Effect of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus Mixture on Esophageal Mucosa in Chronic Reflux Esophagitis

https://doi.org/10.22889/KJP.2020.51.4.349

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만성 역류성 식도염에서 황련과 오수유 혼합물이 식도 점막에 미치는 효과

이진아¹·신미래¹·이지혜²·노성수¹*

1

²

Effect of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus Mixture on Esophageal Mucosa in Chronic Reflux Esophagitis

Jin A Lee¹, Mi-rae Shin¹, Ji Hye Lee², and Seong-soo Roh¹*

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Abstract  Gastroesophageal reflux disease (GERD) is a disease that stomach contents continually refluxing, and is currently on the rise worldwide. The purpose of this study is to find natural materials that can reduce side effects and effectively treat chronic acid reflux esophagitis (CARE), one of GERD. First, the antioxidant activity was confirmed by varying the mixing ratio of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus, which are effective against chronic reflux esophagitis. After, animal experiments were conducted using a 1:1 (CE) and 1:2 (CEE) combination ratio of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus, which had the best antioxidant efficacy. Gross lesion of esophageal mucosa after CE or CEE treatment showed a superior enhancement com- pared with that of CARE control rats. Additionally, its inhibited MAPK phosphorylation and led NF-B inactivation through the suppression of IB phosporylation by regulating Nrf2/Keap-1, and NF-B inactivation induced reduced protein expres- sions including inflammatory mediators and cytokines. Moreover, its improved esophageal barrier function through upreg- ulating protein expressions of tight junction protein, whereas downregulating protein expressions of MMPs. Taken together, a mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus can attenuate the esophageal mucosal ulcer by inhibiting MAPK and NF-

B pathway, and upregulating proteins associated with tight junction.

Keywords  Chronic Reflux Esophagitis, Coptidis Rhizoma, Evodiae Fructus, Inflammation, Tight junction

위식도 역류질환(Gastroesophageal reflux disease; GERD) 은 위장관 질환 중 하나로 식도에 형태조직학적 변화를 초 래하거나 식도 내로 위산이 역류해서 임상증상이 나타나는 경우를 말하며, 식도협착, 바렛식도, 식도암 등의 합병증을 발생시킨다.

¹⁾

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지만 한 번 진단되면 완치가 힘들어 평생 진료를 받아야 하 는 질환으로 치료와 관리에 관심이 깊어지고 있다.

³⁾

역류성 식도염 치료를 위한 가장 기본적인 방법으로는 칼 슘 채널 길항제 및 수면제의 복용을 금하고, 과식 및 기름 진 음식을 금하는 등의 생활습관 조절 등이 있으며, 그 외 에 현재 역류성 식도염 치료를 위해 사용되어지고 있는 약 물로는 위산 분비를 억제하는 H

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^4,5)

황련(Coptidis Rhizoma, 黃蓮)은 미나리아재비과 (Ranunculaceae)에 속하는 여러해살이 식물인 황련의 뿌리

*교신저자(E-mail):[email protected] (Tel): +82-53-770-2350

줄기를 건조한 것이다. 황련은 청열해독(淸熱解毒), 청열조 습(淸熱燥濕) 및 사화해독(瀉火解毒) 효능이 있어 현대약리 학에서 항생제 및 소염제 작용을 한다. 또한, 많은 연구들 을 통해 항균, 항산화, 항아토피 등의 효과가 밝혀졌으며, 선행연구에서 만성 역류성 식도염 치료에 효과가 있다는 것 을 확인하였다.

^6-9)

오수유(Evodiae Fructus, 吳茱萸)는 운향과(Rutaceae)에 속 하는 오수유 열매를 말하며, 한방에서는 설사, 복통 및 소 화불량에 사용되어 왔다.

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^11-13)

^4,14)

본 실험에서는 역류성 식도염에 효과가 있는 황련과 오수 유를 배합하여 만성 역류성 식도염 동물 모델에서 황련과 오수유의 배합비에 따른 역류성 식도염에 대한 효과에 대 하여 연구하였으며, 식도 점막 손상 정도, 염증 및 식도 기 능과 관련된 단백질의 발현을 확인하여 유의한 결과를 얻 었기에 이를 보고하는 바이다.

재료 및 방법

시료  본 실험에서 사용한 황련과 오수유는 옹기한약국 (대구, 한국)에서 구입한 것 대구한의대학교 한의과대학 노 성수교수가 생약규격집에 맞추어 관능검사 후, 약전규격에 적합한 것만을 정산하여 사용하였다. 황련과 오수유 100 g 을 각각 분쇄한 후, 증류수 1 L을 가하여 열탕추출기에서 2 시간 추출하였다. 얻어진 추출물은 감압농축기로 농축 후, 동결건조기를 이용해 완전히 건조시켜 파우더를 얻어(수율

; 황련 14%, 오수유 15.66%) -80

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시약  본 실험에 사용된 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 7 mM 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6- sulphonic acid)(ABTS), potassium phosphate monobasic, potassium phosphate dibasic은 Sigma-Aldrich Co.(St.

Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. Nitrocellulose membranes는 Amersham GE Healthcare(Chicago, IL, USA)에서 구입하였고, NADPH oxidase 4(NOX4), p47

^phox

nitric oxide synthase(iNOS), cyclooxygenase-2(COX-2), tumor necrosis factor-alpha(TNF-), interleukin-6(IL-6), matrix metalloproteinase-2(MMP-2), matrix metalloproteinase- 8(MMP-8), zonula occludens-1(ZO-1) occludin, claudin-1, claudin-4, ꞵ-actin, histone은 Santa Cruz Biotechnology (Dallas, CA, USA)로부터 구입하여 사용하였고, c-Fos와 c- Jun는 Cell Signaling Technology, Inc.(Beverly, MA, USA) 에서 구입하여 사용하였으며, 2차항체는 GeneTex, Inc.

(Irvine, LA, USA)에서 구입하여 사용하였다. Protease inhibitor mixture, ethylenediaminetetraacetic acid(EDTA)는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd.(Osaka. Japan)에서 구 입하였다. 2',7'-Dichlorofluorescein diacetate(DCFH-DA)와 dihydrorhodamine 123(DHR123)는 Molecular Probes(Eugene, OR, USA)에서 구입하였고, ECL western blotting detection reagents는 GE Healthcare로부터 구입하여 사용하였다. 단백 질 정량을 위한 BCA protein assay kit는 Thermo Scientific (Waltham, MA, USA)에서 구입하였다.

DPPH 및 ABTS Radical 소거 활성 측정  시료의 항 산화 효능을 측정하기 위해 DPPH free radical 소거법을 사 용하여 radical 소거 활성을 측정하였다.

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ABTS radical 소거 활성은 Re 등의 방법

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DPPH and ABTS radical scavenging activity(%)

= {1  OD

_sample

_blank

실험동물  5주령 SD 흰쥐 수컷을 대한바이오(음성, 한 국)에서 구입하여 1주일간 사육실 환경에 적응시킨 후 실험 을 진행하였다. 동물 사육실 조건은 conventional system으 로, 온도 22±2

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물실험의 윤리적, 과학적 타당성 검토 및 효율적인 관리를 위하여 대구한의대학교 동물실험윤리 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee: IACUC)의 승인(승인번 호: 2020-053)을 받아 진행하였다.

만성 역류성 식도염 유발 및 동물 처치  수술 전, 18시 간 절식 후 Zoletil(Virbac, France)을 복강주사하여 마취한 뒤 수술을 진행하였다. 제모기로 복부털을 제거하여 복간 정중부를 2 cm 정도 개복하여 위저부(Fundus)를 블랙 실크 (2-0)실로 묶고, 날문부(pylorus)에는 latex ring(18-Fr Nelaton catheter, 2 mm in thickness)을 끼워 나일론(5-0)실로 묶은 후 복막과 피부를 봉합하였다.

¹⁷⁾

식도 조직 Western Blotting  식도 조직에 100 mM Tris-HCl(pH 7.4), 5 mM Tris-HCl(pH 7.5), 2 mM MgCl

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준비된 membrane에 각각의 1차 antibody를 처리하여 4

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로 희석해서 사용)를 사용하여 상온에서 1시간 반응시킨 후, PBS-T로 6분마다 5회 세척하였다. Membrane을 enhanced chemiluminescence(ECL) 용액에 노출시킨 후, Sensi-Q2000 Chemidoc(Lugen Sci Co., Ltd., Seoul, Korea)에 감광시켜 단백질 발현을 확인한 후, 해당 band를 ATTO Densitograph Software(ATTO Corporation, Tokyo, Japan) 프로그램을 사 용하여 정량하였다(represented as 1).

통계분석  In vitro의 수치는 mean±SEM으로, in vivo의 수치는 mean±SD로 표시하였으며, SPSS(Version 25.0, IBM, Armonk, NY, USA)를 사용하여 one-way analysis of variance(ANOVA) test를 실시한 후 least-significant differences(LSD) test로 사후검증을 실시하여 각 군의 평균 차이에 대한 통계적 유의성을 *p<0.05, **p<0.01, ***p<

0.001에서 검증하였다.

결 과

DPPH 및 ABTS Radical 소거 활성 측정  황련-오수 유 혼합물 항산화 활성을 평가하기 위해 DPPH 및 ABTS radical 소거 활성을 측정하였으며, 측정 결과는 IC

₅₀

DPPH radical 소거 활성 측정 결과, CE 22.62±1.01 µg/

mL, CEE 27.90±0.32 µg/mL, CCE 36.70±0.98 µg/mL으로 CE의 DPPH radical 소거 활성이 가장 뛰어났으며(Fig. 1), ABTS radical 소거 활성 측정 결과, CE 35.65±0.28 µg/mL, CEE 36.01±0.31 µg/mL, CCE 38.64±0.73 µg/mL으로 CE의 ABTS radical 소거 활성이 가장 뛰어났다(Fig. 2).

식도 점막 손상 확인  식도 점막의 손상 정도를 육안으 로 관찰하였을 때, 아무런 처치를 하지 않은 Nor군의 식도 점막에서는 손상 및 궤양이 발견되지 않았으나, Con군에서 는 중간 또는 하부식도에서 궤양이 발견되었고, Nor군과 비 교하여 식도의 길이가 줄어들고 두께가 두꺼워졌다. 반면, CE군과 CEE군에서는 식도의 손상 및 궤양이 현저하게 감 소하였다(Fig. 3).

식도 조직 내 NADPH Oxidase 발현량 분석 - 식도 조 직에서 NADPH oxidase인 NOX4와 p47

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식도 조직 내 Nrf2 및 Keap-1 발현량 분석  식도 조직 에서 Nrf2 및 Keap-1의 발현을 확인하였다. Nrf2의 발현은 Nor군 대비 Veh군에서 34% 감소하였으며, Veh군 대비 CE 군과 CEE군에서 38% 유의하게 증가하였다. 또한, Keap-1의 발현은 Nor군 대비 Veh군에서 15% 증가하였으며, Veh군

Fig. 1. DPPH radical scavenging activity of mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus by mixing ratio. DPPH radical scav- enging of L-ascorbic acid; (A), DPPH radical scavenging of CE; (B), DPPH radical scavenging of CEE; (C), DPPH radical scav- enging of CCE; (D). All values are expressed mean±SEM of three replications.

Fig. 2. ABTS radical scavenging activity of mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus by mixing ratio. ABTS radical scav- enging of L-ascorbic acid; (A), ABTS radical scavenging of CE; (B), ABTS radical scavenging of CEE; (C), ABTS radical scav- enging of CCE; (D). All values are expressed mean±SEM of three replications.

Fig. 3. Representative image in each group of esophageal mucosal ulcer after surgical induction of CARE. Unopened esophagus that induced CARE; (A), the opened esophageal ulcer; (B). Normal rats; Nor, chronic acid reflux esophagitis rats; Veh, mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:1 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CE, mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:2 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CEE.

Fig. 4. Expression of NADPH oxidase in esophagus. Normal rats; Nor, chronic acid reflux esophagitis rats; Veh, mixture of Cop- tidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:1 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CE, mixture of Coptidis Rhi- zoma and Evodiae Fructus in 1:2 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CEE. All data are expressed means±SD (n=8). Significance:

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대비 CE군에서 15% , CEE군에서 17% 유의하게 증가하였 다(Fig. 5).

식도 조직 내 MAPKs 단백질 발현량 분석  식도 조직 에서 MAPKs 단백질인 c-Fos, c-Jun, p-p38, p-ERK 및 p- JNK의 발현을 확인하였다. c-Fos와 c-Jun의 발현은 Nor군

대비 Veh군에서 각각 24%, 19% 증가한 반면, Veh군 대비 CEE군에서 발현이 약 20% 유의하게 감소하였으며, 특히 c- Jun의 발현은 CE군에 비하여 CEE군에서 크게 감소하였다.

또한, p-p38의 발현은 Nor군 대비 Veh군에서 27% 증가한 반 면, CE군에서는 Nor군 같은 수준으로 발현이 감소하였으며, Fig. 5. Expression of Nrf2 and Keap-1 in esophagus. Normal rats; Nor, chronic acid reflux esophagitis rats; Veh, mixture of Cop- tidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:1 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CE, mixture of Coptidis Rhi- zoma and Evodiae Fructus in 1:2 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CEE. All data are expressed means±SD (n=8). Significance:

^##

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Fig. 6. Expression of MAPKs proteins in esophagus. Normal rats; Nor, chronic acid reflux esophagitis rats; Veh, mixture of Cop- tidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:1 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CE, mixture of Coptidis Rhi- zoma and Evodiae Fructus in 1:2 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CEE. All data are expressed means±SD (n=8). Significance:

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Fig. 7. Expression of inflammatory proteins in esophagus. Normal rats; Nor, chronic acid reflux esophagitis rats; Veh, mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:1 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CE, mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:2 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CEE. All data are expressed means±SD (n=8). Significance:

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Fig. 8. Expression of proinflammatory enzymes and cytokines in esophagus. Normal rats; Nor, chronic acid reflux esophagitis rats;

Veh, mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:1 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CE, mix- ture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:2 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CEE. All data are expressed means±SD (n=8). Significance:

^##

^###

p-ERK의 발현은 Nor군 대비 Veh군에서 27% 증가한 반면, Veh군 대비 CEE군에서 29% 유의적으로 감소하였으며, Nor 군보다 10% 감소된 발현을 나타냈다. p-JNK의 발현은 Nor 군 대비 Veh군에서 15% 증가하였으며, Veh군 대비 CE군 에서 11%, CEE군에서 13% 감소하였다(Fig. 6).

식도 조직 내 Inflammatory Protein 발현량 분석  식 도 조직에서 inflammatory 단백질인 NF-Bp65와 p-IB의 발현을 확인하였다. Nor군 대비 Veh군에서 NF-Bp65 21%, p-IB 31% 크게 증가하였고, Veh군 대비 CE군에서 NF- Bp65의 발현은 18% 감소하여 Nor군과 같은 발현량를 나타 냈으며, CEE군에서는 21% 유의하게 감소하였다. 또한, p- IB의 발현은 CEE군에서 18% 감소하여 Nor군과 비슷한 발현량을 나타냈다(Fig. 7).

식도 조직 내 Proinflammatory Enzymes 및 Cytokines 분석  식도 조직에서 proinflammatory enzymes인 iNOS, COX-2와 cytokine TNF-, IL-6의 발현을 확인하였다. Nor 군 대비 Veh군에서 iNOS와 COX-2의 발현이 25% 증가하 였으며, Veh군 대비 CEE군에서 iNOS 21%, COX-2 13%

유의하게 감소하였다. 또한, Nor군 대비 Veh군에서 TNF-ɑ 22%, IL-6 18% 크게 증가하였으며, Veh군 대비 CEE군에 서 각각 20% 이상 유의하게 감소하였다(Fig. 8).

식도 조직 내 MMP-2 및 MMP-8 발현량 분석  식도 조직에서 MMP-2와 MMP-8의 발현을 확인하였다. MMP-2 와 MMP-8의 발현은 Nor군 대비 Veh군에서 20% 이상 크 게 증가한 반면, Veh군 대비 CE군에서 MMP-2 11%, MMP- 8 19% 유의하게 감소하였으며, CEE군에서는 MMP-2와 MMP-8 모두 약 20% 유의하게 감소하였다(Fig. 9).

식도 조직 내 Tight Junction Protein 발현량 분석  식 도 조직에서 tight junction 단백질인 ZO-1, occludin,

claudin-1 및 claudin-4의 발현을 확인하였다. Nor군 대비 Veh군에서 ZO-1, occludin, claudin-1 및 claudin-4 모두 약 20% 크게 증가하였다. 반면에, Veh군 대비 CEE군에서 ZO- 1, occludin 및 claudin-4의 발현이 약 20% 유의하게 감소하 였다. claudin-1의 발현은 CE군에서 17%, CEE군에서 13%

감소하였으며, CEE군 보다 CE군에서 더 크게 증가한 것을 확인하였다(Fig. 10).

고 찰

위식도 역류질환(Gastroesophageal reflux disease; GERD) 은 위산이 식도 내로 역류하여 궤양이나 미란 등의 형태로 조직학적 병변뿐만 아니라, 가슴쓰림, 흉통, 목이물감, 만성 기침 등의 증상을 포괄한다.

²⁾

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이다.

^18,19)

로운 치료제 개발을 위한 많은 연구가 이루어지고 있으며, 본 실험에서는 역류성 식도염 치료를 위한 새로운 소재를 개발하기 위하여 역류성 식도염에 효과가 있다고 알려진 황 련과 오수유를 배합하여 배합비에 따른 역류성 식도염에 대 한 효능을 평가하였다.

먼저, CE(황련-오수유 1:1), CEE(황련-오수유 1:2), CCE (황련-오수유 2:1) 3가지 배합비의 항산화 효능을 알아보았

Fig. 9. Expression of MMP-2 and MMP-8 in esophagus. Normal rats; Nor, chronic acid reflux esophagitis rats; Veh, mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:1 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CE, mixture of Coptidis Rhizoma and Evodiae Fructus in 1:2 ratio 200 mg/kg-treated chronic acid reflux esophagitis rats; CEE. All data are expressed means±SD (n=8). Significance:

^##

다. 모든 생물체들은 생명유지를 위해 필요한 에너지를 생 성하는 과정에서 활성산소종(Reactive oxygen species; ROS) 를 발생시킨다. 정상세포 내에서 활성산소종은 항산화인자 와 균형을 이루며 존재하며, 항산화인자의 결핍은 세포구성 성분들을 파괴시켜 조직 손상을 초래하여 만성 염증, 악성 종양 등에 이르는 다양한 질병을 발생시킨다.

²⁰⁾

수술을 통해 만성 역류성 식도염 유발 후 CE 및 CEE를 14일간 경구투여 하였으며, 15일째 부검을 통하여 혈액 및 식도조직을 채취하였다. 식도조직의 손상정도를 육안적으로 관찰한 결과, 정상군에서는 식도 점막에서 궤양 및 미란 등 을 관찰할 수 없었으나 대조군에서는 식도 중간부위와 하 부식도의 궤양을 확인하였으며, 정상군과 비교하여 식도 조 직이 붓고 두꺼워진 것을 확인하였다. 반면, CE군과 CEE

군에서는 대조군에 비하여 식도조직의 손상이 현저하게 감 소한 것을 확인하였다(Fig. 3).

NADPH oxidase는 중성구에서 호흡폭발로 발생하는 활 성산소종을 발생시킨다. NADPH oxidase에 의해 발생된 활 성산소종은 체내의 산화적 스트레스를 유도하여 단백질의 손상 및 DNA를 손상시키는 원인이며, 더 나아가 세포사멸 을 유도한다고 알려져 있다.

^21,22)

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^phox

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NOX4와 p47

^phox

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Keap-1의 발현을 조절한 것을 확인하였다(Fig. 5).

Mitogen-activated protein kinase(MAPK)는 세포 외 신호 전달, 세포의 분열 및 증식을 등을 조절하는 중요한 역할을 가진다. MAPK는 p38, ERK, JNK 등의 단백질을 말하며, LPS 또는 성장인자에 의해 활성화 되어 NF-B의 활성화를 유도하게 되면서 iNOS, COX-2와 같은 여러 전염증성 단백 질 및 염증성 사이토카인의 발현을 유도한다.

^24,25)

CEE군에서 c-Fos, c-Jun, p-p38, p-ERK 및 p-JNK를 포함한 MAPKs 단백질의 발현을 유희하게 감소시켰으며, CE군과 CEE군에서 NF-Bp65와 p-IB의 발현 또한 유의하게 감 소하였다(Fig. 6, 7). 뿐만 아니라 CEE 투여는 전염증성 단 백질과 염증성 사이토카인의 발현을 유의하게 감소시켰으 며, CE 투여군에서도 염증성 사이토카인의 발현의 유의하 게 감소하였다(Fig. 8). 이는 만성 역류성 식도염 동물모델 에서 황련-오수유 혼합물은 MAPKs 및 NF-B 경로를 통 하여 식도 점막의 손상을 감소시키는 것으로 판단된다.

많은 연구들을 통해 GERD환자의 상피세포에서 NF-B 가 활성화된다는 것이 밝혀졌으며, NF-B는 tight junction (TJ) 단백질과 matrix metalloproteinases(MMPs)의 발현을 조절하는 것으로 알려졌다. MMPs는 단백분해효소로써 염 증성 조직을 파괴하는 핵심적인 역할을 하는 것으로 알려 져 있으며, 신체의 결합조직의 항상성을 조절한다고 알려져 있지만 조절기능이 붕괴된다면 세포외 기질의 분해 및 재 구성을 발생시키는 것으로 알려져 있다.

^26,27)

^27-29)

결 론

본 연구는 배합비를 달리한 황련-오수유 혼합물이 만성 역류성 식도염에서 미치는 식도 점막 보호 효과에 대해 평 가하였다. 황련-오수유의 배합비를 달리하여 항산화 효능을 확인하였으며, 그 중 효과가 뛰어났던 1:1과 1:2 배합비를 이용하여 동물실험을 실시하였다. 만성 역류성 식도염 모델 에서 CE보다 CEE에서 더 뛰어난 식도 점막 보호 효과가 있음을 확인하였다. 이러한 식도 점막 보호 효과는 MAPKs

및 NF-B 경로를 억제하여 iNOS, COX-2, TNF- 및 IL- 6와 같은 염증 인자들의 발현을 억제함으로써 염증을 완화 한다는 것을 확인하였으며, 뿐만 아니라 MMPs와 tight junction 단백질의 발현을 조절함으로써 식도의 결합조직 내 손상을 억제하였다. 이상의 결과는 황련-오수유 혼합물은 역 류성 식도염 치료를 위한 새로운 건강기능식품으로의 개발 이 가능할 것으로 사료된다.

사 사

본 연구는 2017년도 한국연구재단에서 시행한 중견연구 자지원사업(NRF-2017R1A2B2006858) 지원에 의해 수행되 었습니다.

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(2020. 10. 20 접수; 2020. 12. 8 심사;

2020. 12. 15 게재확정)