Protective Effects of Ethanol Extracts from Selected Food Materials against UVB-Induced Damage in Human Skin Fibroblast (Hs68) Cells

UVB로 손상이 유도된 인간 피부 섬유아세포(Hs68)에서 일부 식품소재 에탄올 추출물의 피부 보호 효과

⁃ 연구노트 ⁃

이하나¹․이종민²․홍성문²․김나영³․손석준³․정영재³․이현순³․이준수¹

1충북대학교 식품생명･축산과학부

2(주)메가코스 연구소

3국가식품클러스터 기술지원부

Protective Effects of Ethanol Extracts from Selected Food Materials against UVB-Induced Damage in Human Skin Fibroblast (Hs68) Cells

Hana Lee

, Jong Min Lee

, Sung Moon Hong

, Na Young Kim

, Seok Jun Son

, Young Jae Jeong

, Hyun-Sun Lee

, and Junsoo Lee

1

Division of Food and Animal Sciences, Chungbuk National University

2

R&D Department, Megacos Ltd.

3

Technical Support Department, Agency for Korea National Food Cluster

ABSTRACT Ultraviolet B (UVB) irradiation is a major cause of photoaging and leads to the formation of skin wrinkles by degrading collagen via activation of matrix metalloproteinases (MMPs). In this study, we investigated the protective effects of ethanol extracts from selected food materials against UVB-induced photoaging in human skin fibroblast (Hs68) cells. The protective effects of the samples on cell viability were examined by MTT assay under UVB (30 mJ/cm

)-treat- ed and untreated conditions. Intracellular levels of reactive oxygen species (ROS) were determined by using a fluorescent spectrophotometer. The levels of MMPs and collagen were measured by assay kits. The extracts (50 μg/mL) did not show any cytotoxicity. Extracts from red paprika, tomato, pumpkin, chestnut shell, and Jinuni bean showed protective effect against UVB irradiation (88, 104, 98, 97, and 88%, respectively). These extracts reversed elevation of ROS production and prevented reduction of collagen levels. Moreover, the extracts inhibited elevation of MMP-1 and MMP-3 levels caused by exposure to UVB irradiation in Hs68 cells. Among the samples tested, chestnut shell was found to exhibit the strongest inhibitory effect against elevation of UVB-induced MMPs. Taken together, these data suggest that chestnut shell is the most promising food material for treatment of UVB-induced photoaging in cosmetic products.

Key words: photoaging, fibroblast, collagen, matrix metalloproteinase, foods

Received 18 May 2018; Accepted 5 June 2018

Corresponding author: Junsoo Lee, Division of Food and Animal Sciences, Chungbuk National University, Cheongju, Chungbuk 28644, Korea

E-mail: [email protected], Phone: +82-43-261-2566

서 론

삶의 질이 향상되면서 취미 생활을 위한 야외활동 인구가 증가하고 있으나 환경오염으로 인해 지표면에 도달하는 자 외선의 양은 해마다 증가하고 있다. 또한, 산업화된 사회에 서는 서구화된 생활습관 및 스트레스와 같이 피부노화 요소 들도 증가하고 있어 피부건강을 증진시킬 수 있는 다양한 방법들이 연구되고 있다(1). 피부는 외부로부터 내부기관을 보호하고 장벽기능을 하는 인체에서 가장 큰 장기로서 수분 과 전해질의 손실을 막는 등의 1차적 보호역할을 수행한다 (2). 또한, 피부는 인체 최외각에서 화학적, 물리적, 생물학

적 피부 장벽 기능을 통해 인체 보호 작용 외에도 체온조절, 자극감지, 에너지 저장･분비 등 많은 역할을 하나 가장 바깥 층에 노출된 만큼 다양한 환경 자극에 쉽게 공격받아 피부 노화가 일어나기도 한다(3,4). 피부 노화에 영향을 미치는 외부인자에는 바람, 온도, 습도, 담배연기, 공해, 자외선 등 이 있으며, 특히 자외선에 의한 노화를 광노화라고 한다(5).

파장이 280~320 nm인 ultraviolet B(UVB)는 세포 외 기질 (extracellular matrix)의 주요 구성 요소인 콜라겐을 파괴 함으로써 콜라겐성 피부 조직에 큰 변화를 일으킨다(6). 과 량의 UVB는 활성산소종(reactive oxygen species, ROS) 을 생성하고, 비정상적인 ROS의 증가는 체내 항산화 방어체 계를 손상하여 산화적 스트레스를 일으킨다(7). 또한, UVB 는 진피 결합조직의 손실과 함께 진피 섬유아세포에서 ma- trix metalloproteinases(MMPs) 발현을 유도하여 피부노 화를 촉진시키며, 장기간 노출 시 심각한 피부질병으로 이어 져 피부세포 사멸 및 피부암의 발생으로까지 이어질 수 있다

Table 1. Sample information

Sample Code name Scientific name Country of origin Part used Blueberry

Red paprika Tomato Pumpkin Jinuni bean Lotus leaf Chestnut shell Jinuni bean

S-01 S-02 S-03 S-04 S-05 S-06 S-07 S-08

Vaccinium corymbosum

Capsicum annuum var. angulosum Solanum lycopersicum L.

Cucurbita moschata Duchesne Rhynchosia nulubilis

Nelumbo nucifera Gaertn Castania crenata Rhynchosia nulubilis

USA Imported Imported China South Korea South Korea South Korea

China

All (except seeds and calyx) All

All All All All All All (7,8).

피부노화에 대한 관심이 증가하면서 자외선으로부터 피 부를 효과적으로 방어할 수 있는 천연소재 발굴에 대한 다양 한 연구가 시도되고 있다. 최근 부작용이 적은 식물 추출물 에서 피부 노화를 억제하는 기능성 소재를 탐색하는 연구가 활발하게 진행되고 있으며, 이들은 대부분 식물의 2차 대사 산물로서 폴리페놀 및 플라보노이드 등과 같은 생리활성 물 질을 다량 함유하고 있어 복합적인 생물학적 효과를 가진다 고 보고되어 왔다(9). 대표적 자연식품인 블루베리, 파프리 카, 토마토, 호박 등과 같은 과채류에는 항산화제인 비타민 과 플라보노이드와 같은 페놀성 화합물이 풍부하게 존재하 며, 이 성분들은 활성산소를 제거하는 역할을 수행한다고 보고되어 있다(10). 쥐눈이콩은 비타민 E와 이소플라본을 다량 함유하고 있으며 고혈압과 당뇨병을 예방하고 노화를 방지하여 질병예방과 치료에 사용되어 왔다(11). 연잎 추출 물은 항산화 효능과 멜라닌 합성에 관여하는 효소의 발현을 억제한다고 보고되었다(12). 밤껍질은 미백 활성 및 주름개 선 효과를 이용한 화장품 소재로의 활용도 가능하다고 보고 된 바 있다(13). 이러한 연구에 근거하여 본 연구에 사용된 천연물 시료들의 UVB에 대한 피부 보호 효과에 대해 기대 할 수 있으며, 추출물들의 기능성 입증으로 천연 기능성 소 재로의 활용을 증가시킬 수 있을 것으로 생각된다. 따라서 본 연구에서는 다양한 식품 소재의 에탄올 추출물을 제조하 여 UVB 조사로 유도한 피부 섬유아세포의 광노화에 미치는 보호 효과를 조사하여 화장품 소재 개발을 위한 기초자료를 제시하고자 하였다.

재료 및 방법

추출물 제조

시료 정보는 Table 1에 나타내었으며 모든 시료는 건조 된 상태로 분쇄기(JL-1000, Hibell, Hwaseong, Korea)를 이용하여 분말로 만들었으며 3 g을 취하여 에탄올 100 mL 를 넣고 shaking incubator(VS-8480, Vision Scientific, Daejeon, Korea)를 이용하여 24시간 동안 실온에서 추출하 였다. Whatman No. 2 filter paper(Whatman Internation- al, Kent, UK)를 이용하여 여과한 후 추출물을 40°C 이하에 서 감압 농축하였다. 농축액을 dimethyl sulfoxide(DMSO)

로 재용해한 후 0.22 μm 멸균 필터로 여과하고 분석 전까지 -20°C에서 보관하였다.

세포배양 및 세포독성 실험

인간 섬유아세포주인 Hs68 세포는 ATCC(American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA)에서 구입하여 사용하였다. Fetal bovine serum(FBS, 10%)과 penicillin (100 unit/mL), streptomycin(50 μg/mL)이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37°C, 5% CO2, 95% humid air로 조절된 배양기(Thermo Scientific, Tewksbury, MA, USA)에서 배 양하였다. Hs68 세포를 96-well plate에 1.0×10⁴ cells/

well의 농도로 분주하였다. 24시간 배양 후 FBS가 없는 배 지에 시료를 희석하여 24시간 배양하였다. 3-(4,5-Di- methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT, 1 mg/mL) 용액 20 μL를 각 well에 첨가하고 2시간 동안 배양하였다. 마지막으로 상층액을 제거하고 생존 세포 에서 생성된 청색 formazan 결정을 DMSO로 가용화시켜 Microplate reader(Epoch, BioTek Inc., Winooski, VT, USA)를 사용하여 550 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 시 료 처리 시에는 DMSO의 최종 농도가 0.1%(v/v) 미만이 되 도록 시료를 배지로 희석하여 사용하였다.

UVB 조사에 대한 보호 효과

Hs68 세포를 96-well plate에 1.0×10⁴ cells/well의 농 도로 분주하여 24시간 동안 배양한 후 각 well에 FBS가 없 는 배지로 시료를 희석한 다음 처리하여 24시간 동안 배양 하였다. 그 후 배지를 제거하고 phosphate buffered sal- ine(PBS)으로 1회 세척한 다음 UVB lamp(GL20SE, San- kyo Denki Lamps, Marine, Japan)를 이용하여 UVB(30 mJ/cm²)를 조사하였고, UV LIGHT METER(UV-340A, LT Lutron, Taipei, Taiwan)를 사용하여 자외선 강도를 모 니터링하였다. 모든 UVB 조사는 96-well plate에 부착된 세포에 PBS를 얇게 도포한 후 수행하였다. 조사 후 FBS가 없는 배지에서 시료를 희석하여 24시간 동안 세포에 처리하 였다. 대조군은 UVB 조사 없이 동일한 조건으로 진행되었 다. 이후 UVB에 대한 보호 효과는 MTT assay를 이용한 세포독성 실험과 동일하게 진행하였다.

A B

Fig. 1. Cytotoxicity (A) and protective effect (B) of the ethanol extracts (50 μg/mL) from the samples in untreated and UVB irradiated

P<0.001,

**

P<0.01, and

P<0.05 by ANOVA and the Tukey-Kramer method.

ROS 생성 측정

Hs68 세포에 시료를 24시간 동안 전처리하고 PBS로 세 척한 후 세포를 UVB(30 mJ/cm²)로 조사하였다. UVB 조사 후 세포에 시료를 30분간 처리한 다음 25 μM의 dichloro- dihydro-fluorescein diacetate(DCFH-DA)로 염색하였 다. 세포 내 ROS 생성에 해당하는 형광 강도는 485 nm의 여기 파장 및 530 nm의 방출 파장에서 fluorescent spec- trophotometer(LS-55, Perkin-Elmer, Norwalk, CT, USA) 로 측정하였다.

수용성 콜라겐 및 MMPs 측정

UVB 조사에 의해 합성이 증가하는 MMP-1과 MMP-3 의 측정은 human MMP-1, MMP-3 ELISA kit(Merck &

Co. Inc., Whitehouse Station, NJ, USA)을 이용하여 배지 중의 MMP-1과 MMP-3의 생성량을 측정하였다. UVB 조 사 후 수용성 콜라겐 생성량은 Sircol^TM soluble collagen assay kit(Biocolor, Carrickfergus, Northern Ireland)을 사용하여 측정하였다.

통계처리

통계분석은 GraphPad Prism 5(GraphPad Software, San Diego, CA, USA) 소프트웨어를 이용하여 실시하였다.

데이터 간의 유의차는 one-way ANOVA의 Tukey-Kramer method를 통해

P

결과 및 고찰

세포독성 및 UVB 자극에 대한 세포 보호 효과

에탄올 추출물의 세포독성을 확인하기 위해 Hs68 세포주 를 이용하여 세포생존율을 측정하였다. 먼저 UVB 비조사군 에 추출물을 50 μg/mL 농도로 처리한 경우 모든 추출물에 서 세포독성은 보이지 않았으며 일부 시료에서 세포수가 증 가하는 양상을 나타내었다(Fig. 1A). 또한, Hs68 세포에 30

mJ/cm²의 UVB를 조사한 경우 세포생존율이 약 70% 수준 으로 감소하였으며, 추출물을 처리한 경우 레드파프리카, 토 마토, 호박, 밤껍질, 쥐눈이콩에서 UVB 조사군에 비해 유의 적으로 세포생존율이 증가하는 결과를 나타내었다(Fig. 1B).

그중에서도 토마토 에탄올 추출물은 ascorbic acid 100 μM 의 효과보다도 더 뛰어난 세포 보호 효과를 나타내었다. 이 는 추출물이 정상 섬유아세포에서는 세포의 증식을 촉진시 키고 UVB에 의해 증식이 억제된 경우에서는 이를 회복시키 는 데 영향을 미치는 것으로 생각한다.

UVB 조사에 따른 활성산소종 생성과 수용성 콜라겐 생성 에 대한 에탄올 추출물의 효과

UVB는 피부세포의 면역 억제, 염증 촉진, 유전자 손상을 통한 피부암의 유발을 촉진하는 것으로 알려져 있으며, 특히 이러한 신호전달과정의 시작은 산화적 스트레스가 중요한 역할을 한다(14-17). 노화된 피부는 자외선 등에 의한 ROS 의 생성에 의해 세포가 손상되고 항산화계 효소의 기능 저하 및 항산화 물질의 감소로 외부 유해환경에 대한 생체 방어 시스템이 손상되거나 피부를 구성하는 콜라겐, 엘라스틴의 기능 저하 등이 피부주름을 발생시키는 요인이 되기도 한다 (18). 피부의 진피층에 존재하는 콜라겐은 피부 건조 중량의 90% 정도를 차지하는 주요 구성 단백질이다. 즉 피부에서 콜라겐의 분해는 결합조직의 탄력을 약화시키고 주름을 생 성하는 등 직접적인 영향을 미치게 된다(19). 본 연구에서는 세포 내에서 UVB에 의해 발생하는 ROS에 대한 에탄올 추 출물의 억제활성을 알아보기 위해 Hs68 세포에 UVB를 조 사한 뒤 ROS의 양을 측정하였다. UVB 조사군에서 대조군 에 비해 ROS의 생성이 급격히 증가하였으나 에탄올 추출물 을 50 μg/mL 농도로 처리하자 블루베리와 쥐눈이콩을 제외 한 나머지 군에서 유의적으로 감소하였다(Fig. 2A). 수용성 콜라겐 생성을 측정한 결과 UVB 조사에 의해 수용성 콜라 겐의 함량이 많이 감소하였으나, 에탄올 추출물 처리군에서 는 모두 유의적으로 증가하였다(Fig. 2B). 세포 보호 효과가

A B

Fig. 3. Effect of the ethanol extracts (50 μg/mL) from the samples on MMP-1 (A) and MMP-3 (B) production in UVB-induced

P<0.001,

**

P<0.01, and

P<0.05 versus UVB by ANOVA and the Tukey-Kramer method.

A B

Fig. 2. Effects of the ethanol extracts (50 μg/mL) from the samples on ROS production (A) and soluble collagen content (B) in

P<0.001,

P<0.01, and

P<0.05 versus UVB by ANOVA and the Tukey-Kramer method.

높게 나타난 토마토와 호박, 밤껍질 에탄올 추출물 군에서 수용성 콜라겐의 함량도 가장 높게 측정되었다. 이는 채소, 과실류, 견과종실류가 함유한 페놀성 화합물의 항산화 활성 에 의하여 UVB 조사로 증가한 ROS의 생성을 감소시켜 산 화적 스트레스를 억제하여 피부세포 보호 효과를 나타내는 것으로 판단한다. 또한, ROS에 의해 직접 또는 간접적으로 발생하는 콜라겐의 파괴도 억제시킴을 보여준다. Jeon 등 (20)은 곡류 추출물의 처리가 UVB로 손상된 피부 섬유아세 포에서 ROS의 생성을 감소시키고 콜라겐 분해를 억제하여 곡류 추출물의 피부 보호 효과를 보고한 바 있다. 본 연구에 서도 토마토, 밤껍질 추출물이 UVB에 의해 증가한 ROS를 감소시키고 수용성 콜라겐의 분해를 억제시켜 UVB 자극에 대한 피부 보호 효과를 나타내는 것을 확인하였다.

UVB 조사에 따른 MMP-1과 MMP-3 생성에 대한 에탄올 추출물의 효과

MMPs는 세포외기질을 분해하는 효소로 자외선에 의해 활성화된 activating protein-1(AP-1)에 의해 유도되며 인 체 진피 섬유아세포와 정상 표피에서 자외선 조사 후 발현이 증가한다. MMPs 중 특히 MMP-1이 광노화로 인한 세포외 기질 분해에 가장 중요한 역할을 한다는 것은 이미 잘 알려

져 있다(21). MMP-3는 stromelysin 1이라고도 하며 기저 막의 type Ⅳ collagen을 특이적으로 분해하고 pro-MMP- 1을 활성화시킨다(22,23). MMP-1은 콜라겐을 분해하는 protease로서 피부노화와 직접 관련된다. MMP-1의 활성 을 억제하여 콜라겐의 분해를 감소시키면 피부 조직의 탄력 이 유지되어 주름 생성을 예방할 수 있으므로 MMP-1 활성 을 저해하는 소재를 찾는 것이 중요하다. UVB 자극 후 증가 한 MMPs에 대한 에탄올 추출물의 영향을 확인하기 위해 MMP-1과 MMP-3의 생성량을 측정하였다. UVB 조사로 인해 Hs68 세포의 배지에서 MMP-1과 MMP-3의 분비가 증가하였고, 다양한 에탄올 추출물은 UVB로 유도된 MMP- 1과 MMP-3의 생성을 유의적으로 감소시켰으며, 특히 밤껍 질 추출물의 MMPs 생성 억제 효과가 가장 크게 나타났다 (Fig. 3). 밤껍질 추출물은 수용성 콜라겐의 함량도 크게 증 가시켰으며 MMP-1과 MMP-3의 분비도 효과적으로 감소 시켜 UVB에 의한 광노화에 대해 세포를 보호하는 것을 확 인하였다. 따라서 본 연구에서는 일부 식품소재의 에탄올 추출물이 ROS나 MMPs의 생성을 감소시키거나 콜라겐 생 성량을 증가시켜 효과적으로 피부 광노화를 예방할 수 있을 것으로 기대된다.

요 약

UVB 조사는 MMPs를 활성화시킴으로써 콜라겐을 감소시 키고 결과적으로 주름을 형성한다. 본 연구에서는 식품소재 8종을 선정하여 에탄올 추출물을 제조하고 광노화 억제 효 능을 평가하였다. 세포독성과 UVB에 대한 보호 효과는 MTT assay를 이용하여 측정하였다. ROS 발생 정도는 fluo- rescent spectrophotometer로 측정하였으며 수용성 콜라 겐과 MMPs의 생성량은 assay kit을 사용하여 측정하였다.

Hs68 세포주를 이용하여 50 μg/mL의 농도로 세포독성을 확인하였으며 시료의 독성은 나타나지 않았다. 레드파프리 카, 토마토, 호박, 쥐눈이콩(중국산), 밤껍질 에탄올 추출물 은 UVB 자극에 대해 각각 88, 104, 98, 97, 88%의 보호 효과를 보였다. 이 추출물들은 UVB 조사로 유도된 ROS의 생성량을 감소시켰으며 콜라겐 생성량을 증가시켰다. 또한, 추출물들은 UVB 조사에 의한 MMP-1과 MMP-3의 증가를 억제했다. 그중 밤껍질이 UVB로 유도된 MMPs의 생성을 가장 효과적으로 감소시켰다. 결론적으로 본 연구를 통해 밤껍질 추출물은 자외선에 의한 피부노화와 주름 생성을 효 과적으로 개선할 수 있는 가능성을 가짐으로써 항노화 및 항주름 소재로 화장품에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

감사의 글

본 연구는 국가식품클러스터 지원센터의 연구비 지원에 의 해 수행되었으며 이에 감사드립니다.

REFERENCES

1. Lee C, Jang JH, Kim BA, Park CI. 2012. Anti-aging effects of marine natural extracts against UVB-induced damages in human skin cells. J Soc Cosmet Scientists Korea 38: 255- 261.

2. Lee WJ. 2006. Structural cell and function of skin. J Skin

Barrier Research 8: 10-17.

3. Chiba K, Kawakami K, Sone T, Onoue M. 2003. Character- istics of skin wrinkling and dermal changes induced by re- peated application of squalene monohydroperoxide to hair- less mouse skin. Skin Pharmacol Appl Skin Physiol 16: 242- 251.

4. Naylor EC, Watson RE, Sherratt MJ. 2011. Molecular as- pects of skin ageing. Maturitas 69: 249-256.

5. Fisher GJ, Wang ZQ, Datta SC, Varani J, Kang S, Voorhees JJ. 1997. Pathophysiology of premature skin aging induced by ultraviolet light. N Engl J Med 337: 1419-1428.

6. Ganceviciene R, Liakou AI, Theodoridis A, Makrantonaki E, Zouboulis CC. 2012. Skin anti-aging strategies. Derma-

toendocrinol 4: 308-319.

7. Fisher GJ, Talwar HS, Lin J, Lin P, McPhillips F, Wang Z, Li X, Wan Y, Kang S, Voorhees JJ. 1998. Retinoic acid inhibits induction of c-Jun protein by ultraviolet radiation that occurs subsequent to activation of mitogen-activated protein kinase pathways in human skin in vivo. J Clin Invest

101: 1432-1440.

8. Svobodova A, Walterova D, Vostalova J. 2006. Ultraviolet light induced alteration to the skin. Biomed Pap Med Fac

Univ Palacky Olomouc Czech Repub 150: 25-38.

9. Masteikova R, Muselík J, Bernatoniene J, Majiene D, Sa- vickas A, Malinauskas F, Bernatoniene R, Peciura R, Chalu- pova Z, Dvorackova K. 2008. Antioxidant activity of tinc- tures prepared from hawthorn fruits and motherwort herb.

Ceska Slov Farm 57: 35-38.

10. Ames BN, Shigenaga MK, Hagen TM. 1993. Oxidants, anti- oxidants, and the degenerative diseases of aging. Proc Natl

Acad Sci 90: 7915-7922.

11. Kang SA, Jang KH, Cho Y, Hong K, Suh JH, Choue R.

2003. Effects of artificial stomach fluid and digestive en- zymes on the aglycone isoflavone contents of soybean and black bean (Rhynchosia molubilis: Yak-kong). Korean J Nutr 36: 32-39.

12. Yoo DH, Joo DH, Lee SY, Lee JY. 2015. Antioxidant effect of Nelumbo nucifera G. leaf extract and inhibition of MITF, TRP-1, TRP-2, and tyrosinase expression in a B16F10 mela- noma cell line. J Life Sci 25: 1115-1123.

13. Jang MJ, Cheon SJ, Kim HY, Kwoen DJ, Kim HY, Kim SH, Lee JT. 2011. The anti-wrinkle and whitening effect of extracts of Castanea crenata inner shell. J Life Sci 21:

734-738.

14. Masaki H. 2010. Role of antioxidants in the skin: anti-aging effects. J Dermatol Sci 58: 85-90.

15. Kaur IP, Kapila M, Agrawal R. 2007. Role of novel delivery systems in developing topical antioxidants as therapeutics to combat photoageing. Ageing Res Rev 6: 271-288.

16. Krutmann J, Schroeder P. 2009. Role of mitochondria in photoaging of human skin: the defective powerhouse model.

J Investig Dermatol Symp Proc 14: 44-49.

17. Brennan M, Bhatti H, Nerusu KC, Bhagavathula N, Kang S, Fisher GJ, Varani J, Voorhees JJ. 2003. Matrix metal- loproteinase-1 is the major collagenolytic enzyme respon- sible for collagen damage in UV-irradiated human skin.

Photochem Photobiol 78: 43-48.

18. Bickers DR, Athar M. 2006. Oxidative stress in the patho- genesis of skin disease. J Invest Dermatol 126: 2565-2575.

19. Kang TH, Park HM, Kim YB, Kim H, Kim N, Do JH, Kang C, Cho Y, Kim SY. 2009. Effects of red ginseng extract on UVB irradiation-induced skin aging in hairless mice. J

Ethnopharmacol 123: 446-451.

20. Jeon J, Yang J, Sung J, Sung Y, Jeong HS, Lee J. 2017.

Protective effect of various grain methanolic extracts against UVB-induced photo-aging in human skin fibroblasts. Korean

J Food Nutr 30: 211-217.

21. Lee YR, Noh EM, Jeong EY, Yun SK, Jeong YJ, Kim JH, Kwon KB, Kim BS, Lee SH, Park CS, Kim JS. 2009. Cor- dycepin inhibits UVB-induced matrix metalloproteinase ex- pression by suppressing the NF-κB pathway in human der- mal fibroblasts. Exp Mol Med 41: 548-554.

22. Lee YR, Noh EM, Han JH, Kim JM, Hwang JK, Hwang BM, Chung EY, Kim BS, Lee SH, Lee SJ, Kim JS. 2012.

Brazilin inhibits UVB-induced MMP-1/3 expressions and secretions by suppressing the NF-κB pathway in human der- mal fibroblasts. Eur J Pharmacol 674: 80-86.

23. Oh JH, Kim A, Park JM, Kim SH, Chung AS. 2006. Ultra- violet B-induced matrix metalloproteinase-1 and -3 secre- tions are mediated via PTEN/Akt pathway in human dermal fibroblasts. J Cell Physiol 209: 775-785.