천종운․정진태․오훈규*․배종엽

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대한소화기학회지 2005;46:440-446

서 론

Tumor necrosis factor-α (TNF-α)는 다양한 염증세포나 종 양세포에서 분비되어 면역조절 기능과 항종양 효과 등을 나 타낸다. 주로 활성화된 단핵구나 대식세포에서 분비되지만 T, B 림프구, Natural Killer (NK) 세포, lymphotoxin activated

cytotoxic cell, 섬유세포, 호중구, 호산구, 비만세포 등의 염 증세포와 여러 종양세포에서도 분비된다. TNF-α 분비를 촉 진하는 물질로는 lipopolysaccharide, lipid A, 바이러스, 진균 혹은 기생물의 항원, mitogen, C5a 등과 interleukin-1을 포함 한 많은 사이토카인이 있다.^1-3 TNF-α 유전자 정보는 6번 염색체 단완에 있고, 주조직적합항원복합체(major histo- ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ

Correspondence to: Hoon Kyu Oh, M.D.

Department of Pathology, Catholic University Medical Center Daemyeong-4 dong, Nam-gu, Daegu 705-718, Korea

Tel: +82-53-650-4156, Fax: +82-53-653-8672 E-mail: [email protected]

동종이식된 CT-26 생쥐 대장암종 모델에서 TNF-α가 종양혈관신생에 미치는 영향

대구가톨릭대학교 의과대학 내과학교실, 병리학교실*, 의학통계학교실^†

천종운․정진태․오훈규*․배종엽

*

․신임희

^†

․조창호

*

Effects of TNF-α on Angiogenesis in CT-26 Mouse Colon Carcinoma Homograft Model

Jong Woon Chun, M.D., Jin Tae Jung, M.D., Hoon Kyu Oh, M.D.*, Jong Yup Bae, M.D.*, Im Hee Shin, Ph.D.^†, and Chang Ho Cho, M.D.*

Departments of Internal Medicine, Pathology* and Bio-statistics^†, Catholic University of Daegu School of Medicine, Daegu, Korea

Background/Aims: Tumor necrosis factor-α (TNF-α) exerts its anti-tumor effect through direct cytotoxicity on tumor cells and damage to the tumor vasculature. However, its role in tumor angiogenesis is controversial. We evaluated the angiogenic effect of TNF-α on BALB/c mouse colon carcinoma homograft model. Methods: Ten BALB/c mice were inoculated intraperitoneally with CT-26 mouse colon carcinoma cells. After a week, recombinant mouse TNF-α (2μg/mL) were given four times on every other day to five animals and the same volume of phosphate buffered saline was given at the same interval to five animals as control. Harvested tumor tissues were stained by immunohistochemistry with CD31 and VEGF antibodies. Number of microvessels and VEGF expression were counted by light microscope. Results: The mean microvessel counts per 200x field of TNF-α treated animals were 70.2±7.8 and those of nontreated animals were 83.8±8.3 (p＜0.05). The VEGF score of both groups were 3.

Conclusions: TNF-α treated animals showed decreased microvessel counts in tumor tissue but VEGF expression in both groups showed no difference. Therefore, TNF-α showed antiangiogenic effects on colon carcinoma homograft model. (Korean J Gastroenterol 2005;46:440-446)

ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ

Key Words: TNF-α; Angiogenesis; Carcinoma, Colon; Homograft model

ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ 접수: 2005년 7월 25일, 승인: 2005년 11월 19일 연락처: 오훈규, 705-718, 대구시 남구 대명 4동 3056-6

대구가톨릭의료원 병리과

Tel: (053) 650-4156, Fax: (053) 653-8672 E-mail: [email protected]

* 이 연구는 대구가톨릭대학교 의과학연구소 연구비의 지원으 로 이루어졌음.

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천종운 외 5인. 동종이식된 대장암종 모델에서 TNF-^α가 혈관신생에 미치는 영향 441

compatibility antigen complex)와 인접해 있다.^3,4 TNF-α 수용 체는 2개가 있는데, TNF-R1은 55 kDa으로 주로 상피세포에 존재하며, 세포 내 도메인을 가지고 있어 세포자멸사와 관 련된 수용체이다. TNF-R2는 75 kDa으로 골수세포에 존재하 며, 가슴샘세포나 T 림프구에 대한 증식, 항염증, 항자멸사 와 주로 전신반응으로 나타나는 증상과 관련있다.^2,5-7 TNF- α는 다양한 항종양 효과가 있는데 종양세포에 대한 직접 세포독성 효과, 세포자멸사 유도, 면역세포의 활성화와 화 학매개체의 생성과 분비에 관여한다. 그리고 종양세포의 항 원을 노출시킴으로써 면역성을 증가시켜 종양면역 반응을 촉진하고, 활성산소를 생성하여 단백변성, 사립체 손상, 지 질과산화, DNA 손상 등을 초래한다.² 또한 종양내피세포에 선택적으로 작용하여 혈액응고 기전을 활성화시켜 혈관 내 응고를 유발하여 조직괴사를 초래한다.^2,6 그러나 TNF-α가 종양의 혈관신생에 미치는 영향은 혈관신생을 촉진 또는 억 제하거나, 저농도에서는 혈관신생을 유발하고 고농도에서 는 혈관신생을 억제하는 등^6,8,9 다양한 주장이 있다. 혈관신 생의 억제 주장의 보고는 TNF-α가 정상혈관에는 영향을 미치지 않고 종양혈관에 직접 손상을 초래하여 혈관 투과성 을 증가시킴으로써 혈장과 혈구를 누출시키며^6,10 동시에 내 피세포 항원 발현을 촉진하고, 세포 성장을 억제함으로써 종양 내 혈관신생을 방해한다는 것이다.^2,6 그러나 TNF-α가 fibroblast growth factor, platelet activating factor, urokinase type plasminogen activator를 통하여 basic fibroblast growth factor (bFGF)와 vascular endothelial growth factor (VEGF)에 의한 혈관신생을 돕거나, 내피세포나 종양세포 내에서 IL-8, bFGF, VEGF의 전사인자를 활성화하여 혈관신생을 촉진하 며,¹¹ 실험적으로 TNF-α를 억제하거나 TNF-α 전사인자를 억제할 경우 혈관신생이 억제되는 점으로 미루어 TNF-α는 혈관신생을 촉진한다는 주장도 있다.^12,13 외과술로 절제된 맥락막의 혈관신생을 관찰하면 대식세포와 내피세포에 TNF-α의 발현이 증가하며, VEGF mRNA 발현도 동시에 증 가하였다.¹⁴ 토끼 각막이나 닭의 융모막에서 TNF-α는 주위 세포나 염증세포에서 혈관응고인자의 분비를 자극하여 새 로운 혈관의 생성에 관여하는 듯하다.^15,16

위 문헌들을 종합하면 TNF-α는 여러 가지 기전을 통하 여 정상혈관이나 종양혈관에 다양한 효과를 나타내며 실험 방법이나 약물 투여 방법과 용량에 따라 혈관신생을 촉진하 거나 억제할 것으로 보인다. 연구자들은 복강 내에 종양세 포주를 주입하여 복강 내 전이암종 모델을 만들고 TNF-α 를 투여한 뒤 종양 증식에 필수적인 혈관신생의 정도를 측 정해 보고자 하였다. 이를 위하여 혈관 표지자인 CD31에 대 한 면역조직화학검사를 통하여 종양과 주위 조직에서 미세 혈관 밀도를 측정하고 동시에 VEGF 발현을 면역조직화학 검사로 측정함으로써 복강 내 전이암종 모델에서 혈관신생

에 관여하는 TNF-α의 역할을 알아보고자 하였다.

대상 및 방법

1. 대장암 동물모델

복강 내 전이암 동물모델을 만들기 위하여 생후 약 7-8주 된 20-25 g 정도의 BALB/c 암컷 생쥐를 사용하였다. 한국세 포주은행에서 구입한 설치류 대장전이암종에서 배양한 CT- 26 세포주를 RPMI 1640 (Gibco, Charsbad, CA, USA)을 기본 배양액으로 이용하여 10% 우태아 혈청, penicillin 100 unit/

mL, streptomycin 0.1 mg/mL이 함유된 세포배양용 배지와 함 께 37^oC, 5% CO2의 항온항습 배양기에서 배양하였다. 배양 된 세포를 마리당 1×10⁶개씩 복강 내로 주사하였다. 동물 실험은 연구자 소속 대학교 실험동물운영위원회의 승인을 받았다.

2. TNF-α 투여

5마리의 실험동물에 상기한 종양세포를 복강 내 주사한 후 7일, 9일, 11일, 13일째 각각 recombinant mouse TNF-α (Sigma, St. Louis, MO, USA)를 마리당 2μg/mL 농도로 0.5 mL phosphate buffered saline (PBS)에 녹여 복강 내에 주사하 였고, 15일째 희생하였다. TNF-α의 용량과 투여 기간은 Brouckaert 등¹⁷의 방법을 참고하여 종양세포 주사 후 종양 의 성장을 1주일간 기다린 후 2일 간격으로 TNF-α를 투여 하였고, 대조군으로는 종양세포를 복강 내 주사한 동일한 실험동물 5마리에 TNF-α 대신에 PBS를 0.5 mL씩 주사하였 다.

3. 조직검사

실험동물은 종양세포 주입 후 15일째 희생하여 복강 내 주변 정상조직을 일부 포함하여 종양을 완전 절제하였다.

종양의 절반은 영하 20^oC에 냉동시킨 후 면역조직화학검사 를 하였고 나머지 조직은 10% 중성 포르말린 용액에 고정 한 후 통상의 과정을 거쳐 파라핀에 포매한 후 포매된 조직 을 4μm 두께로 박절하여 H&E 염색을 실시하여 일반 광학 현미경으로 검색하였다.

4. 면역조직화학검사

CD31 면역염색을 위하여 냉동된 조직을 cryotome을 사용 하여 10μm 두께로 박절하여 organosaline을 부착한 슬라이 드(Probe-on plus slide, Fisher, Pittsburgh, PA, USA)에 부착하 였다. VEGF 염색을 위하여 파라핀에 포매된 조직을 박절하 여 동일한 슬라이드에 부착한 후 수세하였다. 10 mM citrate buffer (pH 6.0)를 전자렌지(750 watt)로 5분간 가열한 후 슬

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442 The Korean Journal of Gastroenterology: Vol. 46, No. 6, 2005

라이드를 넣고 5분간 2회 가열 처리하여 항원을 표출하였 다. 20분간 실온에 방치하여 온도를 서서히 낮춘 뒤, Tris 완 충액(50 mM, pH 7.4)으로 세척한 후, 0.3% 과산화수소용액 에 처리한 후 Tris 완충액으로 세 차례 세척하였다. 조직 내 비특이항원을 차단하기 위하여 정상 말 혈청에 30분간 반응 시키고, CD31 항체(Pharmingen, San Jose, CA, USA, 1：20) 와 VEGF 항체(Pharmingen, San Jose, CA, USA, 1：60)를 각 각 희석하여 4^oC 수조에서 하룻밤 반응시켰다. 다시 Tris 완 충액으로 세 차례 세척하고 이차항체(Vector Elite kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA)를 30분간 반응시킨 후 avidin- biotin conjugate reagent를 실온에서 45분간 반응시켰 다. 이를 세척한 후 diaminobenzidine tetrahydrochloride (Sigma, St. Louis, MO, USA)로 발색시킨 후 증류수에 수세 하고, Mayer hematoxylin으로 20초간 대조 염색한 후 봉입 하여 관찰하였다.

5. 판정

VEGF에 대한 면역조직화학염색의 평가는 종양세포에서 염색이 없을 때 음성 반응을 0점, 10% 미만의 종양세포에서 약한 양성 반응을 보일 때 1점, 10-50%를 2점, 50% 이상을 3점으로 하였다. 미세혈관 측정을 위하여 광학현미경으로 200배 배율로 조직 상태가 양호하고 단위 면적당 미세혈관 수가 많은 종양 내 임의의 부위를 골라 CD31에 양성으로 염색되는 미세혈관 개수를 세었다. 이어 인접 부위로 이동 해 연속해서 3군데 부위의 총 미세혈관수를 세었다. 미세혈 관의 판정은 세정맥, 모세혈관, 세림프관만을 판정하기 위 하여 CD31 항체에 양성이며 인접 세포군과 명백하게 분리 되는 1개의 내피세포 혹은 내피세포군을 하나의 혈관으로

세었으며 내강을 가진 경우 근육층을 가지는 큰 혈관은 제 외하였다.¹⁸ 면역조직화학염색의 관찰 시 관찰자는 대조군 과 실험군을 알 수 없도록 하였다.

6. 통계처리

대조군과 처치군 간의 미세혈관 밀도에 관해서는 독립 t- test (two-sample t-test)를 시행하였고 표본 크기가 각각 5개 로 비교적 소수이므로 비모수 접근방법인 Mann-Whitney U-test도 함께 실시하였으며 유의수준 0.05 미만으로 하였다.

결 과

1. 육안검사 소견

실험동물의 복강을 개복하였을 때 종양은 장간막과 대장 을 따라 작은 염주와 같은 다발 종괴를 형성하고 있었다(Fig.

1). 실험군과 대조군 사이에 육안 소견에 차이는 없었다.

2. 광학현미경 소견

종양은 대장 장간막을 따라 성장하고 있었으며 동시에 대 장 장막과 근육층을 침범하였다. 세포는 선 구조를 띠지는 않았고 대부분 판상으로 무정형 증식을 하였으며 간혹 물결 흐름 모양의 배열을 하는 부위도 관찰되었다. 각 세포는 짧 은 방추형 또는 난원형 핵을 가지고 있었으며 짙은 염색성, 다형성, 역형성을 보이는 핵을 가지고 있었고 중등도 또는 빈약한 호산성 세포질을 보였다. 판상 증식을 하고 있는 종 양세포들 사이에 미세혈관이 분포하였다. 그리고 대조군과 실험군에서 미세한 괴사부위가 몇 군데 관찰되었고 괴사된

Fig. 1. Gross findings. There are diffuse infiltrates of numerous tumor masses (arrow) along the mesenteric border. Tumor mass shows yellowish red, variable sized nodular growth pattern with focal hemorrhagic spots.

Fig. 2. Microscopic findings. Tumor cells are spreading in diffuse sheet like pattern with focal storiform arrangements. Small necrotic areas are seen. Tumor cells are infiltrating through colonic muscle layer and invading the submucosal layer, focally (H&E stain, ×100).

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Chun JW, et al. Effects of TNF-α on Angiogenesis in CT-26 Mouse Colon Carcinoma Homograft Model 443

주위로 염증세포가 침윤되었으나 판상으로 성장하는 곳에 서 염증세포는 관찰되지 않았다. 혈관은 주로 모세혈관으로 종양세포 사이에서 관찰되었고 간혹 정맥 크기의 혈관도 관 찰되었다(Fig. 2). 미세혈관은 두 군 모두 광학현미경에서 비 슷한 밀도로 보였다.

3. 면역조직화학검사

1) 미세혈관 증식

CD31에 대한 면역조직화학염색 후 200배 배율의 광학현 미경으로 세 곳을 골라 양성으로 반응하는 미세혈관 개수를 세었다. 혈관 분포는 장간막을 따라 발생한 종괴나 대장 벽 을 침범한 종괴 모두 비교적 균일하게 분포하였다(Fig. 3).

측정한 종양조직의 미세혈관 개수는 대조군은 각각 80, 78, 95, 90, 76개로 평균 83.8±8.3개였다. TNF-α 투여군은 각각

68, 60, 77, 67, 79개로 평균 70.2±7.8개였다. 두 군의 비교를 위하여 독립 t-test와 비모수 접근 방법인 Mann-Whitney u test 모두에서 유의수준 0.05 미만으로 두 군은 유의한 차이 가 있었다(Fig. 4).

2) VEGF 발현

VEGF는 대조군과 실험군 모두 종양세포의 세포질에서 강하게 발현하였고 종양세포의 절반 이상에서 대부분 발현 하여 대조군, 실험군 모두 3점으로 판정되었다. 개개 발현 강도는 약간의 차이는 있었으나 염색정도의 차이로 보였으 며 두 군 간에 현미경 소견으로 구분할 수 있을 정도의 차 이는 없었다(Fig. 5).

Fig. 3. Immunohistochemical stain with CD31. Variable sized vessels are highlighted by endothelial cell marker, CD31. Many clusters of endothelial cells and venule- sized vessels are seen. There is a statistically significant difference between control group (A) and TNF-α treated group (B) (p＜0.05) (Immunohistochemistry, × 200).

A B

Fig. 4. Comparison between the number of microvessels in TNF-α treated group and control group (TNF-α treated group, 70.2±7.8;

control group, 83.8±8.3; p＜0.05).

Control group TNF-α treated group

Microvessel count

40.0 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0 100.0

Fig. 5. Immunohistochemical stain with VEGF. Tumor cells show marked positive stainings in cytoplasm (Immunohistochemistry, ×400).

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444 대한소화기학회지: 제46권 제6호, 2005

고 찰

TNF-α는 항종양 효과가 있어 다양한 임상시험이 진행되 고 있지만 TNF-α의 짧은 생물학 반감기와 고농도 투여 시 나타나는 각종 부작용 때문에 결과는 만족스럽지 못하다.² 일반적으로 TNF-α의 정맥 내 투여는 치사량에 가까울 정 도로 농도를 높여야 항종양 효과가 있다.^17,19 이 경우 피로 감, 발열, 오한, 두통, 식욕부진, 설사, 오심, 구토, 심하게는 저혈압, 간독성, 저혈소판증, 악액질, 쇼크 등이 보고되고 있 어서 지금은 별로 사용하지 않는다. 그러나 복강 내 직접 투 여, 종양 내 직접 투여 혹은 isolated limb perfusion system에 서 사용하는 등 국소적으로 사용하는 경우가 많고,^2,19,20 부 작용을 줄이기 위하여 TNF-α 용량은 줄이는 대신 다른 약 제와 병합 사용하는 경우도 있다.^17,19 TNF-α의 항종양 효과 는 종양세포에 대한 직접 세포독성, 세포자멸사 유도, 면역 계 활성화 혹은 종양혈관세포 손상으로 인한 간접 종양억제 효과 등을 들 수 있다.² 이번 연구에서는 설치류 대장암세포 에서 얻은 종양세포주를 실험동물 복강 내에 주사한 후 일 주일 동안 복강 내에서 종양세포가 증식하기를 기다린 후 2 일 간격으로 각각 TNF-α 2μg/mL를 복강 내에 주사한 후 미세혈관 숫자와 VEGF 발현을 관찰하였다. 그 결과 실험군 은 대조군에 비해 종양의 육안 크기의 차이는 없었지만 미 세혈관의 수는 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 감소하 였다.

인간 피부조직을 이종이식한 생쥐에 TNF-α를 마리당 0.1 μg 투여한 후 6시간째 관찰한 결과 피부 각질세포 괴사와 내피세포 손상이 보였고,²¹ 흑색종을 이종이식한 동물실험 에서 종양 유발 후 10일째부터 마리당 3μg의 TNF-α를 2일 마다 5회 정맥주사한 경우 TNF-α 치료군에서 종양 증식 정 도가 감소하였으며,¹⁷ 비소세포폐암의 이종이식 동물에서 recombinant human TNF-α와 mutant TNF-α를 마리당 2 μg 씩 3일간 정맥 투여시 종양의 성장이 억제되었던 보고에서 도 보듯이⁵ 저자가 투여한 저농도 TNF-α는 혈관신생을 억 제한다고 볼 수 있다. 실제로 비소세포폐암종 환자 조직에 서 TNF-α mRNA 발현군이 비발현군에 비하여 미세혈관수 가 적었고,²² 비소세포폐암종에서 TNF receptor가 감소된 경 우 예후가 더 나쁘다고 보고한 점 등으로 보아 TNF-α는 종 양의 혈관신생을 억제하므로 폐암종 환자의 생존에 도움을 줄 수 있다.²³ 그러나 선암 세포주를 복강 내 주사한 후 주 당 5회씩 TNF-α를 투여하였을 때 농도에 따라 상반되는 효 과가 있으며,^3,24 간세포암 세포주를 사용한 실험에서도 고농 도 TNF-α 투여 시 세포사멸을 초래하였으나 저농도에서는 효과가 없다는 보고도 있어²⁵ 이들 연구가 종양세포의 차이 때문인지 실험방법의 차이 때문인지는 결론을 내리기 어렵 다. 이상을 종합해 보면 TNF-α 투여는 VEGF 감소를 동반

하리라 기대한다. 그러나 이번 실험에서 관찰한 VEGF에 대 한 면역염색의 경우 실험군과 대조군 모두 다량의 VEGF 발 현을 보였고 두 군 간 염색 정도에는 차이가 없었다. Human umbilical vein endothelial cell과 동물실험에서 TNF-α를 처 치한 후 시간과 TNF-α 농도에 비례하여 VEGF 수용체가 감소하였고,^8,26soluble TNF receptor 1을 사용한 유전자 치료 로 VEGF 수용체가 활성화된다는 점,²⁷ TNF-α가 VEGF 수 용체의 인산화를 억제함으로써 VEGF 활성화를 막는다는 보고 등을¹¹ 미루어 보아 TNF-α는 종양세포에서 분비되는 VEGF 양과 무관하게 VEGF 수용체의 감소나 기능 억제를 통하여 미세혈관 증식을 억제하는 것 같으나, VEGF 면역조 직화학검사만으로 설명하기는 부족하며 이에 대한 연구는 더 진행되어야 한다.

TNF-α에 의한 혈관내피세포손상 기전으로는 혈관내피세 포의 주조직적합항원복합체 발현 증가나 사이토카인과 화 학매개체 증가^11,28 혹은 TNF-α 수용체와의 결합으로 유발 된 세포자멸사 등을 들 수 있다.²⁹ 또한 혈관내피세포 투과 성을 증가시키고 응고기전을 촉진하여 종양혈관을 막음으 로써 종양 성장이 억제된다.^6,11 TNF-α에 의한 세포자멸사 는 G1기에 있는 세포들이 손상을 더 잘 받는다는 점이나,³⁰ 실제 혈관조영상을 이용한 임상실험 결과를 보면 정상혈관 은 이상이 없고 종양혈관에서만 혈액 유출과 적혈구 정체를 유발한다는^18,26 점들로 미루어 보아, TNF-α는 세포나 정상 혈관에는 영향을 끼치지 않으면서 활발히 분열하여 증식하 는 종양혈관만 손상시킨다.^6,18,26,31

결론으로 복강 내 전이암 모델로서 설치류 대장전이암세 포주를 사용한 동종이식모델에서 TNF-α가 종양혈관 신생 에 미치는 영향을 조사한 결과 TNF-α는 종양 내 미세혈관 수를 감소시켰으며, VEGF 발현에는 영향이 없어서 TNF-α 는 복강 내 전이암종 모델에서 혈관신생을 억제함을 알 수 있었다.

요 약

목적: TNF-α에 의한 항종양 효과는 종양세포에 대한 세 포독성과 종양혈관에 대한 손상으로 일어난다. 그러나 TNF-α가 종양의 혈관신생에 미치는 영향은 혈관신생을 촉 진한다는 주장도 있고 반대로 억제한다는 주장도 있다. 저 자는 TNF-α에 의한 항종양 효과를 규명하기 위하여 복강 내에 종양세포주를 주입하여 종양을 만들고 TNF-α를 투여 한 뒤 종양 혈관신생 정도를 광학현미경과 면역조직화학검 사로 측정하였다. 대상 및 방법: BALB/c mice에 CT-26 설 치류 대장암세포주를 복강 내 주사한 후 1주일 뒤부터 2일 간격으로 recombinant mouse TNF-α를 마리당 2 μg/mL씩 4 회 주사한 후 면역조직화학검사로 CD31과 VEGF 발현을 측

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천종운 외 5인. 동종이식된 대장암종 모델에서 TNF-^α가 혈관신생에 미치는 영향 445

정하였다. 결과: TNF-α 투여군의 평균 미세혈관수는 70.2

±7.8개이며 대조군은 83.8±8.3개로 TNF-α 투여군이 의미 있게 감소하였고(p＜0.05), VEGF는 두 군 모두 강하게 발현 되어 차이가 없었다. 결론: 설치류 대장암세포주를 사용한 동종이식모델에서 TNF-α는 종양 내 미세혈관 숫자를 감소 시켰으나, VEGF 발현은 두 군 간에 차이가 없는 것으로 보 아 TNF-α는 복강 내 전이암종 모델에서 혈관신생을 억제 하였다.

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