

표 1. 사구채 치저막의 염색성(Jones 방법)

fj

^{20 125}^• ³⁰ⁱ³⁵^I⁴⁰^I⁴⁵ⁱ

8 95-9.00

I

¹ ^I

1+1 + I 뷰 | 빠 | 빠 |

9 15-9.20

I \τf#패ri-「FJr]-1-|

9.35-9.40 i

÷

^j

什 | 래 i ^바 ^| l l

^f

꿇B그g펴üT누(什 j 바 I~꾀

^I ^I

I

^I

+;파악의기저막황색

+t; 사구체 기저막 황색 케;피막의기저막흑색 써;샤구체 기셔막 흑색 페;괴-염색

깨끗한 표본윤 얻을수가 있었다. pH 9.35-9.40의 용 액에 염색만응은 상당허 빨라 보였으나， 25분 염색도 중 용씩。1 흔탁되기 시착하여 채끗한- 표본을 얻을 수가 없 었 다. 40분에 농염 색 으로 나타났마. pH 9.55-9.60 염색용액은 염싹만-웅전부터 흔탁되기 시작하여 검은침 천블。 1 표본이1 부착되았으녁 35분이1 이미 과염색으로 나타났다.

그림 l-A. Jones 염 색 뱀 에 의 한 40분 만응후 사구체 펴막의 기저막 (pH 8.95,....,9.00)

그림 l-B. Jones 염 싹 볍 에 의 한 45분 만응후 사구체 파 막의 거 저 막 (pH 8.95-9.00)

- 8 1 -

(3)

그림 l-C. Joncs 캄색법해 위한 50분 만응후 사구체파 막의 기 저 막 (pH 8.95^,.....9.00)

그림 l-D. Jones염 색 법 에 의 한 55분 반응후 사구체

피 막의 기 저 양 (pH 8.95.-9.00)

신장의 사구체 기 저 막이 methenamine _silver용액_에

염색되는 정도릎 펀마경 사진으로 표시하연 다읍파 같

다(그럼 1).

N. 고 안

Jones 닙 걱 ‘엽 이; 시-용되 는 모든 증류수는 chloride가

제 거 된 증류수픔 사용하여 야 하며 methenamine silver

그림

2.

사구체의 청상모세혈관의 기저막。l 찰 나타나

고 있 다. (]ones' pH 8.95.-9.00 55분염 색 )

그림

3.

사구체의 비후된 모세혈관의 기저익-이 찰나타

냐고 있 다. (Jones' pH 8.95.-9.0055분염 색 )

본 자체의 내부척 변화를 방지하71 위함야다.

저자의 성적에서

pH

8.95.-9.00의 용액이 가장 안

정 되 고， 좋은 염 색 표본을 얻을 수 가 있 으묘로 methe-

namine-silver용액 의 pH를 8.95-9.0C을 권장하는 바

이다.

V. 걸 른

용액의 용기는 농침산 처리로 깨끗이 씻고 증류수로씻

응후

coplin

þr릎 사용하여 야 한다· 용기 가 깨 끗치 않 신장의 사쿠처l 병 란을 부기 우] 펙

methenamine silver

을때는 시약의 칩은 침전붙이 생겨 용기에 부착되었으 용액의 pH및 염색시간의 차이들 검토한 결과 다읍과

같은 걷폰을 얻었다.

며 염색이 잘 되지 않았다.

과염을 펴하여야 하녁 혹시 과엽되었을해에는

3% 1. pH

8.95.-9.0엔 염색액헤서 엽색반응야 오랜시

sodium

metabisufite로 1-3분 처 리 란다. 주염 색 인 간(떠55분) 요하는 단점 은 있 」으즈나， 매 우 안정 성 있 는 좋 me안t야he밍없nam꾀펴 짜뜻한 증류수로 처 리 한 후 짜뜻한 1년피ine si1피1v、ve앙r~←용용액 에 서 않을 염 색 할 혜 먼저 은 표본을 얻을 수 있 었 고 염 색 용액 도 선명 하였 단

methenamine silver 2. pH

9.15 ，...92.0의 염 색 용액 에 서 45분간만응푸 좋 -

용액으후 옮거 염색하여야 한다· 이는 일정한 온도어1 은 표본을 얻을 수 가 있었다.

서 염색함으로 철편의 오염융 막고 염색되는 조직 뇨 3. pH

9.35.-9.40의 용액에서 염색시간은 빠르나，

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(4)

용액에 혼탁이 생김파 동시에 표본에 첨전둘。 l 생겨 좋은 표본을 얻을 수 가 없었다(그럼 2) (그림 3).

참고문헌

1. Jones, D.B.: Amer, J. Path, 27 : 1009, 1951

2. Lura, L.G.: ~danual of histokgic staining methods e:f the 와 fIP. 3rd Edit.

l\Ic선 r3\Y-Hìll Bcck Co. New York, 1968

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