5:1 ~

대한임상병리사회지 : 제 23권 1호 1991

세포장해능력 측정에서 수학적 매개변수의 이용

경회의료원 암센타 면역연구실

김 재 만

Key words : NK. LAK. lytic unit.

cell-mediated cytotoxicity.

1 . 서 론

한 종류의 세포군이 다른 세포군을 표적으로 인지 해서 파괴시키는 세포장해능력을 시험하는 51Cr-방 출법은 이제 널리 사용되고 있다 51Cr-방출법은 일 정한 시간동안 정해진 작동세포와 표적세포를 함께 배양하면 작동세포에 의해 파괴된 표적세포로부터 배양전에 미리 표지시켜 놓은 51Cr이 배양상청액으 로 방출되는데 수거된 배양상청액을 y-counter를 이용하여 51Cr의 방사량을 측정하여 얻어진 자료를 갖고 작동세포의 세포장해능력을 결정하는 방법이 다. 아직까지 대부분의 실험설에서는 세포장해능력 을 결정하는데 있어서 단순히 작동세포와 표적세포 의 E: T ratio에 만 의 존하는 한시 점 의 percent lysis

로 표현하고 있는 실정이다. 작동세포가 표적세포를 파괴시키기 위해서는 작동세포의 활성도와 빈도가 동시에 독립쩍으로 영향을 미치게 된다 (Simon J Bol 등， 1986)8). 그러 므로 세 포장해 능력 의 측정 에 있어서 작동세포의 활성도와 빈도가 동시에 반영되 어 계 산되 어 져 야 하지 만 percent lysis로는 표적 세 포 에 대한 작동세포의 활성도와 빈도의 효파를 반영시 키 는 것 어 불가능하다 . 따라서 percent lysis의 결파 해석은 결과해석 자체가 정확한 세포장해능력을 결 정짓기에 어렵다는 문제를 안고 있다. 이러한 문제 를 해결하기 위한 방법이 여러 연구자들에 의하여 시도되었다. Miller와 Dunkley 등은 작동세포의 수 와 파괴된 표적세포간의 관계가 포아송 분포

(Poisson distribution) 를 이 루고 있 는 것 을 이 용하 여 지 수적 합방정 식 (Exponential fit equation) Y =

A(l-e-^kX) 를 제 안하였다6) (Miller and Dunkley, 1974). x는 plate well 당 립 프구의 수이 며 작동세 포 의 활성도 A와 빈도가 세포장해능력 측정에 동시에 반영된다.

본 연구에서는 세포장해능력 측정시험에서 결과

해석의 중요성에 따라 한가지의 E: T ratio에 따른 한 시 점 비 교만을 하는 percent lysis와 여 러 가지

E: T ratio의 실험을 통해 얻어진 자료를 갖고，

Miller 등이 제안한 지수 쩍합방정식을 이용한 LU

의 값 사이에 결과해석의 차이를 비교해 보고자 한 다.

II. 재료 및 방법 1. 세포배양액의 준비

RPMI 1640 조직 배 양액 파 antibiotics는 GIBCO (Grand Island, NY) 에 서 , serum-free medium인

X-VIVO 10 조직 배 양은 Whittaker Bioproducts, Inc. 에 서 , fetal calf serum (FCS) 은 CSL로부터 구 입하였으며 human AB serum은 혈액형이 AB+ 인 정상인들로부터 얻어진 혈청을 모아서 사용하였다.

2. 작동써포의 준비

정상인 또는 암환자의 정맥으로부터 헤파런 (50μ/

ml) 처리된 1회용 주사기로 말초혈액을 취하여 아래 와 같은 방법으로 분리하였다

1) 단핵 구 (mononuclear cell: MNC) 의 분리 전혈과 phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.

4 용액 을 1 : 1로 혼합하여 Boyum 의 Ficoll -Hypaque 비중구배 원심분리법，<Boyum， 1968)3)으 로 단핵구를 분러한 후， PBS로 3회 원첨 세척하였 다.

2) 럼 프구 (peripheral blood lymphocytes

:PB L)의 분리

세척된 MNC를 2% fetaI ca1f serum (FCS) 을 첨 가한 RPMI 1640 조직 배 양액 에 5 X 10⁶ cell/ ml 농도 로 부유시 킨 후 Fisher 등의 방법 (Fisher 등， 1981) 에 따라 플라스틱 배 양접 시 (Costar 3100, Cambrid- ge, Mass. USA) 에 옮겨 3tc, 5% CO2 배 양기 에 서 1시간 동안 배양하였다. 비부착성 세포를 수거하 여 이를 PBL로 사용하였다.

3. Lymphokine-activated 써 ler(LAK) 세포의 유도

PBL을 1 X 10⁶ cells/ ml의 농도로 조정 하여 10%

FCS를 첨 가한 완전 배 양액 (2mM L-glutamine, 100 U/ml 페니실런， 100μg/ml 스트랩토 마이신을 첨가 한 RPMI 1640 조직배양액)으로 재부유하여 사용하 였다. Inter1eukin-2 (IL-2) 는 경희의료원 면역연구 실에서 정한 KMC unit에 따라 100U/ml로 가하였 다 . 배 양용기 로서 는 24 well microplate (Costar 3424) 를 사용하였 으며 3tc, 5% CO2 배 양기 에 서 4

일간 배양하였다. 배양한 후 IL-2에 의해 유도된 LAK세 포는 세 포장해 능력 측정 의 작동세 포로 사용 하였다.

4. 표적 세포의 준비

K562 (chronic myelogenous leukemia), Hela (human cervix carcinoma) , MCF -7 (human breast adenocarcinoma) ^그 리 고 Raji(Burl이tt

lymphoma, Human) 종양세 포주를 3tc^, 5% CO2 배양기에서 계대배양하여 사용하였다. 배양된 종양 세포주들은 동위원소 표지를 위해 세포부유액 0.5ml

(1-3 X 10⁶cells) 에 50μci의 Na20451 Cr(New Engla- nd Nuclear, Boston, Mass. USA) 융 가하여

3tc, 5% CO2 배양기에서 90분간 표식하였다. 표 지된 세포를 2% FCS가 첨가된 조직배양액으로 4회 원침세척한 후 10% FCS가 첨가된 조직배양액에

5 X 10⁶ cells/ml로 배 부유하였 다 .

5. NK 세포의 세포장해능력 측정

NK 세포의 세포장해능력 측정은 4시간 51Cr-방출 법 (남상윤 등， 1986) 을 이용하였으며 표적세포는 NK 세포에 빈감한 K562를 사용하였다. 표적세포를 96-well microplate에 wel1당 5X 10^{3개 씩 분주하고} 작동세 포는 ^1. 25 X 10⁵에 서 1 X 10⁶ cel1s/ml농도로 조 정된 정상언 및 방광암환자 그러고 위암환자의 PBL 올 200μl씩 가하여 100Xg에 3분간 원칭하였다.

3tc, 5% CO2 배양기에서 4시간 방치한 ^{후 각} wel1

들로부터 상청액을 100μl씩 수거하여 y-counter (Beckman Gamma 5500) 로 방사활성 을 측정 하였 다.

6. LAK 세포의 세포장해능력 측정

IL-2로 유도된 정상인의 LAK 세포를 작동세포 로， Hela, K562, MCF-7 그러고 Raji 종양세포주 를 표적세포로 사용하였다. 측정방법은 NK 세포의 세포장해능력과 동일한 방법으로 시행되었다.

7. Percent Iysis오~ Iytic unit(LU)

Percent lysis는 다음과 같은 공식 으로 계 산되 었 다.

Percent lysis (%)

_Exp. cpm^l)-Spon. cpm_;-~U. _ ... ^u 2 ) X 100 Max. cpm^{3) -} Spon. cpm

CD Experimental count per minute

~ Spontaneous count per minute CID Maximum count per minute

Lytic unit (LU) 는 인위적으로 주어진 %만큼 표 적세포를 파괴시키는데 필요한 작동세포의 수로서 정의되는데 본 연구에서는 1 X 10⁶개의 작동세포가 5000개의 표적세포를 30% 파괴시키는 경우를 1 LU

로 정하였다.

LU3o/10⁶ effector cel1s 10⁶

- N o. of cel1s needs for 30% lysis of 5000 target cel1s

LU를 구하기 위해서는 Y =A (l-e-^kX) 의 지수적 합방정식을 이용해야 하는데 Y는 51Cr의 유리방사 능이며 A는 최고 유리방사능의 값을 적용하였고 ^X 와 k는 작동세포와 표적세포의 비율과 상수를 각각 적 용하였으며 분석 은 BRMP computer program을 이용하였다.

III. 결 과

1. NK 세포의 세포장해능력 측정에서의 percent

Iysis오~ LU

NK 세포의 세포장해능력을 측정하기 위해 K562

‘암세 포주에 대 해 수행 된 실험 의 결과를 percent

lysis와 LU로 각각 계 산하였 다 (Table 1). Percent

-214-

100

80

60

40

20

0 40 : 1 20 :‘ 1

口 control

~ control

E : T Ratios

t::. Bladder Ca.

_ Bladder Ca.

120

100

80

60 디 : u .... ‘

>‘

40 ....l

20

0

10 : 1 5:1

。 Stomach Ca.

흩컬 Stomach Ca.

Fig. 1. Comparison of NK cell activity

lysis의 분석 결과는 E : T ratio간에 정상인과 암환 자 사이의 세포장해능력의 정도가 큰 차이를 나타내 고 있다. 즉 정상인과 방광암환자 사이에는 3.5배

(40 : 1) 에서 13.4배 (5 : 1) 로， 정상인과 위암환자 사이에는 3.8배 (40 : 1) 에서 20배 (5 : 1) 로 각각 차 이가 난다. 그러고 LU의 분석결과는 정상인이 97.

2로 방팡암 환자 (4.8) 와 위암 환자 (3.9) 에 비해 20

배이상 높게 나타났다 (Fig. 1).

Table 1. K562 암세 포주에 대 한 NK 세 포의 세포장해능력 비교

E: T Ratio percent (%) lysis

Control 방광암환자 위암 환자

40 : 1 93.0 26.3 24.7

20 : 1 91.1 18.2 11. 7 10 : 1 81.3 12.3 7.1

5:1 61.6 4.6 3.1

Lytic Unit 97.2 4.8 3.9

세포로 하여 각각으로 실험을 수행하였다 (Table 2, 3, 4, 5). Fig. 2는 Hela 암세포주에 대한 LAK 세 포의 세포장해능력을 측정한 것인데 10% FCS로 유 도한 LAK세 표와 serum-free (S-F) 조직 배 양액 으로 유도한 LAK 세 포의 percent lysis에 서 E: T ratio 20 : 1에 서 S-F인 경 우가 94.8% 로 10% FCS보다 약간 높았올 뿐이며 40 : 1, 10: 1 그리고 5 : 1에서 는 모두 낮게 나타났는데 5 : 1에서만 약간의 차이 (1 .15배)를 보였을 뿐 나머지 비율에서는 거의 같게 나타났다 . LU는 10% FCS로 유도한 LAK세포가 124.0, S-F로 유도한 LAK 세 포가 100.3으로 1.24 배 의 차이 로 percent Iysis의 5 : 1과만 비 슷한 차이 를보였다.

Table 2. Hela 암세포주에 대한 LAK 세포의 세포장해능력 비교

E: T Ratio

percent(%) lysis 2% 10%

S-F Pt. (10%

HABS FCS FCS)

79.1 97.0 96.2 77.9 71. 9 92.5 94.8 73.9 57.0 86.4 83.1 57.4 53.7 70.3 60.8 28.8 47.1 124.0 100.3 37.4 40 : 1

2. LAK 세포의 세포장해능력 측정에서의 percent 20 : 1

Iysis오~ LU 10 : 1

5:1 LAK 세포의 세포장해능력을 측정하기 위해

K562, Hela, MCF-7 그리 고 Raji 암세 포주를 표적

Lytic Unit

1t川

HO

,....‘

ë ⁶⁰

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“

;‘ 40 u

~'?

20

()

140 120 100

80 '2

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...l

40 20

0

때 때

WM WM

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없 댔 댔

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A

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-願뼈

w%

%%

--%

Fig. 2. Comparison of LAK cell activity to Hela

Table 3. K562 암세포주에 대한 LAK 세포의 세포장해능력 비교

percent(%) lysis E: T Ratio

2% 10%

S-F P^t. (10%

HABS FCS FCS)

40 : 1 98.2 97.9 97.6 83.5 20 : 1 97.7 93.3 9^1.3 72.7

10 : 1 89.0 93.2 88.1 58.9

5 : 1 88.0 80.2 85.2 50.9 Lytic Unit 209.0 171.3 186.1 48.5

Table 4. MCF-7 암세포주에 대한 LAK 세포의 세포장해능력 비교

percent(%) lysis E: T Ratio

2% HABS S-F Pt. (10% FCS) 40: 1 6^1.9 88.6 87.9 20: 1 ^'J/.'J 63.8 70.8 10 : 1 47.3 46.0 34.6 30.2 31.4 14.9

L~1ic Unit 23.0 32.1 28.2

Table 5. Raji 암세포주에 대한 LAK 세포의 세포장해능력 비교

percent (%) lysis E : T Ratio

2% HABS 10% FCS

40 : 1 94.2 98.0

20 : 1 88.0 96.2

10 : 1 86.1 76.0

5 : 1 70.4 68.8

Lytic Unit 121.6 105.9

Fig. 3은 K562 암세포주에 대한 LAK 세포의 세 포장해능력을 비교한 것인데 10% FCS로 유도한 LAK세 포가 percent lysis의 값이 S-F로 유도한

LAK 세 포보다 40 : 1, 20: 1 그리 고 10 : 1에 서 높 게 나타났고 5:1에 서 는 S-F로 유도한 LAK세 포가 85.2% 로 80.2% 의 10% FCS로 유도한 LAK세 포 보다 높게 나타났다. 그러 나 반대 로 LU의 값으로 비 교해 보면 S-F로 유도한 LAK세 포가 186.1로 171.3인 10% FCS로 유도한 LAK세포보다 오히려 세포장해능력이 높은 것으로 나타났다.

-216-

120 ₂₅₀

100

200 :;..、 80

‘」

150P ·E

u

><

.8 60

100 3니

.... 。

u 〉、

'-0 40

。1

20 50

40: 1 20: 1 10 : 1 0

5 : 1 0

E: T Ratios

• 2% HABS 6. 10% FCS 0 S-F 口 Pt. (10% FCS) _ 2% HABS ~경 10% FCS C그 S-F 투급 Pt. (10% FCS)

Fig. 3. Comparison of LAK cell activity to K562

100 35

80 30

」4;;QX。。4j‘ ⁶⁰

40

?f?_

25

20 ;디을

15 응니 ^... 、

10 20

3

.HJ : 1 20 : 1 10 : 1 o

()

E: T Ratios

디 2% HABS ð S-F 。 Pt. (l()% FCS)

~ 2q,6 HABS _ S-F _ε경 Pt. (l()'!o FCS)

Fig. 4. Comparison of LAK cell activity to MCF-7

120 140

&~~솔\

、、‘ 口~

壘~J

80

ι‘-‘igx;。。ja-‘

~‘ t【〉·」」Ji

~ 40 40

20 20

0 0

40: 1 20: 1 10 : 1 5 : 1

E : T Ratios

口 2% HABS 6 10% FCS 置짧 2% HABS ~ 10% FCS

Fig. 5. Comparison of LAK cell activity to Raji

Fig.4와 Fig. 5는 각각 MCF-7과 Raji 암세 포주 에 대한 LAK 세포의 세포장해능력을 비교한 것인

IV. 고 찰

데 실험결과 MCF-7 암세포주에 대해 40 : 1과 20 : 세포장해능력을 측정하는 51Cr-방출법은 암세포 1에서는 10% FCS로 유도한 LAK세포가 87.9% 와 에 대한 작동세포의 능력을 측정하고 비교분석하는 70.8% 로 2% HABS로 유도한 LAK세포 61.9% 와 데 있어서 가장 널리 사용되는 방법이다. 그러나 지 57.5% 보다 percent lysis의 값이 1. 4배와 1. 2배로 금까지 실험젤에서 E : T ratio에 따른 percent lysis 높게 나타났고 10 : 1파 5 : 1에서는 반대로 2% 만을 이용하고 있어서 실험상의 protocol에서는 문 HABS로 유도한 LAK세포가 47.3% 와 30.2% 로 제가 발생되지 않았다고 최종적으로 결과를 해석하 10% FCS로 유도한 LAK세포 34.6% 와 14.9% 보 는데 많은 문제를 갖고 있기 때문에 한 시점에서의 다 percent lysis9.l 값이 1. 4배 와 2.0배 로 높게 냐타 percent lysis의 값만을 비 교하는 것 으로 만족해 왔 나 2% HABS로 유도한 LAK세포가 약간 높은 듯 다. 즉 한 가지의 E : T ratio에서 한 작동세포가 다 하나 LU로 비교한 경우 LU의 값이 10% FCS로 유 른 작동세포 보다 percent lysis의 값이 높다고 결론 도한 LAK세포가 28.2로 23.0인 2% AHBS로 유도 을 구하는 것으로 만족했다. 그러나 이와같은 결과 한 LAK세포 보다 높게 나타났다. 그리고 Raji 암세 해석은 애매모호한 결과해석일 뿐만 아니라 객관성 포주에 대해 40 : 1파 20 : 1에서는 10% FCS로 유도 마져 결여되어 있어서 올바른 실험결과로서 인정을 한 LAK세포가 98.0% 와 96.2% 로 2% HABS로 유 받지 못하였다. 세포장해능력을 측정하기 위해서는 도한 LAK 세포 94.2% 와 88.0% 보다 percent lysis 작동세포의 활성도와 빈도 그리고 장해를 입은 표적 의 값이 높게 나타났고 10 : 1파 5:1에서는 반대로 세포의 수와 작동세포에 대한 표적세포가 나타내는 2% HABS로 유도한 LAK세포가 86.1% 와 70.4% 장해의 감수도의 높낮이 등에 따른 차이가 반영되어 로 10% FCS로 유도한 LAK세포 76.0% 와 68.8% 져야 한다. 실제로 K562 암세포주는 KN세포에 대 보다 percent lysis의 값이 높게 나타나 10:1(1.13 해 감수성이 있는 세포로， Raji암세포주는 NK세포 배)에서만 약간의 차이를 보였는데 LU의 값은 2% 에 대해 저항성이 있는 세포로 알려져 있다. 그러고 HABS로 유도한 LAK 세 포가 121. 6으로 105.9 인

10% FCS로 유도한 LAK세포 보다 percent Iysis의

10 : 1에서 보인 차이와 비슷한 차이 (1. 15배)로 높게 나타났다.

표적세포에 비해 작동세포의 수를 아무리 많이 늘려 도 표적세포 전부를 파괴시키지는 못한다 (Pross，

198F) : Bloom and Korn, 1983²)) 고 보고된바 있는 데 이는 표적세포의 작동세포에 대한 이질성

-218-

(heterogeneity) 때 문이 다 . 따라서 많은 연구자들이 이러한 문제점을 개선하기 위해 많은 시도를 하였는 데 Miller와 Dunkley 등은 동계 학을 이 용하여 작동 세포와 표적세포간의 반응에서 작동세포의 활성도 와 빈도를 함께 반영시걱 결파를 계산해내는 지수적 합방정식 Y=A(l-e-^kX) 를 제안하였다.

K562 암세포주에 대한 사람의 NK 세포의 세포장 해 능력 측정 에 서 percent lysis의 분석 결과는 E:T

ratio간에 정상인과 암환자 사이의 세포장해능력의 정도가 큰 차이를 나타내고 있다. 즉 정상인과 방광 암환자 사이에는 3.5배 (40 : 1) 에서 13.4 배 (5 : 1)

로， 정상인과 위암환자 사이에는 3.8 배 (40 : 1)에서 20배 (5 : 1) 로 각각 차이가 남을 알 수 있는데 어느

E : T ratio에서 결과를 해석하느냐에 따라 전체적

인 실험 결과가 달라질 수 있다. 그러나 LU의 분석 결과를 보면 40 : 1 에서 5:1까지의 E: T ratio를 종 합적으로 반영하여 하나의 분석값을 구하였기 때문 에 각 실험군의 차이를 명확하게 알 수가 있다 (Fig.

1, Table 1).

K562, Hela, MCF-7 그리 고 Raji 암세 포주에 대 한 LAK 세포의 세포장해능력 측정에서 Hela 암세 포주에 대 한 LAK세 포의 경 우 10% FCS로 유도한

LAK 세 포와 serum-free(S-F) ^{조직 배 양액 으로 유}

도한 LAK 세 포의 percent lysis에 서 E : T ratio 20 : 1에서 S-F인 경우가 94.8% 로 10% FCS 보다 약간 높았을 뿐이 며 40 : 1, 10: 1 그리 고 5:1에 서 는 모두 낮게 나타났다. 만일 20 : 1 하나의 E:T

ratio로만 실험을 하였다면 S-F로 유도한 LAK 세 포가 10% FCS로 유도한 LAK 세 포의 세 포장해 능 력 보다 더 높은 것으로 결과해석이 될 것이다. 뿐 만아니라 여러 종류의 E: T ratio로 실험을 하였다 고 해 도 10% FCS로 유도한 LAK세 포가 40 : 1,

10 : 1 그리고 5 : 1에서 S-F로 유도한 LAK 세포 보 다 높게 나타났다고 해 서 10% FCS로 유도한 LAK

세포가 S-F로 유도한 LAK 세포 보다 세포장해능력 이 더 높다고 결파를 해석할 수는 없다. 그러나 지 수적합방정식을 사용하여 구해진 LU의 값을 이용하 면 10% FCS로 유도한 LAK 세 포가 124.0으로 S-F

로 유도한 LAK 세포의 LU 100.3 보다 높게 나타났 다고 결론을 내릴 수 있다

K562 암세포주에 대한 LAK 세포의 경우에 있어 서 는 10% FCS로 유도한 LAK세 포가 percent lysis

의 값이 S-F로 유도한 LAK 세 포보다 40 : 1, 20:

1 그러고 10 : 1 에서 높게 나타났고 5:1 에서는 S-F

로 유도한 LAK 세포가 10% FCS로 유도한 LAK

세포보다 높게 나타당다. 이와같은 실험 결과는 단 순히 percent lysis를 적 용하였 을 경 우 10% FCS로 유도한 LAK 세 포가 S-F로 유도한 LAK 세 포 보다 세포장해능력이 더 높다고 잘못 해석할 수 있다. 그 러나 작동세포의 활성도와 빈도를 동시에 반영하여 얻 어 진 LU의 값으로 비 교해 보면 S-F로 유도한

LAK 세 포가 186.1로 171.3인 10% FCS로 유도한

LAK 세포보다 세포장해능력이 높음을 알 수 있다.

MCF-7과 Raji 암세 포주에 대 한 LAK세 포 실험 결파 모두 40 : 1파 20 : 1에 서 는 10% FCS로 유도한 LAK세포가 2% HABS로 유도한 LAK세포 보다

percent lysis의 값이 높게 나타났고 10 : 1과 5:1에 서 는 반대 로 2% HABS로 유도한 LAK세 포가 10%

FCS로 유도한 LAK 세 포보다 percent lysis의 값이 높게 나타낯다. LU로 비교한 경우는 MCF-7 암세 포주에 대한 LAK세포의 LU의 값이 28.2로 23.0인

2% HABS로 유도한 LAK세 포 보다 높게 나타났고

Raji 암세포주에 대한 LAK세포의 LU의 값은 2%

HABS로 유도한 LAK 세포가 12 1. 6으로 105.9인

10% FCS로 유도한 LAK 세 포 보다 더 높게 나타났 다.

v. 결 론

본 연구에서는 세포장해능력 측정시험에서 결과 해석의 중요성에 따라 지금까지 대부분의 실험실에 서 사용하고 있는 한 가지의 E : T ratio에 따른 한 시 점 비 교만을 하는 percent lysis와 여 러 가지 E:

T ratio의 실험을 통해 얻어진 자료를 갖고 Miller

등이 제안한 지수적합방정식을 이용한 LU의 값 사 이에 결과해석의 차이를 비교한 결과 작동세포의 활 성도와 빈도를 동시에 반영시켜 결과를 분석하는 지 수적합방정식에 의한 결과해석이 더 객관성이 있고 작동세포간의 세포장해능력을 비교하는데 있어서 유용하다는 결론을 얻었다.

Utilization of Mathematical Parameter in Cell-mediated Cytotoxicity Mesurement

Kim, J. M.

Immunology Research Laboratory, Cancer Center, Kyung Hee Medical Center

ABSTRACT

Recently, the ⁵¹Cr-release assay have been used in the measurement of cell-mediated cytotoxicity.

The cell-mediated cytotoxicity is dependent on the frequency and activity of effector cells. The number of effector cells relate to the number of target cells. Generally, increase or decrease of the effector cells to the fixed number of target cells induce the increased or decreased cell-mediated cytotoxicity. But, the correlation between the number of effector cells and the number of target cells not always fixed and although the effector cells are numerous to the target cells, the effector cells can not lyse all target cells. However, in the majority of cases, cell-mediated cytotoxicity have been performed in a simple E: T ratios. This method of interpretation can not represents results

that have the object because results are simple comparison at one point E : T ratio. Results of cytotoxicity should be considered and represented the two factors of frequency and activity of the effector cells. Thus a trial to interpret by scientifi- c method results of cell-mediated cytotoxicity have been. Cell-mediated cytotoxicity is represen- ted by Exponential fit equation Y =A (1-e-kx).

The estimation unit is LU (lytic unit) and one LU defin as that 1 x 10⁶ effector cells lyse a 30% of 5 x

10³ target cells.

In this study, LAK Oymphokine activated killer- ) cells and NK (natural killer) cells were used as the effector cells and the K562, Hela, MCF-7 and Raji cell-line were used as the target cells. Resuts were represented that interpretation of results utilized LU has the object better than percent(%) lysis according to E : T ratios.

REFERENCES

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