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산소농도와 혈청첨가가 돼지 체외수정란의
체외발육에 미치는 효과
박기은·박춘근·김정익·정희태·박동헌·양부근 f
강원대학교 동물자원과학대학
Effect of 02 concentration and serum on the development of porcine IVM/IVF embryos
Park , K. E. , C. K. Park , C. 1. Kim, H. T. Cheong , D. H. Park , B. K. Yang t College of Animal Resource Science ,
Kangwon Na tÍ onal University
ABSTRACT
This study was carried out to examine the effects of oxygen concentration , serum , cumulus cell co-culture on the development of porcine in vitro maturation (I VM) and in vitro fertilization (I VF) oocytes. Cumulus cell free or intact embryos derived from porcine IVM/IVF oocytes were cultured in NCSU23 medium supplemented to various concentration of serum at 44 , 72 and 96 hours in culture times with 5% 02 or 20% 02.
The cleavage rates of porcine IVM/IVF embryos in 5% and 20% of 02 were 38.5% and 5 1. 2% , respectively. The cleavage rate in 20% of 02 group was higer than 5% of 02 group.
The developmental rates beyond morulae stage in 5% of 02 was 67.5% and those in 20% of 02 was 50.0% respectively. The developmental rate in 5% of 02 group was significantly higher than 20% of 02 group(P<0.05).
The percentages of embryos developed beyond morulae stage in N CSU23 medium supplemented with serum(O% , 10% and 20%) at 44hrs(72hrs) for in vitro culture in groups with cumulus cells were 58.6% , 6 1. 4% and 64.0%(48.2% , 45.3% and 49 .4%) and those in groups without cumulus cells were 60.2% , 63.0% and 65.0% (55.3% , 53 .4% and 47.8%).
There was no significantly difference among all experimented groups(P)0.05).
The proportion of embryos developing morulae plus blastocysts in N CSU23 medium supplemented with different concentration of serum at 96hrs for in vitro culture in 0 , 10 and 20 % serum were 6 1. 6 % (61/99) , 69 .4 % (68/98) and 62.6 % (62/99). They did not show
t Corresponding Author College of Animal Resource Science , Kangwon National University , Chunchon
,200-70 1, Korea
,E-mail bkyang@kangwon.ac.kr
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significantly difference in all experimented groups.
These results indicate that 02 concentration affects the developmental rates of porcine IVM/IVF embryos , but serum addition did not affects.
Key words ; 02 concentration , Serum , Porcine , IVM/IVF embryo , Cleavage rates
1 .
서 론수정란의 대량 확보를 위해서 최근에는 도 축되는 가축의 난소에서 회수한 미성숙란을 체외에서 성숙， 수정시킨 후 체외발육시켜 생산된 체외수정란을 이용하여 각분야의 연 구가 활발히 진행되고 있다. 돼지의 체외수 정에 관한 연구는 Edwards (1965) 가 난포란의 체외성숙에 관하여 처음으로 보고한 이래，
Iritani등(1 978) 이 돼지의 체외수정을 처음으 로 성공하였고， Mattioli등(1 989) 은 체외수정 란을 이식하여 산자를 생산하기에 이르렀다.
대부분 포유동물의 체외수정란의 체외배양 에 있어 일정한 발달단계 까지 발달 후 발육 지연이나 정지가 되는 체외 발육억제현상 (in
vitro cell block)
이 나타나기 때문에 정 상적 인 수정란의 확보에 많은 어려움이 있고， 산자 생 산이 극히 제한되고 있는 실정이다. 돼지에서는 체외발육 억제현상이 때1 포기에서 나타난다 (Jarrell등， 1991 Schoenbeck등，1992).
이 러 한 발육억제 원인으로는 초기배 수정란의genome
활성화 유
·
무와 체외배양액 내의 높은 산소 농도에 의해 발생되는free
radical등이 한가 지 원인으로 지적되고 있으며， 또한 체외수정 란의 체외배양시 생성되는 수정란에 대하여 유해한 역할을 하는 독성물질을 제거하지 못 하여 체외발육율이 저조한 것으로 보고되고 있다 (Bize동， 1991 Pabon동，1989).
이와 같 은 체외배양 체계를 개선하여 체외수정란의 체외발육을 증진시키기 위하여는 체외배양시산소농도의 조절， 배양액에 첨가되는 단백질원 의 검 토~
free
radical을 제 거 하기 위 한 항산화 제의 첨가， 수정란의 발육을 촉진시키기위한 성장언자와macromolecule
첨가 빛 체셰포 공 동 배양체계가 좋은 결과를 얻고 있다 (Allen 과Wright , 1984 ;
Coskun등， 1991 Grupen등，1995 ;
Li등，1993 ;
암lOmpson동，1990).
본 연구는 돼지 체외 수정란의 체외배양 체계에 대한 기초 자료을 확렵하기 위하여 체외배양시 산소의 농도에 따른 체외성숙율 과 체외발육율을 검토하고， 단백질 공급원으 로 적정량의 혈청을 체외 배양시간에 따른 첨가 배양이 돼지 체외수정란의 체외 발육 율에 미치는 영향을 검토하고자 실시하였다.
II.
채료 및 방법1.
난포란의 채취도축장에서 도축된 성숙모돈의 난소를 축 출하여 30~360C의 멸균생리식염수에
10 0I U/
rnl 의
penicillin G(Sigma ,
USA) 와 100fJg/ 매 의streptomycin sulfate(Sigma.
USA) 가 함유된 난소운반액에 넣어 1~2시간내에 실험실로 운반한 후， 직경 이 3~5nun의 난포로부터18
guage의 주사바늘이 부착된 주사기로 흡입채 취하여 미성숙 난자를 채취하였다. 채취된 난포란은 설체현미경하에서 난자주위의 난구 셰포가 균일하게 둘러쌓여 있는 것만을 선별 하여
, Dubelcco ’ s Phosphate Buffered Saline(D-
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PBS ; Gibco , USA)
에0 .1 % polyvinyl alcohol
이 첨가된 난자 회수액 (PBS-PVA) 과 난자성숙용 배양액 (NCSU23) 으로 각각 2회 세척후 성숙 배양에 이용하였다.2.
난포란의 체외성숙난포란의 성숙배양을 위하여
NCSU23(Nor- thcarolina state university 23)
배 양액 에10
IUI 떼 eCG와
10
IUI 매 hCG의 호르몬이 함 유된 1차 성숙배양액으로 10011l 의 소적을 만 들어 멸균된mineral
oü(Sigma) 로 피 복하여 배양 2~3시간 전에5%
C02와 고습도의 가 스조건 및 38.5.C 의 온도조건에서 평형시킨 후 각 소적 배양액에 15~207H 의 난포란을 넣어 22시간 동안 1차 성숙배양을 설시하였 다. 1차 성숙배양후 호르몬이 챔가되지 않은NCSU23
배양액내에서 22시간 동안 2차 체외성숙을 실시하였다.
체외성숙 배양액에 첨가된 난포액은 직경이 3~5mm 인 액상난포에서 채취한 난포액을 15 매 원심분리관 (Corning， USA) 에 넣어
1500Xg , fc
조건에서 30분간 원심분리
(Beckrna n. England)
한 후， 0.2띠n
Syringe fil ter
(녹십자， 한국)로 여과 하여 -20.C 에서 사용 전까지 냉동보관 하였다.3.
난포란의 체외수정동결정 액
(1 straw , 0.5 ml)
을3Tc
의 항옴수 조에서 30초 ~1분간 융해한 후 D-PBS에1 mgl
때 의 소혈 청 알부민(bovine serume albumin ,
BSA;Sigma)
과10
마 Iml 의Antibiotic
antimiotic용 액 (ABAM;
Giboco) 이 함유된 배양액과 혼합 하여 원심분리 (900X g ,
5분)로 2회 세척 후，2mM의
Caffeine(Sigma , U.S.A)
이 첨 가된modified Tris Buffer Medium
(mTBM) 으로 희석시켜 정자농도가2.0 X 106
정자I ml 가 되 도록 정자부유액을 준비하였다. 체외수정은 mTBM에2mgl
ml 의 BSA가 함유된 배양액을 이용하였으며，50
III 의 소적을 만들어 2~3시 간 평형시킨 후 체외수정에 이용하였다.체외에서 44~46시간동안 성숙배양된 성숙 난포란을 선별하여 0.1%의
hyaluronidase
(Sigma ,
U.S.A) 가 함유된 성숙배양액내에서반복
pipetting
방법으로 난구셰포를 제거시킨 후 체외수정 배양액으로 2회 세척하여
15
개씩을 체외배양소적으로 옮긴다음 상기방법 으로 준비한 정자부유액 5011l 를 수정배양액 내에 첨가하여 체외수정을 실시하였다. 체외 수정 배양액내의 caffeine과 정자의 최종농도 는 1mM과
1. 0 X 106
정자Iml 였다. 수정후 6~8시간에4mgl
m1의 BSA가 함유된NCSU23
배양액으로 2~3 회 셰척 후 40~44시간 동안 체외배양을 실시하여 생산된 2~8 셰포기의 체외수정란을 실험에 사용하였다.
4.
체외수정란의 체외배양체외수정 후 40~44시간동안 체외배양을 실시하여 생산된 정상적으로 분할된 2~8셰 포기 체외수정란만을 선별하여
NCSU23
체 외배양액에 체외배양시간에 따른 일정량의 혈청첨가배양과 서로 다른 산소 농도 (5% 와20% 02)
가 체외수정란의 체외발육에 미치는 영향을 조사하였다.
1)
산소 농도 조건에 따른 체외성숙，체외수정 및 체외발육율 조사
NCSU23
배양액에BSA ( 4mgl ml
)가 첨가된 체외배양액에셔 돼지의 미성숙 난포란의 체[Provider:earticle] Download by IP 118.70.52.165 at Monday, December 20, 2021 8:29 PM
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외성숙， 체외수정 및 체외배양을
5%
C02와 38.50C 의 온도조건에 다른 산소농도 (5%와20%
02) 가 체외성숙， 수정 빚 체외 발육에 미치는 영향을 조사하였으며， 일부의 배반포 기 수정란은 형광염색법으로 셰포수를 조사 하였다.2)
난구세포와 혈청의 첨가배양체외수정 후 체외배양 시간에 따라 44시 간， 72시간 빛 96시간에
0% , 10%
빛20%
의 우태아 혈청을 첨가하여 난구셰포가 제 거되지 않은구와 난구세포가 제거된구로 구 분하여
5% C02 , 5% 02
및 38.50C 의 옴도 조건에서 일정기간 체외 배양을 실시한 후 체외발육 성적을 조사하였고， 일부의 배반 포기 수정란을 형광염색법으로 셰포수를 조 사하였다.5.
체외 수정란의 세포수 조사체외수정란의 셰포수 검사는 Long등(1998) 의 염색방법을 수정 보완하여 조사하였다.
간단하게 요약하면 체외수정란을 10% 의
Triton X
-100과 2% 의 paraformaldehyde가첨가된
D-PBS
배양액 내에서 3Tc 의 배양조건으로 한시간 동안 고정한후 D-PBS로 2~3 회 세척을 실시하였다.
D-PBS에 20%의
glycero l,
2많Iml의hoechest 33342(Sigma)
빛 100뼈/매의 DABCO 가 첨 가된 염색액을slide glass
위에 20tll 의 소적 을 만든후 수정란 2~3개를 넣어 4~5분간 염색을 실시한후cover
glass로 덮고 매니큐 어로 봉입하여 형광현미경(Zeiss , Germany;
x200)
하에서 각각의 배반포기 수정란의 셰포수를 조사하였다.
6.
통계처리본 실험에서 얻어진 결과는 최소 유의차 검 정
Oeast
si맴표Ïcantdifferent test LSD test)
을 실시하여 처리간 유의성을 검정하였다.
1lI.
결 과1.
산소농도가 돼지 체외수정란의 체외발육에 미치는 영향돼지 미성숙 난포란을 체외에서 44시간 동 안 성숙， 수정시킨 후
NCSU23
배양액 내에 서 6~7 일 동안5%
C02와 서로 다른 02농 도 (5%02 , 20%
02) 에서 체외발육 시킨 후 생산된 체외 수정란의 체외발육성적과 배반 포기 셰포수를 조사하였다 (Table1, Table2).
Table
1에 나타난 바와 같이5%
02와20% 02
배양조건에서 체외수정 후 분할된수정란의 분할율은 각각
38.5 %
(154/40이와5 1. 2 %
(206/402) 로서20% 02
조건에서 높은 분할율을 나타냈지만 통계적 유의성은 인정 되지 않았다 (P>0.05).
한편5%
02와20% 02
배양조건에서 상실배 이상 발육된 체외발육 성적은 각각 67.5% 와 50.0%로서 배양조건이
5%
02인 처리구가20%
02처리구 보다 통계 적으로 유의하게 높은 체외발육율을 나타냈 으며 (P<0.05),
특히 배반포기의 발육성적은 18.2% 와 6.8% 로서5% 02
처리구가20% 02
처리구 보다 통계적으로 유의하게 높게 나타 나 (P<0.05) ， 체외성숙과 체외발육율은 산소조 건에 따라 상이한 결과를 나타냈다.
한편 2~16세포기 체외수정란을 6~7 일 동 안 체외배양하여 얻은 배반포기 수정란의 셰 포수는 각각 39.0 :t 8.60과
37.3
:t 3.93으로 두처 리구간에 차이가 인정되지 않았다 (Table2)
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Table L Effect of different concentration of 02 on the developmental rates of porcine IVM/IVF embryos
No.of
No. of embryos developed to( %); NO.of
02 NO.of No.of
cleaved morulae plus
examined ( % ) Replicates
oocytes embryos
Premorulae Morulae Blastocysts blastocysts
( %) (%)
190 5 1( 26.8) 19(37.3) 26(5 1. 0) 60 1. 8) 32(62. 7)
5 2 95 43( 45.3) 14(32.6) 21 (48.8) 808.6) 29(67 .4)
3 115 60(52.2) 17(28.3) 29( 48.3) 14(23.3) 43(7 1. 7) ---‘---‘---‘- - --‘-.---‘- --‘-
193 78(40 .4) 41 (52.6) 33( 42.3) 4(5 .1) 37(47 .4)
20 2 92 53(57.6) 3 1( 58.5) 20(37. 7) 2(3.8) 22(4 1. 5)
3 117 75(64 .1) 3 1( 4 1. 3) 36( 48.0) 800 .7) 44(58.7) Overallmeans
5 400 154(38.5) 50(32.5)a 76( 49 .4) 2808.2)b 104( 67.5)
b20 402 206(5 1. 2) 103(50.0) b 89( 43.2) 14(6.8)a 103(50.0)a
a,b
Values with different superscripts within columns significantly different
,P(0.05.
Table 2_ Number of total cell of porcine IVM/IVF embryos in NCSU23 medium with 5% C02 and different concentration of 02
conc. of 02
(%) N o. of blastocysts Total cell no. of blastocysts 5
20
2.
혈청첨가와 난구세포 유무에 따른 돼지 수정란의 체외발육돼지 난포란을 체외에서 성숙， 수정을 시 킨 후 44시간에 생산된 2~8세포기 수정란을 체외배양액인
NCSU23
배양액에 각각 다른 농도의 혈청 (FBS) 을 체외배양 44시간， 72시 간 빛 96시간에 첨가하여 난구셰포를 제거한 처리구와 제거하지 않은 처리구로 구분하여6 6
39.0::!::8.60 37.3::!::3.93
6~7 일간 체외배양한 후 염은 체외발육성적 을 조사하였다 (Table
3 , 4 , 5).
체외배양 44시간에 혈청을
0 , 10
빛20%
챔가와 난구세포의 유무에 따른 상실배이상 체외발육성적은 난구셰포를 제거하지 않은 구에서
58.6% , 61.4%
빛 64.0% 였으며， 난구 세포를 제거한 구에서60.2% , 63.0%
및 65.0%로서 난구셰포를 제거한 20% 의 혈청 챔가구가 여타구보다 다소 높았으나 통계적[Provider:earticle] Download by IP 118.70.52.165 at Monday, December 20, 2021 8:29 PM
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Table 3. Developnental rates of porcine IVM/IVF embryos in NCSU23 medium supplemented with different concentration of serum at 44hrs for in vitro culture
No.of Cumulus cell
Serum NO.of No. of embryos developed to( %):
morulae plus
Presence( + ) cleaved
Absence( - ) (%)
embryos blastocysts
Premorulae Morulae Blastocysts (%)
0 99 4 1( 40 .4) 52(50 .5) 6(6 .1) 58(58.6)
+ 10 101 39(38.6) 55(54 .5) 7(6.9) 62(6 1. 4)
20 100 36(36.0) 57(57.0) 7(7.0) 64(64.0)
- - - -
0 98 39(39.8) 54(55 .1) 5(5 .1) 59(60.2)
10 100 37(37.0) 56(56.0) 7(7.0) 63(63.0)
20 103 36(35.0) 58(56.3) 9(8. 7) 67(65.0)
Overallmeans
+ 300 116(38 .7) 164(54. 7) 20(6. 7) 184(6 1. 3)
301 112(37.2) 168(55.8) 21 (7.0) 189(62.8)
o 197 80(40.6) 106(53.8) 1 1( 5.6) 117(59 .4)
10 20
201 203
유의차는 인정되지 않았다 (P)0.05).
76(37.8) 72(35.5)
한편 난구셰 포의 유무에 따른 상설배 기 이 상 체외발육성적은 두처리구간(난구세포 제 거하지 않은구，
61.3%
난구셰포 제거구 62.8%) 간의 차이가 인정되지 않았다 (P)0.05).혈청을
0 , 10 , 20%
첨가한구 에서 상실배 이상 체외발육된 체외발육 성적은 각각59 .4 (117/197) ,
62.2(125때1)， 64.5%(131/2떠)로 처리구간의 차이 가 인정되지 않았다(P)0.05).
Table
4에 나타난바와 같이NCSU23
배 양액에 혈청을 체외배양 72시간에
0 , 10
빛20%
첨가와 난구셰포의 제거 유무에 따른 상실배이상 체외발육성적은 난구셰포가 제거 되지 않은 구에서48.2% , 45.3%
빛 49.4%였 으며， 난구셰포를 제거한구에서55.3% , 53 .4%
벚 47.8%로서 난구세포를 제거하고 혈청을 첨가한 구가 여타구 보다 다소 높게11 1( 55.2) 115(56.7)
14(7.0) 16 (7 .9)
125(62.2) 13 1( 64.5)
나타났으나， 처리구간에 차이를 나타내지는 않았다 (P)0.05). 그러나 배반포까지 발육된 체외 발육성적은 난구셰포가 제거된
20%
혈 청 첨가구가12.0 %
(11/92) 로서 여타구 보다 유의하게 높은 성적을 나타냈다 (P<0.05).
한편 난구셰포의 제거 유무에 따른 상실배 기 이상 체외발육성적은 두처리구간(난구셰포 제거하지 않은구，
47.7%
난구세포 제거구 52.1%)의 차이가 인정되지 않았다 (P)0.05).
혈청첨가가 체외발육에 미치는 효과에서는 혈청을
0 , 10 , 20%
첨가한구 에서 체외 발육 성적 이 각각5 1.8 , 49 .4, 48.6
%로 처리구간의 차이가 인정되지 않았다 (P)0.05).
돼지 난포란을 체외성숙， 체외수정을 실시 한 후 체외배양 96시간에 체외배양액에 각각 다른 농도의 혈청 (FBS) 을 첨가하여 3~4 일 간 체외배양한 후 얻은 체외 발육성적을 난
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Table 4. Developnental rates of porcine IVM/IVF embryos in NCSU23 medium supplemented with different concentration of serum at 72hrs for in vitro culture
Cumulus cell Presence ( + ) Absence( - )
+
Serum (%)
0 10
No.of cleaved embryos
85 86
N o. of embryos developed to ( %) :
Premorulae Morulae Bl astocysts 44(5 1. 8) 38(44. 7) 3(3.5)a 47(54. 7) 36( 4 1. 9) 3(3.5)a
No.of morulae plus
blastocysts (%) 4 1( 48.2) 39( 45 .3)
20 89 45(50.6) 38(42 .7) 6(6. 7) a 44(49 .4)
---“- -’-‘- --‘---
Overallmeans +
0 85 38( 44 .7) 44(5 1. 8) 3(3.5)a 47(55.3)
10 88 4 1( 46.6) 41 (46.6) 6(6.8)a 47(53 .4
20 92 48(52.2) 33(35.9) 1102.0)0 44(47.8)
260 136(52.3) 112( 43 .1) 12(4.6) 124(47. 7)
265 127(47.9) 118(44.5) 20(7.5) 138(52.U
o 170 8 1( 47.6) 82(48.2) 6(3.5) 88(5 1. 8)
10 20
174 181
88(50.6) 93(5 1. 4)
77( 44.3) 71 (39.2)
9(5.2) 17(9 .4)
86( 49 .4) 88( 48.6) a.b Values with different superscripts within columns are significantly different. P(0.05.
Table 5. Developnental rates of porcine IVM/IVF embryos in NCSU23 medium supplemented with different concentration of serum at 96hrs for in vitro culture
Cumulus cell Preusence( + )
Absence( - )
+
Overallmeans +
No.of Serum
(%) cleaved embryos
No. of embryos developed to( %):
Premorulae Morulae Blastocysts
No.of morulae plus
blastocysts (%)
o 49 22(44.9r 25(5 1. 0)ao 2(4.U a 27(55.U a
10 49 15(30.6)a 30(6 1. 2)0 4(8.8)ao 34(69 .4 )C
20 50 22(44.0)OC 20(40.0)a 806.0)C 28(56.0)ab
o 50 16(32.0) ao 28( 56.0) 0 6(12.0) Oc 34( 68.0) bc
10 49 15(30.6)a 30(6 1. 2)0 4(8.2)ao 34(69 .4 )C
20 49 15(30.6)a 28(57.U o 602.2)OC 34(69 .4 )C
0 10 20
148 59(39.9)0 75(50 .7) 14(9.5) 89(60.U a
148 46(3 1. U a 86(58 .1) 1600.8) 102(68.9) b 99 38(38 .4) 53(53.5)ao 8(8.U a 6 1( 6 1. 6)
98 30(30.6) 60(6 1. 2)0 8(8.2)a 68(69 .4)
99 37(37 .4) 48(48.5)a 1404.U o 62(62.6)
a.b.c Values with different
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구세포를 제거한 처리구와 제거하지 않은 처리 구로 구분하여 조사하였다(Table
5).
Table
5에 나타난바와 같이NCSU23
배 양액 에 혈청을0 , 10
및20%
첨가와 난구셰포의 유 무에 따른 상실배이상 체외발육성적은 난구세 포가 제거되지 않은 구에서55 .1%, 69 .4%
빛 56.0% 였으며， 난구셰포를 제거한 구에서 각각68.0% , 69 .4%
빛 69.4%로서 난구세포가 제거되 지 않은 10%혈청 첨가구가 난구세포를 제거한0 , 10
빛20%
혈청 첨가구와 비슷한 발육성적 을나타냈다.체외배양 96시간에 체외배양액에 혈청 첨가 와 체외발육율에 미치는 효과를 검토한 결과에 서는 난구셰포의 유우에 관계없이 혈청을
0 , 10
벚
20%
첨가한구에서 상실배이상 발육된 체외 발육 성적은 각각6 1. 6%(61/99) , 69 .4 %(68/98)
및 62.6%(62/99) 로셔 처리구간에 차이가 인정 되지 않았다.
N.
고 찰본실험의 결과
5%
Oz와20% Oz
배양조건 에서 체외수정 후 분할된 수정란의 분할율은 각각38.5 %
(154/40이와 51.2%(206/402)로서20% Oz
조건에서 높은 분할율을 나타냈다. 한편
5%
Oz와20% Oz
배양조건에서 상질배 이 상 발육된 체외발육성적은 각각 67.5%와 50.0%로서5%
Oz인 배양조건이20% Oz
배양 조건 보다 통계적으로 유의하게 높은 체외발육 율을 나타내 5%의 산소농도 조건이 돼지 미성 숙 난포란의 체외 성숙， 발육율을 향상시키는 것으로 나타났다. 낮은 산소농도 조건은 체외 배 양시 발생하는free
radical의 생 성 을 억 제 하 여. 난포란의 체외성숙율과 체외발육율에 효과 가 있다고 보고한 Legge와 Sellens (1 991)의 보 고와 소의 경우 산소 농도에 따른 체외수정란의 배반포기로의 체외발육율에 있어 5%와 20%의 산소 농도에서 각각
12.9%
빛 2.5%의 발육성적을 나타냈다고 보고한 Fukui등(1991) 의 보고와 본실험의 결과와 일치하는 경힘上을 나타냈으나， 난포란의 체외성숙의 경우는 반대 의 결과를나타냈다.체외에서 수정된 돼지 수정란을 체외수정을 실시한 후 체외배양 44시간， 72시간 빛 96시간 에
10%
및 20%의 혈청을 첨가한 결과 각 체 외배양 시간에 따른 체외발육율은 커다란 차이 가 나타나지 않았으나 혈청 첨가구가 대조구 보다 다소 높은 성적을 나타냈다. 혈청은 수정 란의 배반포기로의 발육에 영향을 준다고 한Robl
동(1981)의 결과와 일치하였다. 또한 수정 후 96시간에 혈청첨가는 체외수정란의 체외 발육시 상실배기 빛 배반포 단계의 후기 수정 란의 발육에 영향을 준다는 보고(Long 등，
1999) 와 일치하였다.
이 러한 결과는
Dobrinsky
등(1996) 의 보고와 마찬가지로 수정란 초기 발육보다는 상설배기 나 배반포기로 발육되는 후기 발육기에 혈청의 역할이 더 크다고 생각된다. 난구세포의 경우Fukui
등(1991)의 보고에 의하면 정자의 첨체 반응， 수정 빛 수정란의 분할에 중요한 영향을 미친다는 결과와는 다르게 본 실험의 결과를 살펴보면 난구세포의 제거 유무는 돼지 체외수 정란의 상실배기 이상으로 발육되는 체외발육 율에 커다란 영향을 주지는 않았다.v.
요 약본 연구는 돼지 미성숙 난포란을 체외에서 성숙， 수정시킨 후， 체외배양액내에 체외배양 시간에 따라 다른 농도의 혈청챔가 빛 난구 세포의 유무에 따른 돼지 체외수정란의 체외발 육에 미치는 효과를 검토하였다.
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5%
02와20% 02
배양조건에서 체외수정 후 분할된 수정란의 분할율은 각각38.5%(
154/40이와 51.2%(206/402) 로서
20% 02
조건 에서 높게 나타났으며 상실배 이상 발육된 체 외발육 성적은 67.5%와 50.0%로 배양조건이5%
02인 처리구가20%
02처리구 보다 통계적 으로 유의하게 높게 나타나(P(0.05) 체외성숙 과 체외발육율은 산소조건에 따라 상이한 결 과를나타냈다.NCSU23
배양액에 혈청을 체외배양 44시간에
0% , 10%
및20%
첨가와 난구세포의 유무 에 따른 상실배이상 체외발육성적은 난구세포 를 제거하지 않은구 에서58.6 %, 6 1. 4 %
빛 64.0% 였으며， 난구세포를 제거한 구에서60.2% , 63.0%
빛 65.0%로서 처리구간의 차이가 인정되지 않았다.NCSU23
배양액에 혈청을 체외배양 72시간에
0 , 10
및20%
첨가와 난구셰포의 제거 유무 에 따른 상실배이상 체외발육성적은 난구세포 가 제거되지 않은 구가48.2 %, 45.3 %
및49 .4%
였으며， 난구세포를 제거한 구에서
55 .3%,
53 .4%
빛 47.8%로서 처리구간에 커다란 차이를 나타내지는 않았다 (P)0.05).체외배양 96시간에 체외배양액에 혈청 첨가 와 체외발육율에 미치는 효과를 검토한 결과에 서는 난구셰포의 유무에 관계없이 혈청을
0 , 10
빛
20%
첨가한구에서 상실배이상 발육된 체외 발육 성적은 각각6 1. 6 % ( 61/99) , 69 .4 % ( 68/98)
빛
