경희대학교 의과대학·의학전문대학원

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Chap

63. 세포면역기능검사

64. 체액면역 및 면역글로불린검사

진단검사의학과

강 소 영

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* 면역검사를 필요로 하는 질환군

1’ immunodeficiency

autoimmune disease

acquired immunodeficiency

기타 –

hemato-oncological dis.,…

* Indication

빈번한 세균감염

바이러스에 대한 비정상적인 심한 전신반응

진균 혹은 원충류에 의한 일상적이지 않은 감염

생바이러스 접종에 따른 전신반응

가족내 반복되는 감염력

HIV 에 노출된 경우…

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1. Screening stage

CBC/DC

Lymphocyte subset

Mitogen/ 다양한 항원을 통한 시험관내 림프구 활성검사

Ig

2. Confirming stage

Radiology (MRI : thymus 크기 검사 )

Skin test : PPD,

C. albicans

, Tetanus

NK cell 활성도 검사 ,

Th1, Th2 cytokine 생성검사

Immunization 에 대한 반응검사 : 연령별 특이항체 , 자연항체

세포면역기능의 검사

세포면역검사의 단계적 접근

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Lymphocyte subset test

- CD (Cluster of differentiation)

동일한 세포면역 항원을 인지하는

2 개 이상의 특이 단클론 항체군

- CD 분자 or CD 항원

CD 항체군에 인지되는 세포표면분자

- 유세포분석기 (flow cytometer)

형광색소가 표지된 단클론 항체를 이용한 면역형광법

여러 항원 동시 측정 가능

특정 세포 빈도와 혈액단위부피당 절대수 제공

전혈

( 형광염색 후 적혈구 용혈 ) or

단핵구

(Ficoll-Hypaque 비중원심법으로 분리 ) 형광염색

형광색소

: FITC, PE, PerCP, APC..

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세포면역기능의 검사

Immunofluorescence

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Flow cytometry (FCM)

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Reversed CD4/CD8 : HIV 양성 환자

: 기타 - DiGeorge syn., 양성갑상선종 , HCV infec., 가와사키병 , 악성종양 , 일부 자가면역질환

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림프구기능검사

1. Skin test : 지연성 과민반응과정을 통해 전반적인 세포면역계 기능 검사 APC -> T cell 로 항원전달 , 인지 , 증식되어 과민반응을 일으키는 과 : 과거에 노출되었을 항원 – C. albicans, PPD, Tetanus ( 영아 – DNCB(dinitrochlorobenzene)) -> 피내주사 24-48 시간 후 피부 발적이나 경화를 관찰 : anergy – 면역결핍을 시사하는 소견 : anergy 의 원인을 찾을 수 없고 , 정량화가 어렵다 .

세포면역기능의 검사

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림프구기능검사

2. Lymphocyte culture

1) Stimulant – Ag or Mitogen

- Ag stimulated lymphocyte culture

지연성 과민반응 피부검사의 in-vitro test 에 해당 Candida, tetanus, CMV, HSV, PPD

감작된 T cell 만 활성화 , 배양기간 5-10 일 소요

Mixed lymphocyte culture (MLC) : allogenic lymphocyte – Polyclonal activator stimulated lymphocyte culture

Polyclonal activator (or Mitogen)

T cell : PHA (phytohemagglutinin), conA (concanavalin A), superAg, anti-CD3

B cell : PWM (pokeweed mitogen) 대다수의 림프구가 활성화 (non-specific) 72hr 배양

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림프구기능검사

2. Lymphocyte culture 2) detection

– number of blasts : Microscope

- 3H TdR (tritiated thymidine) incorporation assay

: 방사선동위원소 양을 측정하여 림프구 증식 정도 판단 - FCM

: DNA content (DNA 염색시약 – 세포 주기 분석 ) : 세포추적염색시약 이용 (CFSE, PKH26)

: CFSE proliferation assay 친지질성 ester 림프구 세포막 통과 후 세포질내 esterase 에 의해 형광에스테르로 분해되어 세포질단백과 공유 결합체 형성 세포 분열시 양이 반으로 줄어 분열증식 측정에 이용

세포면역기능의 검사

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림프구기능검사

3. NK cell cytotoxicity test

: NK cell 에 감수성이 있는 표적세포를 죽이는 능력을 측정 : 51Cr labeled K-562 cell line (CML cell line)

4. Cytokine release assay

: mitogen 이나 Ag 으로 T cell 자극 후 cytokine 생성 측정 : Quantiferon TB

: type I cytokine : from Th1 cell, IL-2, IFNr, IL-12 type II cytokine : from Th2 cell, IL-4,5,10, 13, TGFß

: 최근 단일세포 수준에서 cytokine 을 분비하는 T cell 측정방법도 소개 FCM : intracellular cytokine staining

ELISPOT

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체액면역 및 Ig 검사

* 항체 : B cell 에 의한 체액면역의 중요물질 : Ig - 정상 성인 혈장 단백의 약 20% 차지 - 혈장 단백질 전기영동 : 가장 천천히 이동하는 γ-globulin region 에 위치 * 항체의 구조적 성상

2 Fab ( 항원결합부위 ), Fc (C or cell receptor 결합부위 ) 2 heavy chain, 2 light chain

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* 항체의 구조적 성상

heavy chain – 5 isotype ( γ, α, μ, δ, ε ) – 기능결정 light chain – 2 isotype ( κ, λ )

2 개의 동일한 항원결합부위 * Ag-Ab 반응 가역적 반응 Ag-Ab 반응의 강도 : 항원결합부위의 수 affinity affinity ( 친화력 ) avidity ( 결합력 ) cross link prozone effect

체액면역 및 Ig 검사

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항체다양성의 유전적 기전

10

6

– 10

9

종류의 항체 생산

Ig gene rearrangement & somatic mutation

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Ig 의 일반적 성상

1. Ig M : 일차항체반응 , pentamer, 10 개 항원 결합부위 ( 결합력 ) 2. Ig G : 이차항체반응 , Ig 의 대부분 차지 , Phagocytosis & ADCC 3. Ig A : 분비물에 존재

4. Ig E : 가장 낮은 혈청농도 , 알레르기반응 , 기생충 질환

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Hyperimmunoglobulinemia : polyclonal or monoclonal

EP & IFE

Normal PEP

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Polyclonal gammopathy

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Monoclonal gammopathy

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Immunofixation electrophoresis (IFE)

수치

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참조

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