• 검색 결과가 없습니다.

The Antitumor Effect of 90K Protein in Prostate Cancer Cell Lines

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

Share "The Antitumor Effect of 90K Protein in Prostate Cancer Cell Lines"

Copied!
8
0
0

로드 중.... (전체 텍스트 보기)

전체 글

(1)

291 책임저자:정익주, 󰂕 519-809, 전라남도 화순군 화순읍 일심리

160, 화순전남대학교병원 혈액종양내과 Tel: 061-379-7632, Fax: 061-379-8019 E-mail: ijchung@chonnam.ac.kr

접수일:2010년 11월 1일, 1차 수정일:2010년 11월 4일, 2차 수정일:2010년 11월 10일, 게재승인일:2010년 11월 12일

Correspondence to:Ik Joo Chung

Department of Oncology, Chonnam National University Hwasun Hospital, 160, Ilsim-ri, Hwasun 519-809, Korea

Tel: +82-61-379-7632, Fax: +82-61-379-8019 E-mail: ijchung@chonnam.ac.kr

종양항원 90K의 전립선암세포에서 항암 효과

화순전남대학교병원 종양내과

이지희ㆍ정익주

The Antitumor Effect of 90K Protein in Prostate Cancer Cell Lines

Ji Hee Lee and Ik Joo Chung

Department of Oncology, Chonnam National University Hwasun Hospital, Hwasun 519-809, Korea

90K (Mac-2 BP) is a tumor-associated protein belonging to the scavenger receptor cysteine-rich domain superfamily that is implicated in immune defense. It is reported that 90K influences on the prognosis of various cancers including breast cancer. We examined to explain that 90K is associated with proliferation and metastasis in prostate cancer. The impact of 90K was analyzed by combining cell cultures, in vitro invasion assay, cell proliferation assay and luciferase assay. Secreted 90K suppressed prostate cancer cell proliferation and invasion via a repression of AP-1 activity. But, the impact of 90K is masked through binding with galectin-3. The data suggest a strategy of strengthening the impact of 90K with knockdown of galectin-3 as a therapeutic approach to prostate cancer progression. (Cancer Prev

Res 15, 291-298, 2010)

Key Words: 90K, AP-1, JNK, Prostate cancer

서 론

90K는 세포에서 glycosylation 과정을 거친 후 세포 밖 으로 분비되는 당단백으로서, 면역반응에 관련된 scav- enger receptor cystein-rich domain superfamily를 포함하는 종 양 관련 단백이다.

1,2)

다양한 세포 형태에서 합성되고 분 비되며, 정상인의 혈청에서도 존재한다.

3)

특히, AIDS와 종양 등 질병을 가진 사람의 혈청에서 그 발현양이 증가 되고 있다.

2,4)

90K는 galectin과 인테그린(integrin)과의 결 합을 통해, 세포와 세포, 세포와 기질간의 결합에 연관되 어 있다.

5)

Galectin-3는 31 kDa의 질량을 가진 beta-galactoside-결합 단백으로서, 세포내 당단백, 세포표면분자, 세포외 기질

단백 등과 상호작용하는 lectin 중 하나로서, 상피세포와 면역세포에서 주로 발현되고 암의 진행 및 전이와 상관 관계를 가지고 있다.

6)

최근 연구결과에서 galectin-3가 혈 관신생, 세포와 기질의 결합, 혈액을 통한 미세전이 등 암의 침습과 전이의 여러 과정에 밀접한 관련이 있다고 보고되고 있어서 암의 치료에 표적 단백으로서의 가능 성이 제시되었으며 몇몇 암의 진단 표지자로 보고되고 있다.

7)

90K는 galectin-1, 3의 리간드로 알려졌다.

8)

A375세포와

90K 단백을 배양시 특이적인 탄수화물-의존적 방법으로

세포 표면에서 galectin-3와 결합함이 확인되었다.

5)

동종

의 세포 응집을 유도하는 90K는 락토스 또는 galectin-3에

대한 항체에 의해 저해되었고, 이러한 결과는 90K단백

이 galectin-3와의 상호작용을 통해 전이과정 중 암세포의

(2)

색전 형성에 기능적 역할을 수행함을 보여준다.

9)

하지만 90K는 다양한 암에서 예후와의 연관성에서 서 로 상반된 연구결과가 보고되고 있다. 몇 몇 보고는 유방 암에서 증가된 90K 수치가 좋지 않은 예후와 연관되어 있 다고 보고되고 있는 반면, 후두암 모델에서는 저하된 90K 발현이 짧은 생존률과 관련 있다고 보고되고 있다.

9∼12)

전립선암은 미국에서 가장 흔하게 발병하는 암으로 최근 우리나라에서도 발생이 증가하고 있다. 전립선암 은 다른 암에 비해 다소 높은 치사율을 가지고 있는데 이는 진행된 상태에서 발견되기 때문이다. 따라서 유용 한 전립선암의 예후나 진단 표지자 발굴이 필요한 실정 이다. 전립선암 세포에서 90K가 promatrilysin 발현을 유 도하므로 90K가 전립선암 진행의 표지자가 될 수 있음 이 보고되어 전립선암에서의 90K 역할에 대한 연구의 필요성이 제시되기도 하였다.

13)

최근 저자는 90K가 대장암에서 종양억제자로서의 기 능을 가지고 있음을 보고한 바 있다.

14)

90K의 대장암세 포성장 및 전이억제 효과가 전립선암세포에서도 작용하 는지 확인하고, 이 연구를 통해 전립선암의 진행과 전이 에 미치는 90K의 역할을 밝혀보고자 한다.

재료 및 방법

1. 세포배양

한국세포주은행으로부터 분양받은 293T, PC3, DU145 세포는 10% 불활성화된 혈청이 들어있는 DMEM 및 RPMI 에 각각 풀어서 25 cm

2

플라스크에 넣은 후 배양액 을 이틀간격으로 갈아주면서 배양하였다. 세포가 꽉 차면 EDTA (0.53 mM)-Trypsin (0.05%) 용액을 처리하여 1,000 rpm으로 원침하여 세포를 모은 후 10% DMSO, 30∼40%

FBS가 함유되어 있는 용액에 세포를 넣어 질소탱크에 보 관하여 세포주를 확립하였다.

2. 플라스미드

90K와 galectin-3에 대한 코딩 서열은 293T 세포의 cDNA로부터 RT-PCR를 통해 합성하였고 염기서열분석 을 통해 확인하였다. 특히 90K 발현 벡터는 blasticidin에 저항성 있는 pcDNA6A 벡터를 이용하였고(Invitrogen), 안 정적으로 90K를 발현하는 세포주 확립에 사용되었다.

Luciferase 분석에 사용된 AP-1 reporter는 Dr. 김낙성(전남 대학교, 한국)으로부터 제공받았다.

3. 암세포 내 유전자 도입

세포에 90K 유전자 도입은 lipofectamine 2000 transfec-

tion reagent (Invitrogen)를 사용하였다. 48시간 후 blastici- dine을 넣은 DMEM 배지로 갈아주면서, 안정된 유전자이 입 세포를 선별하였다. 확립된 세포주는 모세포와 동일 한 특성을 갖는지 확인한 후 실험에 이용하였다.

4. Luciferase assay

전사인자 AP-1의 활성화를 확인하기 위해 AP-1의 결 합부위를 포함한 프로모터부위와 luciferase가 결합된 re- porter plasmid를 이용하였다. 세포내로 90K를 비롯한 여 러 유전자를 각각 도입한 후 프로모터 활성 후 생성되는 luciferase의 활성정도를 측정함으로써 전사인자의 프로 모터가 활성화 되는 정도를 측정하였다. 유전자 도입은 lipofectamine 2000을 이용하였고, 36시간 후 세포를 모두 수확하여 용해시킨 후 확보한 세포 상등액에 기질이 되 는 luciferin을 넣어줌으로써 상등액에 존재하는 luciferase 효소의 활성을 측정하였다. 흡광도는 Berthold사의 발광 분석기를 이용하였다.

5. ELISA

90K 과발현 세포와 대조군 세포를 준비한 후, 48시간 동안 혈청 없는 배지로 배양한 후 상층액을 100 μl씩 취하고 90K ELISA kit (BenderMedSystem, USA)을 이용하 여 분비된 90K 단백 농도를 정량하였다.

6. 면역침강법

세포주에 90K 유전자를 과발현 후 세포는 PBS (pH 7.4) 로 두 번 씻는다. ProteoJET Mammalian Cell Lysis Reagent (Fermentas)에 세포를 용해시킨 후 13,000 rpm (4

o

C)에서 15 분간 세포를 원침시켜서 상등액을 얻었다. 얻은 상등액 은 90K에 대한 항체와 2시간 반응을 시킴으로써 면역침 강을 유도하였다. Protein A/G-agarose beads (Roche)와 면역 복합체는 2시간동안 반응시키고, A/G-agarose beads는 PBS 로 4회 씻어준 후 SDS-polyacrylamide gel로 단백전기영동 을 수행하였다. Western blotting 후 PVDF membrane으로 단백을 옮긴 후 immunoblotting을 통해 분자간의 상호결 합을 확인하였다. 세포의 추출액(25 μg)을 전기영동의 단백컨트롤로 사용하였다.

7. 단백전기영동법

세포를 수확하여 각 세포를 얼음에 30분간 lysis buffer

(10 mM Tris, 1 mM EDTA, 400 mM NaCl, 10% glycerol,

0.5% NP-40, 5 mM sodium fluoride, 0.1 mM phenylmethyl-

sulfonyl fluoride, 1 mM dithiothreitol)를 첨가하여 방치한 후

단백을 추출하였다. 동일한 양의 단백(25 μg)을 사용하

(3)

Fig. 1. 90K expression in 293T and prostate cancer cells. On the basis of the amounts of 90K secreted in the culture media, which was measured by ELISA assay. We then selected representative clones for in vitro assays.

고 PVDF membrane으로 옮긴 후 90K에 대한 항체를 2시 간 동안 결합시킨 후 세척하고 이차항체를 결합시켰다.

그 후 labeled band를 enhanced chemiluminescence kit (ECL) 을 이용하여 확인하였다.

8. MTT-세포성장률 측정

90K transfectant와 대조군 clone의 in vitro 세포성장률은 MTT assay에 의해 측정하였다. MTT분석은 5 mg/ml의 MTT 원액을 각 well에 100 μl씩 넣고 37

o

C에서 2시간 동안 배양한 후 extraction buffer (20% SDS in 50% dime- thylformamide, pH 4.7)를 400 μl씩 첨가하여 다시 37

o

C에 서 20시간 배양하였다. 각 well에서 200 μl씩 반응액을 얻어 96well plate에 옮겨 microplate reader를 이용하여 570 nm에서 OD값을 읽었다. 이때 blank로는 extraction buffer 를 이용하였다. 혈청제거를 일으키지 않은 well의 OD값 과 blank OD값의 차이를 100으로 각각의 처리에 의한 세 포생존률을 상대적 백분율로 환산하여 평균±표준오차 로 나타냈다. 90K 단백의 과발현이 암 세포주의 in vitro 성장률에 미치는 효과를 보았다.

9. Invasion assay

클로닝된 단백이 과발현된 세포주의 전이 억제 능력 의 차이를 비교하기 위해 in vitro invasion assay를 측정하 였다.

Trans-24 well permeable supports (8 μm; Corning Costar Corporation, Cambridge, MA)는 필터에 얇은 막을 형성시 키기 위해 증류수에 1% gelatin을 녹인 후 upper chamber 와 lower chamber에 각각 300 μl, 500 μl을 넣어준 후 밤 새 37

o

C 배양기에 두었다. 다음 날, plate upper chamber와 lower chamber에 여분의 gelatin을 제거한 후, 2시간 이상 실온 건조시켰다. 세포는 분석하기 전에 80% 정도 con- fluent하게 맞춘 후 trypsin 처리하여 0.2% BSA를 함유한 배지로 세포농도를 2×10

6

되게 맞추었다. Lower chamber 에는 attractant을 400 μl씩 넣고, Upper chamber에는 세포 를 각 well당 2.4×10

5

cells이 되게 120 μl넣었다. Attract- ant로는 90K를 발현하고 있는 293T 세포와 대조군으로 는 vector만을 과발현시킨 293T 세포를 사용하였다. 염색 방법은 Diff-Quick을 사용하였는데, Transwell을 집게를 이 용하여 분리시키고 그대로 A 용액에 2분, B 용액에 3분, C 용액에 3분 담근 후 물에 헹구어서 여분의 염색액을 제거하고 upper chamber에 붙어있는 세포는 filter를 통과 하지 않은 세포들이기 때문에 면봉으로 위를 닦아내었 다. 세포수는 직접 ×20 현미경에서 착색된 수를 무작위 로 네 군데를 센 후 평균값을 구하였다. 세포수를 비교할

때는 각 well 간의 세포수를 비교하였다. 각 세포는 최소 한 duplication해서 두 번 실험하였다.

결 과

1. 과발현 세포주 확립

전립선암세포에 90K가 미치는 영향을 알아보고자 90K가 안정적으로 과발현되는 세포주를 확립하고자 하 였다. 암세포가 아닌 세포주, 293T 세포에 90K를 과발현 시킴으로써 배양액에 농축된 분비당단백을 암세포 활성 을 분석하는데 사용하고자 하였다. Vector만을 과발현시 킨 대조군에 비해 90K 과발현 293T 세포는 약 30배의 높은 90K 분비율을 보였다. 또한 90K가 직접적으로 암 세포에 미치는 영향을 살피고자 전립선암세포주인 DU145와 PC3 세포에서도 90K를 과발현하는 세포를 각 각 확립하였다.

세포에 90K 과발현은 90K 발현 특이적인 ELISA kit을 이용해 확인하였다(Fig. 1). 이 결과를 통해 90K를 과발현 시킨 세포주에서 세포 밖으로의 90K 단백분비가 효과적 으로 이루어졌음을 확인하였다.

2. 세포의 성장에 미치는 영향

293T/vec 세포와 90K 과발현 세포의 성장률을 비교함

으로써 90K가 세포성장에 미치는 영향을 살펴봤다. 같

은 수의 세포를 배양시킨 후 4일 동안 세포활성을 측정

한 결과, 2일째부터 세포의 성장이 저해되었으며 4일 이

상 억제효과가 지속되었다(Fig. 2).

(4)

Fig. 2. 90K-overexpressing cells have reduced cell growth rates. 293T and DU145 cells transfected with 90K cDNA or vector were incubated for 24∼48 h. Proliferation were analyzed by MTT assay. p-values of less than 0.05 were considered statistically significant. *p<0.05, **p<0.001.

Fig. 3. Interaction of 90K with galectin-3 was inhibited with increasing doses of lactose (galectin competitor). 293T cells were treated with sucrose (20 mM) or with increasing doses of lactose, and the cell lysate were prepared, im- munoprecipitated with anti-90K antibody, and immunoblotted with anti-galectin-3 antibody.

Fig. 4. Interaction of 90K with galectin-3 in various cancer cells. 90K overexpressing cell lysate were prepared, im- munoprecipitated with anti-90K antibody, and immunoblotted with anti-galectin antibody.

DU145 세포에서도 90K가 과발현된 세포에서 세포성 장 저해효과를 보였다. 이 결과를 통해 90K가 전립선암 세포의 성장에 억제효과가 있음을 보였다.

3. 90K 단백과 galectin-3의 상호결합

여러 보고에서 galectin-3는 90K의 주요 결합파트너로 알려져 있다.

8)

293T 세포에서 90K와 galectin과의 결합을 면역침강법으로 확인하였고, galectin의 competitor로 알려 진 락토스의 양을 증가함에 따라 농도 의존적으로 저해 되었다(Fig. 3). 이 실험결과는 두 분자간의 결합이 락토 스를 처리함에 따라 저해될 수 있음을 시사한다.

4. 전립선암세포에서 90K와 galectin-3와의 상호작용

최근 대장암세포에서 90K와 galectin-3의 결합이 90K 의 대장암세포 성장 및 전이 억제효과를 약화시킴을 확인 하였다.

14)

두 분자간의 상호결합이 전립선암세포에서도 형성되어 있는지 확인하고자 전이성이 강한 PC3 암세포 에서 90K와 galectin-3의 결합을 확인하였다. 대장암세포 인 HCT116세포와 마찬가지로 전립선암세포에서도 두 분 자간의 상호결합이 형성되어 있었다(Fig. 4). HCT116세포 에서 두 분자간의 결합이 저해제로서 작용함에 따라 PC3 세포에서도 galectin-3가 90K의 저해제로서의 가능성 이 있음을 시사하였다.

5. Luciferase assay를 통해 AP-1 활성 저하 확인

암세포의 성장 및 전이능력에는 여러 신호체계 중

AP-1의 활성이 중요하다.

15)

AP-1 프로모터에 특정 전사

인자가 결합함으로써 AP-1 프로모터가 활성화되고, 여

러 성장 및 전이에 영향을 주는 유전자가 발현된다. 대표

(5)

Fig. 5. AP-1 reporter assay upon 90K overexpression. 90K suppressed the AP-1 activity in DU145 cells. C-fos is an AP-1 transcriptional regulator. Cells were plated in 24-well plates and cotransfected with AP1 reporter (50 ng) and the indicated amounts of expression plasmids (90K or Gal-3). The total DNA used in each transfection was adjusted to 320 ng per well by adding an appropriate amount of pcDNA3 empty vector. Cells were harvested 36 h after transfection. Luciferase activity was normalized to Renilla activity. The transfection experiments were performed at least three times. Experimental differences were tested for statistical significance by using ANOVA and Student’s t test. p-values of <0.05 were considered statistically significant.

Fig. 6. Cell migration was mea- sured using a Transwell migra- tion apparatus (Costar, Inc.,) with minor modification. Cancer cells were loaded to the upper chamber of the Transwell, where- as 293T/vec or 293T/90K were loaded into the lower chamber.

적인 전사인자가 c-fos이다. 90K가 AP-1의 활성에 영향을 주는지 확인하고자, AP-1프로모터를 세포에 과발현 시 킨 후 전사인자 c-fos를 도입함으로써 AP-1을 활성화시키 고, 90K의 유전자 과발현을 유도하였다. DU145 세포에 서 90K의 발현이 증가함에 따라 c-fos에 의해 증가된 AP-1의 활성이 크게 억제되었다(Fig. 5). 반면, 90K의 결 합파트너로 알려진 galectin-3를 추가로 과발현 시켰을 때 감소됐던 AP-1활성이 회복되었다. 이 결과를 통해 90K 의 AP-1활성의 억제효과가 galectin-3에 의해 감소됨을 확 인하였다.

6. 암세포의 전이능 억제

90K가 암세포 전이에 미치는 영향을 확인하고 이러한 효과가 galectin-3에 의해 감소되는지 확인하고자 암세포 와 90K를 과발현하는 293T 세포를 공조배양함으로써 암 세포의 전이에 90K가 미치는 영향을 살펴보고자 하였 다. In vitro invasion을 측정하는 Transwell 기구를 이용하 여 침입억제효과를 가지는지 확인하였다(Fig. 6). 두 층으 로 분리된 배양 chamber중 위층에는 암세포를 배양하고, 아래층에는 대조군 또는 90K 과발현하는 세포를 각각 배양함으로써 위층의 암세포가 아래층으로 이동하는 능 력이 90K에 의해 영향을 받는지 확인하였다.

DU145, PC3 암세포와 배양하였고, vec만을 과발현시 킨 293T 세포와 공조배양한 세포에 비해 90K 분비가 많 은 293T 세포와 공조배양한 암세포는 전이능이 줄어들 었다(Fig. 7). 이 결과를 통해 90K가 전립선암세포의 전이 능력에 억제효과가 있음을 확인하였다. 특히 암세포 내 90K 발현이 적었던 DU145 세포가 90K 발현을 많이 하 고 있는 PC3에 비해 90K단백에 노출되었을 때 전이 억 제 효과가 뛰어났다. 그러나 이러한 90K의 전이억제효 과는 galectin-3을 도입함으로써 감소되었다. 이 결과들을 통해 두 분자간의 결합이 AP-1활성을 비롯한 전립선암 세포의 성장 및 전이능력에 있어 상호 경쟁적으로 작용 함을 확인하였다.

고 찰

90K의 혈청 내 평균수치는 암세포를 가지고 않은 정

상인에 비해 다양한 암환자의 혈청에서 높은 90K 수치

를 기록한다.

1)

암환자의 조직 샘플링을 통한 면역염색결

과의 양성반응 또한 암환자에서 90K 발현이 증가되어

있음을 보여줬다. 하지만 이러한 암환자의 혈청 및 조직

내 90K 발현양의 증가가 환자의 예후의 척도가 되기엔

세포내 관련기전 및 역할 규명이 미약하다. 90K가 전립

선암세포의 성장 및 전이에 미치는 영향을 조사함으로

(6)

Fig. 7. Effect of 90K protein on in vitro invasiveness of prostate cancer cells. The migration of DU145 cells or PC3 plated in a Transwell apparatus with filters coated with 1% gelatin. The migrated cells were fixed and stained. The migrated cells on the bottom surface were counted in four random squares for each filter. Experimental differences were tested for statistical significance by using ANOVA and Student’s t test. All statistical tests were two-sided, and p-values of less than 0.05 were considered statistically significant. *p<0.05, **p<0.001.

써 전립선암세포의 90K 발현과 암세포의 진행 및 전이 와의 상관관계를 예측해보고자 하였다.

전이력이 서로 다른 두 종류의 전립선암세포에 90K 유전자 과발현을 유도하였을 때, 두 종류의 세포 모두 성장 및 전이 억제 효과를 가져왔다. 이 결과는 기존의 90K발현과 전립선암에서의 상관관계와는 상충되는 결 과이다.

13)

이러한 결과를 통해 90K 단독 과발현은 세포 의 성장 및 전이를 억제시키나, 암세포에 존재하는 다른

단백의 저해 효과가 있을 수 있다는 가정을 하였다.

Galectin 1, 3, 9 등의 단백은 90K와의 결합을 통해 세포의

전이를 증가시킨다는 보고가 있다. 암세포에 galectin의

과발현은 암세포의 성장 및 전이를 촉진시킨다고 보고

되고 있다. Galectin이 암세포의 성장 및 전이를 촉진시키

는 효과와 90K가 성장 및 전이를 억제시키는 효과는 서

로 상반되므로, 서로간의 기능에 간섭효과를 가지는지

확인하고자 하였다.

(7)

암세포의 성장 및 전이에 중요한 기전 중 하나인 MAPK signaling의 하부신호인 AP-1 프로모터 분석을 통 해 90K와 galectin의 기전의 상관관계를 밝혀보고자 하였 다. AP-1의 전사인자 중 하나인 c-fos 과발현으로 증가된 AP-1 활성은 90K 유전자 도입으로 인해 활성이 억제되 었으나 galectin을 추가로 도입하였을 경우 그러한 활성 은 사라지는 것을 확인하였다. 또한 Transwell apparatus를 이용한 in vitro invasion assay에서도 일치하는 결과를 얻었 다. 293T/90K 세포와 공조배양한 DU145와 PC3 세포 모 두 전이력이 감소되었으나, 293T/90K/gal-3와 공조배양 할 경우 세포의 전이능력이 다시 증가되었다. 이 결과를 통해 90K가 AP-1 활성 조절을 통해 암세포의 성장 및 전이를 억제하는 효과를 가지지만 결합파트너인 galectin 이 동시 과발현됨으로써 그 효과가 약화됨을 보였다. 이 는 90K의 암세포의 전이를 억제하는 종양억제 기능과는 반대의 효과를 나타내는 galectin의 간섭효과로 보인다.

90K 단백이 효율적인 종양억제인자로서의 기능을 가질 수 있도록 galectin과의 결합저해 및 기능적인 부분의 세 부기전을 명확히 함으로써 90K의 종양억제 기능의 효과 를 증대시킬 수 있을 것으로 보인다.

결 론

본 연구는 종양세포에서 발현율이 높은 90K가 전립선 암세포에 미치는 영향에 대해 알아보고자 하였다. 90K 를 과발현하는 암세포주를 확립하여 암세포의 성장률 및 전이능을 살펴본 결과, 90K 과발현이 되어 있는 전립 선암세포는 성장 및 전이능이 감소되었고, 이는 세포의 운동성에 관여하는 AP-1의 활성을 억제함으로써 유도될 수 있음을 보였다. 이 결과로 증가된 90K는 전립선암의 성장 및 전이능을 감소시키는 역할을 할 것으로 보이며, 90K의 증가된 발현이 암세포의 성장 및 전이능을 감소 시킴으로써 궁극적으로 전립선암의 성장 및 전이를 억 제하는데 의의가 있을 것으로 보인다.

감사의 글

이 연구는 2010년도 한국연구재단 연구비 지원에 의 한 결과임(2010-1415).

참 고 문 헌

1) Iacobelli S, Arnò E, D'Orazio A, Coletti G. Detection of antigens recognized by a novel monoclonal antibody in tissue

and serum from patients with breast cancer. Cancer Res 46, 3005-3010, 1986.

2) Ullrich A, Sures I, D'Egidio M, Jallal B, Powell TJ, Herbst R, Dreps A, Azam M, Rubinstein M, Natoli C, Shawver LK, Schlessinger J, Iacobelli S. The secreted tumor-associated antigen 90K is a potent immune stimulator. J Biol Chem 269(28), 18401-18407, 1994.

3) Grassadonia A, Tinari N, Fiorentino B, Suzuki K, Nakazato M, De Tursi M, Giuliani C, Napolitano G, Singer DS, Iacobelli S, Kohn LD. The 90K protein increases major histocompatibility complex class I expression and is regulated by hormones, gamma-interferon, and double-strand poly- nucleotides. Endocrinology 145, 4728-4736, 2004.

4) Natoli C, Dianzani F, Mazzotta F, Balocchini E, Pierotti P, Antonelli G, Iacobelli S. 90K protein: a new predictor marker of disease progression in human immunodeficiency virus infection. J Acquir Immune Defic Syndr 6, 370-375, 1993.

5) Inohara H, Akahani S, Koths K, Raz A. Interactions between galectin-3 and Mac-2-binding protein mediate cell-cell adhesion. Cancer Res 56, 4530-4534, 1996.

6) Castronovo V, Van Den Brûle FA, Jackers P, Clausse N, Liu FT, Gillet C, Sobel ME. Decreased expression of galectin-3 is associated with progression of human breast cancer. J Pathol 179, 43-48, 1996.

7) Sakaki M, Fukumori T, Fukawa T, Elsamman E, Shiirevnyam- ba A, Nakatsuji H, Kanayama HO. Clinical significance of Galectin-3 in clear cell renal cell carcinoma. J Med Invest 57, 152-157, 2010.

8) Tinari N, Kuwabara I, Huflejt ME, Shen PF, Iacobelli S, Liu FT. Glycoprotein 90K/MAC-2BP interacts with galectin-1 and mediates galectin-1-induced cell aggregation. Int J Cancer 91, 167-172, 2001.

9) Grassadonia A, Tinari N, Iurisci I, Piccolo E, Cumashi A, Innominato P, D'Egidio M, Natoli C, Piantelli M, Iacobelli S. 90K (Mac-2 BP) and galectins in tumor progression and metastasis. Glycoconj J 19, 551-556, 2004.

10) Iacobelli S, Sismondi P, Giai M, D'Egidio M, Tinari N, Amatetti C, Di Stefano P, Natoli C. Prognostic value of a novel circulating serum 90K antigen in breast cancer. Br J Cancer 69, 172-176, 1994.

11) Jallal B, Powell J, Zachwieja J, Brakebusch C, Germain L, Jacobs J, Iacobelli S, Ullrich A. Suppression of tumor growth in vivo by local and systemic 90K level increase. Cancer Res 55, 3223-3227, 1995.

12) Marchetti A, Tinari N, Buttitta F, Chella A, Angeletti CA, Sacco R, Mucilli F, Ullrich A, Iacobelli S. Expression of 90K (Mac-2 BP) correlates with distant metastasis and predicts survival in stage I non-small cell lung cancer patients. Cancer Res 62, 2535-2539, 2002.

13) Bair EL, Nagle RB, Ulmer TA, Laferté S, Bowden GT.

90K/Mac-2 binding protein is expressed in prostate cancer and induces promatrilysin expression. The Prostate 66, 283-293, 2006.

(8)

14) Lee JH, Bae JA, Lee JH, Seo YW, Kho DH, Sun EG, Lee SE, Cho SH, Joo YE, Ahn KY, Chung IJ, Kim KK.

Glycoprotein 90K, downregulated in advanced colorectal cancer tissues, interacts with CD9/CD82 and suppresses the wnt/beta-catenin signal via ISGylation of beta-catenin. GUT

59, 907-917, 2010.

15) Ozanne BW, Spence HJ, McGarry LC, Hennigan RF.

Transcription factors control invasion: AP-1 the first among equals. Oncogene 26,1-10, 2007.

수치

Fig. 1. 90K expression in 293T and prostate cancer cells. On  the basis  of  the  amounts  of 90K  secreted in  the  culture  media,  which  was  measured  by  ELISA  assay
Fig. 2.  90K-overexpressing  cells  have  reduced  cell  growth  rates.  293T  and  DU145  cells  transfected  with  90K  cDNA  or  vector  were  incubated  for  24∼48  h
Fig. 5.  AP-1  reporter  assay  upon  90K  overexpression.  90K  suppressed  the AP-1  activity  in  DU145 cells
Fig. 7.  Effect  of  90K  protein  on  in  vitro  invasiveness  of  prostate  cancer  cells

참조

관련 문서

These results suggest that the bilobalide inhibits the cell proliferation and induces the apoptotic cell death in FaDu human pharyngeal squamous cell carcinoma via both

In the present study we investigated the proliferation effect of human oral cancer KB cell treated with pulsatilla koreana extract.. We analyzed the effects of this

They also showed significantly improved cell migration and proliferation with respect to negative control in the scratch - wound healing assay using confluent monolayers

Growth and rosmarinic acid accumulation in callus, cell suspension, and root cultures of wild Salvia fruticosa.. Plant Cell Tissue

The melanoma cell line WM793 was employed for the Fascin and MST2 knock-down and then analyzed by the Western blot assay, and the melanoma xenograft followed by Fascin

1) Effects of methanol extracts of Capsella bursa-pastoris on cyclooxygenase-2 (COX-2) and Inducible Nitric oxide synthase (iNOS) expression in human prostate cancer cell

Objective: The purpose of this study was to analyze recent trend in incidence of basal cell carcinoma and squamous cell carcinoma in patients from the Gwangju City

이 를 위해 cell proliferation assay (MTT), cytochrome C ELISA assay, caspase―3 enzyme activity assay, fluorescence microscopy에 의한 apoptosis 관찰,