오배자 추출물 유래 친환경제제의 세균성과실썩음병균에 대한 항세균활성*
1)
서태진
**․양수정
**․이봉춘
***․김강민
****․이귀재
****․주호종
*****The Anti-bacterial Activity of Eco-friendly Farming Material based on Chinese Nut-gall Extraction on Acidovorax citrulli
Seo, Tae-Jin․Yang, Soo-Jeong․Lee, Bong-Choon․
Kim, Kang-Min․Lee, Kui-Jae․Ju, Ho-Jong
Bacterial fruit blotch (BFB) is one of most important diseases in Cucurbitaceae due to infection of Acidovorax citrulli, causing huge economic losses damage worldwide. This seedborn disease spread rapidly at period of high temperature and humidity. The eco-friendly farming is getting popular. So far there was no effective agent to control BFB in eco-friendly farming. Therefore, effect of the material based on chinese nut-gall extract with antibacterial activity against BFB to was tested against A. citrulli. Different hosts showed various symptoms of BFB.
Liquid formulation among exhibited most effective anti-bacterial activity on A.
citrulli. Pot experiment in greenhouse showed the potential as an control agent of BFB in cucurbits. The treatment of material based on chinese nut-gall extract showed the positive effect on survival of the watermelon seedling and on the length of the cucumber seedling treated with A. citrulli. We cautiously conclude that the material based on chinese nut-gall extract used in this study may be good agents against major diseases of cucurbits in the future even though it is require to be tested with more study on field test.
Key words : acidovorax citrulli, anti-bacterial activity, bacterial fruit blotch, cucurbitaceae, eco-friendly farming
*****
이 논문은 농촌진흥청 공동연구사업(과제번호 : PJ 01004204)에서 연구비지원으로 수행된 결과입니다.
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전북대학교 농생물학과
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국립식량과학원
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전북대학교 생명공학부
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Corresponding authors, 전북대학교 농생물학과, 식물의학연구센터, 농업과학기술연구소
([email protected])
Ⅰ. 서 론
수박(Citrullus lanatus var. lanatus)은 남아프리카에서 유래한 덩굴성 과일채소로 세계적으 로 90여 개국에서 생산되는 중요한 과일채소로써 2013년 기준으로 약 1억천여만 톤이 생산 되고 있으며(FAOSTAT, 2013), 우리나라에서도 농가의 주요 소득원으로 생산액이 1조 원에 달하는 우리나라의 여름에 소비되는 대표적인 과일로 약 17천 ha 재배면적에서 약 687천 톤이 생산되고 있다(KOSTAT, 2014).
수박은 보통 직접 밭에 파종하지 않고 육묘하여 노지재배나 시설하우스에서 온실재배를 하는데 재배농가들은 노동력절감 및 재배관리의 효율성을 높이기 위하여 대단위 육묘장에 서 단일품종을 구매하여 사용하고 있는 상태이다. 육묘장에서 우량의 균일한 모종을 생산 하는 것을 목표로 하고 있으나 부실한 육묘관리를 통하여 오히려 불량한 모종이 생산될 수 있다. 일반적인 육묘장은 고온, 다습, 약광의 상태의 밀식된 조건에서 모종을 생산하므로 도장된 모종과 같이 품질이 저하된 묘를 생산하게 될 가능성이 높다. 최근에는 기후변화에 의한 이상기상으로 인하여 여름철 고온일 수의 증가, 또는 고온기에 저온현상, 돌발병해충 발생 등으로 인하여 건전 묘 생산 및 재배 생산에 어려움이 있다. 소비자들의 친환경 농산 물의 요구도에 맞추어 친환경 재배면적이 증가하고 있다. 이러한 수박재배 여건의 변화는 돌발병해의 위험성을 증가시킨다. 육묘장에 병해가 직접 나타날 수 있지만, 관리 소홀에 의 하여 잠복 감염된 수박모종이 농가에 판매될 수 있으며, 본 밭에 정식한 잠복 감염된 수박 모종에 의하여 건전 묘들이 급격이 감염되어 수박의 양적 질적인 측면에서 큰 피해를 발생 시킨다(Dutta et al., 2012; Schaad et al., 2008; Walcott et al., 2003).
수박 과일썩음병(bacterial fruit blotch)은 1980년대 미국의 수박 재배지역에서 크게 발생하 여 많은 경제적 피해를 일으켰다(Latin and Fane, 1990). 그 이후에 남아메리카를 비롯한 많 은 나라에서 멜론, 수박, 오이 등의 주요 박과작물에서 세균성과일썩음병이 지속적으로 보 고되었다(Cheng et al., 2000; Isakeit et al., 1997; Martin and O'Brien 1999; Shirakawa et al., 2000). 우리나라에서는 1991년에 고창에서 발생이 공식적으로 보고된 후(Song et al., 1991), 그 이후로 전남 광주를 비롯한 전국의 주요 박과 작물 재배지에서 병발생과 피해가 지속적 으로 확산이 진행되고 있는 실정이다(Seo et al., 2006).
Acidovorax citrulli는 수박을 비롯한 박과채소에서 주로 발생하는 BFB의 원인균으로서 종 자점염을 하여(Hpokins and Thompson, 2002) 육묘기부터 전 생육 기간 동안 발생하고 특히 과실 수확기에는 과실에 많이 발생하기 때문에 피해가 더욱 크다. 육묘과정에서 어린 묘를 감 염하여 접목 후 확산되거나 포장 잔재물에 잠복하여 월동 후 이듬해 발생하게 된다(Hopkins et al., 1996; Hopkins and Schenck, 1971; Latin and Hpokins, 1995; Lessl et al., 2007). 2차 전 염은 육묘과정에서 두상관수에 의한 물방울의 튀김이나 재배시 빗방울에 의해 주변 묘에 전염시킨다. 접목 과정, 순지르기, 덩굴유인 등의 농작업에 의해 접촉전염이 되는 것으로도
알려져 있다. 특히 A. citrulli는 30℃ 이상의 고온다습한 환경에서 생육이 왕성한 세균으로 서 BFB는 여름철 다습한 환경에서 발병이 증가한다(Latin and Hpokins, 1995; Rane and Latin, 1992).
종자 및 육묘생산가, 수박재배농가들은 덩굴마름병, 탄저병, 수박모자이크바이러스(WMV)과 같이 예전부터 빈번하게 발생하던 병해관리는 적절하게 진행이 되고 있으나, BFB에 대한 인식 부족에 의하여 상대적으로 세균성과실썩음병 관리에 어려움을 겪고 있다. 수박 세균 성과실썩음병의 병징은 탄저병과 덩굴마름병과 유사하여 재배농가들이 적기 방재를 하지 못하고 있다. 공시된 약제가 없는 상황에서 몇 가지 농약을 사용하여 방제를 하고 있지만, 수박 세균성과실썩음병의 원인균인 A. citrulli가 일부 항생제를 포함한 일부 약제에 대한 약 제저항성을 획득하여 농약의 효과가 감소되고 친환경재배에 의해 수박 세균성과실썩음병 은 점점 증가하리라 본다.
종자 생산비 절감을 위하여 다른 채소종자와 마찬가지로 국내 재배 수박 대목 종자의 대 부분은 중국을 비롯한 노동력이 저렴한 국외에 채종포에서 생산하여 국내로 들여온다. 하 지만 대부분의 대목 채종포가 BFB 만연 지역으로 알려져 있다. 친환경재배와 온난화 등의 영향으로 돌발병 발생이 증가하고 있는 상황에서 BFB가 국내에서 급속히 확산되고 있다.
하지만 BFB에 대한 정보 부족과 BFB 방제 시스템 기반이 제대로 조성되어 있지 않아 등록 된 농약이 없어 현재 BFB 방제를 위해 타 작물 병방제를 위하여 등록된 동제나 항생제 계 열의 농약을 사용하고 있는 실정이다. 더욱이 안전한 농산물 생산과 환경오염 등의 제반적 인 문제 때문에 항생제 계열의 농약이 금지 될 예정이어서 안전성이 높은 고품질 수박 생 산을 위하여 친화적 농업에 적용할 수 있는 방제제의 개발이 요구되고 있는 실정이다. 따 라서 본 연구에서는 오배자나무의 오배자 추출물을 이용하여 개발된 친환경 BFB 방제제의 적용 기술을 제공하고자 연구를 진행하였다.
Ⅱ. 재료 및 방법 1. Acidovorax citrulli와 배양
세균성과실썩음병(Bacterial fruit blotch, BFB)의 증상을 조사하기 위하여 농촌진흥청 국립 농업과학원 미생물은행에서 A. citrulli를 분양받아 이용하였다.
2. 박과 식물의 BFB 증상
수박, 신토좌(단호박), 오이의 박과(Cucurbitaceae) 유묘에 1 × 108 bacteria/ml 농도의 A.
citrulli를 소형 분무기를 이용하여 현탁액이 흐르지 않도록 분무 접종 후 유묘를 30℃에서 상대습도 100%로 유지시켜 병징을 유발시켜 조사하였다.
3. 식물추출물 기반의 친환경제제의 제형 효과 검정
과실썩음병에 대해 강한 항세균활성을 나타낸 오배자나무의 오배자 추출물을 주성분으 로 하고 화학반응 등 효과 저하 및 약해 유발 가능성이 낮고 주성분의 효과를 높일 수 있는 제형을 만들고자 기존 상품인 오배자 추출물 활용제품(오배자추출물 10% 함유) (GE라 칭 함)에 계면활성제, 증량제 및 유화제 등 다양한 부자재를 혼합하여 만든 오배자 추출물의 입상제형(BS라 칭함), 오배자 추출물의 액상제형(BA라 칭함), 친환경제제(CM1라 칭함), 유 효성분이 Streptomycin (20%)인 농용항생제(CM2라 칭함), GE가 포함된 NB배지(액상) (pH : 6.8)에 A. citrulli 콜로니 1개를 접종 후 24시간 동안 30℃의 shake incubator에서 진탕배양 시 켰다. 무처리구로는 물을 이용하였다. 친환경제 제형에 따른 항세균 효과는 OD600 값을 비 교하여 결정하였다.
4. 액상제형(BA)의 항세균 효과(in vitro)
박테리아 현탁액은 A. citrulli를 액체배지에서 24시간 동안 30℃의 shake incubator에서 진 탕배양 시켜 ddH2O로 OD600에서 1로 맞추어 준비하였고, 각각의 고형배지(NA배지)에는 CM3, 옥솔린산을 유효성분으로 하는 항세균제(CM4라 칭함), BA, CM1을 첨가하여 준비하 였다. 무처리 대조구는 동량의 ddH2O만을 첨가하여 NA배지를 준비하였다. 종이디스크(직 경 6 mm)를 준비된 A. citrulli 현탁액에 5분 동안 침지하여 충분히 A. citrulli 현탁액 적신 후 여분의 현탁액은 살균소독한 마른 거름종이를 이용하여 제거하였다. A. citrulli 현탁액으 로 적신 종이디스크를 준비한 고형배지에 올려놓고 24시간과 48시간 동안 30℃의 배양기 에서 배양시켜 종이디스크 주변에 박테리아 생장 여부를 확인하였다.
5. 액상제형(BA)의 항박테리아 효과분석(in vivo)
A. citrulli 접종에 의한 항세균 활성을 조사하기 위하여 수박 유묘와 오이 유묘를 이용하 여 in vivo 실험을 실내에서 진행하였다. 식물추출물의 희석배율은 수박의 경우 100배와 200배로 처리하여 수박유묘의 생존율을 조사하였고, 오이의 경우 500배 희석하여 식물체의 생장(배축 길이)을 비교하였다.
Ⅲ. 결과 및 고찰 1. 박과 식물에서 A. citrulli 접종에 의한 BFB 증상
세균성과실썩음병(Bacterial fruit blotch, BFB) 발병에 의해 발생하는 피해 규모가 상당한 수준임에도 불구하고 수박 세균성과실썩음병의 병징을 포함한 정보가 부족한 상태에서 수 박, 신토좌(단호박), 오이의 세 가지 박과 식물에 나타나는 BFB 병징을 조사하였다. 아래 그림과 같이 다른 식물에서 각각 다른 병징을 보였다. 수박 유묘는 엽맥 주위(Fig. 1A)와 잎 자락 끝(Fig. 1B)에서부터 갈변 고사 되는 현상을 보였으나 신토자 자엽의 경우 울퉁불퉁하 며 뒤틀리면서 자엽이 전개 되거나(Fig. 1C, D, E) 자엽 전개시 갈라지고 자엽 표면에 작은 돌기가 형성되면서 자엽이 전개되었다. 오이의 경우 자엽 가장자리가 말리면서 전개 되었 고(Fig. 1H) 줄기(Fig. 1I) 엽병(Fig. 1J) 등이 수침상을 보이다가 죽어 가는 현상을 보였다.
지재부위의 병징은 모잘록병 병징과 비슷하였다(Fig. 1I). 식물병의 병징은 식물과 병균의 상호작용의 결과로서 같은 병이라 할지라도 기주 식물에 따라 다양한 병징을 나타나는데, 이는 식물과 병균과의 상호작용이 식물의 나이 또는 생육환경에 의해 좌우가 되기 때문이 다. 좀 더 다양한 기주를 이용하여 BFB 병징을 다양한 환경조건에서 살펴볼 수 있는 세밀 한 연구를 진행시키면 더 많은 정보를 제공하리라 생각된다. 신토좌의 경우 수박의 대목으
Fig. 1. Various symptoms of bacterial fruit blotch (BFB) on three Cucurbitaceae plants inoculated with Acidovorax citrulli. Red arrow indicate ares with disease symptom.
A and B: watermelon, C to F: Shintozwa, G to J:Cucumber, F-1and F-2 are views of high magnification shown the boxs in panels F, H is view of high magnification seen at the box in panels G. Wm is Watermelon, St is Shintozwa, and Cu is Cucumber.
로 많이 이용되는데, 발아 후 자엽이 전개될 때 그림(Fig. 1C-F)과 같이 이상전개 되는 유묘 를 즉시 제거 관리하는데 이용이 가능 하리라 본다.
2. A. citrulli에 대한 식물추출물의 세균활성 효과 검정
1)
in vitro
검정과실썩음병에 대해 강한 항세균활성을 나타낸 식물유래 천연물질을 주성분으로 하고 화 학반응 등 효과저하 및 약해 유발 가능성이 낮고 주성분의 효과를 높이는 계면활성제, 증 량제 및 유화제 등 다양한 부자재와 혼합하여 제형을 선발하기 위하여 in vitro 실험을 수행 하였다(Fig. 2).
Fig. 2. Fomular effect of Anti-bacterial Activity on Acidovorax citrulli.
GE: eco-friendly farming material based on chinese nut-gall extraction, BA: liquid type of GE, BS: solid type of GE, CM1: one of eco-friendly farming materials from other company, CM2: streptomycin based agro-antibiotic. GE, CM1, and CM2 are commercially available. Numbers in parentheses indicate dilution of treated materials.
CM2의 경우 100배, 500배, 1000배 희석액에서 월등한 항세균 활성을 보였으나 2000배에 서 항세균활성이 급격히 감소하였다. 식물추출물인 GE, BA, BS 모두 효과를 보였으며
2000배 희석한 처리에서는 CM2보다 높은 항세균활성을 나타냈다. 친환경제품으로 알려진 CM1는 모든 희석 처리구에서 항세균활성을 보이지 않아 BFB 방제에는 적합하지 않은 것 으로 생각된다. 식물추출물의 제형별 처리 효과는 BS보다 BA가 다소 높은 항세균활성을 보였다. 기존 제품인 GE는 고형분말형으로 물에 희석하는 과정에서 불편함이 있는 반면에 액상제형은 이를 개선한 제형이다. 추가 연구가 필요하지만 현재의 실험결과로는 효과와 편리성을 고려할 때 액상제형으로 전환이 필요하다고 생각된다.
BA가 우수한 처리 효과를 보이는 액체배지 실험 결과를 바탕으로 고체배지에서 액상제 형을 이용하여 다른 상업화된 약제들과 대조실험을 하였다. 3반복 실험을 한 결과 CM1은 제형선발 실험과 유사하게 모든 희석 처리구에서 효과가 없는 것으로 나타났고, CM3의 경 우도 BA에 비하여 처리 효과가 낮은 것으로 나타났다. CM4의 경우 거의 모든 희석 처리구 에서 48시간동안 항세균활성을 보였다. 하지만 CM4는 항생제가 포함된 농용항생제인 반면 에 BA는 오배자 기반의 식물추출물로서 친환경 제품이라는 점과 1000배 희석처리에서 48 시간까지 항세균활성을 보이고 있는 점을 고려 할 때 친환경 BFB 방제제로서 이용이 가능 하다고 생각된다(Table 1, Fig. 3).
Table 1. Antibacterial activity of BA on Acidovorax citrulli (in vitro)
Rep. Hour after inoculation
Treated material
Dilution
200 500 1000 2000 3000 4000
1
24
BA - - - - + +
CM1 + + + + + +
CM3 - - + + +
CM4 - - - - - +
48
BA - - - + + +
CM1 + + + + + +
CM3 + + + - - +
CM4 - - - - - +
2
24
BA - - - - + +
CM1 + + + + + +
CM3 - + + + +
CM4 - - - - - -
48
BA - - - -/+ + +
CM1 + + + + + +
CM3 + + + - - +
CM4 - - - - - +
BA: liquid type of eco-friendly farming material based on chinese nut-gall extraction (GE), CM1: one of eco-friendly farming materials from other company, CM3: streptomycin based agro-antibiotic, and CM4: Oxolinic acid base anti-bacterial material. -: no bacterial growth, +: indicates bacterial growth, -/+: not obvious bacterial growth. Numbers: dilution of treated materials.
Fig. 3. Growth of Acidovorax citrulli on solid media containing treated materials.
BA: liquid type of eco-friendly farming material based on chinese nut-gall extraction (GE), CM1: one of eco-friendly farming materials from other company, CM3: streptomycin based agro-antibiotic, and CM4:Oxolinic acid base anti-bacterial material. CM1, CM3, and CM4 are commercially available.
Numbers in indicate dilution of treated materials.
Rep. Hour after inoculation
Treated material
Dilution
200 500 1000 2000 3000 4000
3
24
BA - - - - + +
CM1 + + + + + +
CM3 - - + + +
CM4 - - - - - +
48
BA - - - + + +
CM1 + + + + + +
CM3 + + + - - +
CM4 - - - - - +
2) 식물추출물이
A. citrulli
가 접종된 수박유묘와 오이 유묘에 미치는 영향유묘에서 A. citrulli에 대한 항세균활성을 조사하기 위하여 박과 작물인 수박 유묘(Fig. 4) 와 오이 유묘(Fig. 5)를 대상으로 실내 실험을 실시하였다. BS 처리구와 BA 처리구의 결과 를 바탕으로 BFB 방제를 위한 오배자 추출물 기반 약제의 희석배율은 1000배로 생각되지 만 식물체 처리라는 점을 감안하여 희석 배율을 100배(수박)와 200배(수박), 500배(오이)로 실험을 진행 시켰다. 수박은 유묘의 생존율을 조사(Fig. 4) 하였고, 오이의 경우 식물체의 생장(배축 길이)을 비교하였다(Fig. 5).
Fig. 4. Effect of plant extract treatment on the survival of the watermelon seedling spray- inoculated with Acodovorax citrulli.
BA: liquid type of eco-friendly farming material based on chinese nut-gall extraction and numbers in parentheses indicate dilution of BA.
A. citrulli를 스프레이 접종을 통하여 감염시킨 수박유묘에 식물추출물인 BA 희석액을 처리한 후 A. citrulli에 의한 수박유묘의 피해정도를 조사한 결과, 무처리구의 수박유묘는 80%가 피해를 받아 고사한 반면 BA를 처리한 수박유묘는 100배 희석처리구에서 40%가 피 해를 받았고, 200배 희석액을 처리한 수박유묘는 32.5%가 피해를 받아 고사하였다. 생존율 에 기반한 방제율은 수박유묘에서 BA 100배 희석처리와 200배 희석처리에 의한 BFB 방제 율은 50%와 59.3%로 나타났다(Fig. 4).
A. citrulli 후 BA 500배 희석액을 처리한 후 처리구와 무처리간 오이유묘의 상태와 배축길 이를 비교한 결과 BA 무처리구에서 모든 오이 유묘가 피해를 받은 것처럼 시들어가는 양상 을 보였으나 BA 처리구는 정상적인 생육을 하고 있었다. 뿐만 아니라 무처리구의 오이유묘 의 배축은 세균감염의 영향을 받아 BA 처리구에 비하여 현저히 짧게 조사되었다(Fig. 5).
Fig. 5. Effect of plant extract treatment on the length of the cucumber seedling spray- inoculated with Acodovorax citrulli.
BA: liquid type of eco-friendly farming material based on chinese nut-gall extraction and numbers in parentheses indicate dilution of BA.
세균성과실썩음병은 수박에서 가장 크게 문제화 됐지만 오이, 박, 멜론, 참외 등 여러 가 지 박과채소에도 매우 강한 병원성을 가진다는 점에서 작물의 피해현황과 병징, 발생특성 에 대한 연구를 통하여 종합적 방제대책 수립이 필요한 상황이다. 본 연구에서 얻어진 결 과를 종합해 보면 오배자 유래 친환경제제는 세균성 과실썩음병에 대한 친환경 방제용 자 재로 이용성이 충분하다고 판단이 된다. 추후 이 항세균활성을 가지는 오배자의 화합물의 화학적 구명이 이루어진다면 그 이용성은 더욱 확대될 것으로 생각된다.
Ⅳ. 적 요
세균성과실썩음병(BFB)은 Acidovorax citrulli가 원인균으로서 전 세계적으로 박과채소에 큰 손실을 야기하며 고온다습한 조건에서 급속도로 진전되는 종자 병이다. 요즘 친환경재 배가 인기를 얻어가고 있으나 BFB를 효율적으로 방제할 수 있는 적당한 방제제가 없는 실 정에서 오배자 추출물 기반 약제의 A. citrulli에 대한 황세균활성을 시험하였다. 먼저 식물 마다 다른 다양한 BFB 증상이 나타났다. 오배자 추출물 기반 약제의 액상 형태의 방제제는 높은 항세균활성을 보였으며, 온실내 포트실험 또한 오배자 추출물 기반 약제의 BFB 방제 에 대한 잠재적 효과성을 보였다. 오배자 추출물 기반 약제 처리는 수박 유묘의 생존율과
오이의 유묘 길이에서 긍정적인 효과를 보였다. 따라서 이 연구에서 사용한 오배자 추출물 기반 약제에 대하여 추가적인 연구가 이루어진다면 박과채소인 BFB를 효과적으로 방제할 수 있는 가능성이 아주 높은 물질로 생각이 된다.
[Submitted, June. 17, 2016 ; Revised, July. 6, 2016 ; Accepted, July. 21, 2016]
References
1. Cheng, A. H., Y. L. Hsu, T. C. Huang, and H. L. Wang. 2000. Susceptibility of cucurbits to Acidovorax avenae subsp. citrulli and control of fruit blotch on melon. Plant Pathol. Bull.
9:151-156.
2. Dutta, B., H. Scherm, R. D. Gitaitis, and R. R. Walcott. 2012. Acidovorax citrulli seed inoculum load affects seedling transmission and spread of bacterial fruit blotch of water- melon under greenhouse conditions. Plant Dis. 96: 705-711.
3. FAOSTAT. 2013. FAOSTAT, available at http://faostat3.fao.org/home/E accessed on March 2016.
4. Hopkins, D. L. and C. M. Thomson. 2002. Seed transmission of Acidovorax avenae subsp.
citrulli in cucurbits. HortSci. 37: 924-926.
5. Hopkins, D. L., J. D. Cucuzza, and J. C. Watterson. 1996. Wet seed treatments for the control of bacterial fruit blotch of watermelon. Plant Dis. 30: 529-532.
6. Hopkins, D. L. and N. C. Schenck. 1971. Bacterial leaf spot of watermelon caused by Pseudomonas lachrymans. Phytopathology 62: 542-545.
7. Isakeit, T., M. C. Black, L. W. Barnes, and J. B. Jones. 1997. First report of infection of honeydew with Acidovorax avenae subsp. citrulli. Plant Dis. 81: 694-701.
8. KOSTAT. 2013. KOSIS, available at http://kosis.kr/ accessed on March 2016.
9. Latin, R. X. and D. L. Hopkins. 1995. Bacterial fruit blotch of watermelon: the hypothetical exam question becomes reality. Plant Dis. 79: 761-765.
10. Latin, R. X. and K. K. Fane. 1990 Bacterial fruit blotch of watermelon in Indiana. Plant Dis. 74: 331-335.
11. Lessl, J. T., A. Fessehaie, and R. R. Walcott. 2007. Colonization of female watermelon blossoms by Acidovorax avenae subsp. citrulli and the relationship between blossom inoculum dosage and seed infestation. J. Phytopathol. 155: 114-121.
12. Martin, H. L., R. G. O’Brien, and D. V. Abbott. 1999 First report of Acidovorax avenae subsp. citrulli as a pathogen of cucumber. Plant Dis. 83: 965.
13. Rane, K. K. and R. X. Latin. 1992. Bacterial fruit blotch of watermelon association of the pathogen with seed. Plant Dis. 76: 509-512.
14. Schaad, N. W., E. Postnikova, A. Sechler, L. E. Claflin, A. K. Vidaver, J. B. Jones, I.
Agarkova, A. Ignatov, E. Dickstein, and B. A. Ramundo. 2008. Reclassification of sub- species of Acidovorax avenae as A. avenae (Manns, 1905) emend., A. cattleyae (Pavarino, 1911) comb. nov., A. citrulli (Schaad et al., 1978) comb. nov., and proposal of A. oryzae sp.
nov. Syst. Appl. Microbiol. 31: 434-446.
15. Seo, S. T., . H. Park, J. S. Lee, K. S. Han, and S. R. Cheong. 2006. Bacterial fruit blotch of melon caused by Acidovorax avenae subsp. citrulli. Res. Plant Dis. 12: 185-188. (In Korean)
16. Shirakawa, T., S. Kikuchi, T. Kato, A. Abiko, and A. Kaiwa. 2000. Occurrence of watermelon bacterial fruit blotch in Japan. Jpn. J. Plant Pathol. 66: 223-231.
17. Song, W. Y., H. M. Kim, I. Y. So, and Y. K. Kang. 1991. Pseudomonas pseudoalcaligenes subsp. citrulli: The causal agent of bacterial fruit blotch rot on watermelon. Kor. J. Plant Pathol. 7: 177-182. (In Korean)
18. Walcott, R. R., R. D. Gitaitis, and A. C. Castro, 2003. Role of blossoms in watermelon seed infestation by Acidovorax avenae subsp. citrulli. Phytopathology 93: 528-534.
