Isolation Rate by Culture Methods of Dialysate from CAPD Patients

임상병리검사과학회지 : 제 27권 제 1 호 1995.

지속성 복막투석환자 투석액의 배양법에 따른 세균분리 양성률

세브란스병원 임상병리과

권용재·손민아·이경원·정윤섭·권오헌

Isolation Rate by Culture Methods of Dialysate from CAPD Patients

Kwon, Yong Jae., Son, Min Ah., Lee, Kyungwon., Chong, Yunsop., Kwon, Oh Hun Dept.ol αiηical Pathology, Severaηce Hospital, SeouJ, Korea

Culture of dialysate from peritonitis patients with continuous ambulatory peritoneal dialysis (CAPD) do not always give positive results, because the number of organisms is usually too low and the presence of antimicrobial agents in dialysate. In this study, sediment obtained from 50 ml fluid were cultured onto lysed blood agar(LBA) and into 10 ml thioglycollate broth, and 10 ml uncentrifuged fluid were cultured into 30 ml tryptic soy broth and thioglycollate broth. The both results were compared to those of previous studies. The positive rate with 50 ml centrifuged culture was 43.9 %, compared to 39.0 % and 39.2 % with previ- ous studies, and indicated the volume did not influence the positive rate. The proportions of the isolated bacterial species were similar to those of other studies. In conclusion, 50 ml centri- fuged culture is effective as large volume culture in the diagnosis of peritonitis of CAPD pa- tIents.

Key words : culture of dialysate, chronic ambulatory peritoneal dialysis( CAPD )

I. 서 론 그러므로 CAPD 환자 복막염을 적절히 치료하기 위 해서는 세균배양과 균종 동정이 매유 중요하다고 하겠 지속성 복막투석 (continuous ambulatory peritoneal 다. 그러나 투석액 중에는 항균물질이 있고ll)， 투석액

dialysis, CAPD) 은 혈액투석에 비하여 분자량이 큰 독 의 양이 많아 세균 수가 희석되어 있으며 l2)， 또한 세균

성물질을 효과적으로 제거할 수 있기 때문에 말기 신 이 세포내에 있는 경우가 있어서， 세균이나 진균성 복 부전 환자의 치료를 위해 널리 사용되어 왔다 1-3) 그러 막염 환자의 모든 검체에서 양성결과를 얻기는 쉽지 나 이 치료를 받는 환자 중 일부는 복막염을 유발하게 않다 8) 그래서 배양 양성을 높이기 위한 연구가 많았 되며 이로 인해 사망하기도 한다 4-8) 복막염은 화학적 다.

자극에 의하여 무균적으로 생길 수 있지만， 세균이나 1985년 Dowsonl2) 등은 투석액 전량 배양으로 양성 진균에 의한 감염이 더 혼하다 8-10) 률이 높아짐을 보고하였다. 그 후 Graevenitzl3) 등은

- 72-

투석액의 양과 배양 양성률이 항상 일치하지 않으며， 188 검체 (43.9 %)에서 202 주의 세균 또는 진균이 분

투석액 1000 ml와 50ml의 투석액 배양에서 같은 결과 리되었다 (Table 1). 그람양성 세균이 128주 (63.3 %)로

를 얻었음을 보고하였다. 또한 Saubolle¹⁴⁾ 등도 50ml

Table 1. Microorganism isolated from dialysate of CAPD 와 5ml의 배양에서 비슷한 결과를 얻었다고 하였다 patients

세브란스병원에서는 1987-1988년에는 투석액 전량 (약 2 L) 을 배양하여 39 %의 양성률을 보고하였고l5)，

1988년 6월 - 1991 년 10월 에 는 900ml를， 1992년 2월 -1992년 10월에는 500ml를 배양하여 비슷한 결과를 보임을 보고하였다16) 적은 양의 투석액 배양은 배지의 소모를 줄일 수 있고， 검체의 취급이 용이해져서 오염 률도 줄일 수 있다. 이에 이 연구에서는 소량의 투석 액을 배양하여도 양성률이 낮아지지 않는지를 검토하 고자 하였다.

II. 재료 및 방법

1993년 11월 -1994년 12월에 세브란스병원에서 CAPD 치료를 받던 중 복막염이 의심되는 환자로부터 채취하 여 의뢰된 투석액 428 검체를 대상으로 하였다. 투석 액은 2L 정도의 주머니에 담긴 채로 의뢰되었고， 가 능한한 접수 즉시 접종하여 배양하였으나， 접종이 지 연될 때는 냉장고에 보관하였다. 투석액 주머니에서 무균적 으로 60ml를 취 하여 그 중 10ml를 30ml의 tryptic soy broth(TSB, Difco) 와 thioglycollate broth (Thio, Difco) 에 각각 5ml씩 넣어 1 주일 동안 배양하 면서 매일 육안 관찰하고 세균증식이 의심되면 그람염 색과 계대배양을 하였다. 나머지 50ml는 플라스틱 원 침 관에 넣 어 서 2800 rpm으로 10 분간 원침 하여 약 1ml 의 침사를 lysed blood agar(LBA) 에 1 방울 접종하고 나머지는 10ml의 액체배지 (Brewer thioglycollate, Dif co) 에 접종하였다. Lysed blood agar는 tryptose blood agar

(Difco) 에 5% 혈액 과 0.05 % saponin(Sigma Chemi- cal Co.) 을 넣어 만들었다. 접종된 LBA는 5 % CO2 항 온기에 48시간， 액체배지는 1 주일간 배양하였다. 증식 된 세균은 전통적 방법으로 동정하였고 필요시에는 상 품화된 kit를 이용하였다.

Organism Gram - positive bacteria

Staphylococcus, coagulase negative Staphylococcus aureus

Alpha - hemolytic Streptococcus Gamma - hemolytic 않reptococcus

Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Enterococcus sp.

Bacillus sp.

Diphtheroids

Gram - negative bacteria Escherichia coli Serratia marcescens Klebsiella pneumoniae Klebsiella ^ox까oca Citrobacter freundii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae

-3

β

3 3 3 4 4 A

Ad

…

J 3 3 3 3

AA

A A 4

Qι

A 3 3 3 4 A

Qι

A A

Qι

AA

따

% -%

인

6 6 3 2 0 0 3 0

잃

3 1 0 0 0 0 0 8 3 1

o o o o o

2 0 0 0 4 1 -

1i

ιu -nι

1i 1i

$ L

-8

% 4 4 8 5

7 2

% 8 4 2 2

‘”‘

---4

Pseudomonas aeruginosa 17

Acinetobacter baumannii 8

Acinetobacter sp. 3

Acinetobacter lwoffii 2

Flavimonas oryzihabitans 2

Alcaligenes xylosoxid따lS subsp. denitr파'cans 2 Xanthomonas maltophilia

Ochrobaäer anthropi

Nonfermenting Gram - negative bacilli 6 Aeromonas caviae

Other Gram - negative bacilli

Neisseria sicca 2

Fungi 9

Candida albicans

m.

Yeast 시험기간 중 총 428 검체가 배양되었는데， 그 중 Total

3 1.4 5 2.4 1 0.4 202 43.9

까 ω

Table 2. Effect of centrifugation of dialysate on the growth of bacteria

Growth from not Growth from centrifuged 50 ml specimenb centrifuged lOml

speClmen" Positive Negative Total 169(87.5 %) 7(3.6 %)

24( 12.4 %) 24(12.4 %) 0

Negative

193(100 %) 162(83.9 %)

Positive

7(3.6 %)

"30 ml- TSB and 30 ml- THIO.

bLBA and 10 ml- THIO.

186(96.3 %) Total

가장 많이 분리되었고 그람음성 세균은 65주 (32.1 %), 진균은 9주 (4.4 %)가 분리되었다. 균종별로는 coagu-

lase 음성 포도구균이 76주 (37.6 %)로 가장 많았고， 그

다음으로는 P. aeruginosa가 17주， S. aureus와 alpha 용혈 Streptococcus가 각 14주， gamma 용혈 Streptococ- cus, E. coli 및 A. baumannii가 각 8주이 었 다.

배양 방법에 따른 분리 균주수와 양성률의 분석에 있 어 서 는 오 염 으 로 생 각 되 는 bacillus 7 주 와 diph

theroids 2주는 제외하였다. 방법에 따른 분리 균주 수

는 혈액배양용 액체배지를 사용한 경우는 169주 (87.5

%)가 분리되었으나， 50ml를 원침한 배양방법에서는 186(96.3 %)가 분리되었다 (Table 2). 배지에 따른 분

T able 3. Comparison of result by culture methods

떼

뼈

멍 이

0

α N

”

/Ii‘、

1o ml not centrifuged

3o ml TSB 30 ml THIO

2 4-7 Total 1-2 3 4-7 5o ml centrifuged

1Oml THIO

3 4-7 Total 1-2 Total

60 14 28 102 85.7 3

O O 3 2.5 9 1 3 13 10.9 48 13 25 86 69.7 60 14 27 101 84.8 6

O O 6 5.0 9

2 12 10.0 45 13 25 83 69.7 71 13 28 112 94.1 4

0

5 4.2 11

O O 11

9.2 56 13 27 96 80.6 46 13 17 76 63.8

피

7 8 없 띠얘 %ω

nU nU nU nU nU nU

1 O O 3 4 6.1 14

7 8 21 50 76.9 15

7 8 23 53 81.5 1

O O 2 3 4.6 O O O 3 3 4.6 14

7 8 18 47 72.3 17

8 8 30 63 96.9 O

O O

1.5 0 2

o

l 3 4.6 16

8 29

강9

90.7 15

7 7 22 51 78.4 Gram - positive cocci

Staphylococcus, coag.

negative (76) S. aureus (14) Others (29) Subtotal No.(119)

% (100) Gram - negative bacilli P. aeruginosa ( 17) A. baumannii (8)

E. coli (8) Others (32) Subtotal No. (65)

% (100)

2 2 0 4 44.4 160

82.9 O

O O O O 3 1.0 1

1 0 2 22.2 138

71.5 3 5

9 100 163 84.4

1J

-1」

o

--n

-m

5 3 0 4 44.4 19

9.8 2 2 0 4 44.4 134

69.4 3 5 1 9 100 184 95.3 O

O O O O 6 3.1 3

5 0 8 88.8 163

84.4 3 5

9 100 136 70.4 Fungi

C. albicans (3 ) Candida spp. (5 )

Yeast (1)

Subtotal No. (9)

%(100) (193)

%(100) Total No.

-74 -

"Incubation date.

리 균주 수를 보면， LBA에 배양된 균주가 136주， 혈 주 (70.4 %)가 분리되었으나， thioglycollate 배지에서는 액배양용 액체배지에서는 각각 163주와 160주였으나， 184주 (95.3 %)가 분리되었다. 진균은 두 배지 모두에

10 ml thioglycollate 배지에 배양된 균주는 184주로 가 서 같이 분리되었으나， LBA에서 배양된 그람양성 구

장 많았다 (Table 3). 2일 배양 후 분리된 균주 수도 균은 63.8 %이었고 그람음성 간균은 78.4 %인 반면，

10 ml thioglycollate 배지에 배양한 경우가 가장 많았 thioglycollate 배지에서는 각각 94.1 %와 96.9 %로 현

다. 저히 높았다 (Table 4). 또한 LBA에서 배양된 세균의

50ml 투석액올 원침 후 침사를 배양한 LBA와 thio- 증식을 보면， 대부분의 균주가 소수의 증식만을 보였

glycollate 배지에서의 배양률올 보면 LBA 에서는 136 다.

Table 4. Amount of growth on LBA and in 10 ml thioglycollate Total

Organism No.

(% ) Many

Gram - positive cocci 119 9

(100) 7.5

Gram - negative bacilli 65 19

(100) 29.2

Fungi 9 0

(100) 0

Total 193 28

(100) 14.5

N. 고 찰

말기 신부전 환자가 복막 투석을 시행하는 동안에 세균과 진균에 의한 복막염이 한 환자당 1 년에 1.07 --

1.47예가 발생한다고 보고되어 있다 13) 투석환자의 복 막염을 일으키는 균종은 매우 다양하다. 즉， 피부 상재 균인 S. epidermidis 등의 coagulase 음성 Staphylococcus

를 비롯하여， 장내세균， 환자의 주변 환경에 있는 포도 당 비 발효세 균 등이 다. Graevenitzl3) 등은 coagulase 음성 Staphylococcus가 40--60 %로 가장 많고， 그 다음 으로는 S. aureus 10-- 20 %, Enterobacteriaceae 5 -- 20

%, 포도당 비발효 그람음성 간균 3--15 %, 그람양성 간균 2--4 % 순이며， 진균 ， Mycobacterium 및 혐기성 세균에 의한 감염 및 중복감염은 5% 미만이라고 보 고하였다. 저자들의 연구에서도 coagulase 음성 Staph~

lococcus가 37.6 %, P aeruginosa 8.4 %, S. aureus 6.9

LBA 10ml

Some Few Total Thioglycollate

7 60 76 112

5.8 50.4 63.8 94.1

2 30 51. 63

3.0 46.1 78.4 96.9

5 4 9 9

55.5 44.4 100 100

14 94 136 184

7.2 48.7 70.4 95.3

%로 많이 분리되어 이와 비슷한 결과를 보였다.

투석환자의 복막염을 진단하기 위해 투석액 침사의 그람염색이나 acridine orange 염색이 이용될 수 있으 나 그 양성률은 10--50 % 정도이다， 또한 투석액의 혼 탁도나 백혈구수가 검사되지만 이들 역시 특이도나 감 도가 낮으므로 배양이 필수적이라고 하겠다 13) 그러나 투석액 중의 미생물 수가 적고， 항균물질의 존재 등으 로 인하여 복막염 환자의 투석액 배양에서 양성률을 높이기는 쉽지 않다 17， ¹⁸⁾ 1985년 이래로 이에 대한 많 은 연구가 있어 왔다. 저자들의 병원에서도 1987년부 터 여러 가지 배양 방법을 사용하여 그 결과를 보고한 바 있다. 그 결 과 투석 액 양을 2,000 ml에 서 500ml까 지 줄여서 배양하여도 양성률에는 별다른 차이가 없어 다른 연구자들의 보고와 유사하였다 15， 16， 19)

최근 여러 연구자들은 투석액 배양을 위해 혈액배양 용 액체배지를 사용하여 그 양성률이 매우 높음을 보

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고하였고 20， 21) ， 50 ml 투석액을 원침하여 침사를 접종했 을 때에도 좋은 성적을 얻었다고 하였다 14， 22) 적은 양 의 투석액 배양은 배지의 소모를 줄일 수 있고， 검체 의 취급이 용이해져서 오염률도 줄일 수 있다. 따라서 저자들은 이번 연구에서 소량의 투석액을 배양하여도 양성률이 낮아지지 않는지를 검토하고자 50ml 투석액 을 원침하여 LBA와 10 ml thioglycollate 배지에 접종 하였고， 또한 10ml 투석액은 혈액배양용 배지에 배양

하여 43.9 %의 양성률을 얻었다. 저자들의 지난번 연

구결과를 보면， 투석액 전량 배양시의 39 %, 900 ml

배양시의 39.2 %, 500 ml 배양시에 58.7 %였다 15， 16) 따 라서 이 양성률의 차이는 배양방법으로 인한 차이보다 는 시기에 따른 차이였던 것으로 사료된다. 또

Saubolle^l4) 등이 50ml 투석액을 원침하여 배양한 것과 혈액배양용 배지에 배양한 것이 총 양성 검체 중 88

%와 89 %의 감도를 보였는데 이번 연구에서 각각 96.

3% 와 87.5 %로 원침 후에 배양한 것이 더 나은 양성 률을 보였다.

V. 결 론

소량의 투석액 배양법은 500ml 이상의 배양으로 얻 은 양성률과 의의있는 차이가 있지 않으며， 이 방법은 배지의 양을 절약할 수 있고， 술식이 간편하여 오염률 도 줄일 수 있을 것이라는 결론을 얻었다.

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