Synthesis and Cytotoxicity of Thioureido MAPP Derivatives

약학회 지 제 48 권 제 5 호 272-277 (2004)

Vol. 48，No. 5

稱學舍확

치오우레이도 MAPP 유도체의 합성과 세포독성

전 상철

김 연 숙

김미영

임 채 욱

임 철부 중앙대 학교 약학대 학 의 약화학 교실

(Received September 6，2004; Revised September 15, 2004)

Synthesis and Cytotoxicity of Thioureido MAPP Derivatives

S ang C h u l Ju n , Youn Sook K im , M i Y oung K im , C haeuk Im # and C h u l B u Y im Division of M edicinal Chemistry, College of Pharmacy, Chung-ang University, Seoul 156-756’ Korea

Abstract — The 2-amino- 1-phenylpropanols 4—7 were reacted with isothiocyanates to afford the 20 thioureido MAPP derivatives 8 a ~ lle , which were tested their cytotoxic activity by MTT assay. The cytotoxicity of alkylthioureido com­

pounds were increased and decreased by alkyl chain length from C 8 to C14 and of phenylthioureido compounds showed poor activity. The compounds (8b, 8c, 9b, 9c, 10b, 10c, lib , 11c) with C10 and C12 alkyl chains gave stronger activity than ref­

erence compound B13. The IC 50 of compound 8c was 1.05 (iM and 3 times stronger activity than B13. The stereochemistry of synthesized compounds affected very little to cytotoxic activity.

Keywords □ MAPI； cytotoxicity

Ceram ide

는 세포사멸，세포분화

세포성장 억제，

병 및

병 등에 관여하는 중요한 이차전달 물질이다

암

세포에서

의 농도는 정상 세포에서보다 매우 낮고

천

연

와 유사한

유도체 또는

를 분해

하는

의 억제제 둥을 암세포에 처리하여 암세포내의

ceramide

농도가 중가하면

가를 유리되고

cascade

를 활성화시켜 암세포의 성장을 억제하지만，정상세포에

대한 독성은 낮다고 보고되었다

그리고

를 억제 히는

와

등의

류

〉 와

등의

유 도체가 암세포의 성장억제를 보여주었다

따라서

유 도체나

의 억제제와 같이 세포내

의 농도를 높여줄 수 있는 화합물들은 암세포에 대해서만 선택적인 독성을 나타내는 새로운 항암치료제가 될 수 있다

본 연구에서는

를 억제하는

와

화 합물의 구조를 바탕으로 다양한

구조와

기 길 이를 갖으며

부위를 동등체인

로 치환한

종의

D-e-MAPP

유도체를 합성하고 그 세포독성효과를 측정하였다

#본 논문에 관한 문의는 저자에게로 (전화) 02-820-5603 (팩스) 02-815-2199 (E-mail) [email protected]

H3C(H2C)12^

H F i^(C H2)16CH3

T

Ceramide ( 1 )

HN ^(CH2)i2CH3

D-e-MAPP ( 2 )

HN\

서

B 1 3 ( 3 )

Fig. 1

Structure of ceramide (1) and ceramidase inhibitors (2 and 3).

실험방법

시약 및 기기

본 실험에서 사용된 시약들은

사와

사의 것을 사 용하였고，각종 용매는 특급시익을 사용하였다

는

을 사용하여 얻었고，

의 경우

를 내부 표준물질로 사용하였다

는

를 사용하였고

로

을 확인하였다

흡광도는

을 사용하였고，

용점측정은

을 사용하였으며

272

IR spectra

는

을 사용하여 얻 었다

는

를 시용하였다

일반적인

화합물의 합성방법

Am ine

화합물

)을

/)와

(25 m

/)의 혼합 용매에 녹인 후

실온에서

m m ol

)를 천천히 적가하여

시간 동안 반응시킨다

반응액에

ethylacetate(200 m

/)를 가하고

)로 세척 한 후

유기층을 무수

4로 건조하고 감압 농축하여

화합물을 얻는다

이

화합물을

로 정제하여 목적 화합물

를 얻었다

(IS, 2R) l-(2-Hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-3-octyl-

th io u re a

의 합성

，

고

을

사용하여 합성하였다

Yield : 33.5%; R ^ O jy e th y la c e ta te : h e x a n e = l: 4); [oc]

효

-28.50(c, 0.5 in C H3O H ); IR (K B r) c m 1; 1140, 1620, 2960, 3110, 3440; ^- N M R C C D C y 8 : 0.89(t, 3 H ,/= 6 .6 H z , CH 3), 1.06(d, 3H, /= 6 .9 H z C r C H 3), 1.23-1.43(m, 10H, (C H 2)5), 1.545-1.69(m, 2H , NH-CH2C H 2), 3.23-3.38(m, 2H , N H -CH 2), 4.99-5.00(m, 1H, C r H ), 5.55(d, 1 H ,/= 7 .5 H z , C2-H), 7.21- 7.4l(m , 5H, phenyl).

(IS, 2R) l-Decyl-3-(2-hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-

th io u re a

의 합성

，

과

을 시용하여 합성하였다

Yield : 33.6%; Rf=0.33(ethylacetate : h e x a n e = l: 3); [oc]

용

-27.50fc

，

，

，

(IS, 2R) l-Dodecyl-3-(2-hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-

th io u re a

의 합성

과

을 시용하여 합성하였다

Yield : 18.6%; Rf=0.33(ethylacetate : hexane= 1 :3 ); [a]

홈

-28.50(c, 0.5 in CH3OH ); IR (K B r) cm*1; 1100, 1640, 2960, 3135, 3390; ^- N M R C C D C ^) 8 : 0.88(t, 3H ,

J= 6.6

，

7.40(m, 5H , phenyl).

(IS, 2R) l-(2-Hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-3-tetra-

decyl-thiourea

의 합성

，

과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 27.6%; R ^ O JR e th y la c e ta te : h e x a n e = l: 3); [a]^°=

-28.50(c, 0.5 in C H3OH ); IR (K B r) cm '1; 1140, 1620, 2960, 3140

，

드또

，

(IS, 2R) l-(4-Chloro-phenyl)-3-(2-hydroxy-l-methyl-2-

phenyl-ethyl)-thiourea

의 합성

과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 87.2%; Rf=0.33(ethylacetate : h e x a n e = l: 3); [a]

효

-19.40(c, 0.5 in C H3O H ); IR (K B r) cm '1; 1090, 1560, 3160;

^- N M R C C D C ^) 5 : 1.03(d, 3H,

J= 6.9

(IR, 2S) l-(2-Hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-3-octyl-

th io u re a

의 합성

： 시용하여 합성하였다

Yield : 33.0%; Rf=0.25(ethylacetate : h e x a n e = l: 2); [a]

효

+ 10.60(c

，

，

，

(IR, 2S) l-Decyl-3-(2-hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-

th io u re a

의 합성

과

，

을 사용하여 합성하였다

Yield : 59.0%; R f= 0 .33(ethylacetate : hexane= 1 : 4); [a]

효

+ 10.60; ^-N M RCCD Cla) 8 : 0.88(t, 3H, / = 6 . 6 H z, C H 3), 1.05(d, 3H , /= 6 .9 H z C r C H 3), 1.29-1.40(m, 14H, (C H 2)7), 1.50-1.69(m, 2H , NH-CH2C H 2), 3.20-3.39(m, 2H , N H -C H 2), 4.95-5.01(m, 1H, C r H ), 5.56(d, 1H, /= 7 .5 H z , Cr H ), 7.19- 7.40(m, 5H , phenyl).

(IR, 2S) l-Dodecyl-3-(2-hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-

th io u re a

의 합성

Vol. 48，No. 5’ 2004

274 전상철 • 김연숙 • 김미영 • 임채욱 • 임철부

(182 mg, 1.2 m m ol)

과

을 시용하여 합성하였다

Yield : 21.5%; Rf=0.33(ethylacetate : h e x a n e = l: 4); [a]

홈

+5.40(c, 0.5 in CH3OH ); IR (K B r) cm '1; 1240, 1610, 2935, 3090

，

J= 6.6

(IR, 2S) l-(2-Hydroxy-l-methyl-2-phenyl-ethyl)-3-tetra-

decyl-thiourea

의 합성

，

과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 19.8%; R ^O ^C e th y lace tate : h e x a n e = l: 3); [a]o°=

+7.20fc, 0.5 in CH3OH ); IR (K B r) cm '1; 1210

，

，

，

(IR, 2S) l-(4-Chloro-phenyl)-3-(2-hydroxy-l-methyl-2-

phenyl«ethyl)-thiourea

의 합성

과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 70.2%; R ^O JV e th y lac e tate : h e x a n e = l: 3); [a]o°=

+ 58.90fc 0.5 in C H3O H ); IR (K B r) cm '1; 1100

，

^-N M RCCD Cls) 5 : 1.02(d, 3H , / =6.6 H z C r CH 3), 5.02- 5.11(m, 1H, C r H ), 6.09-6.19(m, 1H, C2-H), 7.10-7.40(m, 9H, phenyl).

(R) l-(l-Hydroxymethyl-2-phenyl-ethyl)-3-octyl-thiourea

의 합성

)과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 38.9%; R ^O JO fcthylacetate : hexane= 1 :2 ); [a]^0=

+41.60(c, 0.5 in C H3O H ); IR (K B r) cm '1; 1240, 1550, 2910, 3170, 3370; ^- N M R C C D C y 8 : 0.88(t, 3H , / =6 . 6 H z, CH 3), 1.00-1.39(m, 10H, (C H 2)5), 1.40-1.59(m, 2H , NH-CH2C H 2), 2.86(dd, 1H, / ^ S . l H z, /2= 7.8 Hz, Cr H) 2.98(dd, 1H, /!= 6 .3 H z,

J 2= 6 3

3.58-3.81(m, 2H , C H2O H ), 4.42-4.60(m, 1H, C r H), 7.19- 7.39(m, 5H , phenyl).

(R) l-Decyl-3-(l-hydroxymethyl-2-phenyl-ethyl)-thiourea

의 합성

叩

)과

)을 사용하여

합성하였다

Yield : 32.0%; R f=0.12(ethylacetate : hexane= 1 :3 ); [oc]

효

+48.20fc 0.5 in CH3OH ); IR (K B r) cm '1; 1140, 1560, 2970, 3060, 3450; ^-N M RCCD Cla) 6 : 0.88(t, 3H , / =6 . 6 Hz, CH 3), 1.09-1.37(m, 14H, ( C H ^ )

，

人

3.59-3.80(m, 2H , C H2O H ), 4.42-4.62(m, 1H, C r H ), 7.19- 7.39(m, 5H , phenyl).

(R) l-Dodecyl-3-(l-hydroxymethyl-2-phenyl-ethyl)-thiourea

의 합성

-沖

)과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 24.8%; R ^O JW ethy lacetate : h e x a n e = l: 3); [a]g0=

+45.80(c, 0.5 in CH3O H ); IR (K B r) cm*1; 1110, 1520, 2890, 3090, 3340; ^- N M R C C D C y 8 : 0.88(t, 3H , / =6 . 6 H z, CH 3), 1.19-1.39(m, 18H, (CH 2)9), 1.40-1.59(m, 2H , NH-CH2C H 2), 2.88(dd, 1H, /!= 7 .8 Hz, /2=7.5 H z, C2-H) 3.00(dd, 1H,

^ = 6 .0 Hz, /2=6.3 Hz, C2-H) 3.12-3.37(m, 2H, NH-CH2), 3.59-3.80(m, 2H , C H2O H ), 4.49-4.64(m, 1H, Cr H ), 7.19- 7.39(m, 5H, phenyl).

(R) l-( 1 -Hydroxymethyl-2-pheny 1-ethyl )-3-tetradecyl-

th io u re a

의 합성

(182 mg, 1.2 m m ol)

과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 20.8%; Rf=0.13(ethylacetate : h e x a n e = l: 3); [a]

효

+43.00(c, 0.5 in CH3OH ); IR (K B r) c m 1; 1260

，

3.59-3.80(m, 2H, C H2OH ), 4.58-4.62(m, 1H, Cl-H), 7.19- 7.39(m, 5H, phenyl).

(R) l-(4-Chloro-phenyl)-3-( l-hydroxymethyl-2-phenyl-

ethyl)-thiourea

의 합성

과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 98.1%; R ^O ^C e th y lace tate : h e x a n e = l: 3); [cx]

효

+108.40(c, 0.5 in CH3OH ); IR(K B r) cm-1; 1120, 1560, 3120;

^- N M R C C D C y

8 :

(S) l-(l-Hydroxymethyl-2-phenyl-ethyl)-3-octyl-thiourea

의 합성

J. Pharm. Soc. Korea

12.59

1.53

12.94 10.12

2.01

2.20

2.88 9.04 5.02 1.78 1.50 3.74 61.58

2.99

3.80(m, 2H , C H2O H ), 4.49-4.69(m, 1H, C l-H ), 7.19-7.39(m, 5H , phenyl).

(s) l-(4-Chloro-phenyl)-3-( l-hydroxymethyl-2-phenyl-

ethyl)-thiourea

의 합성

과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 83.7%; Rf=0.33(ethylacetate : h e x a n e = l: 3); [(x]

은

-105.60(6：, 0.5 in C H3OH ); IR (K B r) cm4 ; 1080, 1560, 3160;

^- N M R C C D C y 5 : 2.89-3.04(m, 2H, C2-H) 3.59-3.89(m, 2H, C H2O H ) 4.79-4.90(m, 1H, Cr H ), 7.10-7.39(m, 9H, phenyl).

세포독성효과를 측정

합성 화합물은

에 녹여서 농도별로

야씩 각

첨 가하고

암세포

)와 화합물이 접종된

를

하에서

일 간 배양한다

각

에

의

를 가하고 다시

，

하에서

시간 배양한다

를 원 심 분리하여 생성된

결정을 가라앉히고，배지는

정도만 남기고 제거하였다

생성된

결정을 용해하려고

를

/씩 가한 후

용 광도계

Table I - Cytotoxicity of thioureido MAPP derivatives in HL-60

cells

Compd. Ri Ro R3 Config. IC50 (|iM)

)과

사용하여 합

성하였다

Yield : 25.0%; Rf=0.33(ethylacetate : h e x a n e = l: 2); [a]g0=

-47.40(c, 0.5 in C H3OH ); IR (K B r) cm '1; 1170, 1490, 2900, 3100, 3370; ^- N M R C C D C y 5 : 0.88(t, 3H , / =6 . 6 H z, CH 3), 1.19-1.39(m, 10H, (CH 2)5), 1.40-1.59(m, 2H, NH-CH2C H 2), 2.89(dd, 1H, /!= 8 .1 Hz, /2=7.5 Hz, C2-H) 3.01(dd, 1H, /!= 6 .3 Hz, /2=6.3 H z, C2-H) 3.19-3.31(m, 2H , N H -CH 2), 3.59-3.80(m, 2H , C H 2), 4.50-4.69(m, 1H, Cr H ), 7.20-7.39(m, 5H, phenyl).

(S) l-Decyl-3-( l-hydroxymethyl-2-phenyl-ethyl)-thiourea

의 합성

)과

)을 시용하여 합 성하였다

Yield : 58.8%; Rf=0.14(ethylacetate : h e x a n e = l: 3); [a]

효

-47.20(c, 0.5 in C H3OH ); IR (K B r) c m 1; 1120, 1560, 2910

，

2.88(dd, 1H, /!= 7 .8 H z, /2= 7.8 H z, C2-H) 2.99(dd, 1H,

^ = 5 .7 Hz, /2=6.3 Hz, C2-H) 3.19-3.37(m, 2H , N H -CH 2), 3.59-3.80(m, 2H , C H ^O H ), 4.49-4.65(m, 1H, C r H ), 7.19- 7.39(m, 5H, phenyl).

(S) l-Dodecyl-3-(l-hydroxymethyl-2-phenyl-ethyl)-thiourea

의 합성

⑶

)과

)을 사용하여 합성하였다

Yield : 21.9%; Rf=0.17(ethylacetate : h e x a n e = l: 3); [cx]

은

-39.00(c, 0.5 in CH3OH); IR (K B r) cm '1; 1210, 1530, 2970, 3150, 3410; ^- N M R C C D C ^) 5 : 0.88(t, 3H, / =6 . 6 H z, CH 3), 1.19-1.39(m, 18H, (CH 2)9), 1.41-1.59(m, 2H, NH-CH2C H 2), 2.88(dd, 1H, /!= 7 .8 H z, /2= 7.5 H z, C2-H) 3.00(dd, 1H, /1

：

，

(S) l-(l-Hydroxym ethyl-2-phenyl-ethyl)-3-tetradecyl- th io u re a

의 합성

肌

과

)을 시용하여 합성하였다

Yield : 23.7%; Rf=0.20(ethylacetate : h e x a n e = l: 3); [a]

홈

-36.60(c, 0.5 in C H3O H ); IR (K B r) c m 1; 1200, 1500, 2910, 3170, 3370; ^- N M R C C D C y 5 : 0.88(t, 3H , / =6 . 6 H z, CH 3), 1.19-1.39(m

，

2)，

2.886dd, 1H, 7 ^ 7 .8 Hz, /2=8.1 H z, C2-H) 3.00(dd, 1H,

J x=

6.3 Hz, /2=6 . 6 H z, C2-H) 3.12-3.31(m, 2H , N H -CH 2), 3.57-

R R R R R

S S S S S 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2

..

..

..

.

..

..

..

..

R R R R R

S S S S S S S S S S

R R R R R 1 IX IX IX 1

1I X I X

1 IX

^ _h

x h x _h '

s c ^ _v

vx i

^

h *

c c c CC 6H C c c CC6 HC

c c CC6 HC

c c CC6 H

Tl TJ1 JI T_1 T_I T_1 Ji t h x ji

tf

t_ x

-lx Tr_ Tr-

Tr

Tr_p

Tr

I I I I I I I I I

O O O O O O O O O O

Tl

t t- j i T_1 hr 요

JI

T

_1 JI

T_1 JI OOOOOOOOOOKPTrFFFFFTrTr

a b

c d

e a

b

c d

e a

b

c d

e a

b

c d

e 3

8 8 8 8 8 9 9 9 9 9 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1

11

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

B

Vol. 48, No. 5，2004

276 전상철 • 김연숙 • 김미영 • 임채욱 • 임철부

Compd. Rx

^Config.

Compd. Ri

2 Config.

4 0H H IR, 2S 5 OH H IS, 2R

6 H OH 2R

7 H OH 2S

Scheme 1

- Synthesis of thioureido

derivatives.

R2 R3-NCS

reader

)로

에서의 톱광도를 즉정하였다

억제농도

(ICso

)는 대조군에 대해 생존율이

%가 되도록 하는 약물의 농

도이며 이

값을 항암 효과의 지표로 삼았다

결과 및 고찰

합성한 화합물의 선광도

0)는 모핵이

)인 화합물

(8a~8e)

^에서

，모핵이

)인 화합물

에서

모핵이

)인 화합물

^에서

108.40,

모핵이

)인 화합물

^에서

이 나 왔다

화합물

^의

에서

가

가

3는

에서 흡수대 가 나타났고

화합물

^{의 방-丽尺에서}

^가

3.05 ppm , C r H

가

는

에서 흡수대가 나타났다

에서

는

는

，

는

-1에서 흡수대가 나 타났다

지방족체인 화합물의 합성수득를은

정도로 낮 았지만，방향족 화합물은 70% 이상 높았다

합성한 화합물

종에 대하며

를 사용하여

M값

을 측정한 결과

지방족 체인의 탄소 수가

개에서

개 및

phenyl

로 갈수록 세포독성 효과가 증가하다가 다시 감소하였고

탄소의 수가

개와

개인 화합물이 가장 우수한 세포독성 효 과를 나타내었다

대조화합물로 시용한

보다 우수한 세포독

성효과를 나타낸 화합물은 지방족 체인의 탄소 수가

개와

개인

이며，이중에서 가장 우수한 효과를 나타낸 화합물은

이고

50값은

이며

보다

배 우수한 세포독성 효과를 나타내었다

한편

각 화 합물의

에 대한 세포독성 효과에는 큰 차이가 없었다

참고문헌

1) Obeid, L. M., Linardic, C. M., Karolak, L. A. and Hannun, Y. A .:

Programmed cell death by ceramide. Science 259，1769 (1993).

2) Okazaki, T., Bell, R. and Hannun, Y. A. : Sphingomyelin

J. Biol Chem.

264, 19076 (1989).

3) Jayadev，S., Linardic, C. M. and Hannun, Y. A .: Identification of arachidonic acid as a mediator of sphingomyelin hydrolysis in response to tumor necrosis factor. J. Biol Chem. 269，5757

R R R R R

S S S S S 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2

..

..

..

.

.

，

, ,

R R

R R

R s

s s

s s

S S S S S

R R R R R 1 X

1I X X IX IX

Ii XI IX

17 25

29 4- 17 25

29

1

c - 17

21

25 29 i- c 17 25

29

1

c -

H

환

H H 4

-4

H H H H 4

-4

HH1

H H 4

-4

HH1

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/. Pharm. Soc. Korea

(1994).

4) Hunot, S., Brugg, B.，D.，R.，Michel, E P, Muriel, M. E, Ruberg, M.，Faucheux, B. A., Agid, Y. and Hirsch, E. C. : Nuclear translocation of NF-kappaB is increased in

Proc.

Natl Acad. Sci. U.SA.

5) Haimovitz-Friedman, A., Kan, C. C.，Ehleiter, D.，Persaud, R.

S., McLoughlin, M.，Fuks, A. and Kolesnick, R. N. : Ionizing radiation acts on cellular membranes to generate ceramide and

J. Exp. Med.

，

6) Selzner, Markus Bielawska, Alicja Morse, Michael A. Rudiger, Hannes A. Sindram, David Hannun, Yusuf A. Clavien, Pierre- Alain. : Induction of apoptotic cell death and prevention of tumor growth by ceramide analogues in metastatic human colon cancer.

61(3), 1233 (2001).

7) Bielawska, A., Greenberg, M. S., Perry, D., Jayadev, S., Shayman, J. A., McKay, C. and Hannun, Y. A. : (1S,2R)-D- erythro-2-0^-Myristoylamino)-l-phenyl-l-propanol as an inhibitor of ceramidase.

Biol Chem. 271, 12646 (1996).

8) Bielawska, A., linardic, C. M. and Hannun, Y. A. : Ceramide- mediated biology : Determination of structural and stereo- specipic requirements through the use of N-alkyl-phenyl- aminoalcohol analogs.

Biol. Chem. 267, 18493 (1992).

9) Samsel, Leigh Zaidel, Grazyna Drumgoole, Honesty M.

Jelovac, Danijela Drachenberg, Cinthia Rhee, Juong G. Brodie, Angela M. H. Bielawska, Alicja Smyth, Miriam J. : The ceramide analog, B13, induces apoptosis in prostate cancer cell lines and inhibits tumor growth in prostate cancer xenografts.

Prostate

10) Witty, J. R, Bridgham, J. T. and Johnson,

L. : Induction of apoptotic cell death in hen granulosa cells by ceramide.

Endocrinology

137，5269 (1996).

11) Skehan, R, Storeng, R., Scudiero, D., Monks, A., McMahon, J., Vistica, D., Warren, J. T., Bokesch, H.’ Kenney, S. and Boyd, M.

R. : New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening. Journal of the National Cancer Institute

VoL 48，No. 5’ 2004