Journal of Sasang Constitutional Medicine

(1)

사상체질학회지

J.of Sasang Const. Med

Val. 15. No. 2. 2003

太陰

A

^헤

!

^{心풀子홉의 抗}

allergy

作用에 對 훌톨융的

if

^뿔

박승천

lAb stract I

Effects of CheongSimYeonJaTang(CSYJT) on Control of

Immune-function in highly purified mouse B cells and Mast cell

Park Seung Chan*

Dept. of Oriental Medicine Graduate School, Taejon University

In o.rder to. evaluate the antiallergic effeets o.f C:SYJT, studies were do.ne. We measured the CYWta.

잉C

activity far cyto.kines transcript expressio.n, productio.n o.f IL-4, IgE, IFN-Y, pro.liferatio.n o.f B cell in HRF

plus anti-CD40mAb plus rIL-4 stimulated murine splenic B cells. and cywkines transcript expressio.n o.f

IgE in Mast cell

까Ie

results were o.btained as fo.llo.ws:

1.

αYJT

deer,

없sed

the expressio.n o.f IL-4 in mast cell significantly.

2. CSYJT decr

얹sed

the produCtio.n o.f IL-4 significantly.

3. C:SYJT decreased the expressio.n Of IgE in mast cell significantly.

4.

αYJT

decreased the produCtio.n o.f IgE significantly.

5. CSYJT increased the appearance o.f IFN-Y.

The fa

다

s above pro.ve that

α,YJT

is effeCtive against the allergy. Thus, I think that we sho.uld study

o.n this co.ntinuo.usly.

I.

績論

^{( 이하 IgE)}

항체를 지닌 개인이 계속하여 동

일 allergen 에 노출되었을 때 일어나는 것으 로 최근에는 .여러 다양하고 무해한 항왼에 대한 연역계의 반응으로 발생하는 질병.과 _같

Allergy

반응은 무해한 항원

.

^{즉 allergen}

에 반응하여 생성된

Immunoglobulin E

대전대학교 한의학과 사상체질의학과학전공 교신저자 : 박숭찬 주소

)

대전시 동구 판암동 678-28 박숭찬 한의원 천화

) 여2)284-8478 E-m

밍

J : [email protected]

166 -

(2)

-

太陰

Ai

빼心훌子훌의 抗 allergy 作用에 휩힌

I

앓的

-

이 보다 제한된 의미로 정의되고 있다

U IgE

매개 mast

cell

활성화 후 일어나는 염증반응은

histamine. prostaglandin

등 의 매개물질의 활성에 의해서 일어나는데

,

이 들 매개 물질들은 혈관투과성을 증가시키고 평활근을 수축시킨다

.

또한 활성화된 mast

cellO] leukotriene. chemokine

그리고

cytokine

동의 매개물질을 합성하고 분비하

여 호산구와

Th2(T helper 2) cell

을 포함 한 백혈구를 염증 장소로 집합시킨다

.

이러한 과정을 거쳐 평활근 수축 , 지속적인 부종

.

^그

리고 allergy 천식의 주요한 증상 중의 하나 인 histamine 과 같은 비특이적 기관지 수축 물질에 대한 기관지 과민반응이 발생한다

2)

過敏免授反應을 말하는 allergy 에 대해서는

〈素問四時刺遊從論

»3)

에 ..少陰有餘皮햄隱

형

^.. <t

짧病源候論

^»4)

에 ..深有毒

A

有훌性없

毒- 但見

r

쫓便中其毒亦有性者耐者終日燒者境不

f

씌홈也

..·|

하여 皮

I

협의 過敏反應에 對한 言及이 있었다 .

며象醫學에서의 흉病治했홀에대한 觀點은 體質에 따른 職

^R

府의 相효關係를 正常化하고 均衝을 회복하는 것이 곧

A

댐

l

의 抗病力을 제 공하는 根幹이 된다고 하여 주로 技正의 方法 을 사용하여 홍病을 治標하고 있다

⁵⁾

淸心運子場은 元

6)

의 〈東醫四象新編〉 에 ..治虛勞쫓뺀無度題痛

t

^世

i

寫 줌卷中風

^.

食휴

8

힘 題痛 .이라고 主治證이 처음으로 記述된 후 많

은 醫홉

7-10)

에서 淸心運子場을 太陰

A

의 虛勞와 中風

.

^{心緣흉惠 ,} ^{神經性 흉惠 ,}

^allergy

性算꽃 동에 활용됨을 설명하고 있다

.

이에 관련한 鼎究로는 朴

1U

의 臨많的鼎究

.

^{洪 등}

12)

의 抗스트레스 效果에 관한 實顧긴 돼究 , 金 퉁

13)

의 免授反應과 抗알러지 效果에 관한

實顧성 鼎究 등이 있었으나

.

^抗allergy ^效果

의 分子免흉學的인 機轉에 대한

R

究報告는 접하지 못하였다

.

이에 저자는 淸

'L

鐘子場의 抗allergy 作用 에 대한 效能을 實驗的으로 쐐明하고자

.

^생쥐

비장B 세포에서 interleukin-4

( 이하 IL-4) ^,

interferon-Y ( 이하 IFN-Y)

의 유전자발현 그

리고 정량적으로

IL-4, IFN-Y, IgE

생성에 미치는 효과 및 생쥐 복강 mast

cell

에서 IgE 의 유전자발현 등을 측정한 바 , 유의한 결과 를 얻었기에 보고하는 바이다

.

ll.

材합및方法

1.

材料

1)

動物

실험동물은 18-20g 의 BALBI

c

생쥐를 한국 화학연구소에서 공급받아 고형사료( 조단백질

22.1%

이상

.

^조지방

^8.0%

^이하

.

^조섬유

5.0%

이하

.

^조회분

^8.0%

이하 , 칼숨 0.6% 이 상

.

^인

^0.4%

^이상

.

^{삼양사 Co.}

. ^Korea)

^와

정제수를 충분히 공급하고

2

주일간 실험실환 경( 온도

23

^土

2'C,

상대습도 50:t10%, 조명시 간

12

시간 (07:

00-19: 00),

조도

150-

300Lux)

에 적웅시킨 후 실험에 사용하였다

.

2)

藥材

본 실험에 사용한 약제는 《東醫옳世保元〉

14)

에 수록된 淸 ,C, 、運子場으로 대전대학교 부속 한방병원에서 구입한 것을 정선하여 사용하였 으며 처방 내용과

1

첩의 용량은 다음과 같다

.

Presc

끼

ption of

αleon 횡imYur 니

a

돼ng(CSYJT)

빼成뺏物生쫓名用삶

(g)

훨子肉

M ι .tmbi

짜I Semm

8.0

山藥

Di,

ω'<rJrr4l

Rhizqma 8.0

天門

AJpar.

쩡 & 찌x

4.0

찢

r'

^μriopis

^Tuhtr ^4.0

i

효흔

P

얘Igalat

&

짜x

4.0

石흠짧

Arori Gr.

쩌

^y ^μ .; Rhizqma 4.0

앓껏

t: ^Ziz

써'i

^Spi1lO.Wl Stmm 4.0

龍眼肉 μ1Igm 짜 ArilL ω

4.0

혐

^{

二

Biolal Semm 4.0

월쪽

Salt

뻐

^i4l ^RAdix ^4.0

.홈

^1- ^&

^째찌

^Stmm ^4.0

tt

행花 αryJtl1/lhemi

FItn 2.0

Tαal Amount .O

167 -

(3)

-

사상채질의획회지 재

15

권 제

2

효

2003 -

3)

試料製造

상기 한

CSY JT 2

첩 분량을 각각

3.000

뼈

round flask

에 증류수

2.000

뼈와 함께 넣은

다음 냉각기를 부착시키고

2

시간 동안 가열하 여 여 과한 여 액 을 rotary

vaccum evaporat

orCBtichi B-461, Switzerland)

에서 감압

농축하고

. ^-84.C ^deep freezer(Sanyo, Jap

an)

에서

24

시간 동안 방치한 후 freeze

dry

er{Eyela. Japan)

로 12 시간을 동결 건조하

여

14.5g

의 분말을 얻어

.

^{검액으로 제조하여}

사용하였다

.

실험시에는 증류수에 용해시켜

s

yringe filterCO.22

μm.

Falcon)

로 여과하여

사용하였다

. 4)

試藥 및 機器

시약은

RPMI 1640. fetal bovine

serum (FBS). dulbecco

^’

s phosphate

buffered saline (OPBS-A). 1

^따

ru mum

essential medium (MEM). sodium dodecyl

sulfate(SDS). trypsin. EDTA. phorbol

myristate acetate (PMA), A23187. red

blood cell lysis buffer. penicillin-

streptomycin, sodium hydroxide, acetic

acid. trypan blue. phenol red, sodium

azide

및

isopropanol

퉁은 Sigma 제품

.

ethanol. HCl

은

Merck

제품

sodium

bicarbonate

는

Gibco

제풍을 사용하였다

.

RNAzolB

는

Tel- Test

λ

}

제품을

Taq

polyrr

ε

rase

와 IRoxynucleotide

triphosphate

(dNTP)

는 Takara

(Japan)

사 제품을

.

^역전

사효소 (Moloey

Murine Leukemia Virus

Reverse Transcriptase: M-MLV RT)

와

RNase inhibitor

는

promega

사 제풍을

.

^그

리고 agarose 는

FMC

사 제품을 사용하였으며

.

유세포분석에 사용된 anti

body

는 pharrningen

(U.S.A.)

사의 제품을 사용하였다

.

기기는

C02 incubator{ vision scientific

Co.. Model VS-9108 MS). clean bench

(vision scientific

α

.. KMC-l400D. centrifuge

(Beckrn

킹1

Co. ,GS-6R) , inverted microscope

(Nikon Co. Japan), bright microscope

(UFX- DX. Nikon). imager system

(Kodak. U.S.A.). microcentrifuge(

한일과

학),

UV-Vis spectro- photometer

(Shimazue. Japan). Turbo TherrnlcycletIM

CBioneer Co. , Korea) . ELISA-reader

(Emax. U.S.A). FACSc

킹1

(Becton dickinson,

U.S.A.), rotary vaccum evaporator (Btichi

461). autoclave (Hirayama, Japan),

micro-pipet (Gilson, U.S.A), titer plate

shakerClabline Inst.. U.S.A), autoclave

(Hirayama. Japan). culture flask (Falcon

3024). multi well plate(96-well. Falcon),

conical tube. disposable pipet(5me. 10

me, 25me. Falcon)

및

syringe filter

(0.22

_μ

m, Falcon)

등을 使用하였다

2.

方法

1)

세포의 배양

Rat leukemia cell line RBL-2H3

세포

를 한국 세포주 은행으로부터 분양받아

MEM (Minium Essential Medium)

에

2.2g/L sodium bicarbonate. 10% Fetal

bovine serum(FBS)

그리고 Antibiotic-

Antimycotic (GibcoBRL, 15240-062)

을

1%

가 되게 첨가하여 bottle

top filter

를 사 용하여 멸균하여 사용하였다

.

RBL-2H3 cell

은

100 mm dish

와 T-75

flask

에 seeding 하여 5%

C02

가 포항된 혼

합가스로 채워진 배양기에서 배양하였다

.

배 양된 세포는

1

주에

2

회씩 계대 배양을 하였 다

2) IL-4

발현 분석을 위한 RT-PCR

(1)

약재의 처리

RBL-2H3

세포는

Trypsin-EDTA

를 처

리하여 배양용기에서 떼어 낸 후

1.500 rpm

에서

5

분 동안 원심 분리하여 세포를 수득하 고

.

배지 5mQ 에 재 현탁 후

12 well plate

에

8xl04 cells/

뼈로 분주하여 o/n 배양하

168 -

(4)

-

太陰A 쐐心훌子었의 抗allergy 作用에 협한

1

앓的

m -

였다

.

o/n

배양 후

CSYJT

의 농도가

O. 100.

200. 300. 400

^μ

g/m£

이 되도록 처리하여 다 시

o/n

배양한 후 1000

nM A23187

과 50

nM PMA

를 처리한 다음

4

시 간 후에

cells

를 수득하였다 .

(2) Total RNA

의 추출

배양종료 후 상충액을 제거한 후 RNAzolB 를 이용하여 생쥐

B

세포막을 터트린 후

mRNA

를 추출하는 방법을 택하였다. RNAzolB

를

1/10

양으로

chloroform

을 넣은 후 15 초

간 vortex 로 혼합하고 얼음에서

15

분간 방치 하였다 . 고속원심분리기 (4'C) 로

15.000rpm

에서

15

분간 원심분리한 후 상층액을 취하여

동량의

iso-propanol

과 혼합하고 천천히 흔

들어 주었다

.

그리고 고속원심분리기로

15.000 rpm

에서

15

분간 원심분리한 후 상층액을 제

거하고

. ^1mQ

^의

80% EtOH/DEPC D.W

를

넣고 혼합한 후 15.000rpm 에서

15

분간 원 심분리하고 상층액을 다시 제거하고 speed-vac 으로 건조시켰다 .

DEPC/D.W(O.05%)

추출 한 total

RNA

는 DEPC 을 처리한

20

뼈의

증류수에 녹여

RT-PCR

에 사용하였다

.

(3)

역전사-중합효소 연쇄반응 (RT-PCR) 역 전사 (Reverse

transcription)

반응은 준비된 total

RNA 3

^μ

g 을 75'C

에서

5

분 동 안 변성 (denaturation) 시키고 , 이에

2.5

μ

Q

10mM ell

아

Ps mix. 1

μ

Q random sequence

hexan

띠∞ti 뾰 (25pmole/25 뼈

:). RNAi

빼biter

로서

1

μ

Q RNase inhibitor(20U/

따 ).

1

μ

e

100mM DTT. 4.5

μ

Q 5xRT buffer

(250mM Tris-HC!. pH 8.3. 375mM

KC!. 15 mM MgC12)

를 가한 후

. ¹

^μ

^g

^의

M-MLV RT(200U/

따 ) 를 다시 가하고

DEPC

처 리 된 증류수로서 최종 부피가

20

^μ

M

가 되도록 하였다

.

이

20

μ

e

의 반응 혼합액을

잘 섞은 뒤

2.000 rpm

에서

5

초간 원심침강

하여

3TC

항온 수조에서 60 분 동안 반응시 켜 first-strand

cDNA

를 합성한 다음

. ⁹

5'C

에서

5

분 동안 방치하여

M-MLV RT

를

불활성화 시킨 후 합성이 완료된 cDNA 를

PCR

에 사용하였다

.

(4) cDNA

의

PCR

증폭

PCR

은 Primus

96 Legal PCR system

을 이용하여 역전사-중합효소 연쇄반응을 수 행하였다

.

반웅은 이미 합성된

3

^μM^의

^cDNA

를 주형으로 사용하고 , 주형에 대한 primer

는

IL-4. GAPDH

를 증폭하기 위하여 sense

primer OOpmole/

μ) 와 antisense

primer

(lOp mole/

μ ) 를 혼합하여 1μ

M

를 가하고

.

^다

시

3

μ

Q 2.5mM dNTPs. 3

μ

Q 10xPCR buffer

OOOmM Tris- HC!. pH 8.3. 500mM

KC!. 15mM MgC12).

그리고

0.18

따 Taq.

polymerase(5U/

때 ) 를 첨가한 다음 최종 부

피가

30

μ

M

가 되도록 멸균증류수를 가하고

pre-denaturation (95'C. 5

분

). denaturation

(95 'C. 1

분

). annealing(55'C. 1

분

). ^elongation

(72'C. 1

분 ) 을 30 회한 뒤 post-

elongation

을 72'C 에서

3

분 동안의 조건으로

PCR

을 수행 하였다 . 각

PCR products

는

20

μ

e

씩

1.2% agarose gel

에 loading 하여 120V 조

건에서

20

분간 전기영동을 통하여 분석하였 다

.

Oligonucleotide

의 염기배열은 다음과 같

cHTable II).

Table II. Oligonucleotide Sequences of

Primers Used for Quantitative RT-PCR

Gene Primer Sequence

IL-4 sense S'-ACCTTGCTGTCACCCTGTTC-3

^’

antisense 5

^’

-TTGTGAGCGTGGACTCA TTC-3'

sense S'-CTGACTTCAACAGCGACA-3

^’

5

^’

-ACATGACAAGGTGCGGCG-3

^’

GAPDH antISense

PCR product

의 양은

Windows 1D

maIn program

을 이용하여 최고값 (height

: Ht)

으로 측정하였다 .

169 -

(5)

-

^{사상채질의학회지 제}

¹⁵

^{권 제}

²

^호

²⁰⁰³ ^-

3) Mast cell activation

표면

IgE

발현

분석

0)

복강mast

cell

의 분리

BALB/ c

생쥐 를 치사시 킨 후 Tyrode 용

액 (NaCl

137mM, KCl 2.7mM, CaClz.

2HzO 1mM. NaHzP04 OAmM. NaHC03

12mM, glucose S.SmM BSA)

을 복강 내

에 주입하고 ,

90

초간 복벽을 가볍게 마사지 한 후 복벽을 소절개하여 복강 세척액을 스포 이드로 채취하여

3.000 r.p.m

에서

5

분간 원 심분리하여 얻어진 peritoneal

cells

를 1

의

Tyrode

용액 에 부유시 킨다 .

Peri toneal

cells

로부터 mast

cell

를 얻는 과정 은 Yurt

et a1'

의 방법 을 따랐다 . Peritoneal

cells

를

부유시킨

Tyrode

용액

1me

를

0.22Sg/

metriamide(density 1.120g/m

ι

Sigma)

2

뼈 표연 위에 loading 하겨 원심 분리 (400xg.

lSmin. RT)

하였다

.

버퍼와

metrizamide

사이에 있는 cells 층을 잘 수거하여 Tyrode

buffer

로

2-3

차례 세 척 한 후

1

에 부유시

켜 실험에 사용하였다

.

(2)

생쥐 복강 mast

cell

에서 IgE 발현분석 생쥐 복강 비만 세포를

24 wells plate

에

Sx105

세포

/well

로 분주하고

histamine-

releasing-factor(HRF) (SOOng/me),

PMAOOOng/)

그리고 CSYJT 추출물

00

μ

gjr

^뼈

) 을 가하여 72 시간 배양하였다 . 배양

후 비만 세포를 인산완충생리식염수로

2

회 수 세하였고

. ⁴

^°

^C

^에서 ^{연역형광염색을} ^실시하였

다 . 각각에

FITC-anti-mouse IgE

를 넣고

30

분간 얼음에서 반응시켰다

.

반응 후 3 회 이상 인산완충생리식염수로 수세한 후 유세포 형광분석기로 생쥐 복강 비만 세포에서

IgE

발현을 분석하였다 .

4)

생쥐

B

세포분리 및 배양

BALB/ c

생쥐에서 비장을 분리하여 비장세

포를 채취하여

2.000rpm

에서

5

분간 원심분 리하여 세포를 회수하였다

.

이에 적혈구 용혈 액

2

을 넣고 3TC 항온수조에

5

분간 방치

하였다 . 그 후 즉시

10

뼈의

D- PBS

를 첨가 하여 2,OOOrpm 에서

5

분간 원심분리하여 사 용하였다. 분리한 비장세포에 JIJlO,

OK1.S.3,

M1/70

배양 상층액

o

^뼈

^/108

^{세포 ) 을 처리한}

후 얼음에서

30

분간 반응시 켰다 (Table

I).

반응 후

2

회

D- PBS

로 수세하고

rabbit

complement lyophilised O.Sme

을 처리한

후 37 ^°

C

항온수조에서

1

시간 동안 배양하였 다 배양 후 5 회 complete

medium

으로 수 세하고 Sephadex

0-10 column

에 통과시 켜

B

세포를 분리하였다

.B

세포 항량을 측 정하기 위하여 Q-

B220- FITC

를 이용하여 유 세포 형광분석기로 분석하였다 (Fig.

1).

S) IFN-Y, IL-4, IgE

생산량 측정

생쥐

B

세포를 분리하여

96 wells plate

의 각 well 에 2x

105

세포씩 분주하고

. CSY JT

를 농도별로 처리하였고

.

^약물처리

^l

^{시간 후}

HRF(SOOng/

뼈 ),

anti-CD40 mAb(SOOng/

me)

과 rmIL-4 를 10 일과

72

시간 동안 동시 배양하였다

.

그리고

rmIL-10

을 처리하여 양 성대조군으로 사용하였다

.

배양 종료 후 전체

배양액을

2,OOOrpm

에서

5

분간 원심분리 하

여 상등액을 회수하여

ELISA

에 사용하였다

.

IFN-Y, IL-4. IL-10 ELISA

를 72 시간 , 그

리고

IgE ELISA kit

로 분비량은

10

일 동안

배양 후 측정하였다

.

각 항체를

coating

완

충용액에 희석하여

micro well

에

coating

한

후

4

^°

C

에서

overnight

하였다 . 각 well 을

3

회 washing 완충용액으로 세척한 후

B

세포 배양상충액을

100

μ

M

씩 분주하였다

. 1

시간 동 안 실온에서 방치 한 후 2 회 washing 완충용 액으로 세척한 다음 antibody

avidin-HRP

conj ugeted 100

때를 처리하고 1 시간 실온

에서 방치한 후 다시 세척하였다

. TMB

기질 을

100

따씩 분주하고 암소에서

30

분간 방치 한 후

SO

μ

e

의

stop

용액을 처리한 후

ELISA reader 4S0nm

에서 홉광도를 측정

하였다 .

- 170 -

(6)

Normll 58 120 0148 29 Control

I89 1l5 l64 lOO

(PMAjA¬¬187)

CI l70 l33 l 28 78

C3 l83 l27 I 44 88

c, l80 ll3 1 59 97

Ci l90 ll9 160 98

-

太陰A 淸心훌子훌의 抗a||ergv 作用에 對한

I

앓的 쩌

% -

m.

成績

1. PMA-A23187

로 활성화시킨 RBL-

2H3

세포주에서 IL-4 발현 억제에 미치는 효과 다양한 농도의

CSYJT(400

μ

g/mg, 3OO

^μ

g/

mg, 200

μ

g/me, 100

^μ

g/

뼈) 을 처리한 실험군의

IL-4

발현률이 대조군에 비하여

78. 88,

97, 98%

로 농도에 따라 억제되었다

(Table

1. Fig.1).

Table 1. Effects on the cells stimulated

with PMA and A23187

도노깅

% of _lL4(Ht) _GAPDH(Ht) _lL4/GAPDH

contro|

C 1 : 4OO

μ

g/mQ CSYJT + PMA-A23187

C2 ; 3OO

μ

g/

뼈

CSYJT+PMA-A23l87

C3 ^; 200

μ

g/mg CSYJT+PMA-A23187 C4 ; 100

μ

g/mM CSYJT+PMA-A23187.

M 2 3 4 5 6

|L

「

4 li, ^ν각 ^l

GR}{

| ’‘ ^l

Fig.l Effects of cs

ηT on

the ceUs Stimulated

with PMA and

A23l87

Cells were lnQlbated overnlght ln the presence of varlO

us concentrations of CSUT and were stmilllated with

PMA-A23l87 Cells were harvested 4h later for assessm

enr of IL-4 mRNA levels

Lane M ; lOObp ladder

lane 1 , media control

lane 2 ; RIA-A23l87

lane 3 , 400

μg/me αYjT+PMA-A23l87

lane 4 ; 3OO

_μ

g/me cSY]T+PMA-A23l87

lane 5 , 200

_μg/me αYjT+PMA-A23l87

lane 6 ; mollg/IIle

αYJT+PMA-A23187.

2. CD4O

과 IL-4 및 HRF ’를 함께 처리한

B cell

에서

IL-4

생성 억제에 미치는 효과

실험군 중

B cell

자극인자인

CD4O

과

IL-4

및 HRF 를 함께 처리한 경우 아무 것 도 처리하지 않은 음성 대조군에 비해

15

배 가량 증가됨으로

B cell

이 충분히 활성화되었 음을 확인 할 수 있으며 , 또한

IL-4

생산의

suppressor

로 작용하는

IL-1O

과 처리 시

IL-4

의 생산은

1037

±

754pg/me

로 현저히

감소하였다

.

또한 본 실험에 사용한

CSYJT

을 IL-10 대신 사용하여

IL-1O

과 비교 하였 을 때 농도에 따른 유의성 있는 억제 효과가 관찰되 었다 (Table

2)

Table 2. Inhib4tion effEct of IL-4 production

on splenic B ceUs that stjmulated with anti-

CD4OmAb, and rIL-4

CSYJT Group

(i 때ml) O O O 1m 1O

Noma| (N)

Cmtm!(C) dL-10 (r)

CSYJT1 (C1)

CSYJT2 (

띠

|L-4 prodlxtmn

」멜밴

L

213 ^± 621 ^허 3%2

± 16.1O

1037 ± 154.-- 1897 ± 655.-- gl3.8 ± 1310

N : Non-treated group.

C : Anti-CD40 + rIL-4

treated group .

r : Anti-CD4O + HRF +

rIL-1O treated group.

+ HRF

rIL-4 +

- 17 I -

(7)

r

^‘에

,tI

영

tf1t

、

+rXil

경

;

G

암까 (lqll _잉ni)

(PFVh+f

^‘

-

사상체질의학회지 저

|15

권 제

2

호

2003 -

,

^。‘

.

쉴융

형

^g

훌

^$

C 1 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4

CSYJT(mollg/mM) treated group.

C2 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4

CSYJT(1O

μ

g/

뼈

) treated group.

a) : Means

^±

standard error.

* P-value : Statistically significant

value compared with control data.

(* : P

〈0.O5,

** : P

〈0.O1.

*** : P

〈

ODou- + +

F1g.2 Inhibition effect of IL-4 production

on splenic B ceIIs that stimulated with

anti-CD4OmAb and rIL-4.

effect on mast cell surface

either

healthy BALB/c

Stunulated with PMA and recomblnant HRF or

n1ICe

Fig. 3 I

띠1ibitory

IgE expression

Mast cells from

gfi8

±

131@

3E2t1610

PMA and recombinant HRF plus CSYjT ( lO

_μ

g

/ml) Blndlng of IgE on rnOlue mast cells for 24 h

After 24 h, the cells were harvested, and assayed fbr

lgE expression by now cytomet

π

, and the Other

methods for assay were peIformed as

Metk

찌

treated R1ere

with 1887t6EEm

1m7t7%

…

m

rt-10(r)

α;YJr1

(C1)

.Å» XD

~ ^Ci

으 2E

t

。

san

그

§

^1$

‘1

-L1m

$ F a 3

土

6aal

o 4D 333

described ln

gym (cg

G1*d(Q kxrTIi (M

Mate,iah arld

+ HRF

4. B cell

의 IgE 생산에 미치는 효과

실험군 중

B cell

자극인자인

CD4O

과

IL-4

및

HRF

를 함께 처리한 경우 아무 것 처리하지 않은 陰性 대조군에 비해

4

배 가량 증가됨으로써

B cell

이 충분히 활성화 되었음을 확인 할 수 있으며 , 또한

IgE

생산 의 suppressor 로 작용하는 IL-lO 과 처리시

IgE

의 생산은 현저히 감소하였다

.

또한 본 실험에 사용한

CSYJT

을 IL-10 과 비교하기

위하여

IL-10

대신 사용한 결과 농도에 따

른 유의성 있는 억제 효과가 관찰되었다

(Table 3) .

+ +

N : Non-treated group ^.

C : Anti-CD40 + rIL-4

treated group .

r : Anti-CD40

rIL-1O treated group.

C 1 : Anti-CD40 + HRF

CSYJT( moltg/mM) treated group.

C2 : Anti--CD40 + HRF + rIL-4

CSYJT(1O

_μ

g/

뼈

) treated group.

a) : Means

土

standard error.

* P-value : Statistically significant

value compared with control data.

(* : R0.O5, : Rom. * : P

〈

0.Om).

rIL-4

+ + + HRF

+

도

3. Mast cel1

표면 IgE 발현에 미치는 영향

CSYJT

이 mast

cell surface IgE

발현에

미치는 영향을 알아본 결과 , CSYJT

10

μ

g/

me

농도로 처리한 실험군의

IgE

발현이 대조 군에 비해 감소하였음을 관찰할 수 있었다

(Fig. 2) .

l72

(8)

Group CSY JT IFN-Y production

¼tgJml) (nºpml)

Normal (N) 0 4.1:t O.42"!

Control (C) o ^15.5Í2.31

r1L-10 (r) 0 8.7:t 1.43

CSYJTl (Cn 100 17.4:1:2.25

CSYJT2 (C2) 10 15.2:1:1.34

-

^太陰

^Ai

홉心훌子혀의 抗 allergy

fFffl

에 훤한 ..앓的왜究

-

Table 3. Inhibition effect of IgE

production on splenic B cells that stimulated

with anti-CD40mAb. and rIL-4

CSYJT IgE pr

여 uction

Group

뼈에

⁾

뻐메

⁾

o ^11.5:1: ^1.4031

o 49.9:1:2.51

o 11.3:t 1.30."

50 24.4:t2.55".

Normal (N)

Control (C)

rIL-IO (r)

CSYJTl (Cn

CSYJT2 (C2) 10 26.5:t 1.29".

N : Non-treated group.

C : Anti-CD40 + rIL-4 + HRF

trea ted group.

r : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

rIL-IO treated group.

Cl : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSY JT(SO

μ

g/mQ) treated group.

C2 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSYJTOO

^μ

g/mQ) treated group.

a) : Means:!:standard error.

‘

P-value .

Statistically significant

value compared with control data.

(

^‘

_P(O.OS. ^U : P(O.Ol. ... _{: P(O.OOU}

00 49.9:t:2 S1 잉

때

ma

”

1I~

。

C)c

。

;u

그

1。

-。ω으

26 5<

^’

;>gooo 2“ :t:255".

‘’ 5%1 μ:9) 1 ’ 3:t:1.3)o>..

10 Normat (

씨 Control (C) rι -10(,) CSYJT1 (C') CSYJT2 (C2)

Fig. 4 Inhibition effect of IgE

production on splenic B cells that

stimulated with anti-CD40mAb. and

rIL-4

N : Non-treated group.

C : Anti-CD40 + rIL-4 + HRF

treated group

r : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

rIL-IO treated group.

C 1 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSYJT(SO

_μ

^g/mQ) ^treated ^group.

C2 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSYJTOO

μ

g/mQ) treated group.

a) : Means:!:standard error.

. P-value .

Statistically significant

value compared with control data.

(. : P(O.OS. .. _{: P(O.Ol.}

^‘

.. _{: P(O.OOU.}

S. B cell

의 IFN-Y 생산에 미치는 효과

지나친

B cell

의 활성화를 억제하기 위한

cytokine

으로 작용하는

IFN-Y

의 생산 변

화를 살펴보았다

.

앞서 알아본

CSYJT

에 의한 IgE 나 IL-4 의 억제 효과와는 다르게

IFN-Y

는 증가되 는 것을 관찰 할 수 있었다

(Table 4).

Table 4. Effect on IFN-Y production by HRF

plus anti-CD40mAb plus rIL-4 stimulated

murine splenic B cells

N : Non-treated group.

C : Anti-CD40 + rIL-4 + HRF

treated group.

r : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

rIL-IO treated group.

Cl : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSYJT(lOO

^μ

^g/mQ) ^treated ^group.

C2 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSYJT(lO

μ

g/

뼈 ) treated

group.

a) : Means:!:standard error.

173 -

(9)

-

사상채질의학회지 제

15

권 제

2

효 2003

-

Fig. 5 Effect on IFN-Y production

by HRF plus anti-CD40mAb plus

rIL-4 stimulated murine splenic B

cells

N : Non-treated group.

C : Anti-CD40 + rIL-4 + HRF

g

17,412.25 1 m

g

흥 1

g g

is 10

중

- 4. It 0.42<1)

, _"-2.J1

12t.1.34

8.7H43

Normal IN) Coouol IC) <1. -'0

I,) CSYJT' IC') CSYJT21C2)

treated group.

r : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

rIL-10 treated group.

C1 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSYJTClOO

^μ

gJ

뼈 ) treated

group.

C2 : Anti-CD40 + HRF + rIL-4 +

CSYJTClO

^μ

g/me) treated group.

a) : Meanststandard error.

N.

考察

Allergy

라는 용어는

1906'

^년

Clemens

Von PirQuet

에 의해 최초로 .이물질에 대한

신체의 잘못 변화된 능력’이라 하여 모든 면 역학적 반응을 포함하는 극히 광범위한 정의 였으나 최근에는 .다양하고 무해한 항원에 대 한 면역계의 반응으로 발생하는 질병.과 _같이

보다 제한된 의미로 정의 되며

.

종종 제

1

형 과민반응

(IgE

에 의하여 매개되는 즉시형 과 민반응 ) 과 동일시된다

1.15)

Allergy

반응은 무해한 항원 , 즉 allergen

에 반웅하여 생성된

IgE

항체를 지닌 개인이 계속하여 동일 allergen 에 노출되었을 때 일

어난다

. Allergen

은 이미 노출된 조직에 있

는

IgE

결합

mast cell

을 활성화시켜

.

allergy

의 특징적인 반응들을 연속적으로 일

어나게 한다

16.17)

Allergy

반응은 연역 글로불린이 항원과

반응하여 방출하는 화학전달물질이나

T

세포 에 의한 각종 화합물에 의해 혈관의 확장

.

^모

세혈관의 투과성 항진

.

평활근의 수축과 경 련

.

점액의 증가 및 점막의 부종과 염증 등이 유발되는 것으로 allergy 성 기관지염

. ^allergy

성 기 관지 천식

. ^allergy

^{성 비 염 등의} ^질환을

일으키는데 특히 호홉기계에 심각한 영향을 주어 기침과 객담의 분비

.

^호흡곤란

.

^발열

.

흉통

.

흉민감

.

^{천명 등을 일으킨다}

^18.19.)

최근 allergy 연구가 세포의 염증 발현에 관여하는 세포와 분자수준의 기전에 초점이 맞추어지고 있다 . 즉 세포단계의 염증 면역반 응에서 각종 cytokine 이 어떻게 관여하고 역 할하고 있는지를 계속적으로 보고하고 있으 며

.

^각종 ^치료 ^제제를 ^{투여함으로서} ^그러한

mechanism

에 변화를 초래하는 기전들을 구

체적으로 제시하고 있다

WI

Allergy

질환에서의 염증반응은 IgE 의 과

도한 생성과 백혈구

.

^특히 ^호산구의 ^{대량 유}

입으로 특징 지워진다 .

IgE

를 발현시키는

B

세포의 분화는 세 가지 종류의 신호에 의한 다

.

첫째로

B

세포의 항원 수용체를 통하여 이루어지는데 항왼 특이적 반응을 결정하는데 중추적인 역할을 한다

.

둘째는

Th2

세포에서

유래된

IL-4. IL-13

같은 cytokine 에 의하

여 제공된다 . 셋째는

B

세포와

T

세포의

interaction

에 의하여 제공된다

2.19)

Interleukin (IL)

이란 항원과 반응하여 활

성화된 림프구가 생성

.

^방출하는 ^물질로서

다른 세포에 작용하게 하는 활성물질이며

lymphokine

으로 칭하기도 하며

. ^macrophage

가 생성하는 통일한 활성물질인 monokine 은

monocyte

의 억제작동물질을 의 미 하는데

.

^이

둘을 합하여

cytokine

이 라고 부른다

19)

이 런

cytokine

은 어떤 한 가지 항원에 특이적인

적은 수의 립프구로 하여금 그 항원을 제거하 는 다양한 실행기전을 활성화시키도록 하는 증폭기전을 제공하므로

cytokine

의 과도한

- 174 -

(10)

-

太陰

A

쩌心홉子훌의 抗allergy 作用에 휩한 .앓的

-

생성 및 작용은 조직상해를 유발하거나 괴사 를 일으킬 수 있다

.

그러므로 cytokine 이나 저해제를 투여하는 것은 질병과 연관된 생물 학적 반응을 변화시킬 잠재적인 접근 방법이 될 수 있다

21. 22)

Th

세포는

cytokine

을 분비하여 기도의

염증반응을 조절하는 중요한 역할을 하고 있 다 .

Th

세포는 cytokine 의 분비 양상에 따 라 Thl. ^’

rh2

세포로 나뉘어 진다

. Thl

세

포는 주로

IL-2. IL-12. IFN-Y

를 생산하며

지연형 과민반응

.

결핵균이나 바이러스에 대 한 방어작용

.

종양에 대한 숙주반응에 관여한 다 . Th2 세포는 IL-4.

IL-5. IL-6. IL-IO

등을 생산하며 즉시형 과민반응

.

^{기관지 천식}

과 같은 allergy 성 질환 , 기생충 감염에 대한 방어작용에 관여 한다 .

Thl

세포와

Th2

세 포는 서로 길항작용을 나타내어 기능이 억제

되는 현상이 관찰되며

allergy

성 기관지 천식

환자의 기관지 폐포 세척액에서는

Th2

세포 의 기능이 활성화됨이 관찰되고 있다. 즉 , 항 원에 의한 IgE 생성에 필수적인 요소인

IL-4

를 분비 하는

Th2

세포는

naive CD4+ T

세포가

IL-4

의 영향으로

allergen

과 반응시

분화되고 이때

IgE

생성을 방해하는 IFN-Y 를 분비하는

Thl

세포는 그 발달이 저해 된 다

21.23.24.25)

그러므로

IL-4

의 생성이 억제 되면

Th2

세포의 분화가 억제되고

B

세포에 의한

IgE

의 생성이 역시 억제되어

mast cell

의 표면 에 IgE 항체의 발현이 적어질 것이며

. ^IFN-

v

의 생산의 증가는 곧

Thl

세포의 발달을 촉 진하여

ThO

세포가 ^’

rh2

세포로 분화되는 것 을 저해시켜 알레르기 반응이 일어나지 않게 될 것으로 예상이 된다

.

太陰

A

에게 나타나는 흉病의 特徵은 表病證 인 氣浪之氣의 中

i

뭘證과 짧病證인

;操熱證으로

나누어 볼 수 있다

.

表病證인 氣滾之氣의 中

i

뭘證은 發散

i

댐操補뼈하는 治法을 사용하며 훌 病證인 操熱證은 淸JJf 熱j 댐操하는 治法을 사용 한다 . 太陰

A

의 病證은 表夏를 막론하고 呼散

之氣를 保命之氣로 調節해야 한다

26)

太陰

A

의 특성상 府爆熱의 病證이 發生하면 뼈局에 영향을 미쳐 뼈의 챈廳組織을 乾操하 게 하여 진드기의 배설물 , 미세 먼지 , 꽃가루 등의 이물질에 과민한 반응을 일으킬 가능성

이 커지게 되어

allergy

性氣管支갖이나

allergy

性氣짤支 댐息이 발생하게 된다

.

淸心違子場은 〈東醫옳世保元)

14)

草本

1#<

에는 기술되어 있지 않지만 甲午本과 辛표版本에 處方의 構成만 기록되었다가 후대 학자 인 元

6)

의 〈東聲四象新編〉 에 ..治虛勞夢뺀無度

8

훌痛

t

世

i

寫 좀卷中風食漂

8

떼題

1

홈이 라 기록 되어 있으며 , 많은 醫홉

7-10)

에서 淸

^Je.

、運子場 을 太陰

A

의 虛勞와 中風

.

^心

^R

^{훌훌뽕‘ ,} ^神經性

흉愚

. ^allergy

性 웰갖 둥에 활용됨을 설명하

고있다 .

淸

Je.

、運子場의 橫成과 效能을 살펴보면

,

運子肉은 開뼈之몹氣하고 , 山쫓은 싼뼈而有內守 하고

.

^{天門쪽은 開皮毛하고}

.

^{껑충門쪽은 補‘뼈和}

뻐하고

⁾

좋志는 醒師之합氣하고 , 石홈演는 錯琮뼈氣 하고 , 醒훌仁은 安神定意하고 , 龍

DI

肉 은 開皮毛

.

^相子仁은 ^{補‘心益氣하고}

^,

^黃측은

收敬뼈元하고

. ^*ij

^훨子는

^{P 뽑섰下氣하고} . ⁱ

^호쨌

은 開皮毛하여

.

^補‘

^Hili

^和뼈

. ^!tf: ^R

^{며 , 收敬뼈元}

.

^安

피輪혐ι、

¹⁴⁾

등으로 師元을 補하고 和하는 樂物 과 心神을 安定시키는 獲物로 構成된 處方으 로 allergy 性氣짤支꽃

. ^allergy

^{性氣管支 n}^밟

息、에 사용될 수 있을 것으로 사료된다

.

淸心運子楊에 대한 다양한 연구

11-13)

가 있 어 왔으나

.

^{淸心運子場의} ^抗allergy ^효과의

分子免흉學的인 機轉에 대한 賢驗的

^1iJf

究는 아직 접해보지 못했다

.

이에 저자는 淸心連子場의 抗 allergy 에 대 한 效能을 實驗的으로 쐐明하기 위해

B

세포 에서

IL-4

의 유전자발현과

IL-4. IgE

의 생 성 및 mast

cell

에서 IgE 발현

. ^IFN-Y

^생성

에 미치는 효과 등을 측정하였다

.

淸

Je.

鐘子場의 抗allergy 효과를 측정하기 위해

.

^淸

^Je.

鍾子場을 투여한 실험군과 IL-IO 을 투여한 양성 대조군과 아무것도 투여하지