The Cytotoxic Activity of 3,4,5-Trihydroxybenzoic Acid Methylester and Related Compounds against Skin and Oral Cancer Cell Lines

(1)

3,4,5-Trihydroxybenzoic Acid Methylester와 관련 화합물의 피부암 및 구강암 세포주에 대한 세포독성

이재숙·한두석*·강정일**·백종민***·백승화****^,#

광주여자대학교 미용과학과, *원광대학교 치과대학 구강해부학교실, **대불대학교 물리치료학과,

***서울대학교 비알엔사이언스 연구개발부, ****원광대학교 한의학전문대학원 한약자원개발학과

(Received September 29, 2009; Revised January 14, 2010; Accepted January 14, 2010)

The Cytotoxic Activity of 3,4,5-Trihydroxybenzoic Acid Methylester and Related Compounds against Skin and Oral Cancer Cell Lines

Jae Sug Lee, Du Seok Han*, Jeong Il Kang**, Jong Min Baek*** and Seung Hwa Baek****^,#

Department of Beauty Science, Kwangju Wonmen's University, Kwangju 506-713, Korea

*Department of Oral Anatomy, School of Dentistry, Wonkwang University, Iksan 570-749, Korea

**Department of Physical Therapy, Daebul University Youngam 526-702, Korea

***R&D Center, BRNScience Co. LTD., Seoul National University, Seoul 151-897, Korea

****Department of Herbal Resources, Professional School of Oriental Medicine, Wonkwang University, Iksan 570-749, Korea

Abstract

— The cytotoxic activity of 33,4,5-trihydroxybenzoic acid methylester and related compounds on the growth of normal cell lines, human skin melanoma cells and human oral epithelioid cell line were evaluated by the 3-[4,5-dim- ethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and 2,3-bis-[2-methoxy-4-nitro-5-sulfo-phenyl]-2-H-tetrazolium- 5-caboxanilide (XTT) methods. 3,4,5-Trihydroxybenzoic acid methylester decreased the cell viability of human skin mel- anoma cells and human oral epithelioid cells shown by the MTT method and the cell adhesion activity of human skin mel- anoma cells and human oral epithelioid cells shown by the XTT method. In light microscopy, 100

^µ

M 3,4,5- trihydroxybenzoic acid methylester showed the highest cytotoxic activity. These results suggest that 3,4,5-trihydrox- ybenzoic acid methylester has a potential anticancer activity.

Keywords □

cytotoxic activity, NIH 3T3 fibroblasts, MTT and XTT methods. 3,4,5-trihydroxybenzoic acid methylester, human oral epithelioid cells, human skin melanoma cells

페놀화합물의대부분은

shikimic acid pathway

^에^의해서^합성

된방향족물질이며

,

^사람이^{일상생활에서}^쉽게^섭취할^수^있는

과일

,

채소

,

포도주

,

차등에서분리되는성분으로

,

다른페놀성 성분이갖는생물학적효과인항산화작용

,

항돌연변이작용

,

항암 작용및항염증작용을갖는것으로보고되고있다

.

^1,2)^페놀성^성

분들은건강세포보다암종세포에강한세포독성을나타내는것 으로보고되고있는데

, Isuzugawa

^등³⁾^과

Inoue

^등⁴⁾^은^식물성

페놀산인

gallic acid

^는^흰쥐에서^분리한^간세포

,

^{각질상피세포}

,

대식세포

,

내피세포및섬유모세포같은정상세포보다암종세포 인

HeLa

^세포

, HL-60RG

^세포

, dRLH-84

^세포^및

PLC/PRF 5

^세

포에세포독성이선택적으로나타난다고보고하였다

. Sakagami

등⁵⁾도수용성탄닌은정상인체치은섬유모세포보다인체구강 편평상피암종세포와타액선상피암종세포에더강한세포독성 을나타낸다고보고하였으며

, Furuya

등⁶⁾은종나리

(Camassia leichtlinii)

^에서^분리한^{스테로이드성}^사포닌

(steroidal saponins)

은정상인체치은섬유모세포보다인체구강편평상피암종세포 에더강한세포독성을나타낸다고보고하였다

. 3-Hydroxybenzoic

acid(3-HBA)

^는^방향족^{고리구조에}^{카르복실기}^하나와^수산기^하

나가결합된간단한페놀화합물로서각종식물로부터분리되고 있으나

,

^7,8)^{항암작용에}^대한^연구는^소수에^불과하다

.

⁹⁾^반면에

3,4,5-trihydroxybenzoic acid(3,4,5-THBA)

^는^{카르복실기}^하나와

3

개의수산기가결합된페놀화합물이며

,

세포독성과세포의증 식억제작용에대하여많은연구가이루어졌다

. Yanez

^등¹⁰⁾^은^식

물에광범위하게분포되어있고

,

^식생활에^{규칙적으로}^제공되는

#본논문에관한문의는저자에게로

(

^전화

) 063-850-6225 (

^팩스

) 063-850-6225 (E-mail) [email protected]

종설

(2)

식물로부터분리되는

gallic acid

^와

quercetin

^을^포함한^몇^종류

의페놀산을

2

^종류의^{흑색종세포}

(B16/F10

^와

SK-MEL-1)

^와^하나

의정상흑색세포에각각적용한후세포증식억제작용을측정 한결과

,

^이들^성분의^세포증식^{억제효과는}^치환기의^위치

,

^수^및

성질과밀접한관계가있다고보고하였다

. Ma

등¹¹⁾은페놀화합 물의생리활성은항산화작용에의하며

,

이는

HCT-116

과

SW- 480

^인체^결장암^세포주에^대한^{세포독성으로}^{작용한다고}^보고

하였다

. Salucci

등¹²⁾은

gallic acid

와

quercetin

유도체는항산화 작용과세포증식억제효과가있으나

,

세포의성장억제와는관련 이없으며

,

^이^작용에는^구조적^관점에서^보면

, galloryl

^성분이

필요하다고보고하였다

. Quercetin

은생리활성이있는식물성

flavonoid

로서암세포의증식을 억제하는것으로알려져 있는

데

,

^13,14)^이는^항산화^작용과^{세포사멸과}^밀접한^관계가^있으며

,

선택적세포독성도있는것으로보고되었다

.

¹⁵⁾

Wilhelm

등¹⁶⁾은 벤조산은표피삼투압의장벽

(epidermal permeability barrier)

으 로작용할수있으며

, Nunez-Selles

^등¹⁷⁾^은

mango

^를^달인^즙에

는

gallic acid, mangiferin, (+)-catechin, (-)-epicatechin

및 벤 조산등이함유되어있으며

,

^이들^성분은^{항산화작용이}^있다고

보고하였다

. Murakami

^등¹⁸⁾^은^벤조산^유도체인

TAC-101(4-[3,5- bis{trimethylsilyl} benzamido] BA

는

JHH-7

인체간세포상피 암종세포

(JHH-7 human hepatocellular carcinoma cells)

에대하 여항암작용이있다고보고하였다

.

^또한

Ray

^등¹⁹⁾^은^버터에^함

유되어있는무색지방인

tributyltin

성분을구성하는

3

종류의벤

조산염은인체백혈병세포주인

K562

^세포와^인체^유방암^세포

주인

MCF-7

^세포에^민감한^{세포독성을}^나타내는^데

,

^이는^세포

외칼슘이온의유입과활성산소

(ROS)

의생성에의한세포고사 기전에벤조산염이작용하는결과라고보고하였다

. De Graff

²⁰⁾

는

3,4-dihydroxybenzoic acid(protocatechuic acid, DHB)

^를

chinese hamster V79

세포에 처리하면

,

아드리아마이신

(adriamycin, ADR)

^이^나타내는^{세포독성을}^감소시킬^수^있다고

보고하였으며

, Costa-Lotufe

^등²¹⁾^은

p-hydroxy- benzoic acid

^를

암세포주에처리하면세포의성장을억제한다고보고하였다

. Marom

^등²²⁾^은

2,6-hydroxybenzoic acid(farnesylthiosalisylic acid, FTS)

를정상세포인

NIH3T3

섬유모세포와암세포주인

chinese hamster ovary

세포와

B16

흑색종세포에처리하면

,

세 포의성장을선택적으로억제한다고보고하였다

.

본연구는벤조산에방향족고리구조에결합된수산기수와 위치가생리활성이다양한영향을미치기때문에

, benzoic acid (BA), 3-hydroxybenzoic acid(3-HBA), 2,3-dihydroxybenzoic acid(2,3-DHBA), 2,6-dihydroxybenzoic acid(2,6-DHBA), 3,4,5- trihydroxy-benzoic acid(3,4,5-THBA, gallic acid), pyrogallol (PG), 3,4,5-trihydroxybenzoic acid methylester(methylgallate, MG), syringic acid(SA), ferulic acid(FA)

와

quercetin(QC)

를선 정하여

,

카르복실기와수산기의수와위치가정상세포와암종세

포의세포생존율과세포부착저지능에어떠한영향을미치는가 를보고하는바이다

.

실험방법

시약

세포배양에 사용한

Minimum Essential Medium(MEM)

^과

Dulbecco's modified eagle medium(DMEM)

및

RPMI 1640

배 지

, fetal bovine serum, penicillin, streptomycin, fungizone

시 약은

Gibco/BRL(Grand Island, NY, USA)

^제를 ^{사용하였다}

. 3- [4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)

정량과

2,3-bis-[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H- tetrazolium-5-caboxanilide(XTT)

^정량에^사용한^시약과

benzoic acid(BA), 3-hydroxy benzoic acid(3-HBA), 2,3-dihydroxy- benzoic acid(2,3-DHBA), 2,6-dihydroxybenzoic acid(2,6-DHBA), 3,4,5-trihydroxybenzoic acid(3,4,5-THBA, gallic acid), pyrogallol (PG), 3,4,5-trihydroxybenzoic acid methylester(methylgallatge, MG), syringic acid(SA), ferulic acid(FA)

^와

quercetin(QC), (

^분

자구조식

Fig. 1)

^는

Sigma Chemical Co.(ST. Louis, MO, USA)

사에서구입하여사용하였다

.

세포의배양은

CO

2

incubator(Shellab Co., Cornelius, U.S.A.)

를사용하였으며

,

^세포수의^계산은

Turk

^형^{혈구계산기}

(Marienfeld Co., Mergentheim, Germany)

를이용하였다

. MTT

정량

, XTT

정량에는

ELISA reader(Spectra max 250, Molecular Devices, Sunnyvale, U.S.A.)

^를^{사용하였다}

.

세포배양

BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG,

SA, FA

와

QC

의세포독성과암세포에대한세포독성을측정하

기 위하여

,

^{원광대학교} ^의과대학 ^{해부학교실에서}^분양받은

NIH3T3

섬유모세포

(NIH3T3)

는

MEM

배지에

,

서울대학교암 연구소에서분양받은인체피부흑색종세포

(SK-MEL-3),

인체구 강유상피암세포

(KB)

^는

RPMI 1640

^배지에

10% fetal bovine serum, penicillin(25 unit/ml)

및

fungizone

을첨가하여사용하였 다

.

세포의배양은온도

37

^o

C,

습도

95%,

탄산가스농도

5%

의 배양기

(CO

2

incubator, Shellab Co., Cornelius, U.S.A.)

^를^사용

하였다

.

실험을 위하여

,

일차 배양한

flask

의 세포를

0.25%

trypsin-EDTA

로처리하여세포를분리한후

, Turk

형혈구계산 기를이용하여세포수가

5×10

⁴

cells/ml

^가^되도록^세포^부유액을

만들었다

.

MTT정량분석법

Mosmann

의방법²³⁾에의하여

, NIH3T3

섬유모세포

,

인체피 부흑색종세포와인체구강유상피암세포를각배양용기에

5×10

⁴

(3)

cells/ml

^세포수를^넣고

24

^시간^배양^후

, BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

와

QC

자체의세포독 성과암종세포에대한세포독성을측정하였다

. BA, 3-HBA, 2,3- DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

^와

QC

^를^각

각농도별

(1, 25, 50

및

100

µ

M)

로첨가한후

48

시간배양한 후분석당일조제한

50

µ

g/ml MTT

가포함된배양액을배양배 양후배양액을버리고

, dimethylsulfoxide(DMSO)

^를

2 ml/well

씩넣어

5

분간실온방치하여

MTT formazan

을용해한후

,

흡 광도는분광광도계

ELISA reader

로

MTT

의흡광도를측정하여 대조군과비교조사하였다

.

XTT정량분석법

Laminin-coated plate

^는

laminin 1 mg

^을

PBS 2 ml

^에^용해하

여

,

냉장고에보관하면서필요시에

laminin

의농도

(20 mg/ml)

를 결정하였다

.

^찬

PBS

^용액으로^희석하고

,

^이^용액을

24 well plate

의각

well

^에

200

^µ

l

^씩^분주하여^하룻밤^동안^건조시킨^뒤

, PBS

로두번세척하여

3% Bovine Serum Albumin(BSA)

를각

well

에

200

^µ

l

^씩^첨가해^잘^흔들어^준^다음^제거하고

, PBS

^로^두^번

정도세척하였다

.

^배양된

NIH3T3

^섬유모^세포

,

^인체^피부흑색

종 세포와인체 구강유상피암세포

5×10

⁴

cells/ml

세포수를

laminin

^으로

coating

^한^{배양용기에}^넣고

24

^시간^배양한^후

, MTT

정량 분석법과같은 방법으로

, BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6- DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

와

QC

를넣고

,

다시

48

시간배양한후배지는조심스럽게제거하고

, PBS

로두번세척 하였다

.

^여기에

XTT

^와^혼합하여

,

^각

well

^에

200

^µ

l

^주입하고

, 4~6

시간동안배양한후

450 nm

에서

ELISA reader

로흡광도 를측정하였다

.

항산화능

Hatano

등의방법²⁴⁾에의하여

,

각

fraction

을

25, 50, 100, 200, 500 ppm(99.5% ethanol)

^의

5

^가지 ^농도로 ^조제한^용액

0.1 ml (control: 99.5% ethanol)

에

0.1 mM DPPH

용액

(99.5% ethanol) 1.9 ml

^를^가하였다

. Vortex mixer

^로

10

^초간^진탕한^후

37

^o

C

^에서

30

^분^동안

incubation

^시켰다

.

^이후

spectrophotometer

^를^이용하

여

515 nm

에서흡광도를측정하였다

.

양성대조약물로는

L- ascorbic acid

^를

25, 50, 100, 200 ppm(99.5% ethanol)

^의

4

^가지^농

도로조제하여측정하였다

.

^시료의^항산화^작용은

DPPH

^에^대한

전자공여능

(Electron donating ability, EDA%)

²⁵⁾과

IC

50치

(DPPH radical

^형성을

50%

^{억제하는데}^필요한^µ

l

^농도

)

^로^{나타내었다}

.

EDA(%)=Control O.D-sample O.D×100 Control O.D.

Fig. 1 −

Molecular structures of BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA and QC.

(4)

Sample O.D.:

^시료를^가한^시험액의^흡광도

Control O.D.:

^시료^대신

ethanol

^을^가한^시험액의^흡광도

IC₅₀결정

BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

와

QC

의

IC

50결정은배양중인

NIH3T3

섬유모세포

,

인 체피부흑색종세포와인체구강유상피암세포를각배양용기당

5×10

⁴

cells/ml

씩 넣고

24

시간 배양 후

, 1, 25, 50, 100

µ

M

의

BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

^와

QC

^를^첨가하여

48

^시간^배양한^후

, MTT

^및

XTT

^정

량을하여이들각각에대한

50%

억제농도인

IC

50을회귀직선 식²⁶⁾에의해구하였다

.

세포의광학현미경적관찰

세포의광학현미경적관찰을위하여

, NIH3T3

섬유모세포와인 체피부흑색종세포및인체구강유상피암세포는각각세포분주 후

, BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

^와

QC

^를^처리하여

MTT

^를^처리하기^전에

,

^{도립위상차}^현

미경

(Inverted Microscope, Olympus, Japan)

^으로^{관찰하였다}

.

통계처리

실험결과의통계처리는

Students' t-test

^에^준하였고

,

^유의성^검

정은

one way ANOVA t-test

와비교하였으며

, p-value

가

0.05

미만일경우유의한것으로판정하였다

. 실험결과 및 고찰

최근에는페놀화합물의세포독성과분자구조와의관계에관 한연구뿐만아니라

,

페놀성성분의고리구조에결합된수산기 의위치에따른선택적세포독성에관한연구도다양하게이루 어지고있는데

, 3,4-dihydroxybenzoic acid

의암종세포주에대한 성장억제효과²¹⁾와아드리아마이신에의하여유발되는세포독성 을감소시킬수있다고보고하였다

.

²⁰⁾

2,3-Dihydroxybenzoic acid

에결합된수산기에대한다양한기능에대하여도보고되고있 으며

,

^27-29)

2,6-dihydroxybenzoic acid

는

chinese hamster ovary

세포

, NIH3T3

^섬유모^세포

, B16

^{피부흑색종}^세포에서

GTP-

^결

합단백질의메틸화에의하여세포의성장을억제하는것으로보 고하였다

.

²²⁾정상세포에대한세포독성은적으며

,

암세포에대한 세포독성은강한생리활성물질즉선택적세포독성을나타내는 생리활성물질을연구하기위하여

, BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6- DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

와

QC

를선정하였다

.

정

상세포인

NIH3T3

^섬유모^세포에^{암종세포인}^인체^{피부흑색종}

세포와인체구강유상피암세포에적용한후

,

세포생존율

,

세포 부착저지능

,

라디칼소거능측정및광학현미경적으로관찰하였다

.

NIH3T3섬유모세포에대한세포독성

BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

와

QC

를정상세포인

NIH3T3

섬유모세포주에처리한 후

, 48

^시간이^지나면

, MTT

^흡광도가^농도^{의존적으로}^감소하였

으나

,

모든화합물에서농도의존성이미약한변화가관찰되었다

.

세포생존율을

MTT

정량분석법으로측정한결과에의하면

,

NIH3T3

^섬유모^세포주에^대한^{세포독성은}

327.6~4,972.5

^µ

M

범위로관찰되었다

. 25

µ

M PG

에서부터

NIH3T3

섬유모세포주 에대한세포독성이통계적으로유의성이관찰되었으며

(p<0.05, p<0.01), 100

^µ

M QC

^에서만^{통계적으로}^유의성이^{측정되었다}

.

정상 세포주에 대한 세포 생존율도

PG

에서 최소억제농도

(327.6

µ

M)

로가장강한세포독성을관찰할수가있었으나

,

다른 방향족화합물은농도증가에따라

,

^세포^생존율의^변화에^큰^차

이가관찰되지않았다

. PG

는

BA

의최소억제농도

(1,225.8

µ

M)

보다약

3.7

배정도로높은세포독성효과가관찰되었으며

, PG

유도체로서

PG

^의^{벤젠고리에}^{카르복실기가}^치환된

GA

^의^최소

억제농도

(2,552.4

µ

M)

는

PG

의최소억제농도보다약

7.8

배정도 의약한활성이측정되었지만

, GA

^의^{카르복실기의}^메틸^에스테

화된

MG

^의^최소^억제농도

(1,667.7

^µ

M)

^는

PG

보다는

5.1

배정도로낮은활성이관찰되었다

.

방향족화합물중 에벤조산에올소

-

메타수산기가치환된

2,3-DHBA

의최소억제 농도

(3,105.8

^µ

M)

^는^올소

-

^올소^수산기가^치환된

2,6-DHBA

^의^최

소억제농도보다약

1.6

배정도로높은활성이관찰되었다

. 2,6- DHBA

^의^최소^{억제농도는}

PG

^의^최소^{억제농도보다}^약

15.2

^배

정도로가장낮은세포독성이관찰되었으며

,

^나머지^벤조산^유

도체들의최소억제농도는

PG

4.2~15.2

배정도로낮은세포독성이측정되었다

.

^특히^방향족^화합물중

에프라보노이드인

QC

^의^{최소억제농도}

(1,463.9

^µ

M)

^는

PG

^의^최

소억제농도보다약

4.5

배정도로높은세포생존율이나타났다

. MG

^와^관련^화합물에^대한

MTT

^정량^분석법에^의한

IC

50측정값 은

PG>BA>3-HBA>QC>MG>3,4,5-THBA>FA>2,3-DHBA

>SA>2,6-DHBA

순서로활성이감소되어나타났다

. NIH3T3

섬유모세포에대한방향족화합물의세포독성의연구결과에의 하면

,

페놀산인

PG

가정상세포주에대하여높은세포독성이관 찰되어

,

이들페놀산유도체에대한세포독성의지속적인연구 가 필요함을 알 수가 있었다

(Table I).

^30,31)

BA, 3-HBA, 2,3- DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA

와

QC

를정 상세포인

NIH3T3

섬유모세포주에처리한후

, 48

시간이지나면

, MTT

^{흡광도처럼}

, XTT

^흡광도가^농도^{의존적으로}^{감소하였으}

나

,

모든화합물에서농도의존성이미약한변화가관찰되었다

.

세포부착저지능을

XTT

정량분석법으로측정한결과에의하면

,

NIH3T3

^섬유모^세포주에^대한^세포부착^저지능은

360.0~3,822.1

µ

M

범위로관찰되었다

. 25

µ

M PG

에서부터

NIH3T3

섬유모세 포주에대한세포부착저지능이통계적으로유의성이관찰되었

(5)

으며

(p<0.05), 100

^µ

M QC

^에서만^{통계적으로}^유의성이^측정되

었다

.

정상세포주에대한세포부착저지능도

PG

에서최소억제 농도

(360.0

^µ

M)

^로^가장^강한^세포^민감성을^관찰할^수가^있었으

나

,

^반면^다른^방향족^화합물은^{농도증가에}^따라

,

^세포부착^저지

능의변화에큰차이가관찰되지않았다

. BA

(1,292.1

^µ

M)

^는

PG

3.6

^배^정도로^활성

이낮은세포부착저지능이측정되었으며

, PG

^의^{벤젠고리에}^카

르복실기가치환된

GA

(2,445.6

µ

M)

는

PG

의최 소억제농도보다약

6.8

^배^정도의^약한^활성이^{측정되었지만}

, GA

의카르복실기의메틸에스테화된

MG

(1,818.9

µ

M)

는

PG

의최소억제농도보다는약

5.1

배정도로낮은활성 이관찰되었다

.

^{프라보노이드인}

QC

(2,410.8

^µ

M)

는

PG

6.7

^배^정도로^낮은^세포부착^저

지능이측정되었으며

,

방향족화합물중에벤조산에올소

-

메타수 산기가치환된

2,3-DHBA

(3,552.9

^µ

M)

^는^올소

-

올소수산기가치환된

2,6-DHBA

1.1

배 정도로높은활성이관찰되었다

. 2,6-DHBA

는

PG

의최소억제

농도보다약

10.6

^배^정도로^가장^낮은^세포부착^저지능이^관찰

되었으며

,

다른벤조산유도체의최소억제농도는

PG

의최소억

제농도에비하여약

3.9~10.6

배정도로낮은세포부착저지능이

측정되었다

.

^이와^같이^세포부착^저지능의^활성은^{세포독성과}^다

르게측정되었다

. MG

와관련화합물의세포에대한민감성은

XTT

정량분석법에의한

IC

50측정값은

PG>BA>3-HBA>MG>

FA>QC>3,4,5-THBA>SA>2,3-DHBA>2,6-DHBA

^순서로 ^세

포부착저지능이감소되어나타났다

(Table I).

^30,31)

인체구강유상피암종세포에대한세포독성

BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG,

SA, FA

^와

QC

^의^인체^{구강유상피}^{암종세포에}^대한^세포^생존율

은농도의존적으로흡광도를감소시켰으며

,

^벤조산은

50

^µ

M

^농

도와

100

µ

M

농도에서통계적으로유의성이관찰되었지만

, (p<0.05), 100

^µ

M 3-HBA

^에서^{통계적으로}^유의성이^{관찰되었다}

(p<0.05). 2,3-DBHA, 2,6-DHBA

^와

3,4,5-THBA

^는

50

^µ

M

^농도

(p<0.05)

와

100

µ

M

농도

(p<0.01)

에서통계적으로유의성이있 었다

. PG

^의^경우에는

50~100

^µ

M

^농도^범위에서

MTT

^의^흡광

도변화가관찰되었으며

,

^인체^{구강유상피}^{암종세포주에}^대한^세

포독성도통계적으로유의성이증가되어관찰되었다

(p<0.01, p<0.001).

^그렇지만

MG

^의^경우에는

MTT

^의^흡광도^변화가^다

른화합물보다크게관찰되었으며

, 25

µ

M MG

부터통계적인유 의성도가장높게측정되었다

(p<0.001).

일반적으로

100

µ

M

방 향족화합물은통계적으로유의성이측정되었다

.

^인체^구강유상

피암종세포에대한세포생존율은

MG

(95.5

^µ

M)

가가장높은세포독성이관찰되었으며

,

정상세포의최소억제

농도보다약

52.1

^배^정도의^높은^활성으로^세포^생존율을^억제

하는것으로관찰되었으나

, Borenfreund

등³¹⁾에의하면저독성 으로측정되었다

. MG

의유도체인벤젠고리에메틸에스테르가 없는

PG

^의^{최소억제농도}

(106.4

^µ

M)

^는^약

1.1

^배^정도로

MG

^보다

낮은세포생존율이측정되었으며

, 3,4,5-THBA

(168.4

µ

M)

는

1

번위치에카르복실기가없는

PG

보다약

1.6

배 정도로낮은활성이측정되었다

.

^{프라보노이드인}

QC

^의^최소^억

제농도

(310.9

µ

M)

는

3-HBA

의최소억제농도와큰차이가없게 관찰되었다

.

다른방향족화합물의최소억제농도는약

222~334

µ

M

^범위의^활성이^{나타났으나}

,

^벤조산의^최소^억제농도

(419.9

^µ

M)

는다른방향족화합물보다가장낮은세포독성이측정되었다

. 2,3-DHBA(260.7

^µ

M)

^와

2,6-DHBA(222.4

^µ

M)

^의^경우에

,

^세포독

성은두분자구조의수산기에대한위치에따라

,

^최소^억제농도

가다르게측정되었는데

,

두화합물의구조이성질체에대한세 포독성은

260.7

^µ

M>222.4

^µ

M

^와^같이^두^개의^수산기의^올소

-

Table I −

The cytotoxic activity of aromatic compounds by the colorimetric method

^a

Compound IC

50

(

^µ

M)

^b

MTT XTT

NIH3T3 SK-MEL-3 KB NIH3T3 SK-MEL-3 KB

BA 3-HBA 2,3-DHBA 2,6-DHBA 3,4,5-THBA PG MG SA FA QC

1,225.8 1,385.0 3,105.8 4,972.5 2,552.4 0,327.6 1,667.7 3,340.9 2,753.0 1,463.9

501.9 556.2 468.7 260.7 471.7 292.2 103.9 501.6 143.0 199.7

419.9 323.1 260.7 222.4 168.4 106.4 095.5 282.3 334.0 310.9

1,292.1 1,414.9 3,552.9 3,822.1 2,445.6 0,360.0 1,818.9 2,462.4 2,125.0 2,410.8

464.4 628.5 414.9 388.7 512.7 341.2 232.1 438.0 311.6 280.9

375.5 366.0 299.5 235.7 216.6 218.9 491.0 418.8 184.5 168.8

a

BA, 3-HBA, 2,3-DHBA, 2,6-DHBA, 3,4,5-THBA, PG, MG, SA, FA, and QC were examined in four concentrations in triplicate experiments.

b

IC

50