새로 고안한 배지에서 진균학적 동정에 관한 연구

임상병리검사과학회지 : 제 27권 제 1 호 1995.

새로 고안한 배지에서 진균학적 동정에 관한 연구

대구 가톨릭피부과의원 • 대구보건전문대학 임상병리과* . 경산대학교 보건과학과**

방용준 • 이건섭* . 노뱅의**

Study on New Media for Identifing Pathogenic Fungi

Bang, Young-JUN., Lee, Gun-Sup*., Roh, Pyong- Ui**

CatJwlic Skiη α'inic， Taegu Korea

Ðept. OinicaJ PatJwlogy Taegu HeaJth Juηior Cl빼'ege*

Kjνη:gsan Uηiversity**

Dermatophytes had been studied by many dermatologists and nine(9) species have been identified in Korea. Trichophyton genera isolated from patients are Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagr빼까es. Tricho마까on verrucosum was for the first time identified in Korea in 1986.

The authors have tried to make a Potato dextrose cornmeal agar(PDCA) more convenient for routine mycological laboratory study than Sabouraud dextrose agar(SDA). Trichoph까on

rubrum made a fast absorption of KOH solution added on to their colonies on PDCA and it was much easier to differentiate them from other dermatophytes.

Eleven( 11) strains of Trichoph，까on veπucosum grew on Trichophyton agar # 2 and 11 strains absorbed fast KOH solution added on to their colonies on PDCA. Candida albicans also formed chlamydospores and pseudohyphae on PDCA.

PDCA is more useful in isolation and identification of pathogenic fungi than SDA.

Key wαds: ab∞rption of K뻐 ∞lution， chlamydospαes， pseu뼈1Yphae， PDCA

I. 서 론 견과 현미경적 소견이 유사한 T. megninii와 구별이 어 려워 trichophyton agar올 사용하여 구별한다. 또한 T.

우리나라에서 백선균에 대한 연구가 시작된 후 지금 rubrum파 T. mentagrophytes의 구별이 잘 되지 않는 보 까지 9종의 균종이 동정되고 있다1-9) 현재 가장 많이 고가 국내 13， ⁽⁴⁾ 및 외국9- (2)에서 볼 수 있으며 이러한 분리되는 Trichop~짜on( 이하 T.) rubrum은 sabouraud 경우에는 SDA배지에서 자란 집락올 육안적 소견， 각

dextrose agar( 이하 SDA) 에서 자란 집락의 육안적 소 종 생물학적 성상， 감별배지에서 성장유무， 모발천공시

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험， corn meal agar에서 색소생성 유무， 및 urease배지 T. rubrum과 T. mentagroph껴es을 urease시험， 모발천 에서 urea 분해 유무가 도움이 될 수 있다 8， 10， 13-16) 이 공시험， corn meal with dextrose agar로 동정한 후 러한 감별배지를 사용하지 않고 KOH용액으로 T. PDCA 에서 KOH 용액의 홉수유무 비교와 T. verru-

rubrum과 T. mentagroph，까es을 통정할 수 있는 방법은 cosum의 inositol 및 thiamine 요구시험과 PDCA에서 국내 및 외국 문현에서 아직 볼 수가 없다. 홉수 유무를 비교하였다.

이에 저자는 우리나라에서 분리되는 백선균 중 대다

수를 차지 하는 T. rubrum과 T. mentagroph，까es를 KOH

m.

용액 훌수 유무로 간단하게 구별할 수 있고， 초대분리

배지에서 C. a뻐icans가 후막포자를 생성하므로 동정할 1. 칩락의 KOH용액 홉수시험 수 있는 새로운 배지를 고안하여 사용한 결과 SDA보

다 이용가치가 높다고 생각되어 보고한다. 홉수시험에 사용한 균주의 종류는 T. ru뻐lm， T.

mentagrophytes, T. verrucosum, T. ferrugineum, T. megni-

n.

floccosum을 SDA 및 PDCA 배 지 에 2주간 배 양한 후 실험에 사용한 배지는 SDA(peptone 5 gm, dextrose KOH용액(1 0 %)을 떨어뜨려 홉수 유무시험을 관찰한 20 gm, agar 9 gm) 및 potato dextrose cornmeal agar 결과 PDCA 배 지 에 서 는 T. rubπlm은 전 부가 홉수되 었 (이 하 PDCA) (potato dextrose 10 gm, corn meal agar 고， T. verrucosum은 11 균주가 홉수하고， 14균주는 홉 10 gm, peptone 1 gm, Tween-80 3 ml) 에 각각 증류수 수되지 않았다. T. ment때'ophytes， T. ferrugineum, T.

500 ml, chloramphenicol 250 mg을 넣 어 서 사면 배 지 를 megninii, M. can업， M. gypseum, E. floccosum은 홉수되 만들어 사용했다. 감별배지로 Trichophyton agar # 2, 지 않았다. SDA에서는 시험에 사용한 모든 균주가 홉

#4와 urease시험배지， 모발천공시험 (hair perforation 수되지 않았다.

test) 배 지 , corn meal with dextrose agar 등으로 균주

를 동정했다 2. T. rubrum. T. n뀐magrophytes의 감벌시험과 KOH

사용한 균주는 T. rubrum 100주， T. mentagγ'ophytes 흡수유무 시험 100주， T. verrucosum 25주， T. ferruginαlm 1 주，T.

me.양lÏnii( R v64063 ), Microsporum( M) can업 50주， M. T. rubrum, T. ηzentagrophytes 각각 50균주를 모발천공

gypseum 10주， Epidermophyton floccosum 10주와 C. 시 험 , corn meal with dextrose agar, urease시 험 을 한

albicans 50주를 PDCA 및 SDA에 접종하여 25⁰C 에 결과 T. πrubrπ‘'"U7

2주간 배양한 후 각 균주의 집락에 KO아H용액(1 0 %)을 agar에서 적색의 집락， 모발천공시험은 음성이고，T.

떨어뜨려 홉수 유무를 관찰하였다 mentagroph.까es는 urease 양성， corn meal with dextrose T able 1. Absorption of dropped KOH solution

SDN PDCAd

T ..

rubrum +

T. T.

menta. ne힘H.

T. M.^b M. M. E.

verru. ferru. cams gypseum floccosum

-/+

A) T: Trichoph까on( T. mentagroph.까es， T. negninii, T. verrucosum). B) M: Microsporm. C) PDCA: Potato dextrose COTn-

meal agar. D) SDA : Sabouraud dextrose agar

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Table 2. Differentiation of similar conidia - producing Trichophytoη spp. on SDA Identification of T. rubrum, T. mentagrophytes

Urease Hair perforation Colony color on CMDA ^a Absorption PDCA

Pos^b• Nef/. Pos. Neg. Red White “+" “ ”

T. rubrum 2 48 0 50 50 0 50 0

( =50)

T. menta. 50 0 50 0 0 50 0 50

(n=50)

52 48 50 50 50 50 50 50

Total 100 100 100 100

A) CMDA : corn meal dextrose agar. B) Pos : Positive. C) Neg : Negative

agar에서 백색의 집락， 모발천공시험은 양성이었다. 홉 PDCA에서 흡수 시험을 한 결과 inositol 요구주 11 균 수유무 시험에서 T. rubrum은 흡수되었고， T. mentagrθ 주는 KOH용액을 홉수하였고， thiamine 요구주 14균주 ph까es는 흡수되지 않았다. 이상의 결과로 감별배지를 는 KOH 용액을 흡수하지 않았다. 따라서 inositol 및 사용하지 않고 PDCA에서 흡수 유무로 즉시 간단하게 thiamine 요구시험을 하지 않고 PDCA에서 흡수유무

구별할 수 있었다. 로 구별할 수 있었다.

3. T. verrucosum의 inositol 및 thiamine 요구시 험 과 KOH흡수 유무시험

T. verrucosum 25균주를 inosit이 및 thiamine 요구시 험을 한 결과 inositol 존재에서만 자란 균주는 11 균주

였고， thiamine 존재에서만 자란 균주는 14균주였다.

Table 3. Growth pattern of T. verrucosum on Trichophy ton agar and absorption tests of dropped KOH solution

Trichophyton agar PDCA

#2 #4 KOH absorption Inositol Thiamine “+" “ ”

T. verrucosum 11 0 11 0

(25 species) 0 14 0 14

Total 11 14 11 14

T able 4. Chlamydospores production tests of C. albicans 50 cases

4. C. a/bicans의 후막포자 형성시험

C. albicans 50균주를 PDCA 및 SDA에 접 종하여 25

℃에 배양한 결과 4일 후 PDCA에서는 30(60 %)주가 가성균사를 생성하였고， 7일 후에는 C. albicaηs의 특정 인 위균사 주위에 덩어리 모양의 분아포자와 후막포자 가 50주 전부에서 생성된 것을 관찰할 수 있었다. 반 면 SDA에서는 4일 후 가성균사의 생성을 전혀 볼 수 가 없었고， 배양 7 일 후 20주 (40 %)만이 가성균사를 생성하였고 후막포자는 50균주 전부에서 생성되지 않 았다.

N. 고 찰

진균동정 배지의 조건으로서는 집락이 빨리 자라고

Formation PDCA(N=50) SDA(N=50)

(days) Pseudohyphae Chlamydospores Pseudohyphae Chlamydospores

4 days 30(60.0) 0 0 0

7 days 20(40.0) 50(100) 20(40.0) 0

Total{ %) 50(100) 50(100) 20(40.0) 0

”

Fig. 1. Colony of Trichophyton rubrum on potato dextrose Fig. 2. Trichophyton rubrum absorbed fast KOH solution corn meal agar. added on to colonies on potato dextrose corn meal agar.

Fig. 3. Candida albicans f ormed chlamydospores and pse udohyphae.

분생자 생성이 왕성하며， 균의 특정적인 착색과 형태 를 형성하고， 초대분리 배양에서 동정이 간편하고 배 양 양성률이 높아야 한다. 또한 오랫동안 보관하여도 변이가 일어나지 않는 것이 이상적인 배지라 할 수 있 다. 저자는 이런 조건을 가지고 있는 새로운 배지를 개발하여 사용해 본 결과 SDA에 비해 다음과 같은 이 점이 있었다.

진균의 동정에는 전통적으로 SDA에서의 집락의 육 안적 형태와 현미경 소견을 기초로 하고 있으며， 육안

적 소견으로는 배지에서의 성장속도， 집락의 색상， 형 태 및 현미경 소견과 임상소견이 도움이 된다1). SDA 배지는 당의 함량이 많고 pH가 산성이라서 동일 균종 이라도 집락의 형태 및 색상이 다양하게 나타나며， 다 른 균종도 비 슷하게 나타나는 경 우가 있다.

우리 나라에 서 Trichophyton 균속 중 가장 많이 분리 되 는 균은 T. rubrum과 T. mentagrophytes이 다. SDA배 지에서 이들 균은 집락의 형태가 전형적인 경우에는 특정적인 진균학적 양상으로 쉽게 구별할 수 있으나 여러 가지 변형이 있어 쉽게 구별되지 않는 경우가 있 다 14) 이 런 경 우 SDA에 서 자란 각종 백 선 균을 urease 시 험 , 모발천 공시 험 , corn meal with dextrose agar 등 여러 가지 감별배지를 사용하는 경우가 많다 9， 1 1，1 3-16) 이러한 감별배지를 사용하지 않고 새로 고안한 PDCA 배지에서 자란 집락에 KOH 용액을 떨어뜨려 흡수 유 무로 간단하게 동정할 수 있는지를 알아보기 위하여，

백선균 8균종을 SDA 및 PDCA에 접종하여 자란 집락 에 KOH 용액을 떨어뜨린 결과 SDA에 자란 모든 백 선균의 집락은 KOH용액을 흡수하지 않으나 PDCA에 서 자란 백선균은 T. rubrum이 KOH용액을 순간적으로 흡수하고 착색이 더욱 진해졌다. 특히 여기에서 자란 T. rubrum균주 중 홍색균주는 KOH용액을 흡수함으로

끼 「 U

A 4 ‘

서 집락 전체가 진한 포도주색으로 되며 백색균주의 경우에는 KOH용액을 홉수하나 착색의 변화는 볼 수 가 없었다. 또한 T. verrucosum 25주 중 11 주는 홉수하 고 14주는 홉수되 지 않았다. T. verrucosum은 선택 적 으 로 홉수하나 집락의 성장 속도가 매우 느려 T. rπ1뼈1 과 차이가 있었다. T. rubrum의 통정에 사용할 수 있는 지 알아보기 위 하여 T. ru뼈lm 100 주와 T. menta-

grophytes100주를 urease시 험 , 모발천 공시 험 , corn meal with dextrose agar 시 험 을 하여 T. ru뻐lm으로 동정 된 100주는 전부가 KOH를 홉수하였고 T. mentagro뼈，ytes 로 동정된 100주는 KOH롤 홉수하지 않았다. 이상의 결과로 보아서 PDCA는 T. 1뼈rum의 동정에 유익할 뿐만 아니라， 비병원성 균사형 진균파 T. ru삐lm을 의 심 케 하는 집 락이 함께 자랐을 때 나 T. meπtagroph까es，

T. megninii 등과의 감별이 어려울 경우 이 홉수시험을

함으로서 T. ru뻐lm 여부를 확인하는데 큰 도움을 줄 것으로 사료된다.

T. verrucosum은 1986년부터 우리 나라에서 분리되 기 시작하여 점차 증가 추세에 있다. 본 균에 대한 연 구는 김 18) 퉁이 37t 에서 T. verrucosum의 성상을 연 구하였으나 영양 상태에 대한 연구는 아직 없다.

Georg^l7)는 thiamine과 inositol이 함유된 배 지 에 서 는 모 든 균이 성장하나 thiamine만이 있는 배지에서 16 %만 이 성장한다고 하였으나 본 연구에서 25균주 중 11 균 주가 자라 차이 가 있으며 또한 inositol 및 thiamine 요 구시험에서 inositol에 자란 균주는 KOH에 홉수되고，

thiamine에 자란 균주는 KOH용액에 홉수되지 않으므 로 KOH홉수 유무로 inositol 요구균주와 thiamine 요구 균주를 알 수 있었다.

C. albicans 동정 은 SDA배 지 에 서 는 분아포자만 왕성 하게 생성되며 때때로 소수의 위균사를 형성하여 다른

Candida spp와 구별이 되지 않아 동정을 할수 없는 것

이 단점이다. 따라서 C. a빠cans를 통정하기 위하여 발 아관 시험， 당 이용성， 당 발효성 시험 및 후막포자 형 성 시험을 하여 동정한다 19). PDCA배지에서는 이러한 감별시험 없이 초대분리에서 위균사 및 후막포자를 형 성하므로 간단하게 동정할 수 있다.

또한 SDA배지는 균사형 균주를 장기간 보존하면 균

주 변이가 일어나 사용할 수 없는 반면 PDCA배지는 장기간 본존하여도 집락의 변이가 일어나지 않아 보존 배지로서 우수하였다. 이상의 결과로 PDCA배지를 사 용하면 백선균과 C. albicans의 동정을 동시에 할 수 있어 SDA 보다 이용가치가 높다고 생각된다.

V. 결 론

저자는 SDA배지의 단점파 진균의 전문적 지식이 없 이 간단하게 동정할 수 있는 새로운 배지로 고안한 PDCA배지를 사용하여 다음파 같은 결론을 얻었다.

1.T. ru뼈lm과 T. mentagro.뼈，ytes을 KOH 홉수 유무 시험으로 간단히 동정할 수 있었다

2. T. verrucosum의 inositol 및 thiamine 요구시험 없 이 KOH홉수 유무로 inositol 요구균주와 thiamine

요구 균주를 알 수 있다.

3. C. albicans도 PDCA에 서 후막포자， 아포성 포자 및 위 균사를 형 성 하므로 초대 분리 에 서 C. albicans

을 동정할 수 있었다.

4. 실온에 오랫동안 방치 (2-3개월)하여도 변이가 없다.

REFERENCES

1. Rippon JW: Medical mycology : the pathogenic fungi and the pathogenic actinomycetes 3rd ed, WB Saunders, Philadelphia, pp 121-275, 1988.

2. 서순봉 : 한국피부사상균질환의 연구 : 제 2보. 고병 간박사 송수기념 논총 4: 1-23, 19L>0.

3. 김병수， 서순봉 : 백선균의 균학적 및 임상적 관찰.

대피지 14 : 325-334, 1976.

4. 김기홍， 이천열， 김덕하 : 부산지방의 백선증. 대피 지 24 : 263 - 270, 1986.

5. 최종수， 김기홍 : 표재성 피부진균증의 임상적 및 진균학적 연구， 최신의학 29 : 1051-1057, 1987.

6. 이유신， 윤재일， 은희철， 김선훈， 조광현 : 임상 피 부과학. 초판， 여문각， 서울， pp.326-334, 1987.

7. 김기홍 : 우리 나라의 백선균. 영남의대학술지 7(2)

- 44-

: 13-26, 1987.

8. 김 영 표， 전 인 기 , 김 숭훈 : Trichophyton verrucosum에 의한 두부독창과 역학적 관찰. 대피지 24: 687- 691, 1986.

9. Ajello L, Georg LK: In vitro hair culture for differentiating between atypical isolates of Trichσ ph，까on mentagroph，까es and Trichophyton rubrum.

Mycopath Mycol Appl 8 : 3-17, 1957.

10. Knox GA : The isolation of strains of Trichophy- ton rubrum which produce a melanin - like sub- stance in culture media. Am J Med Technol ¹²⁷

: 287-291, 1961.

11. English MP : Variation in ^Tr끼icho때Iph)까@때on πrubrπ‘"U7

seen in a routine' diagnostic service. Sabouraudia ³ : 205-210, 1964.

12. Smith JMB, Rush - Munro FM : An unusual stains of Trichoph까on rubrum from Figi. Sabouraudia 9 : 153-156, 1971.

13. 박용모， 최 종수， 김 기 홍 : Potato dextrose agar에 서

배양한 수종 백선균의 육안적 및 현미경 소견. 대 피지 29 : 364-367, 1991.

14. 김기홍， 박용모， 김종철， 최종수 : 배지에 착색을 보 인 Trichophyton ru빠lm에 의한 체부백선 1 예. 대피 지 29 : 529-532, 1991.

15. Georg LK: The relationship between the downy and granular f orms of Trichoph까on menta-grophytes.

J Inves Dermatol 23 : 123-141, 1954.

16. Georg LK, Camp LB : Routine nutritional test for the identification of dermatophytes. J Bacteriol ⁷⁴

: 113-121, 1957.

17. Georg LK: The nutritional requirements of the faviforme Trichophyton. Ann NY Acade Sci 50 : 1315-1341, 1950.

18. 김종철， 최종수， 김기홍， 서순봉 : 대구지역에서 분 리된 Trichophytoη verrucosum의 진균학적 성상. 대 피지 30 : 761-768, 1992.

19. 서순봉， 김기홍， 방용준 : 의진균학， 대학서림， pp.

28-62, 1994.

- 45-