어성초로부터 분리된 Quercetin의 카드물에 대한 득성억제효과
최화정 • 노용주* • 강정일* * • 백승화* ' *
생명공학연구원 천연 의학연구 센터 , * 원광대학교 한의학 전문대학원 한약자원개발 학과,
**대불대학교 물리 치료학과
(Received November 20, 2008; Revised December 25, 2008： Accepted January 3, 2009)
The Inhibitory Effects of Quercetin from Houttuynia cordata against Cadmium-Induced Cytotoxicity
Hwa Jung Choi, Yong Ju No*, Jeong II Kang** and Seung Hwa Baek*'^
Natural Medicines Research Center, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, Taejeon 305-333, Korea
^Department of Herbal Resources, Professional Graduate School of Oriental Medicine, Wonkwang University, Iksan 570-749, Korea
**Department of Physical Therapy, Daebul University Youngam 526-702, Korea
Abstract —— The aim of this study was to develop antitoxic compound for cadmium-induced cytotoxic Vero cells. These cells were divided into five groups： control group (medium only), cadmium group (cadmium only), and two experimental groups.
SRB (sulphorodamine B) assay was performed to evaluate the cytotoxicity of cell organelles. After cadmium was treated on Vero cells, we determined IC50 values to examine the detoxification effects of Houttuynia cordata methanol extract and quercetin under cadmium-induced cytotoxicity. Furthermore, morphological changes were observed by the light microscope.
In Vero cells, methanol extract of Houttuynia cordata, and quercetin showed inhibitory effects on cadmium-induced cyto
toxicity and these detoxification effects were increased in a concentration-dependent manner. These results suggest that methanol extract and quercetin from Houttuynia cordata retain a potential antitoxic activity.
Keywords □ Houttuynia cordata, quercetin, cytotoxicity, cadmium, Vero cells, SRB
많은 환경오염물질 중 특히 중금속 이온은 일단 체내로 흡수 되면 잘 배설되지 않고 생체에 측적되어 중추신경 마비, 근의 무 력화, 발암 등 급성 또는 만성 중독증을 유발할 뿐만 아니라, 돌 연변이나 기형유발과 같이 후대에까지 그 영향이 나타냄으로서 심각한 피해률 미처는 것으로 알려지고 있다.^* 특히 토양에 측 적된 중금속들이 식물의 생정ofl 머치는 영향은 다성한 것으로 보 고되었다.2 WHO에 의하면, 국가기관은 중금속과 같은 득성이 었는 화학물질이 국민건강에 위해한 수 준 존 재 하 지 않는다 는 것을 보장해 주어야 할 의무와 책임이 있으며, 이 때 위해 여 부는 식이를 통해 섬취되는 오염물질의 잉을 일일섬취 허용량 (ADI)이나 잠정 주간섭취 허용량(PTWI)파 비교 측정함으로써 가 능하며 , 만약 이런 화학물질의 실질적 노출량이 ADI나 PTW1보 다 낮다면 안전하다고 할 수 있다고 하였다.^^ 우리나러세서는 식
*본 논문에 관한 문의는 저자세게로 (전화) 063-850-6225 (팩스) 063-841-4893 (E-mail) shbaek(« wonkwang.ac.kr
품의약품 안전청의 전신인 국립 보건원에서 1985년부터 1991년 까지, 어 • 패류, 1992~1996년까지 농산물, 1999년에 당류에 대 한 중금속 함량 모니터링 사업을 수행하여, 식품으로부터 섭취 되는 중금속량을 중금속의 ADI나 PTWI와 비교 평가를 하였으 나, 식품공전에 규격이 설정되어 있는 다류 등 개벌식품에 대한 모니터링 자료는 거의 없는 실정이다.®■가 특히 심각한 사회문제 로 대두되고 있는 환경 오염성있는 중금속 중에서도 카드뮴 (cadmium, Cd>은 금속의 부식성을 방지히는 효과가 있어, 전기 도금, 플라스틱 열 안정제 및 축견지 (Ni-Cd battery) 등에 사용 되고 있다. 카드뮴은 크게 식품과 음료의 섬취 및 공기의 흡입을 통해서 일단 체내에 흡수되면, 간, 신장 및 고환 등에 측적되어,®
간득성 , 신장장해, 고환의 염증 및 괴사 등을 일으키는 것으로 보 고 되어 있 다 . ® 또 한 카드뮴은 세계적으로 일년 평균 생산과 소비량은 27,000론에 이르고 있 으 며 /카 느 몸 의 대사는 매우 긴 생물학적 반감기률 가지고 있어, 생체내에서 지속적인 측적이 이 루어진다.12) 인간에서 카드몸량의 약 5%는 경구로 흡수되어지 고, 위장관에 의한 흡수는 여러 가지 영양요소에 의해 영향을 받
12
어성초로부터 분러된 Quercetin 의 카드f 에 대한 득성억제효과 13
는다/® 혈액중 카드몸의 90% 이 상 세 포 에 서 발견되며, 카드 뮴 저장의 2대 장소는 간장과 신장이다. 그곳에 측적된 카드뮴 량은 생체 총 하중의 약 50%에 이른다. 비직업적으로 노출된 사 람에서 간장 중 카드뮴의 농도는 연령에 따라 계속적으로 증가 하며, 신장에서도 역시 최소한 50~60세까지 연령에 따라 증가 한다. 유럽과 미국에서 신장피질의 카드뮴 평균처는 15~50ppm 으로 보도되고 있다. 신장질환이 발생했을 때 신장에서 카드몸 수준은 감소하며, 조직에서 카드몸은 주로 시스테인이 풍부한 메 탈로치오닌(MT) 형성에 기여한다. MT는 61개의 아미노산중 시 스테인의 티올잔기(thiol group)가 카드뮴 득성을 경감하는데 관 여하는 것으로 보고되고 있다.^속^® MT이외에 또 하나의 방어물 질로서 글루타티온(glutathione, GSH)은 3개의 아미노산으로 구 성되어 있으며, 이 중 시스테인이 카드몸 득성에 관여하는 것으 로 알려져 있다.고® 특히 생체 내 카드뮴 득성과 관련하식 Kwata, Chung 및 Shukla 등 실 험 동 물 을 이용한 연구에 의하면, 카 드 늙 1 투여된 흰쥐의 간에서는 카드몸(n)와 GSH의 티올기가 서로 상호결합함으로써 간득성이 경감되는 것으로 보고하고 있 다. 최근에는 카드몸에 의한 세포손상의 유발이 세포마다 다르 다는 보고가 있다.2 이러한 카드몸과 같은 중금속의 득성에 대 해, 중금속 해득제로는 Ca^Na^ EDTA률 사용하는데, 이것은 중 금속과 강한 친화성 킬레이트제이나 신장득성을 유발한다.^^* 또 한 해득제 penicillamine은 위장관에서 잘 흡수되는 장점을 가지 고 있으나, 백혈구 감소증, 재생불량성 빈혈 등을 유발시킬 수 있 는 것으로 알려졌다.2^> 어성초의 신선한 엎에 함유되어 있는 quercitrin은 카드뮴 득성에 대한 억제효과가 있다고 보고하였으 며,™ quercitrin, isoquercitrin 및 quercetin을 사람 대장암 세포, 생쥐 임파세포, 생쥐 임파성 백혈병 세포에 적용한 후 MTT 정 량분•석법으로 세포득성을 측정한 결과에 근거하여,2^> 어성초 추 출물의 항암효과에 관하여 연구하였다.
본 연구는 어성초의 메탄올 추출물로 얻은 quercetin이 카드 뮴에 대한 세포득성을 효과적으로 억제할 수 었는지률 검색하고 자, Vero 세포에 quercetin을 처리하여, SRB 정량분석법 및 광 학 현미경적인 분석을 통해 세포 생존율을 검색하식 카드뮴에 대 한 득성억제 효과률 평가하고자 하였다.
실험 방법
실험재료
본 연구에 시용한 어성초는 일신약품(주)에서 건초률 구입하 여 사용하였다.
시약 및 기기
세포배양에 사용한 MEM(Eagle's Minimum Essential Medium), fetal bovine seruin(FBS)는 JBI, Trypsin-EDTA와
antibiotic-antimycotic는 GIBCO, sulforhodamine B(SRB) 와 dimethyl sulfoxide(DMSO) Sigma사에서 구입하였다. 세포의 배 양은 CO2 incubator, 현미경은 Nikcon, Deep freezer, Nitrogen freezer, Micropipette(Gilson), 96 well(Falcon), Conical tube (Falcon), HEPES, L-glutamine 등, 기타 시약은 Sigma사 제품을 사용하였다. 세포수의 계산은 Turk형 혈구계측기룰 시용하였으 며, SRB 정량분석은 ELISA reader를 사용하였다.
세포득성농 측정을 위한 세포주
어성초로부터 추출한 시료의 카드뮴에 대한 득성억제효과를 측정하기 위하식, 시용되는 Vero 세포은 한국생명공학연구원 세 포주 은행으로부터 분앙받아 사용하였으며, 10% FBS, anti- mycotic antibiotics(100 m//0을 포함한 MEM(minimal essential medium)을 배잉= 액으로 사용하여 , 37°C, 5% CO2 incubator에서 계대배양하였다.
세포배양배지
세포배양에 사용된 배지는 L-glutamine이 포함된 DMEM (Dullbeco's modified Eagle medium)에 NaHC03을 흔합한 후, 3차 증류수에 녹인 다옴 membrane filter(0.2 |am)로 여과한 후, Antimycotic antibiotics(100x ； GIBCO)를 흔합하여 여액에 55°C 에서 30분간 inactivation 시킨후, FBS룰 전체양의 10%가 되도 록 혼합한 다움■, 1 N NaOH와 1 N H O i： 사용하식 pH 7.2가 되 도록 하였다.
세포배양
세포 득성능 측정에 시용된 세포는 위에서 제조한 세포배양배 지률 사용하늬 , 세포의 지수적 성장을 유지하도록, 37°C, 5% CO2 incubator에서 culture dish에서 2—3일간 배양한 푸 , Ixtrysin- EDTA률 사용하여 cell을 떼낸 후 conical tube(falcon)에 옮겨, 1,000 rpm에서 5분간 세포 침전물을 원심분리하였다. 분리된 세 포 침전물을 다시 IxP B S에 부유시켜 원심분리한 다옴, 상등액 을 제 거 하 세 포 만 을 취하였다. 동일한 방법으로 반복 세척 후 일부률 취하여, 0.4% trypan blue를 가하식 염색되지 않은 살아 있는 세포률 hematocytometer로 세어, 1 x 10^ cells/m/S) 농도가 되도록 새로운 culture dish에 새로운 배지룰 넣어 배양하여 실 험을 하였다.
SRB assay
암세포에 대한 세포득성능 측정은 SRB 정량분석법으로 실험 하였다. 암세포에 대한 세포득성을 측정하기 위해, 96 well에 암 세포 Caski, SiHa룔 lxlO\ ;elh% ell 농도로 각 well에 첨가하 고, S rC , 5% CO2 incubator 조건하에서 1일 배양한 후 , 실<>1•있 는 세포만을 염색하기 위하여 Ix P B S 로 1회 세척하여 70%
Vo/. 53, No. 1, 2009
14 최화정 ■노§주 • 강정일 ■백승화
acetone으로 세포를 고정시킨 후, 건조기에서 건조시켜 0.4%
SRB(in 1% acetic add)용액 100 |o/를 가하여, 살아있는 세포률 염식시킨다. 1시간 후 염색되지 않은 SRB 용액을 제거하식 1%
초산으로 5회 세척한 후, 건조기에서 건조시킨다. 각 well에 붙 어있는 세포에 염색된 SRB률 10 mM trizma base(100 (j/)를 가 하여 , 용출시켜 ELISA reader로 흡광도 562 n n # 측정하여 ICjo 값을 구하였다. 비교약물로는 adriamycin(일동제약)을 사용하였 으며 , 약물없이 동일한 조건하에서 배양된 세포를 대 조 군 로 하 였다. IC50 값은 대조군의 50% 수준으로 암세포의 성장을 억제 하는 약물의 농노(n&ta/)로 주어지며, 미국 암 연구소(NCI;
National Cancer Institute, USA)의 manual 방법에 의헤 결정하 였다 _25괴>
어성초의 메틴을 추출물로 분리하여 얻은 quercetin의 카드뮴 에 대한 득성억제효과률 보기 우1하식, SRB 방법으로 세포의 증 식 또는 생존의 정도률 측정하였다. 즉 96 well microplate (Falcon)에 Vero cell을 1x10"* cells/well이 되도록 분주하여 24 시간 배양하였으며, 시료들을 DMSO에 녹여 각 well에 처리한 후 48시간 배양하였다. 배양 후에 위와 같은 방 법 로 , 세포 고 정 및 염색하여 살아있는 세포 생존율을 ELISA reader로 520 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 결정하였다. 어성초의 메탄을 추출물로 분리하식 얻은 quercetin의 카드뮴에 대한 득성억제효 과를 보기 위하여, 사용한 카드몸 농도는 Vero 세포의 생장을 50% 억제하는 농도로 결정하였다.
세포의 광학 현미경 관찰
카드몸에 대한 어성초의 메탄을 추출물로 분러하여 얻은 quercetin의 득성억제효과롤 보기 위하여, 카드몸 및 quercetin을 Vero 세포에 가하고 일정시간 배양한 후 광학 현미경으로 세포 률 관찰하였으며 , 역상 현미경하게서 관찰하여 사진을 촬영하였다.
통계처리
실험결과의 표시방법(mean±S.D.)을 사용하였으며, 통계처러 는 Students' t-test에 준하였고, p-value가 0.05 이하일 경우 통 계적으로 유의한 것으로 관명하였다.
실험 결과
SRB assay에 의한 세포 생존울 (Viability) 측정
식물들에 함유되어 있는 폴리페놀계 화합물인 탄닌성분은 금 속이온과 착염(chelation)을 이루어, 중금속 득성에 대한 해득작 용을 하며, 카테킨(catechins) 성분이 세포막 구성 물질로 존재하 고 있는 지질을 과산화로부터 보호함으로써 세포막을 안정화시 켜, 효소의 기눙적 최적조건을 만들어 주는데 기여한다고 보고 하 였 다 그 동안 BAL, EDTA 등과 같은 중금속 킬레이터듭이
2차적인 득성을 유발하여, 중금속 해득제로 개발되어 사용되지 못하는 등 카드몸의 세포득성을 억제하는 생리활성물질에 대한 연구가 이루어지고 있으나, 아직까지 뚜렷한 성적을 보이는 해 득제가 개발되지 못하고 있다. 어성초의 메탄을 추출물로부터 quercetin을 분리 및 분석하식,2**> 세포에 카드품을 처리한 후 생 존율을 측정하여, Vero 세포의 생장을 50% 억제하는 IC50 능도 를 결정하였다. 죽, 대조군의 흡광도를 100%로 하여 각각의 처 리군에 대한 흡광도를 측정한 결과, 3.13 |iM 카드몸 처리시 세 포의 생존율이 96.7%로 감소하였으며, 25 |iM 카드뮴 처러시에 는 세포 생존율이 24.1%로 감소되었다. 50 nM 카드몸 처러농도 이상부터는 세포의 생존율이 10% 이하로 감소되었으며, 카드뮴 농도에 의존적으로 세포의 생존율이 감소됨을 확인할 수 있었으 며 , ICso 농도는 6.25-50.00 |iM 사의 농도(약 12.5 |^M) 임을 알 수 있었다.
어성초의 메틴'을 주쿨■물에서 분리한 quercetin의 카드뮴에 대 한 세포득성을 억제할 수 있는지를 평가하기 위하여, 다옴과 같 이 6개의 실험군으로 나누어 실험하였다. 죽, Vero 세포 대조군 (Control 군), 카드뮴 단득 처 리 군(ICjo 군), 카드뮴 ICgo 농도와 어성초의 메틴을 추출물 처러군(IC50+ 어성초 메탄을 추출물), 카 드뭄과 quercetin 처리군(ICgo+quercetin 군)으로 나누어 각 약 물을 처리한 후, 48시간 배양한 다옴 SRB 정량분석법으로 세포 생존율을 비교하였다. 연구결파에 의하면, 대조군에 버해 ICji)군 의 세포 생존율은 35.4%(A=0.87±0.012)로 감소되었으며, 이에 비해 ICso+ 어성초의 메탄올 추출물은 0.5ng/m/ 어성초 메탄올 추출물을 처리할 때에 세포 생존율이 38.6%(A=0.95±0.013)로 증가되었으며, 의 어성초 메탄울 추출물을 처리할 때에, 카드몸 득성에 대한 세포 생존율은 45.4%(A=1.12±0.031)로 증 가되었다. 어성초 메탄올 추출물을 처리할 때에 세포 생존율이 56.1%(A=1.39±0.12)로 증가되었으며, 50 |그g W 어성 초 메탄을 추출물을 처러시에는 세포 생존율이 60.5%(A=1.50
±0.017수끓)까지 증가되었다. 카드몸 득성에 대한 quercetin의 억 제효과를 확인하기 위하여, 실험한 결과 ICgo군보다는 IC50+
quercetin에서는 quercetin 농노에 의존적으로 세포 생존율이 증 가되었다. 카드뮴 득성에 대?!: 두 자리 배위자로 quercetin의 catechol그룹을 사용하였다. IC^o군의 세포 생존율(35.8%)에 비 해 0.5 ng/m/ quercetin을 처 러 할 때 에 세 포 생 존율은 41.0%
(A=1.01±0.013)로 증가하였으며, 1 (ig/m/ quercetin을 처리할 때에 세포 생존율은 47.3%(A=l.r7±0.051)로 증가허였다. 10 |ig/
ml quercetin을 처리할 때에 세포 생존율은 61.2%(A=1.52±
0.011)로 증가하였으며, 50 \x^rci quercetin을 처리할 때에 세포 생존율은 68.0%(A=1.69±0.017**)로 증가하였다(Fig. 1).
세포의 광학 현미경적 관찰
Quercetin의 카드뮴 득성에 대한 억제효과를 평가하기 위해,
/. Pharm. Soc. Korea
어성초로부터 분리된 Quercetin 의 카드품에 대한 득성억제효과 15
□ M T H C
■ Q u e rc e tin
C o n tr o l IC 50 0 .5 1 10 50
D ru g ( u g /m L )
Fig. 1 - The SRB absorbance of MTHC and quercetin on Vero cells treated with cadmium. The values represent the mean±
standard deviations for triplicate experiments. Significantly different from the control value; *p<0.05, ^^p<0.01 (Student's test). MTHC; methanol extracts of Houttuynia cordata.
광학 현미경적인 관찰을 위해 세포의 성상을 관찰하였다. Vero 세포룰 96 well microplate에서 24시간 배양한 후, 실험군을 Vero 세포 대조군(control 군), 카드뮴 단득 처 리 군(IC50 군), 카드몸 ICso 농도와 어성초의 메탄을 추출물 처리군(IC50+ 어성초 메탄
올 추출물), 카드뮴과 quercetin 처리군(IC50+quercetin 군)으로 나누어, 약물을 처리한 후 24시간 이상 배양한 다옴, SRB assay 로 측정하여 살아있는 세포의 번화양상을 관찰하였다. Vero 세 포는 24시간 이상 배양하면, 뚜렷한 핵을 갖는 계란형으로써 well 바닥에 부착되면서 단층을 이루며 자라는 데, 이에 비해 ICso 군 의 카드몹을 처리한 군에서는 10시간 이후부터 세포수가 감소되 었다. 세포의 형태는 점차 원형으로 변형되어, well 바닥에서 떨 어져 SRB assay로 측정하기전에 washing 단계에서 떨어져나가 고, 온전하게 손상을 받지 않은 일부의 세포만이 계란형으로 소 수가 붙어 있는 양상을 관찰할 수 있었다. 카드뮴 단독 처리군 (ICso 군)과 카드뮴 ICso 농도와 어성초의 메란을 추출물 처리군 (IC50+ 어성초 메탄을 추출물), 카드뮴과 quercetin 처리군(IC50+
quercetin 군)을 처리한 군에서는, 카드몸 단득으로 처리한 군에 세포수가 증가하고, 세포의 형태 번화가 심하지 않는 등 의 카드뮴 득성에 대한 억제효과가 관찰되었다(Fig. 2).
고 찰
최근에 고삼에 포함된 flavonoids 화합물인 LA(5,7,4'-
Fig. 2 - Inverted photomicrograph of NIH 3T3 fibroblasts treated with MTT for additional 3 h after incubation unmodified medium (control) for 2 days X 200. Most cells had abundant cytoplasm and formed round shape (1). Inverted photomicrograph of NIH 3T3 fibroblasts after incubation in the IC50 concentrations for 2 days x 200. Most cells were formed round type and number of cells were decreased (2). An inverted photomicrograph of NIH 3T3 fibroblasts after incubation in the SRB5Q cadmium concentration and 50 \i^rd quercetin containing medium. Cells were showed regenerative and number of cells were increased (3). An inverted photomicrograph of NIH 3T3 fibroblasts after incubation in the SRB50 cadmium concentration and 50 나g/m/ Houttuynia codata methanol extract containing medium. Cells were showed regenerative and number of cells were increased (4).
Vol. 53, No. L 2009
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16 최화정 • 용주 • 강정일 • 백승화
trfiyctoxy-8-lavandulyl-2'-methoxyflavanone) 의 5번 위 처의 hydroxyl기와 C고리의 카르보닐기에 두 자리 배위자로써 카드뮴 과 배위공유결합이 가능하리라고 보고하였다.2® Quercetin는 가 능한 3개의 chelating site에서 경쟁반응할 수 있는 화합물로서, 착물의 형성능력은 3'4'-dihydroxyl group(catechol group)>3- hydroxy-carbonyl group > 5-hydroxy-carbonyl group 의 ^ 서 이루어진다. 따라서, quercetin의 catechol group에서 카드몸과 착물을 형성하여, 카드몸의 득성을 억제할 수 있으리라 생각된 다 2 3 어성초의 메탄올 추출물은 카드몸의 득성을 농도 의존 적으로 억제하며, 가장 높은 50ng/m/ 어성초 메탄을 추출물을 처리할 경우에는 카드몸의 득성을 ICso군의 세포 생존율의 약 1.7배 정도로 억제할 수 었음을 확인할 수 있었다. 이와 같은 카 드몸 득성에 대한 억제효과는 어성초의 메란을 추출물에 카드뮴 과 걸합할 수 있는 배위화합물이 함유되었으리라 생각한다. 연 구결과에 의하면, 50 |ig/m/ 어성초 메탄을 추출물을 처리할 때에 카드뮴 득성에 대한 세포 생존율(60.5%)은 50 quercetin 을 처리할 때에 카드몸 득성에 대한 세포 생존율(68.0%)보다 낮 은 억제효과로 측정되었다. 이는 quercetin이 카드뮴 착물이 형 성될때에 카드뮴(II)의 4d 원자궤도함수의 참여와 quercetin의 B 고러에서 Y-pyrone 고리를 통해서 A고리로 낮은 전하기동이 일 어나며, 이때에 ligand-to-metal charge transfer로 인한 장파장 효과를 나타난다. 카드뮴 착물이 형성될때에 리간드로서 quercetin 이 전체적으로 평면구조률 이루어, catecholate 그룹에서 카드몸 (II)파 배위공유결합을 이룬다고 관단된다(Fig.
Fig. 2 Vero 세포에 대한 광학 현미경의 관찰에서 볼 수있는 것처럼, 세포수의 증가와 세포형태의 핵의 원형으로 재생되는 것 으로 관찰되는 것은, 50 |ig/m/ quercetin에서 카드뮴 득성 에 대 한 억제효과가 높게 측정됨을 알 수가 있었다. 이 등2^>의 quercitrin의 카드몸에 대한 득성억제가 카드뮴과 quercitrin의 mole ratio가 1.0이 되면 흡광도의 번화가 최대가 되어 카드뮴과 quercitrind : 1)의 안정 한 카드뮴 착물을 형성하는 53.52 pM quercitrin의 최적농도처럼, quercetin과 카드몸(1 : 1)의 안정한 카드뮴 작물을 형성할 수있는 최적농도가 규명되면, 카드뮴 득 성에 대한 억제효과가 증가하리라 사료된다. 카드몸과 같은 중 금속 해득제로 사용되는 Ca^Naa EDTA는 중금속과 강한 친화성 킬 레이트제이나 신장득성을 유발하고,^^* 해득 제인 penicillamine 의 백혈구 감소증, 재생 불량성 빈혈 등의 부작^ 일으키는 것 으로 보고하고 있다.22> 현재 사용되고 있는 해득제의 부작용을 경감시킬 수 있는, 어성초의 메탄을 추출물 및 quercetin은 Vero 세포에 대한 세포득성을 효과적으로 억제할 수 있다고 사료된다.
이상의 연구결과에 의하면, 어성초로부터 분리한 quercetin이 카드뮴에 대한 세포득성을 억제하는 효과가 있는 것으로 사료된 다. 앞으로 quercetin파 중금속의 착물에 대?} 착물의 번용 메카 니즘과 분자구조 및 생러활성을 연구할 계획 이다.
결 론
어성초의 메탄올 주줄물에서 분리한 quercetin에 대한 카드뮴 득성의 억제효과를 평가하기 위하여, Vero cell 대조군(control 군), 카드뮴 단득 처리군(ICso 군), 카드뮴 ICso 능도와 어성초의 메 탄을 추출물 처리군(IC50+ 어성초 메탄을 추출물), 카드몸과 quercetin 처리군(IC50+quercetin 군)으로 나누어 각 약물을 처러 한 후 48시간 배양한 다음", SRB assays. 세포 생존§ 을 측정하였다.
1) 대조군의 세포 생존율에 비해 ICso군의 세포 생존t 은 35.4%
(A=0.87±0.012*)로 감소되었으며, 이에 비해 IC50+ 어성초의 메
& 을 처리하였을 탄을 추출물은 0.5 ng/m/ 어성초의 메탄'을 겨
경우, 세포 생존율은 38.6%(A=0.95±0.013)로 증가되었고, 1 ng/
m/ 어성초 메탄율 추출물을 처리하였을 경우, 세포 생존율이 45.4%(A=1.12±0.031)로 증가되 었다. W iig/ml 어성초 메탄을 추출물을 처리하였을 경우, 세포 생존§ 미 56.1%(A=1.39±0.12) 로 증가되었으며, 50^g/ml 어성초 메탄을 추출물을 처리하였을 경우, 세포 생존"tol 60.5%(A=1.50±0.0r7와)로 증가되어 , 어성 초의 메틴을 추출물이 농도에 의존적으로 카드뮴에 대한 세포득 성을 억제할 수 있는 생리활성물질이 함유되었옴을 알 수 었었 다. 50 ixg/ml 어성초 메틴을 추출물을 처리하였을 경우, 세포 생 존율(60.5%)은 IC50군의 세포 생존율(35.4%)보다 약 1.7배 정도 로 억제할 수 었옴을 확인할 수 있었다.
2) Quercetin이 카드몸에 대한 세포득성의 억제효과를 확인한 걸과에 의하면, IC50 군보다는 IC50+quercetin에서는 quercetin 농도에 의존적으로 세포 생존■율이 증가되었으며 , ICso 군의 세포 생존율(35.8%)에 비해 0.5|ig/m/ quercetin을 처리하였을 경우, 세포 생존율은 41.0%(A=1.01±0.013)로 증가하였다. lug/m / quercetin을 처리하였을 경우, 세포 생존율이 47.3%(A=1.17±
0.051)로 증가하였으며, 10 |ig/m/ quercetin을 처리하였을 경우, 세포 생존율이 61.2%(A=1.52±0.011)로 증가하였다. 50ng/m/
quercetin을 처리하였을 경우, IC50 군의 세포 생존율(35.8%)보 다 높은 68.0%(A=1.69±0.017)의 세포 생존율(1.8배)이 증가함 을 알 수 있었다. 이와 같은 연구결과에 의하면, 어성초의 메탄 을 추출물 및 quercetin은 카드뮴에 의한 Vero 세포의 세포득성 을 효과적으로 억제할 수 있옴을 확민할 수 있었다. 중금속 해득 제로 사용하는 CasNaj EDTA는 중금속파 강한 친화성 킬레이트 제이나 신장득성을 유발하거나, 해득제 penicillamine의 백혈구 감소증, 재생불량성 빈혈 등의 부작용을 나타내지만, quercetin 은 카드뮴 득성을 경감시킬 수었는 해득제로 개발될 수 있을 것 이라 생각된다.
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