4 Z 4, pp. 379∼386

 4 Z 4, pp. 379∼386

] k

ù° Ë Ñ V ê så ¾ Ë Ä Z Ø° Ë Ñ0 n É ù p § T “ Ó Þ” X ¢ Ä Z Ø ô p §8 ý ½  ʍ ˜ m 4 • ¤ • ¤X N Ë

T

< ¸ 6 Ò ·  6 Ò; d ç > ·  ™ ») o  4 w H

Ö 

¦ í ß –@ /† < Ɠ § Ó ü t o † < Æõ , Ö  ¦ í ß – 680-749 (2011¸   2 Z 4 16{ 9  ~ à Î6 £ §, 2011¸   3 Z 4 27{ 9  > F  S X ‰& ñ )

+ þ

AF  g  © œ › ' aì  rF  gZ O (FCS; fluorescence correlation spectroscopy)“ É r 6   xÓ  o ? /\ " f S X ‰ í ß – î  r1 l x   H ì  r   [

þ

t _  1 l x% i † < Æ& h  : £ ¤$ í `  ¦ ƒ  ½ ¨ l  0 AK  1970¸   œ í\  > hµ 1 Ï  ) a l Õ ü t – Ð" f, š ¸Z þ t ± ú ˜ Ò q tÓ ü tÓ ü t o † < Æ ì  r  _  ƒ  ½ ¨

\

" f ‰ & ³p  â õ  † < Êa  Õ ª  Ö ¸6   x s  S X ‰ @ /÷ &“ ¦ e ”  . ‘ : r ƒ  ½ ¨\ " f  H   © œs  532 nm“   DPSS Y Us $ ü < 633 nm“   He-Ne Y Us $ _  ¿ º F  g " é ¶`  ¦ s 6   x   H + þ AF  g ‰ & ³p  â õ  + þ AF  g 8 £ ¤& ñ l Õ ü t`  ¦   ½ + Ë # Œ FCS  © œu \  ¦

½

¨$ í % i  . 532 nmü < 633 nm y Œ •y Œ •\  @ /ô  Ç FCS r Û ¼% 7 ›_  Ä »´ ò œ í& h   Òx  1.3 flü < 19.6 fl\  ¦ y Œ •y Œ • ½ ¨

“ ¦, s \  ¦  „ ½ ÓÜ ¼– Ð + þ AF  g { 9  _  7 á x À Ó, 6   x B _  & h $ í • ¸, 6   xÓ  o_  0 l x • ¸\  ¦    or v   H Y >  t  z  ´+ « >`  ¦ : Ÿ x K

  © œu \  ¦  Ž 7 £ x “ ¦  Ö ¸6   x ~ ½ Óî ß –\  @ /K " f  Ž ž Ð % i  .

Ù þ

˜d ” # Q: + þ AF  gì  r  ,  l  © œ › ' a † < Êà º, S X ‰ í ß – > à º

Measurement of the Diffusion Coefficient of Molecules by Using Fluorescence Correlation Spectroscopy

Jaeran Lee · Yesul Han · Sok Won Kim ^∗

Department of Physics, University of Ulsan, Ulsan 680-749 (Received 16 February 2011 : accepted 27 March 2011)

FCS (fluorescence correlation spectroscopy) is a technique developed in the 1970s to study the dynamic characteristics of diffusing molecules in solution, and its application with the microscope has been expanding in the field of biophysics. In this study, the FCS system was composed of a fluorescent measuring device and a fluorescence microscope using two light sources, a DPSS laser (532 nm) and a He-Ne laser (633 nm). After obtaining effective focal volumes of 1.3 fl and 19.6 fl for the 532-nm and the 633-nm light sources, the utility of the FCS system was verified by performing several experiments, such as changing the particle size, the viscosity of the solvent, the concentration of the molecule, etc., and an application plan was developed.

PACS numbers: 78.20.-e, 78.20.Ci, 81.40.Tv, 81.40.-z

Keywords: Fluorescent molecule, Autocorrelation function, Diffusion coefficient

I. " e  ] Ø

+ þ

AF  g  © œ › ' aì  rF  gZ O (FCS : fluorescence correlation spec- troscopy)“ É r p ™ è % ò % i \ " f + þ AF  g ì  r  [ þ t _  ¹ ¡ §f ” e ” \   

∗

E-mail: [email protected]



 ~ ½ ÓØ  ¦ ÷ &  H + þ AF  g [ jl     o\  ¦ 8 £ ¤& ñ “ ¦  l  © œ › ' a † < Ê Ã

º(ACF : autocorrelation function)\  ¦ ½ ¨ # Œ + þ AF  g ì  r   [

þ

t _  ¹ ¡ §f ” e ”  5 Å q • ¸
 ß ¼l , > hà º, Šҁ   ì  r  [ þ t õ _   © œ  ñ Œ • 6

 

x`  ¦ & ñ | ¾ Ó& h Ü ¼– Ð ì  r$ 3    H l Õ ü t – Ð, Webbü < Rigler\  _  K

 > hµ 1 Ï÷ &% 3   [1–5]. { 9 ì ø Í& h Ü ¼– Ð ì  r  _  ß ¼l  x 9  1 l x& h 

-379-

:

£ ¤$ í [ þ t`  ¦ ì  r$ 3  l 0 AK  Ò q tÓ ü t x 9   o† < Æ ì  r  \ " f  H Gel Chromatograph ¢ ¸  H Gel Electrophoresis(„  l % ò 1 l x) ü <

° ú

 “ É r ~ ½ ÓZ O [ þ t s  s 6   x ÷ &t ë ß –, @ /| ¾ Ó_  r « Ñ\  ¦ € 9 כ ¹– Ð ½ + É ÷  r ë

ß –  m   r + « >6   x Ò  re  ¦ \    É r  o† < Æ& h  % ƒo \  ¦ כ ¹½ ¨ “ ¦, Õ

ª   õ  ¢ ¸ô  Ç & ñ $ í & h s    H ô  Ç>  e ”  . s \  ì ø ÍK  FCS



 H à º µl_  Ò  re  ¦ 6   xÓ  o`  ¦ s 6   x # Œ + þ AF  g ì  r  [ þ t _  : £ ¤$ í [ þ t

`

 ¦ & ñ | ¾ Ó& h Ü ¼– Ð 8 £ ¤& ñ ½ + É Ã º e ”  . Õ ª Q
,  © œ6   x FCS  © œq 



 H   s  B Ä º “ ¦s  9 FCS > hµ 1 Ï [ þ t`  ¦ ×  æd ” Ü ¼– Ð ô  Ç

„

 ë  H ƒ  ½ ¨l  › ' a \ " fë ß –  6   x s  ô  Ç& ñ ÷ &# Qe ”   [6].

‘

: r ƒ  ½ ¨\ " f  H  © œ6   x  © œq _    \  @ /ô  Ç ë  H ] j\  ¦ ˜ Ð ¢ - a

l  0 AK    © œs  532 nm“   DPSS Y Us $ ü < 633 nm“   He-Ne Y Us $ \  ¦ s 6   x # Œ z  ´+ « >z  ´ à ºï  r \ " f q “ §& h  ç ß –é ß –

>  FCS r Û ¼% 7 ›`  ¦ F  g † < Æ ‰ & ³p  â \  ] X 3 l q r (   . 532 nm F 

g " é ¶ \  @ /K " f  H Rhodamin 6G à º6   xÓ  o`  ¦ l ï  r r « і Ð

# Œ r Û ¼% 7 ›_  Ä »´ ò œ í& h   Òx \  ¦ 8 £ ¤& ñ “ ¦, Sucrose à º 6

  xÓ  o\ " f Rhodamin 6G_  S X ‰ í ß – r ç ß –`  ¦ q “ § % i  . Õ ª o

“ ¦ 633 nm F  g " é ¶ \  @ /K " f  H + þ AF  g q × ¼\  ¦ s 6   x # Œ Ä »

´

ò œ í& h   Òx \  ¦ 8 £ ¤& ñ “ ¦, PBS 6   xÓ  oõ  7 £ x À Óà º\ " f + þ AF  g q

× ¼ü < quantum dot(Q-dot)_  S X ‰ í ß – r ç ß –`  ¦ q “ § % i  .

II. T  Â ] Ø

p

™ è % ò % i \  y n Cs  › ¸  | ¨ c M :, Õ ª % ò % i \  [ þ t # Q“ : r + þ AF  g ì

 r    H + þ AF  g`  ¦ ~ ½ ÓØ  ¦ ô  Ç . FCS  © œu \ " f @ /Ó ü tE $ ™Ý ¼\  _  K

 + þ A$ í ÷ &  H p ™ è % ò % i “ É r Fig. 1(a) _  ¢ , aA á ¤ Õ ªa Ë >õ  ° ú  s 

 è ­ q à º e ”  . Fig. 1(a)\ " f Ä »´ ò œ í& h   Òx   H t 2 £ §

~

½ ӆ ¾ Ó U  ´s  2wü < » ¡ ¤ ~ ½ ӆ ¾ Ó U  ´s  2z\  _ K    & ñ  ) a  . + þ AF  g ì

 r  [ þ t“ É r Ä »´ ò œ í& h   Òx \  ¦ Ø  ¦{ 9  €  " f Fig. 1_  Õ ªA á Ô ü

< ° ú  s  r ç ß –\    É r + þ AF  g [ jl  כ ¹1 l x`  ¦ { 9 Ü ¼v   H X <, ì  r



_  ß ¼l   Œ • 
 6   xÓ  o_  & h $ í • ¸ ± ú Ü ¼€   (a)ü < ° ú  s  r

ç ß –\     + þ AF  g   1 l x _  Å Òl  T   ú ª“ ¦, ì  r  _  ß ¼l 

ß

¼ 
 6   xÓ  o_  & h $ í • ¸
 Z  } Ü ¼€   (b)ü < ° ú  s    1 l x _  Å Òl  T  U  ´ . Õ ªo “ ¦, › ' a8 £ ¤  Òx \  ¦ 1 l x{ 9 ô  Ç r ç ß –\  Ø  ¦{ 9    H ì

 r  _  à º & h Ü ¼€   (c)ü < ° ú  s  + þ AF  g   1 l x _  ”  ; Ÿ ¤ δF  ß

¼“ ¦, > hà º ´ ú §Ü ¼€   (d)ü < ° ú  s  + þ AF  g   1 l x _  ”  ; Ÿ ¤ δF 



Œ

• .

r

y Œ • t\ " f Ä »´ ò œ í& h   Òx – РÒ'  ~ ½ ÓØ  ¦ ÷ &  H + þ AF  g _  [ j l

 F (t)s “ ¦, r ç ß – τ + '_  + þ AF  g [ jl  F (t + τ ){ 9  M :, t

ƒ   r ç ß – τ \    É r ¿ º ’    ñ  s _  Ä » $ í “ É r  l  © œ › ' a

†

< Êà º(ACF : autocorrelation function) G(τ )\  ¦ : Ÿ x K  S X ‰ “  

½

+ É Ã º e ”  .  l  © œ › ' a † < Êà º  H r ç ß – ƒ  5 Å q ’    ñ à º| 9 \  _  K

 % 3 # Q”   y Œ •y Œ •_  ’    ñ[ þ t  s _   © œ  ñ  © œ › ' a › ' a > \  ¦
 

Fig. 1. (Color online) Motion of fluorescent dye in the effective focal volume of the objective lens and the fluo- rescent intensity fluctuation; (a) fast diffusion, (b) slow diffusion; (c) small number and (d) large number of molecules.

?

/  H  © œ › ' a > à º[ þ t _  † < Êà º– Ð, d ”  (1)õ  ° ú  s 
 è ­ q à º e ” 



.

G(τ ) = < F (t)F (t + τ ) >

< F (t) >

²

(1)

#

Œl " f <>  H r ç ß – ƒ  5 Å q ’    ñ[ þ t \  @ /ô  Ç r ç ß – ¨ î ç  H`  ¦ _  p

ô  Ç .

é

ß –{ 9  ½ ¨$ í { 9  \  _ ô  Ç S X ‰ í ß – î  r1 l x _  ACF  H S X ‰ í ß – r ç ß – τ

D

ü < Ä »´ ò œ í& h   Òx \  @ /ô  Ç + þ AI  כ ¹™ è s = z/w, 1 l x{ 9 ô  Ç r

ç ß –\  p ™ è % ò % i \  ” > r F    H + þ AF  g ì  r  [ þ t _  à º N\  _  K

  6 £ § õ  ° ú  s  ³ ð‰ & ³ ) a   [7].

G(τ ) = 1 N

 1 + τ

τ

_D



−1

 1 + τ

s

²

τ

_D



−1/2

(2)

z 

´+ « >d ”  (1)õ  s  : rd ”  (2)\  ¦ s 6   x # Œ q ‚  + þ A þ j™ è 5 p x þ

j& h ´ ú » ¡ §`  ¦ €     p '  N, τ

D

, s\  ¦ % 3 `  ¦ à º e ”  . ì  r



 random walk– Ð S X ‰ í ß – î  r1 l x`  ¦ ½ + É M : r ç ß – t 1 l x î ß – ¨ î ç  H

&

h Ü ¼– Ð î  r1 l x   H  o  x  H { 9  " é ¶ \ " f < x

²

>= 2Dt s 

“

¦, s \  ¦ ì ø Ít 2 £ § s  w“   2 " é ¶ ¨ î €  \ " f S X ‰ í ß – r ç ß – τ

^D

1 l x î

ß – ¹ ¡ §f ” s   H ì  r  _  S X ‰ í ß – > à º D\  @ /ô  Ç d ” Ü ¼– Ð
 è ­ q Ã

º e ”   [8].

D = < w

²

>

4τ

_D

(3)

Û

¼: Ÿ ¤ Û ¼- “  à » “  d ” `  ¦ d ” (3)\  @ /{ 9  €   6   xÓ  o_  & h 

$ í

• ¸ü < S X ‰ í ß – r ç ß –  s _  › ' a > \  ¦ · ú ˜ à º e ” “ ¦ [9], 7 £ x À Óà º _

 & h $ í • ¸\  ¦ · ú ˜“ ¦ e ”  €  , FCS   õ  ì  r$ 3 `  ¦ : Ÿ x K    É r 6

  xÓ  o_  & h $ í • ¸ü < 6   xÓ  o ? /\ " f S X ‰ í ß – î  r1 l x   H ì  r  _  ß ¼ l

\  ¦ > í ß –½ + É Ã º e ”   [10].

Fig. 2. (Color online) Optical setup of FCS (L1, L2: lens, OB: objective lens, DM: dichroic mirror, DL: detection lens, BF: band pass filter).

III. ÷ m Ç] M öU ê s0 n É

1. ° Ë Ñ] K ¡ X ê sV   ŒV R Ë

FCS  © œu   H   © œs  532 nm“   DPSS Y Us $ (Cobolt Samba) ü < 633 nm“   He-Ne Y Us $ (Thorlab)\  ¦ F  g " é ¶ Ü ¼– Ð

“ ¦, NA 1.2“   water immersion @ /Ó ü tE $ ™Ý ¼(Olympus UPlanSApo 60X) ü < — 2 ;f . Ë @ /’    ï# Q_  t 2 £ § s  62.5 µm“   Y O

w — ¸× ¼ F  g$ 3 Ä »\  ¦  6   x # Œ  ^ ‰ ] j Œ • % i   [11].

Figure 2  H ‘ : r ƒ  ½ ¨\ " f ½ ¨$ í ô  Ç FCS r Û ¼% 7 ›_   © œu • ¸ s

 . €  $ , s Ò  o$ í  Ö  ¦`  ¦ : Ÿ x K  t 2 £ § s  0.8 mm“   633 nm F  g " é ¶“ É r È Òõ ÷ &“ ¦ t 2 £ § s  0.7 mm“   532 nm F  g " é ¶

“ É

r ì ø Í  # Œ ¿ º F  g _  ”  ' Ÿ ~ ½ ӆ ¾ Ós  { 9 u  >  ÷ &“ ¦, œ í& h 



o  2.5 cmü < 30 cm“   E $ ™Ý ¼\  _ K  ¿ º F  g " é ¶ _  t 2 £ § s

 S X ‰ @ /  ) a  . › ¸o > h\  ¦ : Ÿ x õ ô  Ç c ” “ É r @ /Ó ü tE $ ™Ý ¼ ½ ¨ â t 2 £ § 8.5 mm ü < ° ú   ”   . c ”  t 2 £ § s  S X ‰ @ /  ) a ¿ º F  g " é ¶“ É r s Ò  o$ í



Ö  ¦(SEMROCK) \ " f ì ø Í ô  Ç Ê ê @ /Ó ü tE $ ™Ý ¼ü < immersion water, & ! Q / å J  Û ¼\  ¦ í  H " f@ /– Ð : Ÿ x õ ô  Ç Ê ê\  r « Ñ 6   xÓ  o

?

/ Ò\  p ™ èô  Ç Â Òx \  ¦ t   H œ í& h `  ¦ + þ A$ í ô  Ç . z  ´+ « >\ 



6   x ) a + þ AF  g { 9  [ þ t“ É r 532 nm   © œ_  F  g`  ¦ f  ¨ à º “ ¦ 555 nm x ß ¼\  ¦ t   H + þ AF  g`  ¦ ~ ½ ÓØ  ¦  
, 633 nm   © œ_  F  g

`

 ¦ f  ¨ à º “ ¦ 650 nm x ß ¼\  ¦ ~ ½ ÓØ  ¦ % i  . ~ ½ ÓØ  ¦ ) a + þ AF  g“ É r

@

/Ó ü tE $ ™Ý ¼ ~ ½ ӆ ¾ ÓÜ ¼– Ð ÷ &[  t  “ ¦, @ /Ó ü tE $ ™Ý ¼, s Ò  o$ í  Ö  ¦,

 Ž

Ø  ¦ E $ ™Ý ¼,  ½ ™× ¼J Û ¼€ 9 ' \  ¦ : Ÿ x õ ô  Ç Ê ê\  F  g$ 3 Ä »_   ï# Q

–

Ð { 9  ô  Ç .  ½ ™× ¼J Û ¼€ 9 '   H ì  r  _  7 á x À Ó\    " f ¿ º

t  ‚  × þ ˜& h Ü ¼– Ð  6   x ÷ &% 3  . 
  H 540 ∼ 560 nm % ò

%

i _    © œ`  ¦ È Òõ r v “ ¦ + þ AF  gì  r  [ þ t \  _ K  í ß –ê ø Í  ) a 532 nm _  F  g“ É r é ß – “ ¦,   É r 
  H 645 ∼ 690 nm % ò % i _  

 © œ`  ¦ È Òõ r v “ ¦ 633 nm_  í ß –ê ø Í F  g“ É r é ß –ô  Ç . & h ‚  

~ Ã

ÌÛ ¼ ? /\  e ”   H s Ò  o$ í  Ö  ¦, @ /Ó ü tE $ ™Ý ¼, r « Ñ Û ¼_ …s t ,

 Ž

Ø  ¦ E $ ™Ý ¼  H  © œ6   x ‰ & ³p  â (Olympus IX71)\  Ÿ í† < ʝ ) a ½ ¨$ í

Fig. 3. (Color online) User software correlator interfacer written by LabVIEW software.

[ þ

t – Ð" f s \  ¦ s 6   x # Œ  © œu  & ñ § > =`  ¦ 6   x s  >  ½ + É Ã º e ” % 3 



. F  g$ 3 Ä »\  ¦ : Ÿ x õ ô  Ç + þ AF  g[ þ t“ É r APD(avalanche photodi- ode) ™ è – Ð  ) a F  g Ž Ø  ¦ l (idQuantiqe id100-MMF50)\  _

K  TTL ’    ñ– Ð   ¨ 8 Š ) a  .

2. } º³ Ž² Ž ú# a V ê så ¾ ËM 

Y O

w - Ä º(multi-tau) ~ ½ ÓZ O \  l œ íô  Ç ™ èá Ôà ÔJ ?# Q  © œ › ' a l

  H l ‘ : r& h Ü ¼– Ð × ¼J ?# Q  © œ › ' a l ü < Ä » ô  Ç ’    ñ% ƒo 

~

½ ÓZ O Ü ¼– Ð  © œ › ' a † < Êà º\  ¦ ½ ¨   H á Ԗ ÐÕ ªÏ þ ›Ü ¼– Ð" f, × ¼J ?

#

Q  © œ › ' a l \ " f 4 Ÿ ¤ ¸ ú šô  Ç  r– Ж Ð ] j Œ •÷ &  H ‚  + þ A  © œ › ' a l [ þ t _

 · ú ˜“ ¦o 7 £ §`  ¦ á Ԗ ÐÕ ªA b ç • ¸2 Ÿ ¤ # Œ FCS  © œu  ½ ¨» ¡ ¤

\

 € 9 כ ¹ô  Ç q 6   x`  ¦ ] X y Œ ™r v   H ´ òõ \  ¦ ] j/ B N ô  Ç  [12]. Y O  w

- Ä º ~ ½ ÓZ O “ É r & h ì  r r ç ß –s  ∆t

s

“   s> h_  ‚  + þ A  © œ › ' a l [ þ t

`

 ¦ á Ԗ ÐÕ ªÏ þ › o   H ~ ½ ÓZ O Ü ¼– Ð × ¼J ?# Q  © œ › ' a l ˜ Ð  Ä »

ƒ

  >  & h ì  r r ç ß – ∆t

s

ü < ‚  + þ A  © œ › ' a l _  > hà º\  ¦ › ¸& ñ ½ + É Ã º e ”

 .

‘

: r ƒ  ½ ¨\ " f  H Burden \  _ K  ] jr   ) a Y O w - Ä º ~ ½ ÓZ O  [13] Ü ¼– Ð 2.7 GHz CPU, 2 Gb RAM“   PC, î  r ' / s  Q ˜ Ð× ¼(NI PCI-6602)ü < ê Á œÂ Ó á Ԗ ÐÕ ªÏ þ ›Ü ¼– Ð ™ èá Ôà ÔJ ?# Q



© œ › ' a l \  ¦ ½ ¨$ í % i  . 7> h_  ‚  + þ A  © œ › ' a l \  ¦ s 6   x # Œ y Œ • y

Œ

•_   © œ › ' a l [ þ t \  @ /K  t ƒ  r ç ß – τ  0.5 µs _  10C m ”  t  Ã

º& h Ü ¼– Ð 7 £ x  • ¸2 Ÿ ¤ % i  . Fig. 3“ É r ê Á œÂ Ó á Ԗ ÐÕ ªÏ þ ›_ 



6   x   “  ' ` …s Û ¼– Ð" f, 1> h_  Rhodamin 6G ì  r   Ä »

´

ò œ í& h   Òx \ " f î  r1 l x ½ + É M :, ¢ , aA á ¤ † ½ Ó3 l q \ 
  · p [ O & ñ

@

/– Ð X <s ' \  ¦ à º| 9  “ ¦, š ¸ É rA á ¤ Õ ªA á Ô\  + þ AF  g [ jl ü <

ACF\  ¦
  · p  כ s  .

Fig. 4. (Color online) Structures of (a) fluorescent beads, and (b) Q-dots.

3. S z »

r

« і Ð" f  H 532 nm F  g " é ¶ \  @ /K  Rhodamin 6G\  ¦, 633 nm F  g " é ¶ \  @ /K  + þ AF  g q × ¼ü < Quantum-dot(Q-dot)`  ¦ y Œ • y

Œ

• ï  r q  % i  .

1) Rhodamin 6G

&

h

$ í • ¸ 8 £ ¤& ñ `  ¦ 0 Aô  Ç r « Ñ 6   xÓ  o“ É r  Ä º 8 + þ AI _  Rho- damin 6G(Sigma-Aldrich)\  ¦  © œ“ : r 25

^◦

C _  7 £ x À Óà º\  Ø  æ ì

 r y  6   x K r v “ ¦ (25

^◦

C \ " f_  6   x K • ¸ 20 g/L), 7 £ x À Óà º

\

" f 1/1000– Ð  B$ 3  # Œ 4 µM 0 l x • ¸_  Rhodamin 6G Ã

º6   xÓ  o`  ¦ ë ß –[ þ t% 3  . Õ ªo “ ¦ s \  ¦ 7 £ x À Óà º– Ð 1/100 ∼ 1/100000 – Ð  B$ 3  # Œ 0.04, 0.4, 4, 40 nM 0 l x • ¸_  Rho- damin 6G à º6   xÓ  o`  ¦ ë ß –[ þ t% 3  . 7 £ x À Óà ºü < Sucrose (Sigma- Aldrich) | 9 | ¾ Ó q Ö  ¦`  ¦ › ¸] X  # Œ 10, 20, 30, 40, 50 wt%_  Sucrose à º6   xÓ  o`  ¦ ë ß –[ þ t # Q y Œ •y Œ •_  6   xÓ  o 999 µl\  4 µM 0

l

x • ¸_  Rhodamin 6G à º6   xÓ  o`  ¦ 1 µlm ”  V , # Q" f 4 nM_  Rhodamin 6G ì  r  \  ¦ Ÿ í† < Ê   H Sucrose à º6   xÓ  os  ÷ &• ¸ 2

Ÿ

¤ % i  . Sucrose à º6   xÓ  o ? /\ " f Rhodamin 6G ì  r  [ þ t

`

 ¦ Y  J “ ¦À Ò ì  r Ÿ ír v l  0 AK " f  © œ“ : r \ " f y Œ • 6   xÓ  o[ þ t`  ¦ 2 r  ç

ß – 1 l x î ß – ¿ º% 3  . y Œ •y Œ •_  6   xÓ  o`  ¦ 50 µlm ”  & ! Q / å J  Û ¼ 0 A

\

 `  ¦  9¿ º“ ¦ Rhodamin 6G ì  r  _  S X ‰ í ß – î  r1 l x`  ¦ 8 £ ¤& ñ 

% i  .

2) + þ AF  g q × ¼ü < Q-dot + þ

AF  g q × ¼  H Fig. 4(a) \  ˜ Ðs   H  כ % ƒ! 3  t 2 £ § s  24 ± 0.3 nm – Ð · ú ˜ 94 R e ” “ ¦, ×  æd ” \  e ”   H + þ AF  g } € f › Ó ü t| 9 _  S !

í ß –% i  % ƒo  Ê ê ³ ð€  \  Ø Ô4 Ÿ ¤z  ´l   ïh A÷ &# Q e ”  . Õ ª o

“ ¦ Fig. 4(b)“   Q-dot“ É r t 2 £ § s  18 ± 0.2 nms “ ¦, ×  æ d ”

\  CdTe– Ð  ) a  ï# Q e ” “ ¦ Õ ª 0 A\  ZnS– Ð  ) a shell s 

Fig. 5. (Color online) (a) Correlation functions for sev- eral different concentrations of R6G in distilled water, and (b) average particle numbers for different concentra- tions in confocal volume.

W =

# Œ e ” Ü ¼ 9, þ jü @ F Y ` \   H q × ¼ü <  ð ø Ít – Ð 4 Ÿ ¤z  ´l 

  ïh A÷ &# Q e ”  . 1 l x{ 9 ô  Ç Ø Ô4 Ÿ ¤z  ´l   ïh A\  @ /K  + þ AF  g q

× ¼  H 7 £ x À Óà º\  ˜ Ð › ' a ÷ &t ë ß –, Q-dot“ É r pH 9“   Ô  æ í ß –% i \ 

˜

Ð › ' a ) a  . 7 £ x À Óà ºü < PBS 6   xÓ  o\ " f Q-dot_  ß ¼l     o\  ¦ S X

‰ “   l  0 AK  + þ AF  g q × ¼ü < Q-dot_  S X ‰ í ß – î  r1 l x`  ¦ q “ § 

%

i  . + þ AF  g q × ¼ü < Q-dot à º6   xÓ  o r « Ñ[ þ t“ É r 7 £ x À Óà º– Ð y Œ • y

Œ

• 1/1000, 1/10000_   B$ 3 `  ¦ : Ÿ x K  10 nM, 1 nM_  0 l x • ¸

–

Ð ë ß –[ þ t% 3  . 1 l x{ 9 ô  Ç ~ ½ ÓZ O Ü ¼– Ð PBS 6   xÓ  o\ " f• ¸  B$ 3 `  ¦ :

Ÿ

x K  10 nM, 1 nM_  r « Ñ\  ¦ ë ß –[ þ t% 3  .

IV. + s ÇÊ Ý õ m Í À X Ø8 ý



^ ‰ ] j Œ •  ) a FCS  © œu   H · ú ¡\ " f ë ß –[ þ t # Q”   r « Ñ[ þ t`  ¦ s

6   x # Œ 532 nm F  g " é ¶ \  @ /K " f  H 0 l x • ¸ü < & h $ í • ¸\  ¦ 8 £ ¤

&

ñ “ ¦, 633 nm F  g " é ¶“ É r 0 l x • ¸\  ¦ q “ § “ ¦ ½ ¨+ þ A { 9  _  ß ¼ l

\  ¦ ½ ¨ l  0 AK   6   x ÷ &% 3  .

Ä

º‚  , 532 nm F  g " é ¶`  ¦ s 6   x   H FCS r Û ¼% 7 ›\ " f ] j /

B

N ÷ &  H Ä »´ ò œ í& h   Òx \  ¦   & ñ l  0 AK  4 nM 0 l x • ¸_  Rhodamin 6G à º6   xÓ  o\ " f ~ ½ ÓØ  ¦ ÷ &  H + þ AF  g [ jl – РÒ'  ACF\  ¦ ½ ¨ % i  . ™ èá Ôà ÔJ ?# Q  © œ › ' a l – РÒ'  % 3 “ É r ACF ü

< q ‚  + þ A þ j™ è 5 p x þ j& h ´ ú » ¡ § _    õ – РÒ'  ³ ðï  r ¼ #  

 ±0.028– Ð" f q “ §& h  & ñ S X ‰ >  z  ´+ « >H † d`  ¦ S X ‰ “   “ ¦ Ä »

´

ò œ í& h  8 £ ¤& ñ \  € 9 כ ¹ô  Ç   B j' [ þ t`  ¦ ½ ¨ % i  . ACF– Ð Â

Ò'  y Œ •y Œ •_  þ j& h  ´ ú » ¡ §   B j'   H ¨ î ç  H F  g  à º N = 3, + þ

AI כ ¹™ è s = 10, S X ‰ í ß – r ç ß – τ

D

= 7.2 × 10

⁻⁵

s – Ð > í ß –

÷

&% 3  . S X ‰ í ß –r ç ß –õ  Rhodamin 6G_  7 £ x À Óà º\ " f_  S X ‰ í ß –

>

à º 280 µm

²

/s\  ¦ d ” (3)\  @ /{ 9 K " f Ä »´ ò œ í& h _  c ”  ì ø Í t

2 £ § w = 0.28 µm, » ¡ ¤ ~ ½ ӆ ¾ Ó U  ´s  z = 2.8 µm\  ¦ % 3 % 3  .

w ü < z– РÒ'  Ä »´ ò œ í& h   Òx  V

ef f

  H 1.38 fl – Ð > í ß –÷ &% 3 

“

¦, s    õ – РÒ'  3.9 nM_  6   xÓ  o_  0 l x • ¸ % 3 # Q& ’  . z  ´ +

« >\ " f % 3 “ É r 3.9 nM 0 l x • ¸  H ] j Œ •õ & ñ \ " f > í ß –  ) a Rho- damin 6G à º6   xÓ  o_  0 l x • ¸ 4 nMõ  q “ §& h  & ñ S X ‰ >  { 9 u 

% i  .

Figure 5(a)  H à º6   xÓ  o\ " f Rhodamin 6G 0 l x • ¸ 0.04, 0.4, 4, 40 nM { 9  M :, ACF\  ¦
  · p  כ s  . ì  r  _  0 l x • ¸

 ± ú  f ” \     ACF_  ”  ; Ÿ ¤ s  7 £ x  % i t ë ß –, þ j& h  ´ ú 

»

¡

§ \ " f % 3 # Q”   S X ‰ í ß – r ç ß –“ É r 72 ± 5 µs – Ð { 9 & ñ > 
  z

Œ

¤ . Fig. 5(b)  H · ú ¡\ " f % 3 “ É r Ä »´ ò œ í& h   Òx \  ¦ s 6   x 

#

Œ 0 l x • ¸\     ¨ î ç  H& h Ü ¼– Ð 8 £ ¤& ñ | ¨ c à º e ”   H ì  r  _  > hà º ü

< FCS   õ – РÒ'  % 3 # Q”   ¨ î ç  H ì  r  _  > hà º\  ¦ q “ §ô  Ç

 כ

`  ¦ – ÐÕ ª Û ¼H { 9 – Ð
 ? /% 3  . 8 £ ¤& ñ ° ú כ[ þ t“ É r > í ß –  ) a ° ú כ [

þ

t \  q K  2 % & ñ • ¸_  s \  ¦ ˜ Ð% i t ë ß –, à º femto-liter_  Ä

»´ ò œ í& h   Òx \ " f µ 1 ÏÒ q t   H + þ AF  g ’    ñë ß –Ü ¼– Ð 5 µl 6   xÓ  o

?

/\  e ”   H B Ä º ± ú “ É r ì  r  _  0 l x • ¸\  ¦ q “ §& h  & ñ S X ‰ >  8 £ ¤

&

ñ K ? /  H  כ `  ¦ · ú ˜ à º e ” % 3  .

FCS  © œu   H ì  r  _  · ú ˜ 9”   S X ‰ í ß –> à º\  ¦ s 6   x # Œ & h 

$ í

• ¸\  ¦ 8 £ ¤& ñ l • ¸ ô  Ç . S X ‰ í ß – > à º & h $ í • ¸_  % ò † ¾ Ó`  ¦

~ Ã

΍  H & h `  ¦ “ ¦ 9 # Œ & h $ í • ¸   É r Sucrose à º6   xÓ  o\  @ / K

 Rhodamin 6G_   l  © œ › ' a † < Êà º\  ¦ q “ § % i  .  © œ“ : r 25

^◦

C \ " f y Œ • r « Ñ[ þ t \  @ /K  10œ ím ”  20 r 8 £ ¤& ñ ô  Ç   õ \  ¦

¨ î

ç  H % i  .

Figure 6(a)  H Sucrose à º6   xÓ  o_  Sucrose 0 l x • ¸\     4 nM 0 l x • ¸“   Rhodamin 6G_  ACF_  þ j& h ´ ú » ¡ §   õ [ þ t

`

 ¦ q “ §ô  Ç  כ s  . # Œl " f 0 wt%  H Sucrose  Ÿ í† < Ê÷ &t 

· ú

§“ É r 4 nM Rhodamin 6G à º6   xÓ  o`  ¦ _ p ô  Ç . Õ ªA á Ô\ 

"

f þ j& h  ´ ú » ¡ § _  S X ‰ í ß – r ç ß – τ

^D

  H y Œ •y Œ •_  Õ ªA á Ô_  ì ø Íu 

;

Ÿ

¤ \  K { © œ   H r ç ß –Ü ¼– Ð, Sucrose 0 l x • ¸ 7 £ x ½ + Éà º2 Ÿ ¤ S X ‰ í

ß –r ç ß – τ

D

• ¸ 7 £ x  % i  . Fig. 6(b)ü < Table 1“ É r S X ‰ í ß – r

ç ß –Ü ¼– РÒ'  Sucrose_  0 l x • ¸\    É r & h $ í • ¸\  ¦ ½ ¨ “ ¦

Fig. 6. (Color online) (a) Normalized autocorrelation functions for different concentrations of sucrose solutions and (b) viscosity changes with varying concentrations of sucrose.

ë

 H‰  ³° ú כõ  q “ §ô  Ç  כ s   [14,15]. Fig. 6(b)\ " f ˜ Ð1 p w s  Sucrose à º6   xÓ  o_  0 l x • ¸ 7 £ x ½ + Éà º2 Ÿ ¤ S X ‰ í ß –r ç ß –“ É r U  ´# Q

&

’ “ ¦, & h $ í • ¸ ¢ ¸ô  Ç 7 £ x    H   õ \  ¦ ˜ Ð% i  .  ð ø Ít – Ð S X

‰ í ß –r ç ß –_  Ô  ¦S X ‰& ñ • ¸ 7 £ x † < Ê\     S X ‰ í ß –r ç ß –Ü ¼– ÐÂ Ò '

 > í ß –÷ &  H & h $ í • ¸_  Ô  ¦S X ‰& ñ • ¸ ¢ ¸ô  Ç 7 £ x  % i  . 10 ∼ 40 wt% _  0 l x • ¸ t  FCS   õ   H Ô  ¦S X ‰& ñ • ¸ # 3 0 A ? /\ " f ë

 H‰  ³° ú כõ  { 9 u  % i “ ¦, 50 wt% 0 l x • ¸\ " f  H ë  H‰  ³° ú כ˜ Ð 

± ú

>  8 £ ¤& ñ ÷ &% 3  . ± ú “ É r & h $ í • ¸\ " f  H ì  r  _  î  r1 l x s  q 

“

§& h   Ø Ôl  M :ë  H \  1 l x% i † < Æ& h  ¨ î + þ A  © œI  Ä »t ÷ &  H  כ Ü

¼– Ð ˜ Ðs t ë ß –, ì  r  _  & h $ í • ¸ Z  }  t €   ì  r  _  ¹ ¡ §f ”  e ”

s   © œ@ /& h Ü ¼– Ð Ö ¼ 9t “ ¦ FCS  © œu _  › ' a8 £ ¤  Òx \ " f  H ì

 r  _  Ø  ¦{ 9  Å Òl  U  ´# Qt Ù ¼– Ð z  ´+ « > r ç ß –s   ú ªÜ ¼€   1 l x

&

h

 ¨ î + þ A  © œI \  ¦ Ä »t ô  Ç “ ¦ ½ + É Ã º \ O  .   " f Z  }“ É r & h 

$ í

• ¸\ " f 8 £ ¤& ñ r ç ß –`  ¦ Ø  æì  r y  U  ´>  €   Ô  ¦S X ‰& ñ • ¸ü < š ¸

\  ¦ ×  ¦{ 9  à º e ” `  ¦  כ s  .

Table 1. The diffusion times of R6G molecules and the viscosities of aqueous solutions with different sucrose concen- trations.

Concentration(wt.%) 0 10 20 30 40 50

Diffusion time(µs) 72 ± 5 105 ± 7 149 ± 10 230 ± 43 376 ± 72 614 ± 100 Viscosity(mPa·s) 0.89 1.30 ± 0.20 1.84 ± 0.27 2.84 ± 0.78 4.65 ± 1.13 7.59 ± 1.89 Reported value of viscosity(mPa·s) 0.89 1.28 1.75 2.73 5.16 12.40

633 nm F  g " é ¶`  ¦  6   x   H FCS r Û ¼% 7 ›\  @ /K  7 £ x À Óà º

\

" f { 9  _  t 2 £ § s  24 nm– Ð · ú ˜ 9”   + þ AF  g q × ¼\  ¦ s 6   x

# Œ  ^ ‰ ] j Œ •  ) a FCS  © œu _  Ä »´ ò œ í& h   Òx \  ¦ > í ß – 

“

¦, Ô  æ í ß –% i  6   xÓ  o\ " f { 9  _  t 2 £ § R s  18 nm– Ð · ú ˜ 9”   Q-dot _  ß ¼l \  ¦ 7 £ x À Óà º\ " f  r  8 £ ¤& ñ % i  .

D = k

B

T

6πηR (4)

d ”

 (4)ü < ° ú  “ É r Û ¼: Ÿ ¤ Û ¼- “  à » “  d ” \  20

^◦

C \ " f Ó ü t _

 & h $ í • ¸ η = 1 mPa·sü < · ú ˜ 9”   + þ AF  g q × ¼_  ì ø Ít 2 £ § R

= 12 nm, “ : r • ¸ T = 293 K, ^  ¦ Þ Ôë ß –  © œÃ º k

^B

[ þ t`  ¦ @ /{ 9  

#

Œ > í ß –ô  Ç   õ , Ó ü t \ " f + þ AF  g q × ¼_  S X ‰ í ß – > à º  H 1.73 × 10

⁻¹¹

m

²

/s – Ð > í ß –÷ &% 3  . > í ß –  ) a S X ‰ í ß – > à º\  ¦ l ì ø ÍÜ ¼

–

Ð FCS z  ´+ « >õ  Y >  t  > í ß – õ & ñ `  ¦ : Ÿ x K  PBS 6   xÓ  o_ 

&

h

$ í • ¸ü < 7 £ x À Óà ºü < PBS\ " f Q-dot_  ì ø Ít 2 £ §    o\  ¦ 8 £ ¤

&

ñ % i  .

Figure 7“ É r FCS  © œu \  ¦ : Ÿ x K  y Œ •y Œ •_  r « Ñ[ þ t \  @ /K  % 3 

#

Q”   ACF[ þ t õ  þ j& h ´ ú » ¡ §`  ¦
  · p  כ s  . Fig. 7(a)  H 7

£

x À Óà º\ " f 0 l x • ¸   É r + þ AF  g q × ¼ü < Q-dot_  ACFs 

“

¦, (b)  H PBS 6   xÓ  o\ " f 8 £ ¤& ñ  ) a ACF s  . Õ ªa Ë >\ " f l   

ñ– Ð ³ ðr   ) a  כ “ É r  © œu \ " f 8 £ ¤& ñ  ) a ACF s “ ¦ ‚  Ü ¼– Ð ³ ð r

  ) a  כ “ É r  î  r l   ñ[ þ t \  @ /ô  Ç þ j& h ´ ú » ¡ §  õ s  . 6   x Ó 

o\ " f { 9  _  0 l x • ¸ 10 nM { 9  M :˜ Ð  1 nM{ 9  M : ACF _

 œ íl  ”  ; Ÿ ¤ s  10C  Z  } > 
 M ® o “ ¦, s   H 7 £ x À Óà º, PBS, Q- dot õ  + þ AF  g q × ¼ü < ° ú  s  › ¸| s   Ø Ô 8 • ¸ 1 l x{ 9  >  & h  6

 

x ÷ &  H  כ `  ¦ S X ‰ “   % i  .

S X

‰ í ß –r ç ß –“ É r Figure 7(a) ü < (b) — ¸¿ º + þ AF  g q × ¼˜ Ð   H Q-dot s   ú ª> 
 z Œ ¤ . s   H Q-dot s  + þ AF  g q × ¼˜ Ð   Œ •



" f 7 £ x À Óà ºü < PBS 6   xÓ  o\ " f ˜ Ð   Ø Ô>  S X ‰ í ß – l  M : ë

 H s  . Õ ª Q
 ° ú  “ É r 0 l x • ¸\ " f 7 £ x À Óà º\ " f_  S X ‰ í ß –r ç ß –

s ü < PBS 6   xÓ  o\ " f_  S X ‰ í ß –r ç ß –_  s   H PBSA á ¤ s   8

 H  כ `  ¦ S X ‰ƒ  y  ½ ¨ì  r ½ + É Ã º e ”  . s   H 7 £ x À Óà º˜ Ð  PBS _

 & h $ í • ¸  8 ß ¼   H  כ `  ¦ _ p ô  Ç . s ü < ° ú  “ É r  z  ´

“

É r Fig. 8 \ " f  r  S X ‰ “  ½ + É Ã º e ”  . Fig. 8“ É r 1 nM 0 l x • ¸ _

 Q-dotõ  + þ AF  g q × ¼ r « Ñ\ " f q ‚  + þ A þ j& h ´ ú » ¡ §   õ [ þ t

`

 ¦ ˜ Ð# Œï  r  . 1 l x{ 9 ô  Ç { 9  \  @ /K  7 £ x À Óà º\ " f˜ Ð  PBS 6

  xÓ  o\ " f S X ‰ í ß – r ç ß –“ É r U  ´> 
 z Œ ¤ . y Œ •y Œ •_  r « Ñ[ þ t \ 

@

/K " f % 3 # Q”   S X ‰ í ß – r ç ß –“ É r Table 2 \   r 
 ? /% 3  .

Fig. 7. (Color online) Experimentally obtained and least square fitted normalized correlation functions (a) in dis- tilled water and (b) in PBS solution.

Table 2. Diffusion times of Q-dots in distilled water and PBS solution.

Diffusion Time (s)

Sample Beads Q-dots

Concentration 10 nM 1 nM 10 nM 1 nM Distilled Water 0.00797 0.00810 0.00240 0.00241

PBS 0.02080 0.02067 0.00278 0.00278

Fig. 8. (Color online) Least square fitting results for 1 nM Q-dots and beads.

Table 3. Viscosity of PBS and sizes of Q-dots in distilled water and PBS solution.

Viscosity of PBS Size of Q-dots (nm)

(Pa·s) Distilled Water PBS 0.00255 7.4 ± 0.2 3.2 ± 0.2

Table 2 \ " f { 9  [ þ t _  0 l x • ¸  Ø Ô 8 • ¸ 6   x B _  7 á x À

Ó ° ú  `  ¦  â Ä º, ì  r  _  S X ‰ í ß –r ç ß –“ É r à º ms & ñ • ¸_  s 



 H e ” t ë ß –  _  { 9 u    H   õ \  ¦ ˜ Ð% i  . Õ ªo “ ¦ 1 l x{ 9 ô  Ç { 9

 \  @ /K " f 7 £ x À Óà º\ " f_  S X ‰ í ß – r ç ß –s  PBS 6   xÓ  o\ 

"

f˜ Ð   ú ª> 
 z Œ ¤ .

· ú

¡\ " f % 3 “ É r + þ AF  g q × ¼_  S X ‰ í ß – > à ºü < Table 2\ 
 

è ß – 7 £ x À Óà º\ " f S X ‰ í ß –r ç ß –`  ¦ s 6   x # Œ Ä »´ ò œ í& h  Òx _  ì

ø Ít 2 £ § w\  ¦ > í ß –ô  Ç   õ  0.76 µm% i “ ¦, ACF_  þ j& h ´ ú » ¡ § Ü

¼– РÒ'  % 3 # Q”   s = 8`  ¦ s 6   x # Œ c ” _  » ¡ ¤ ~ ½ ӆ ¾ Ó Z  } s  z

= 6.09 µm ü < Ä »´ ò œ í& h   Òx  19.6 fl\  ¦ % 3 `  ¦ à º e ” % 3  .

S X

‰ í ß –r ç ß –õ  œ í& h _  ì ø Ít 2 £ §`  ¦ d ”  (3)\  @ /{ 9  # Œ PBS 6   x Ó 

oõ  7 £ x À Óà º\ " f + þ AF  g q × ¼ü < Q-dot_  S X ‰ í ß – > à º\  ¦ ½ ¨ 

“

¦, PBS_  & h $ í • ¸_  Q-dot_  ß ¼l \  ¦ Table 3 õ  ° ú  s  >  í

ß – % i  .

Table 3 \ " f PBS_  & h $ í • ¸  H Ó ü t _  & h $ í • ¸ 1 mPa·s˜ Ð



  © œ@ /& h Ü ¼– Ð 2.5C  ß ¼> 
 z Œ ¤ . s   H 4 Ÿ ¤z  ´l – Ð



ïh A ) a ½ ¨+ þ A { 9  _  ³ ð€  s  PBS 6   xÓ  o\  Ÿ í† < ʝ ) a ì  r  [ þ t _

 ~ ½ ÓK – Ð î  r1 l x5 Å q • ¸ Ö ¼ 9& ’ l  M :ë  H s   Ò q ty Œ •  ) a  . Q- dot _  t 2 £ §“ É r pH 9“   Ô  æ í ß –% i \ " f 18 nm– Ð · ú ˜ 9& ’ t ë ß – PBS ü < 7 £ x À Óà º\ " f · ú ˜ 9”   ß ¼l ˜ Ð  y Œ •y Œ • 1/3, 1/9– Ð  Œ •

>


 z Œ ¤ . 4 Ÿ ¤z  ´l – Ð  ïh A ) a Q-dot _  t 2 £ § s  10 nm s

 © œ“   & h `  ¦ y Œ ™î ß –½ + É M :, 8 £ ¤& ñ ° ú כ“ É r B Ä º ± ú “ É r   õ – Ð, s 



 H pH    o\  _ K  Q-dot_  µ 1 Ï F  g : £ ¤$ í s    † < Ê\     Ô

 ¦ î ß –& ñ >  µ 1 Ï F  g   H ^  ¦a A( ç (blinking)_  % ò † ¾ ÓÜ ¼– Ð S X ‰ í ß – r

ç ß –s   ú ª>  8 £ ¤& ñ ÷ &  H  כ Ü ¼– Ð ˜ Г    [16].

V. + s Ç Â ] Ø

‘

: r ƒ  ½ ¨\ " f  H 532 nm F  g " é ¶ õ  633 nm F  g " é ¶ \  @ /K  / B N

œ

í& h  ‰ & ³p  â õ  ™ èá Ôà ÔJ ?# Q  © œ › ' a l \  ¦ s 6   x # Œ FCS  © œ u

\  ¦ ½ ¨$ í % i “ ¦, ½ ¨$ í ô  Ç FCS r Û ¼% 7 ›_  Ä »´ ò œ í& h   Òx 



 H 532 nm ü < 633 nm\  @ /K  y Œ •y Œ • 1.3 flü < 19.6 fl– Ð % 3 `  ¦ Ã

º e ” % 3  . 532 nm F  g " é ¶ \  @ /ô  Ç z  ´+ « >\ " f, ì  r  _  0 l x • ¸

\

    S X ‰ í ß –r ç ß –_  Ô  ¦S X ‰& ñ • ¸  H ±5 µs – Ð 2 % s ? /% i  .

Sucrose \  _ ô  Ç & h $ í • ¸ 7 £ x \     S X ‰ í ß –r ç ß –_  Ô  ¦S X ‰& ñ

•

¸  H 7 £ x  % i t ë ß –, > í ß –  ) a & h $ í • ¸  H · ú ˜ 9”   ë  H‰  ³° ú כ\ 

"

f ß ¼>  # Á # Q
t  · ú §  H   õ \  ¦ ˜ Ð% i  . Õ ªo “ ¦ 633 nm F 

g " é ¶ \  @ /ô  Ç z  ´+ « >\ " f, PBS 6   xÓ  o_  & h $ í • ¸ 7 £ x À Óà º˜ Ð



 Z  }“ É r 2.226 mPa·s – Ð ½ ¨K & ’ “ ¦, Q-dot_  t 2 £ §“ É r 7 £ x À Ó Ã

ºü < PBS\ " f · ú ˜ 9”   ß ¼l ˜ Ð   Œ •“ É r 7.4 ± 0.2, 3.2 ± 0.2 nm% i  .

‘

: r ƒ  ½ ¨\ " f ½ ¨$ í ô  Ç FCS r Û ¼% 7 ›`  ¦ : Ÿ x K  532 nmü < 633 nm F  g " é ¶ \  @ /K  ‚  × þ ˜& h “   FCS  © œu   6   x _  0 p x$ í `  ¦ S X ‰

“

  % i “ ¦, + þ AF  g Û ¼& 7 ˜à Ô! 3 s  ½ ¨ì  r ÷ &  H " f– Ð   É r + þ AF  g ì  r



\  @ /K " f 1 l x r \  ì  r  [ þ t _  1 l x& h  : £ ¤$ í `  ¦ ì  r$ 3 ½ + É Ã º e ” 

`

 ¦  כ Ü ¼– Ð ˜ Г   .

P

c p 8 ý ò k >

s

  7 Hë  H“ É r 2007¸  • ¸ & ñ  Ò(“ §¹ ¢ ¤ õ † < Æ l Õ ü t  Ò)_  t " é ¶ Ü ¼

–

Ð ô  Dz D Gƒ  ½ ¨F é ß –_  • ¸€  •ƒ  ½ ¨ \ O (ROA-2007-000-20052- 0) _  t " é ¶ Ü ¼– Ð Ã º' Ÿ ÷ &% 3 _ þ v m  .

Y

c p w Š à U Ø ”  ô

[1] A. Cooper, Biophysical Chemistry (Lifescience, Cambridge, 2005), p. 84.

[2] J. Mertz, Introduction to Optical Microscopy (Robertand Company Publishers, Colorado, 2010), p. 269.

[3] D. Magde, E. Elson and W. W. Webb, Phys. Lett.

29, 705 (1972).

[4] M. Ehrenberg and R. Rigler, Chem. Phys. 4, 394 (1974).

[5] D. Sengupta, J. Balaji and S. Maiti, Method 27, 374 (2002).

[6] M. Renz and J. Langowski, Chromosome Research 16, 424 (2008).

[7] D. R. Lide, CRC Handbook of Chemistry and

Physics (CRC Press, 1994), Chap. 6, p. 205.

[8] J. R. Lakowicz, Principles of Fluorescence Spec- troscopy, 3rd ed. (Springer Science+Business Media, New York, 2006), p. 797.

[9] O. Krichevsky and G. Bonnet, Rev. Prog. Phys. 65, 251 (2002).

[10] E. L. Elson and D. Magde, Biopolymers 13, (1974).

[11] J. B. Pawley, Hand book of Biological Confocal Mi- croscopy, 3rd ed. (Springer, New York, 2006), p. 506.

[12] D. Magatti and F. Ferri, Appl. Opt. 40, 4011 (2001).

[13] M. J. Culbertson and D. L. Burden, Rev. Sci. In- strum. 78, 044102 (2007).

[14] M. Bourne, Food Texture and Viscosity: Con- cept and Measurement (Academic press, California, 2002), p. 78.

[15] M. Mathlouthi and P. Reiser, Sucrose Properties and Applications (BLACKIEA & P, London, 1995), p.

137.

[16] M. Kuno, D. P. Fromm, H. F. Hamann, A. Gal-

lagher and D. J. Nesbitt, J. Chem. Phys. 112, 317

(2000).