√ 시료 중에 함유되어 있는 미생물 수를 측정하는 일은 낙농, 식품, 미생물, 환경 미생물 등의 분야에서 매우 중요한 작업. 식품에서는 함유되어 있 는 미생물의 수는 식품의 변질과 밀접한 관련이 있기 때문에 안정성의 측면에서 많이 실시되고 있는 항목 √ 이와 달리, 유산균 제품과 같이 미생물 수가 일정 이상 되어야 하는 식품 도 있음. √ 또한 미생물 산업에서도 미생물 수의 측정은 필수적임. 대부분의 시료 에는 매우 많은 수의 미생물이 포함되어 있기 때문에 적절한 희석을 해 야 하며, 결과는 계산을 통해 얻어지는 경우가 대부분임. √ 시료 중에 존재하는 미생물은 크게 사균과 생균으로 구별할 수 있으며, 이 둘을 합쳐서 총 균수라고도 함. 이 중 실제 변질과 관련된 것은 생균 이기 때문에 생균수 측정을 중요하게 생각함.
배양방법에 따라 주입평판배양법과 표면 평판배양법으로 구분 표면평판 배양법(Spread plate) ① 사용하고자 하는 배지를 멸균시켜 멸균된 petri dish에 부어서 고 체 배지를 만든다. ② ①에 시료를 떨어뜨린 후, 콘라디 봉을 이용하여 골고루 분산시 켜 배양하는 것으로 세균이 결국 배지 표면에서 생육하게 됨. ③ 주로 열에 민감한 세균의 균수 측정에 많이 이용된다.
주입평판배양법(pour plate): ① 시료를 멸균된 petri dish접시에 먼저 넣고 멸균하여 약 50°C로 냉각된 배지를 부어 골고루 시료가 퍼지도록 한 다음, 응고시켜 배양하는 방법 ② 따라서 이 방법을 사용하면 세균은 배지 표면뿐만 아니라 고체배지 속 에서도 집락을 형성할 수 있음. ③ 국내의 식품 공전상 일반 세균수 측정은 이 방법을 측정함.
배양방법에 따라 주입평판배양법과 표면 평판배양법으로 구분 주입평판배양법(pour plate): ① 시료를 멸균된 petri dish접시에 먼저 넣고 멸균하여 약 50°C로 냉각된 배지를 부어 골고루 시료가 퍼지도록 한 다음, 응고시켜 배양하는 방법 ② 따라서 이 방법을 사용하면 세균은 배지 표면뿐만 아니라 고체배지 속 에서도 집락을 형성할 수 있음. ③ 국내의 식품 공전상 일반 세균수 측정은 이 방법을 측정함.
평판당 30~300개 사이의 CFU가 형성된 경우 에 만 통계적으로 타당성이 있는 숫자로 간주 300 CFU를 초과하는 평판에서는 세포가 과 밀되어 생장이 억제되어 집락이 형성되지 않 았을 가능성 30 CFU 미만의 평판은 접종 시료량이 적어 실제 세포 수보다 과소평가되었을 가능성
(1) 시료의 희석 − 분석하고자 하는 시료(식품) 중에는 많은 양의 미생물이 오염되어 있으므로 직 접 사용하는 경우 너무 많은 colony가 형성되어 측정할 수 없기 때문에 적절히 희석하여 사용하고 여기에 희석배수를 곱하여 계산함. − 주로 10배 희석법(-fold dilution)을 이용하여 희석함. (2) 희석방법 − Vortex mixer를 이용하여 희석액 중의 세균을 완전히 혼합 − 희석 시험관에 희석배수 표시를 한다. 이 희석액은 원액을 10배 희석한 것으로 희석배수는 10이 됨. 필요한 희석배수까지 반복하여 희석함. (3) Petri dish에 표기해야 할 사항들 • 희석배율 (예, 10-5) • 시료명 • 실험일자 • 배지명 • 배양온도 • 실험자 이름 등
• 배양이 완료된 평판배지의 집락수를 센다. • 희석배율을 감안하여 단위시료당 집락수로 환산한 후에 평균값을 계산함 [계산 예] 103으로 희석한 시료 1 mL petri dish의 집락수: 35 102으로 희석한 시료 1mL petri dish의 집락수: 270 35 x 103 =35,000 270 x 102 = 27,000 62,000/2 = 31,000 = 3.1 x 104 (cfu/mL) 따라서 생균수는 3.1 x 104 (cfu/mL)이다. (5) 주의사항: 집락수 계산 • 희석배수를 적절히 하여 평판당 30~300개의 colony가 생성되도록 함. • 미지의 시료일 경우는 희석배수를 조절하기가 곤란하므로 희석의 단계에 대 해 모두 실험을 실시하여 집락수가 적당한 것을 골라서 계산에 이용함.
