약학회 지 제 43 권 제 4 호 494-501(1999) Yakhak Hoeji Vol. 43, No. 4
율피 • 솔잎 • 호프의 수성 아세론 추출물에
의한 Melanin 생성 억제 효과
양민진^ ■김명길* • 임세진* * • 안형수* * • 안령미
동덕여자대학교 보건관리 학과, * 경기도 보건환경연구원, ** 동덕여자대학교 약학과 (Received May 6, 1999)
Inhibitory Effects of Water-Acetone Extracts of Chestnut inner shell, Pine needle and Hop on The Melanin Biosynthesis
Min-Jin Yang***, Myung-Gill Kim*, Sejin Lim **, Hyung-Soo Ann** and Ryoung-Me Ahn Departm ent of Health Science, Dongduk Women's University, Seoul 136-714, Korea
^Public Health Envirom ent Research, Kyonggido
**Departmemt of Pharmacy, Dongduk Women's University, Seoul 136-714, Korea
Abstract —— The skin whitening effects of pine needle extract, hop extract and chestnut inner shell extract were evaluated both in vitro and in B 16 mouse melanoma cell lines. Each extracts significantly inhibited tyrosinase activity, dopa auto-oxidation and melanin biosynthesis in vitro and in B 16 cell lines. In vitro, hop extract inhibited melanin biosynthesis 15 times stronger than kojic acid at 10 나g/m/ concentration. Each extracts were stronger inhibitors of melanin biosynthesis than kojic acid in B 16 mouse melanoma cell at less than 4 p.g/m/ concentration. These results show that extracts of pine needle, hop and chestnut inner shell could be developed as skin whitening component of cosmetics.
Keywords □ Chestnut inner shell, pine needie, hop. tyrosinase, dopachrome, melanin.
파 정 <>1 200~ 400nm인 자 외 선 은 지 구 대 기 률 투 과 한 태 양 광 선 가 운 데 비 록 1% 에 불 과 하 지 만 일 광 화 상 , 면 역 반 응 의 번 화 , 돌 연 변 이 , 광 알 레 르 기 성 번 움 ,
광 과 민 성 질 환 , 백 내 장 발 생 의 증 기 등 을 위 시 하 여 인 체 피 부 의 색 소 침 착 , 피 부 암 의 발 생 과 피 부 반 점 , 기 미 , 주 근 깨 의 피 부 흑 화 현 상 을 가 져 온 다 .« 이 런 피 부 색 소 침 착 과 괴 부 흑 화 현 상 의 원 인 인 멜 라 닌 은 자 외 선 으 로 생 성 된 radical을 둘 러 싸 포 착 제 로 써 피 부 의 광 노 화 나 일 광 각 화 증 을 억 제 하 는 역 할 을 하 는 궁 정 적 인 기 능 ® 을 가 지 고 있 기 도 하 지 만 , 미 용 적 인 측 면 에 서 의 색 소 침 착 뿐 만 아 니 라 델 라 닌 전 구 물 질 둘 에 의 한 득 성 으 로 세 포 사 멸 촉 진 등 부 정 적 인 기 능 ^ ' « 을 가 지 고 있 다 . 따 라 서 자 외 선 에 대 한 방 어 작 용 으 로 합 성 되 는 델
* 본 논문에 관한 문의는 이 저자에게로 (견화) 02-940-4481 (팩스) 02-940-4193
라 닌 색 소 에 대 한 연 구 도 활 발 해 지 고 있 는 추 세 이 다 .
델 라 닌 은 tyrosinase에 의 하 여 tyrosine에 서 형 성 된 델 라 닌 이 델 라 닌 소 체 에 첨 착 하 고 델 라 닌 세 포 내 에 서 델 라 닌 소 체 의 수 상 돌 기 로 의 이 동 및 델 라 닌 소 체 의 각 질 세 포 로 의 이 동 하 는 세 과 정 을 거 쳐 생 성 되 므 로 델 라 닌 생 성 억 제 는 이 중 한 과 정 을 차 단 시 킴 으 로 써 가 능 하 다 . 이 와 같 이 피 부 의 흑 화 를 억 제 하 는 미 백 작 용 (skin whitening effect)을 지 닌 머 백 제 로 는 arbutin
과 kojic acid®가 있 다 .
이 에 본 연 구 에 서 는 전 보 의 연 구 결 과 , tyrosinase
활 성 억 제 와 델 라 닌 생 성 억 제 효 과 를 나 타 냈 던 율 괴 추 출 물 인 CIS-gel과 우 리 나 라 에 자 생 하 고 있 는 풍 부 한 식 물 자 원 인 솔 잎 및 호 프 의 추 출 물 을 시 • 용 하 여 미 백 효 과 를 검 증 하 고 자 하 였 다 . 솔 잎 , 호 프 , 율 피 의 수 성 아 세 론 추 출 물 에 대 한 미 백 효 과 를 비 교 검 증 하 기 위 해 시 험 관 내 실 험 과 세 포 실 험 에 서 tyrosinase 활 성 과
494
율피 • 솔잎 ■ 호프의 수성 아세론 추출물에 의한 Melanin 생성 억제 효과 495
dopa X]동 산 화 , 델 라 닌 함 량 을 측 정 하 였 고 비 교 물 질 로 는 kojic add를 사 용 하 였 다 .
실 험 방 법
세포 및 배양액-Mouse 피 부 암 세 포 인 B 16 me
lanoma# Dulbecco's Modified Eagle Medium(Gibco Life technologies. Inc. USA) 배 지 에 서 배 양 하 였 다 .
시 약 및 조제 - 본 연 구 에 서 시 용 한 솔 잎 추 출 물
(PN), 호 프 추 출 물 (HOP), 율 피 추 출 물 (CIS-gel) 은 200 ixg/m/ 의 농 도 로 1/15 M의 Phosphate buffer solution
에 녹 여 단 계 별 화 석 하 여 시 용 하 였 다 . Tyrosinase(EC 1.14.18.1), L-3,4-Dihydroxyphenylalanine(L-DOPA), kojic acid, triton-X, MTT(3-(4,5-dimethylthia2ol-2-yl) 2,5-diphenyl tetxazolium bromide) 등 은 Sigma^KSt.
Louis, MO., U.S.A) 에 서 구 입 하 였 고 , soluene 350은
Canberra사 (Netherlands) 에 서 구 입 하 였 다 .
엑스의 제조 - 건 조 한 율 피 ( 층 남 공 주 산 ) 는 경 동 한 약 재 시 장 에 서 구 입 하 였 고 , 감 정 한 후 하 였 다 . 율 피
2 kg을 70% 수 성 아 세 론 용 액 15 L로 실 온 에 서 냉 첨 ,
추 출 하 고 감 압 농 축 하 쉬 수 성 아 세 론 엑 스 1 1 0당 을 얻 었 다 . 솔 엎 은 동 국 대 학 교 일 산 농 장 에 서 채 집 하 여 사 용 하 였 고 , 1 kg을 옴 건 한 후 70% 수 성 아 세 론 8 L
로 실 온 에 서 냉 침 , 추 출 하 고 감 ^ ! • 농 축 하 여 수 성 아 세 론 엑 스 35 g을 얻 었 다 . 호 프 밀 은 (주 ) 두 산 에 서 공 급 받 아 사 용 하 였 으 며 , I k g i： 70% 수 성 아 세 론 용 액 8L
로 실 온 에 서 냉 침 , 추 출 하 고 여 과 한 후 감i] ■농 축 하 ^ 수 성 아 세 론 엑 스 80 g l：얻 었 다 .
시 험 관 내 Tyrosinase 활성 억제 실 험 - Mason (1947f의 방 법 에 따 라 기 질 은 tyrosine을 정 제 수 로 용 해 시 켜 사 용 하 였 으 며 Lambda4A(Perkin Elmer) 을 이 용 하 ^ 475피 고 에 서 흡 광 도 를 측 정 하 였 다 . 각 물 질 의 tyrosinase 활 성 억 제 효 과 는 다 옴 의 공 식 으 로 구 하 였 다 .
Tyrosinase 활 성 억 제 율 (%)=100 B _ A _ B
- A xlOO
A B A', B'
blank 용 액 의 반 응 후 의 흡 광 도 시 료 용 액 의 'L빠 후 의 흡 광 도
tyrosinase 대 신 buffer로 대 체 하 여 측 정 한 흡 광 도
따 라 완 층 용 액 NajPO/O.OOS M, pH 6.8) 와 Dopa (500|oM) 를 준 비 하 고 전 체 반 응 부 괴 를 2 m/ 로 하 식
475 nm에 서 흡 광 도 를 측 정 하 였 다 . 각 실 험 물 질 의 도 파 자 동 산 화 억 제 효 과 는 다 옴 의 공 식 으 로 구 하 였 다 .
DOPA 자 동 산 화 억 제 율 (%)
= 100- 각 추 출 물 의 반 응 흡 광 도 대 조 군 의 반 응 흡 광 도
X 100
시험관내 엘라닌 생성 억제 실험 -Mason(1947f의
방 법 에 따 라 tyrosinase는 135 unit/m/ 로 하 여 37+
r C에 서 10분 간 반 웅 시 키 고 0.03% dopa를 넣 은 후 실 험 물 질 을 견 체 반 응 부 피 가 1.5 mPl 되 게 하 여 37± rC에 서 60분 간 반 응 시 킨 후 4000 rpm에 서 15분 간 원 심 분 리 하 였 다 . 침 견 물 은 6N HC1 1 m/ 과 distilled water로
wash 한 무 soluene 350 2 m/ 률 넣 어 vortex 하 여
400nm에 서 흡 광 도 룰 측 정 하 였 다 . 델 라 닌 생 성 억 제 율 은 다 옴 의 공 식 으 로 구 하 였 다 .
Melanin 생 성 억 제 율 (%)
각 추 출 물 의 반 응 흡 광 도 100-
대 조 군 의 반 응 흡 광 도 100
시험관내 도파 자동산 화 -Mason(1947f의 방 법 에
UV 훌 수 실 험 -Hideaki(1996) 가 의 방 법 에 의 하 여
CIS-gel, PN, HOP는 50 |xg/m/ 의 농 도 로 , kojic acid
는 25 ng/m/ 의 농 :E로 200-400 피 고 에 서 례 도 률 측 정 하 였 다 .
MTT assay - Mosmann(1983) 베 의 방 법 에 의 하 여 흡 광 광 도 계 550 nm에 서 흡 광 도 률 측 정 하 쉬 대 조 군 과 비 교 하 였 다 .
세포내 Tyrosinase 활성 억제 실험 -B 16 mouse melanoma 세 포 룰 10간 개 /m/ 로 24 well에 심 어 서
37"C, 5% 의 배 양 기 에 서 견 배 양 하 였 다 . Maeda (1992) " " 씩 방 법 에 따 라 실 험 하 였 으 며 475nm에 서 흡 광 도 률 측 정 하 였 다 .
세포내 엘라닌 생성 억제 실험 -B 16 melanoma
세 포 를 10" 개 /m/ 로 24 well에 심 어 서 37 °C, 5% 의
CO^ 배 양 기 에 서 배 양 한 후 Gordon(199lf» 의 방 법 에 따 라 실 험 하 였 으 며 이 것 을 흡 광 광 도 계 파 장 475 nm에 서 흡 광 도 률 측 정 하 쉬 실 험 군 위 델 라 닌 양 은 대 조 군 의 델 라 닌 양 에 대 한 백 분 율 로 계 산 하 였 다 .
통 계 처 리 - 결 과 의 통 계 학 적 인 분 석 은 Factorial design analysis와 Anova분 석 을 사 용 하 였 다 .
Vo/. 43, No. 4. 1999
-CIS-ge!
-PN -HOP
~Kojic acid
■ -X -X
0 50 100 150
Concentration ( /« /ml)
200
F ig . 1 — Inhibitory effects of chestnut inner shell extract, pine needle extract, hop extract and kojic acid on tyrosinase activity. (fcO.Ol; significantly different from concentration of test substances)
결 과
시 험 관 내 tyrosinase 활 성 억 제 실 험 - 율 피 주 출 물 ,
솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 및 kojic acid의 tyrosinase
활 성 억 제 실 험 결 과 는 Fig. 1과 같 다 . 각 실 험 물 질 돌 의 농 도 가 증 가 함 에 따 라 tyrosinase 활 성 억 제 율 이 유 의 하 게 증 가 하 였 다 (fcO.Ol). 또 한 tyrosinase의 활 성 도 의 ICjoQnhibition concentration 50%)은 kojic acid
가 11.27 CIS-gel이 62 PN 82 \igjvd,
HOP 174 lag/m/ 순 으 로 추 출 물 중 에 서 CIS-gel의 억 제 능 이 가 장 높 았 다 .
시 험 관 내 도 파 자 동 산 화 - CIS-gel, PN, HOP 및
kojic acid의 도 파 자 똥 산 화 억 제 실 험 결 과 는 Fig. 2
와 같 다 . 각 실 험 물 질 의 농 도 가 증 가 함 에 따 라 도 파 지 동 산 화 억 제 율 이 유 의 하 게 증 가 하 였 으 며 (fcO.Ol), CIS-gel과 HOP은 200 ng/m/의 능 도 에 서 억 제 능 이
90% 정 도 로 kojic add와 비 숫 한 억 제 효 과 를 나 타 내 었 다 . 또 한 도 파 지 '동 심 • 화 의 IC^o은 kojic acid가 32 ng/
ml, CIS-gel이 124|x©님 , HOP가 126 ng/m/, PN이
146 (xg/m/ 순 으 로 tyrosinase 활 성 억 제 실 험 에 서 와 마 찬 가 지 로 추 출 물 중 에 서 CIS-gel의 억 제 능 이 가 장 높 았 다 .
Concentration /ml)
F ig . 2 - Inhibitory effects of chestnut inner shell extract, pine needle extract, hop extract and kojic acid on dopa auto-oxidation. (fcO.Ol; significantly different from concentration of test substances)
시 험 관 내 엘 라 닌 생 성 억 제 실 험 -CIS-gel, PN, HOP 및 kojic acid의 농 도 가 증 가 함 에 따 라 델 라 닌 생 성 억 제 율 이 유 의 하 게 증 가 하 였 으 며 (fcO.Ol) 그 결 파 는 Fig. 3파 같 다 . 각 실 험 물 질 의 델 라 닌 생 성 억 제 율 은 l(Uig/m/의 농 도 에 서 HOP이 59.06%, PN
g
jo
!Ec
Concentration (/원/ml)
F ig . 3 — Inhibitory effects of chestnut inner shell extract, pine needle extract, hop extract and kojic acid on melanin biosynthesis. (fcO.Ol; significantly different from con
centration of test substances.
J. Hharm. Soc. Korea 양 민 진 • 김 명 길 • 임 세 진 • 인 형 수 • 인 령 미
g{%>
I J
U011I
0 2 4 6 8 10
Concentration U트 /ml)
Fig. 5 - The effects of chestnut inner shell extract, pine needle extract, hop extract and kojic acid on viability of B 16 melanoma cell
세 포 내 tyrosinase 활 성 억 제 실 험 - B 16 melanoma cell의 tyrosinase 활 성 억 제 설 험 에 서 는 CIS-gel, PN, HOP 및 kojic add의 농 도 가 증 가 함 에 따 라 tyro
sinase 활 성 억 제 율 이 농 도 의 존 적 으 로 유 의 하 게 증 가 하 였 으 며 (f<0.01) 그 결 파 는 Fig. 6과 같 다 . 각 실 험 현 재 가 장 많 어 사 용 되 고 효 과 가 인 정 되 는 미 백 제 인
kojic add보 다 높 은 델 라 닌 생 성 억 제 능 을 나 타 내 어 상 당 히 높 은 미 백 효 과 률 보 여 주 는 것 이 라 할 수 있 다 .
UV 훌 수 실 험 -CIS-gel, PN, HOP는 50 |ig/m/ 의 농 도 로 , kojic add는 25|ig/m/ 의 농 도 로 200-400 nm에 서 UV 흡 수 실 험 을 한 결 과 는 Fig. 4와 같 다 . CIS-gel, HOP는 200-400 nm에 서 야 를 흡 수 하 지 않 고 , PN은 200~50nm에 서 약 한 흡 수 률 보 이 는 데 반 해 kojic acid는 200~290nm에 서 흡 수 률 하 는 것 으 로 ^ 타 났 다 .
MTT assay - B 16 mouse melanoma cell 에 서
CIS-gel, PN, HOP 및 kojic acid에 대 한 생 존 률 을 조 사 한 결 과 는 Fig. 5와 같 다 . 각 실 험 물 질 을 10 ng/
mL 농 도 로 투 여 한 처 치 군 은 정 상 군 에 비 해 생 존 률 이
86.1%, 89.63%, 89.05%, 87.92%이 었 으 며 , 각 실 험 물 질 별 로 8[ig/ml이 하 의 농 도 에 서 는 정 상 군 과 비 교 했
을 때 세 포 생 존 률 에 영 향 이 없 었 다 . 따 라 서 각 실 험 물 질 에 의 한 세 포 득 성 은 없 는 것 으 로 나 타 났 다 .
Vol. 43, No. 4, 1999
율피 • 솔잎 ■ 호프의 수성 아세톤 주줄물에 의한 Melanin 생성 억제 효과 497
Fig. 4 - Absorption in the UV spectrum.
(A ; PN (50 Mg/m/j, B : ClS-gel (50 |Jg/m/j, C : Kojic acid (25 |Jg/m/), D : HOP (50 |Jg/m/))
45.13%, CIS-gel이 1486%, kojic acid가 3.96% 순 으 로 추 출 물 이 단 일 물 질 인 kojic add에 비 해 델 라 닌 생 성 억 제 효 과 가 높 았 다 . 특 히 , 추 출 물 중 HOP는 kojic add
보 다 억 제 율 이 15배 나 높 았 는 데 이 것 은 호 프 추 출 물 이
100 I
98
96
0
0 2 4 6 8 10
Concentration (/« /ml)
Fig. 6 - Inhibitory effects of chestnut inner shell extract, pine needle extract, hop extract and kojic acid on tyrosinase activity in B 16 melanoma cell. (f<0.01;
significantly different from concentration of test substances)
물 질 들 의 tyrosinase 활 성 억 제 율 은 1 0 의 농 도 에 서 kojic acid가 80.48%, CIS-gel이 63.41%, PN이
50,71%, HOP가 49.97%이 었 다 . 또 한 tyrosinase 활 성 도 의 IC50은 CIS-gel이 1.9|ig/m/으 로 kojic acid
와 유 사 한 효 과 률 나 타 냈 으 며 , CIS-gel이 시 험 관 내 실 험 에 서 와 동 일 하 게 tyrosinase의 활 성 억 제 효 과 가 가 장 높 았 다 .
세 포 내 엘 라 닌 생 성 억 제 실 험 -B 16 melanoma cell에 서 CIS-gel, PN, HOP 및 kojic acid에 의 한 델 라 닌 생 성 억 제 실 험 결 과 는 Fig. 7과 같 다 . 각 실 험 물 질 에 대 한 델 라 닌 생 성 억 제 율 은 능 도 가 증 가 함 에 따 라 유 의 하 게 증 가 하 였 다 (f<0.01). 특 히 CIS-gel, PN, HOP는 4|ig/m/ 이 하 의 농 도 에 서 kojic acid보 다 델 라 닌 생 성 저 해 능 이 높 았 다 . 또 한 델 라 닌 생 성
ICjodnhibition concentration 50%) 은 kojic add 의
5.2 fig/m/와 유 사 한 결 과 틀 나 타 낸 CIS-gel이 6 |ig/m/, PN이 8[ig/ml, HOP가 8.1 |ig/m/ 순 으 로 추 출 물 중 에 서 CIS-gel이 억 제 능 의 가 장 높 았 다 .
고 찰
피 부 색 은 카 로 틴 , 델 라 닌 , 혈 색 소 등 에 의 해 결 정 되
0 '
0 2 4 6 8 10
Concentration (/« /mt)
Fig. 7 - Inhibitory effects of chestnut inner shell extract, pine needle extract, hop extract and kojic acid on melanin biosynthesis in B 16 melanoma cell. (f<0.01; signifi
cantly different from concentration of test substan
ces)
며 이 중 가 장 중 요 한 역 활 을 하 는 것 은 델 라 닌 이 다 .
델 라 닌 은 델 라 닌 세 포 에 서 melanogenesis에 의 해 서 만 들 어 지 는 데 건 강 인 의 피 부 는 단 위 면 적 당 약 1,500개 의 델 라 닌 세 포 가 존 재 하 며 " 델 라 닌 세 포 의 크 기 , 모 양 및 수 는 유 전 적 으 로 결 정 된 다 /®
본 실 험 에 서 델 라 닌 생 성 억 제 제 로 사 용 한 율 피 , 솔 잎 , 호 프 는 폴 리 페 놀 류 로 우 리 나 라 의 대 표 적 인 탄 닌 함 유 자 원 식 물 이 다 . 농 림 부 식 물 자 원 의 폴 리 페 놀 류 분 류 와 기 능 성 신 소 재 기 술 개 발 의 보 고 서 ® 에 따 르 면 소 나 무 tabulmformis can.) 잎 은 ellagic add와
catechin이 탄 닌 의 주 요 성 분 으 로 탄 닌 을 포 함 한 폴 리 페 놀 류 의 함 량 이 100 g당 1.995 요 정 도 로 분 석 되 었 으 며 ,
비 타 민 C를 다 량 함 유 하 고 있 고 특 히 득 성 이 염 려 되 는 물 질 인 알 칼 로 이 드 가 " 들 어 있 지 않 은 것 이 특 징 이 라 고 할 수 있 다 . 솔 잎 의 효 과 로 는 항 산 화 효 과 와 항 번 이 원 성 효 과 를 나 타 내 며 , 클 로 로 필 은 고 약 형 태 로 만 들 어 피 부 병 에 이 용 되 기 도 한 다 . 맥 주 의 주 원 료 인 호
프iflumulus Lupulus)는 ellagic add와 gallic acid가 주 성 분 으 로 폴 리 페 놀 류 함 량 은 100g당 1.305g이 며 , polyphenol 화 합 물 과 탄 닌 계 열 의 화 합 물 이 존 재 하 여
뛰 어 난 항 산 화 효 과 를 나 타 낼 것 은 물 론 항 돌 연 번 이 효 과 와 암 세 포 증 식 억 제 효 과 도 지 닐 것 으 로 기 대 되 는 물 질 이 다 . Ellagic add가 탄 닌 의 주 요 성 분 인 율 피 는
J. Pharm. Soc. Korea 잉민진 • 김명길 • 임세진 • 안형수 ■ 안령머
|%> I 011I U
£ I
uiiul
율괴 • 솔잎 ' 호프의 수성 아^11론 추출물에 의한 Melanin 생성 억제 효파 499
밤 나 무 (Casfemea molUssimaB I.) 열 매 인 밤 의 내 과 피
로 서 밤 을 이 용 한 가 공 식 품 제 조 시 제 거 되 어 폐 기 처 리 되 던 일 종 의 산 업 부 산 물 이 었 으 나 최 근 에 율 피 가 민 간 에 서 피 부 머 용 팩 의 한 성 분 으 로 널 리 시 용 되 고 있 으 며 그 수 럼 효 과 및 괴 부 보 호 효 과 도 윤 " « 에 의 해 서 검 증 된 바 있 다 . 또 한 전 보 ^ 세 서 도 율 피 추 출 물 의 시 험 관 내 실 험 과 B 16 m elanom a 세 포 실 험 에 서 미 백 효 과 를 측 정 하 식 그 가 능 성 을 제 시 한 바 있 다 .
델 라 닌 합 성 과 정 중 tyrosine이 델 라 닌 으 로 합 성 되 는 처 옴 두 단 계 에 서 의 산 화 작 용 이 tyrosine이 tyro- sinase의 작 용 에 의 하 쉬 이 루 어 지 므 로 어 떤 물 질 의 미 백 효 과 률 죽 정 하 기 위 해 서 는 tyrosinase 활 성 의 억 제 여 부 률 측 정 하 는 것 이 가 장 많 이 알 려 져 있 다 . 따 라 서 본 연 구 에 서 는 시 험 관 내 실 험 과 세 포 실 험 에 서 솔 잎 추 출 물 , .흐■프 추 출 물 , 율 피 추 출 물 에 대 한 tyrosinase 활 성 억 제 실 험 을 하 였 는 데 그 결 과 시 험 관 내 실 험 에 서 는 tyrosinase 활 성 도 의 IC50이 CIS-gel이 62 |ig/
ml, PN이 82 ng/m/, H O P가 174 |ig/m/로 나 타 났 다 . Hideaki^®등 은 시 험 관 내 실 험 에 서 M yrica rubra의 잎 과 bark의 주 줄 물 과 kojic acid의 tyrosinase 활 성 을 측 정 하 였 는 데 그 결 과 tyrosinase 활 성 도 ICjo이
Myrica 의 잎 과 bark 모 두 약 200|오gte /으 로
나 타 났 다 . 두 연 구 의 tyrosinase 활 성 억 제 실 험 결 과 률 비 교 해 보 면 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 괴 추 출 물 이 Myricarw뇨 a의 잎 과 bark의 추 출 물 보 다 tyrosinase 활 성 억 제 효 과 가 더 뛰 어 난 것 을 알 수 있 었 다 . 또 한 B 16 세 포 실 험 에 서 도 시 험 관 내 실 험 에 서 와 마 찬 가 지 로 실 험 물 질 의 농 도 의 존 적 으 로 tyrosinase의 활 성 을 억 제 시 켰 다 .
Dopa는 tyrosinase의 작 용 에 의 해 tyrosin으 로 부 터 생 성 되 며 도 파 자 동 산 화 (dopa auto-oxidation)과 정 을 거 쳐 멜 라 닌 을 생 성 하 는 데 작 용 하 는 중 간 대 사 물 질 로 델 라 닌 합 성 에 중 요 한 역 할 을 한 다 / 가 최 근 둘 어 미 백 물 질 을 개 발 하 는 과 정 에 서 도 파 자 동 • 산 화 를 억 제 할 수 있 는 물 질 에 대 한 연 구 가 많 이 진 행 되 고 있 다 . 본 연 구 에 서 는 솔 엎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 피 추 출 물 , kojic acid틀 10 ixg/m/ 농 도 에 서 200 ng/m/ 농 도 로 처 리 하 식 시 험 관 내 실 험 에 서 도 파 자 동 산 화 를 측 정 한 결 파 농 도 의 존 적 으 로 도 파 자 동 산 화 억 제 율 이 증 가 하 였 으 며 , 전 보 " " * 의 연 구 결 과 에 서 도 율 피 추 출 물 의 농 도 가 증 가 할 수 록 도 파 자 동 산 화 억 제 율 이 증 가 하 였 다 .
솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 괴 추 출 물 , kojic acid
에 대 한 UV흡 수 실 험 을 한 결 과 kojic a d d률 제 외 한 실 험 물 질 은 UV률 흡 수 하 지 않은것 으 로 나 타 나 각 실 험 물 질 에 의 한 미 백 효 과 는 UV 흡 수 에 의 한 것 이 라 기 보 다 는 델 라 닌 생 성 에 관 여 하 는 효 소 들 의 활 성 을 억 제 함 으 로 써 나 타 나 는 것 이 라 생 각 할 수 있 다 .
또 한 시 험 관 내 실 험 과 세 포 실 험 에 서 솔 잎 추 출 물 ,
호 프 추 출 물 , 율 괴 추 출 물 , kojic ad d에 대 한 델 라 닌 함 량 을 측 정 하 였 는 데 그 결 과 각 각 의 추 출 물 과 kojic acid는 농 도 의 존 적 으 로 델 라 닌 생 성 을 억 제 하 였 다 . 시
험 관 내 실 험 에 서 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 피 추 출 물 은 tyrosinase의 활 성 억 제 율 이 가 장 높 았 던 단 일 물 질 인 kojic add에 비 해 델 라 닌 생 성 억 제 율 이 더 높 게 나 타 났 는 데 이 러 한 결 과 는 다 옴 과 같 은 사 살 로 이 해 할 수 있 다 . 델 라 닌 은 tyrosinase에 의 해 tyrosine 으 로 부 터 생 산 된 여 러 중 류 의 중 간 체 들 이 모 여 형 성 된 복 합 체 지 만 이 들 유 도 체 들 이 어 떻 게 진 행 중 인 반 응 으 로 부 터 벗 어 나 델 라 닌 색 소 의 한 구 성 성 분 이 되 는 지 에 대 해 서 는 아 직 까 지 정 확 한 기 전 이 밝 혀 져 있 지 않 다 . 뿐 만 아 니 라 현 재 까 지 도 델 라 닌 의 정 확 한 성 분 과 구 조 에 대 해 서 완 전 하 게 알 려 져 있 지 않 다 . ^ * * 따 라 서 본 연 구 의 시 험 관 내 실 험 에 서 kojic acid보 다 호 프 추 출 물 이 델 라 닌 생 성 억 제 에 서 15배 나 높 은 효 과 를 나 타 낸 것 은 호 프 추 출 물 어 델 라 닌 생 성 초 기 단 계 를 조 절 하 는 tyrosinase의 활 성 억 제 효 과 뿐 만 아 니 라 그 이 후 단 계 인 dopchrome에 서 5,6-dihydroxy-indole-2- carboxylic add(D H IC A )으 로 가 는 step에 관 여 하 는 TRP-2(tyrosinase related protein-2)의 활 성 억 제 재 에 효 과 가 있 는 것 으 로 추 측 할 수 있 다 .
델 라 닌 생 성 억 제 는 크 게 두 가 지 로 세 포 득 성 에 의 한 세 포 사 멸 과 델 라 닌 생 성 단 계 에 서 효 소 활 성 억 제 로 나 눌 수 있 는 데 , B 16 cell에 서 솔 엎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 피 추 출 물 , kojic add에 의 한 M T T 결 과 세 포 득 성 이 없 는 것 으 로 보 아 델 라 닌 생 성 억 제 는 세 포 득 성 에 의 한 세 포 사 멸 에 의 해 서 보 다 는 델 라 닌 생 성 단 계 중 추 출 물 에 의 한 tyrosinase의 활 성 억 제 , dopa 자 동 산 화 억 제 와 같 은 효 소 활 성 억 제 에 의 한 것 으 로 생 각 할 수 있 으 며 , 아 직 밝 혀 내 지 못 한 dopa 이 후 여 러 단 계 에 서 델 라 닌 생 성 억 제 작 용 이 일 어 나 는 것 으 로 짐 작 할 수 있 다 . 또 한 탄 닌 성 분 을 다 량 함 유 한 추 출 물 둘 이 superoxide an io n radical를 sca- venging하 여 tyrosinase 활 성 을 억 제 하 여 결 국 델 라 닌 생 성 억 제 효 과 를 나 타 내 는 것 으 로 추 측 할 수 있 다 . 이
Vol. 43. No. 4, 1999
500 양민진 • 김명길 • 임세진 • 인형수 ■ 인•령미
러 한 7]능 성 을 증 명 하 기 위 하 여 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 괴 추 출 물 에 의 한 자 유 라 디 칼 소 거 작 용 에 대 한 중 점 적 인 연 구 가 앞 으 로 더 진 행 되 어 야 할 것 이 다 .
결 론 적 으 로 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 괴 추 출 물 , kojic acid에 의 한 미 백 효 과 는 UV 흡 수 실 험 을 한 결 과 kojic acid를 제 외 한 실 험 물 질 이 UV률 흡 수 하 지 않 은 것 으 로 보 아 각 추 출 물 에 의 한 UV 흡 수 에 의 한 것 이 라 기 보 다 는 델 라 난 생 성 에 관 여 하 는 효 소 의 활 성 을 억 제 함 으 로 써 나 타 나 는 것 이 라 생 각 할 수 있 다 .
우 리 는 시 험 관 내 실 험 과 B 16 mouse melanoma
세 포 실 험 을 통 하 여 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 , 율 피 주 출 물 이 tyrosinase 활 성 억 제 와 도 파 지 동 산 화 억 제 ,
멜 라 닌 의 생 성 억 제 에 머 처 는 효 과 룰 확 인 하 였 는 데 이 러 한 걸 과 는 전 보 의 율 피 추 출 물 뿐 만 아 니 라 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 이 저 가 의 새 로 운 미 백 화 장 품 원 료 로 서 의 개 발 가 능 성 이 높 옴 을 보 여 준 다 고 할 수 있 다 .
결 론
본 연 구 에 서 율 괴 (Cis-gel), 솔 잎 (PN), 호 프 (HOP) 의 수 성 아 세 론 추 출 물 을 이 용 하 여 시 험 관 내 실 험 과 B 16 mouse melanoma 세 포 실 험 에 서 kojic add틀 비 교 물 질 로 사 용 하 여 tyrosinase 활 성 억 제 , dopa 자 동 산 화 억 제 , 델 라 닌 생 성 억 제 효 과 률 측 정 한 걸 과 는 다 음 과 같 다 .
1. 시 험 관 내 실 험 과 B 16 세 포 실 험 에 서 율 피 추 출 물 , 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 은 농 도 가 증 가 함 에 따 라
tyrosinase 활 성 억 제 율 이 유 의 하 게 증 가 하 였 으 며 , 각 각 의 ICgo은 62 iig/ml, 82 ^g/m/, 174 \JcgJml이 었 다 .
2. 시 험 관 내 실 험 에 서 율 피 추 출 물 , 솔 잎 추 출 물 , 호 프 주 출 물 에 의 한 dopa auto-oxidation 억 제 율 은 농 도 가 증 가 함 에 따 라 유 의 하 게 증 가 하 였 으 며 , 각 각 의 ICso
은 124ng/m/, 146|ig/mi, 126 |xg/m/ 이 었 다 .
3. 시 험 관 내 실 험 과 B 16 세 포 실 험 에 서 율 피 추 출 물 , 솔 잎 추 출 물 , 호 프 추 출 물 에 의 한 델 라 닌 생 성 억 제 율 은 농 도 가 증 가 함 에 따 라 유 의 하 게 중 가 하 였 으 며 ,
특 히 시 험 관 내 실 험 에 서 호 프 추 출 1 0|ig/m/ 농 도 에 서 단 일 물 질 인 kojic aicd보 다 델 라 닌 생 성 억 제 율 이 15배 나 높 게 나 타 났 다 .
4. 각 각 의 추 출 물 에 대 한 B 16 세 포 의 생 존 률 은 정 상 군 과 유 사 하 게 나 타 나 는 것 으 로 보 아 세 포 득 성 이 없 는 것 으 로 고 려 된 다 .
감 사 의 글
본 연 구 는 농 림 수 산 부 특 정 과 제 연 구 비 지 원 에 의 하 여 이 루 어 졌 으 며 연 구 비 지 원 에 감 사 드 럽 니 다 .
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