Bioequivalance Test of Fexofenadine Hydrochloride 120mg Tablets

akhak k Hoeji

염산팩소페나딘 120밀리그람 정제의 생물학적동등성시험

조혜영* • 강현아** • 김세미 • 이용복**"

전남대학교 약학대학 부속생물학적동등성 및가교시험연구소_

* 국립득성과학원,

**cj

Bioequivalence Test of Fexofenadine Hydrochloride 120 mg Tablets

Hea-Young Cho*, Hyun-Ah Kang**, Se-Mi Kim and Yong-Bok Lee끓

College of Pharmacy, Institute of Bioequivalence and Bridging Study, Chonnam National University, Gwangju 500-757, Korea

^General Pharmacology Team, Pharmacological Research Department, NITR, KFDA, Seoul 122-704, Korea

*

"^Pharmaceutical Research Institute, CJ Cheiljedang Corp. Ichon-si, Kyanggi-do 467-812, Korea

Abstract —— Fexofenadine, (± )-4- l-hydroxy-4-{4-(hydroxydiphenylmethyl)- 1-piperidinyl}-butyl-a,a-dimethyl benzeneacetic acid, is a selective histamine receptor antagonist, and is clinically effective in the treatment of seasonal allergic rhinitis and chronic idiopathic urticaria as a first-line therapeutic agent. The purpose of the present study was to evaluate the bioequivalence of two fexofenadine hydrochloride tablets, Allegra® (Handok Pharmaceuticals Co., Ltd.) and Alecort (Sam- chundang Pharmaceutical Co., Ltd.), according to the guidelines of the Korea Food and Drug Administration (KFDA). The release of fexofenadine from the two fexofenadine hydrochloride formulations

in vitro

the

mulations based on the reference drug, Allegra®, were -1.37, 5.22 and 16,50% for AUCt， and

T^,

rithmically transformed data were within the acceptance range of log 0.8 to log 1.25 (e.g., log 0.83--log 1.08 and log 0.81~log 1.03 for AUC( and respectively). Thus, the criteria of the KFDA bioequivalence guideline were satisfied, indi­

cating Alecort tablet was bioequivalent to Allegra® tablet.

Keywords □ fexofenadine, Allegra® tablet, Alecort tablet, bioequivalence, HPLC

팩소페나딘 (fexofenadine, (± )-4- [l-hydroxy-4- { 4-(hydroxy- diphenylmethyl)-l-piperidinyl}-butyl]-a,a-dimethyl benzene- acetic acid)은선택적인 Hi 수용체 길항체로서 계절성 비염및 특발성 만성두드러기에 1차선택제로 용된다.^염산팩소페 나딘 120 m g t 경구투여하였을때, 최고혈장중농도(C^ ) 는 610--611(ng/m/), 최고혈장중농도도달시간(T^ ) 은 1.5니.1

후본 논문에 관한 문의는 저자에게로 (견화) 062-530-2931 (팩스) 062-530-0106 (E-mail) [email protected]

시간, 최중상소실반감기는 9.6-11.0시간으로보고되어 었다.크 국내에서는주식회사한득약품에서 ''알레그라정 120밀리그람"

이라는상품명으로염산팩소페나딘정제(염산펙소페나딘 120 mg) 률제조하식시관하고 있다. 한편제제학적으로동등한제제나 제제학적으로대체가능한제제의시판을위하거나의사또는치 과의사가처방전에기재한의약품을성분 • 함량및제형이동일 한다른의약품으로대체하여조제할수있게하기위해서는식 품의약품안견청이고시한생물학적동등성시험기준®에따라생 체시험을통해 생체이용률에 있어서통계학적으로동등하다는 것을입증하식야할될요가있다.

염산팩소페나딘의 생물학적 동등성

따라서, 본연구에서는삼천당제약주식희사에서 발매하고자 하는염산팩소페나딘제제인"알레코트정 120밀리그람"이기존 의염산팩소페나딘제제인 "알레그라정 120밀리그람"과그생 체이용률에있어서통계학적으로동등하다는것을입증하기 위 해서식품의약품안전청이 고시한생물학적동등성시험기준®>에

따라건강한성인 남자(만 19~33세) 26명을대상으로라틴방

격법에따라생체내이용률시험을한후, 얻어진팩소페나딘의 혈청중약물농도•시간곡선하면적 (AUCt), C„^와 T„^에대하

여 를제외한 AUCt와 는로그번환한후통계검정과분

산분석 (ANOVA, analysis of variance)을통하여생물학적동등성 을비교관정하였다. 아울러 , "알레코트정 120밀리그람"과"알레 그라정 120밀리그람"에대하여대한약견제 8개정용출시험법 중제 2법(패들법)에따라비교용출시험을행하였다. 그리고본 시험은식품의약품안전청으로부터시험계획서의승인을얻은후 시험계획서에따라수행되었으며모든피험자의동의률받아•서 이루어졌다.

실험 방법

시약 및 기기

시험에사용된시험약은의약품임상시험관리기준® 제 36조및 제 37조의규정에따라제조한삼천당제약주식회사(서울)의''알 레코트정 120밀리그람"(제조번호: T0309, 제조일자: 2006. 3. 9), 대조약은식품의약품안전청으로부터허기룰받아주식회사한득 약품(서울)에서시관하고었는''알레그라정 120밀리그람''(제조 번호: D010, 사용■기한: 2007. 12. 13)으로염산팩소페나딘을 120

mg 함유하는정제이다.

염산팩소페나딘표준품은삼천당제약주식희사로부터 제공받 았으며, 내부표준물:질로시용한할로페리돌(Sigma Chemical Co., St Louis, MO, 머국), HPLC용메탄을및아세토니트릴(Fisher Scientific., Fair Lawn, NJ, 미국), 생러식염수및헤파린(이상중 외제약, 한국)은 시관품을, 증류수는 Milli Q(Millipore Co.,

Milford, MA, 미국)에서 로통과시킨것을사용하였다.

Triethylamine 및기타시약들은특급및 1급시약들을사용하 였다.

비교용출시험용기기로는용출시험기 (Dissolution Tester VK- 7000, Varian, 미국) 및 HPLC (Alliance, Waters, 미국)를사용•하 였으며, 혈중 약물농도분석기기로는 Shimadzu LC

lOADvp

system(Shimadzu, Kyoto, 일본), Symmetry™ C8(입자경 5 [xm, 4.6x150mm I.D., Waters Corp., Milford, MA, 미국), 형광 검 출기 (SPD IOAxl，Shimadzu. Kyoto, 일본), 원심분리기 (UNION 55R, Hanil Science Industrial Co., 인천, 한국), 증발농측기 (CVE200D, EYELA, Rikakikai Co., Tokyo, 일본), 냉각회수기 (UT-80, Tokyo Rikakikai Co., Tokyo, 일본), pH 측정기 (Model

7, Coming Ltd., Halstead Essex England, 영국) 및 탁상용혼 합기 (G560, Scientific Co., Bohemia, NY, 미국)를시용하였다.

비교용출시험

대조약''알레그라정 120밀리그람"파시험약''알레코트정 120 밀리그람" 각 12정씩을취하^ 대한약전제 8개정용출시험법중 제 2법(패들법)에 따라 50 rpm으로시험하였다. 용출액은용출 시험조건에따라 pH 1.2, 4.0, 6.8 및물의용출액을 900 m/ 사 용하여용출개시 5, 10, 15, 30, 45 및 60분에용출액을채취하

고 HPLC를사용하며 용출률을산출하였다.

퍼험자 선정

피험자는식품의약품안견청이 고시한생물학적동등성시험 기

준®에근거하여만 19-55세의건강한성인남성지원자률공고

률통하늬 모집하였다. 32명의지원자가이시험에대한설명회 에참석하였다. 이들중전남대학교병원(광주)에서 전문의사의 건강진단을실시하쉬건강인으로관정된 26명을선정하였다. 피

험자로선정된사람들의 평균체중은 70.05± 11.71 kg, 평균나

이는만 25.62±3.35세이었다. 이들로부터 동의서를받은후생

물학적동등성시험을실시하였다.

모든지원자는정해진투약일 일주일전부터 항생제 및진통 제등을포함한일체의 약물복용을금지하였을뿐아니라흡연 및 xanthine계옴료등을제한관리하였다. 시험전날오후 8시 부터 시험당일투약후 4시간까지는금식시켰다. 또한시험 기

간중에는연구자의 지시에따라모두같은식단의 식사" 및경

미한활동을하게하였다.

약물 투약 및 혈액 채취

약물투약은 2시기 2제품의 라틴방격법에따른교차시험법으 로투약계획을세우고 26명의퍼험자률군당 13명씩 임의로 A, B 2군으로나누고제 I기때 A군에는대조약인 ''알레그라정 120 밀리그람'을, B군에는시험약인"알레코트정 120밀러그람"을투

여하였고제 IP1 때에는그반대로투여하였으며투여량은 1정

(염산팩소페나딘 120 mg)으로하였다. 한편, 건강성인에게염산 팩소페나딘 120mg을경구투여 하였을 때최종상의 반감기는

9.6~11.0시간^으로보고되어 있어생물학적동등성시험 기준제

18조제 4항휴약기간의산정기준에따라층분한휴약기간을두 고자 7일로하였다.

피험자들모두에게 heparin-locked(150 unit/m/) Angiocatheter (JELCO™, 22G, Johnson&Johnson Medical, Pomezia, 이탈리 아)를괄또는손등의 정맥부위에 설치하고대조약또는 시험약

각각 1정씩을 240m/의물과함께복용시켰다. 다옴각 피험자

로부터투약직전, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24 및 36시간째 (총 12시점)에약 5m/의혈액을채취하여 혈구분리용원심분리

Vol. 52, No. 3, 2008

에따라경구투여하식 얻은각제품의 혈청중약물농도•시간 곡선으로부터 약물속도론적 파라미터인 AUCt， 및 를 구하였으며, 이돌두제품에서각각얻은 값에대해 T„^를 제

외한 AUCt와 의로그번환처를생물학적동등성시험 통계처

리용프로그램인 Equiv Test패률이용하늬유의수준 a=0.05에 서분산분석을실시하여순서효과(sequence effect)를검중한 후

,

각번동요인간의유의성여부를검토하였고 90% 신뢰한계를구 하였다. 이 때, C„^와 는설측치를사용하였으며 AUCt는 사다리꼴면적계산공식을이용하여 최중채혈시점까지의 값을 통상의방법에따라구해 용하였다. "알레그라정 120밀리그 람"에대한'할레코트정 120밀리그람"의 생물학적동등성여부는 식품의약품안견청이 고시한생물학적동등성시험 기준®에따라 AUC,, C„^ 및 T„^ 등을평가하였다.

결과 및 고찰

버교용출시험

약물의용출은 생체이용률파깊은상관관계가었으므로먼저 용출시험을 행하여 대조약및시험약이 생물학적으로동등할 것인지를추정하고자하였다. 죽

,

대조약과시험약에대하여대한약전에수재된 패들법에따라 염산팩소페나딘두제제를용출시험한결과 pH 6.8에서는 10분 이내에, pH 4.0 및물에서는 30분이내에, pH 1.2에서는 60분

0 10 20 30 40 50 60

Time (min)

Fig. 1 - Dissolution profiles of fexofenadine from Allegra® tablet (# ) and Alecort tablet (O ) in pH 1 . 2 dissolution medium (n=12, mean±S.D.).

관에넣고 3,000 rpm에서 20분간원심분리한후즉시 혈청분리 관을사용하여 혈청을채취하고분석시까지 영하 80°C에서보관 하였다.

채혈및피험자의휴식등의모든일은전남대학교병원에서 타인과격리된상태에서이루어졌다.

혈청 중 팩소페나딘의 정량

혈청중팩소폐나3의정량fir 이미보고된팩소페나딘의 HPLC 분석법4 을참고하여상기 기기조건하실온에서이동상으로 는 1% triethylamine phosphate buffer(pH 3.7): 아세토니트릴

=67; 33(v/v, triethylamine으로 pH률 5.6으로조정)의혼합용액 을사용하였고, 유속 1.0m//min, 주입량 50 및형광검출기 (excitation: 230 nm, emission: 280 nm)를이용하여 정량하였으 며다옴과같이검량선을작성하였다.

염산팩소페나딘표준품을메란을에녹여팩소페나딘으로서농 도를 1000 ng/mZ로만든후냉장보관시키고, 이용액을냉동보 관하였던공혈청으로희석하여 혈청중팩소페나딘의최중농도 가각각 10, 20, 50, 100, 200, 500 및 1000 ng/m/가되도록검 량선용표준혈청액를조제하였다. 각각의 검량선용표준혈청

500 p/에내부표준물질로할로페리돌 메탄을용액(100 ng/m/)

50 n/ 및아세토니트릴 500 pi를가한후 1분 30초간 vortexing 하였다. 이것을 12,000 rpm에서 10분간원심분리한후유기층 을취하며새시험관에옮기고 55°C에서중발 • 건조시켰다. 이 잔사에이동상 150 가하여 30초간 vortexing 한후이용액 을 Eppendorf tube에옮겨 12,000 rpm에서 5@■간원심분리한다 옴상층에서 50 n/률취해 HPLC에주입하였다. 여기에서 얻은 내부표준물질의 괴크면적에 대한팩소페나딘의피크면적비를 구하여 검량선을작성하였으며 하루에실험을 5번시행하여 일

내재현성을구하였고연속하^ 5일간실험을행하여일간재현

성을구하였을뿐만아니라, 10, 20, 100 및 100 ng/m/ 농도에서 각각 5회측정하여 정확성을평가하고상기농도에서물에대한 평균상대추출률을구하였다.

한편, 혈청시료의분석은던저피험자로부터각시간별로채

취하여 -80°C에보관했던혈청시료률실온에방치하여녹인후

3초간진탕한다g" 이혈청 500 에내부표준물질로할로폐리돌 메탄을용액(100 ng/m/) 50 n/를가한후상기검량선작성방법

과동일한방법으로 견처리한후 HPLC에주입하여 얻어진크

로D]■토그램으로부터내부표준물질의피크면적에대한팩소페나 딘의피크면적비를구하쉬 미리작성된검량선에의해혈청시 료중팩소페나딘의농도(ng/m/)률신출하였다.

약몰속도론적 파라미터의 분석

"알레그라정 120밀리그람" 및"알레코트 정 120밀리그람"을 각각 1정씩 26명의지원자에게라틴방격법에따른교차시험법

조혜영 • 깅현아 • 김세머 • 이 복

=0

면적비로부터 구한상대추출회수율(%)은 136.42±17.76이었다. 혈청 시료로부터 구한 팩소페나딘의 검량선은 피크 면적비 (y)=0.00519x 팩소페나딘 농도(ng/m/, x)+0.00693(r=0.9999, pcO.Ol)로 10-1000 ng/m/ 범위에서 양호한직선성을나타내었 다. 또한, 이농도범위에있어서 팩소페나딘의 일내및 일간변 동계수(C.V)는모두 15% 이내로나타났고 10, 20, 100 및 500 ng/m/의농도에서 5회반복측정하여얻온표준편차(%, deviation) 도모두 15% 이내로나타났다(Table I). 이로부터혈청중팩소

페나딘에대한상기 HPLC 분석법은인체에대한생체이용률시

(hr)

Fig. 3 - Mean serum concentration-time curves of fexofenadine following oral administration of Allegra® tablet ( • ) and Alecort tablet (O ) at the dose of fexofenadine hydro­

chloride 120 mg (±S.D., n=26).

이내에 85% 이상용출되었고, 두제제의용출양상은거의처미

가없었으며 FDA guideline브*에따라계산한물에서의 similarity factor(y가 76.44로나타나, 두제제간의 용출은차의가없는것 으로관단하였다. Fig. 1에는두제제의 pH L2에서의용출양상 을나타내었다.

혈청 중 팩소페나딘 정량

건강한성인의대조혈청과대조혈청에내부표준물질인할로페 리톨과염산팩소페나딘을함께가한것및알레그라정 120밀리

그람투여후 1.5시간째의혈청을본시험방법에따라 HPLC로

분석하여얻은크로마토그램을 Fig. 2에나타내었다. 팩소페나딘 피크의출현시간은약 5.5분, 내부표준물질 피크의출현시간은

약 6.8분이었으며각물질의분러상태는양호하였다. 신호대 잡

옴비 (S/N ratio)를 5 이상으로하고일내및일간번동계수의크

기률 20% 미만으로 하였을 때의 최저정량한계(LLOQ, lower

limit of quantitation)는 10 ng/m/이었으며 , 수용액중약물을주 출한것의평균피크면적비에 대한추출시료중약물의피크

Table I - Reproducibility for the HPLC analysis of fexofenadine in human serum

Concentration (ng/m/)

Precision C.V (%) _Accuracy

(%, n=5) Intra-day C.V (%)

(n=5)

Inter-day C.V {%)

(n=5)

1 0 10.3 8.53 85.8

2 0 13.3 5.43 8 8 . 6

1 0 0 4.29 6 . 2 0 1 0 2

500 4.21 4.72 95.0

C.V (Coefficient of Variation)=100 xS.Dymean.

Vol. 52, No. 3, 2008

Fig, 2 - Chromatograms of (A) blank human serum, (B) blank human serum spiked with fexofenadine (500 ng/m/) and internal standard (I.S., haloperidol 5 (ig/m/) and (C) serum sample (329.78 ng/m/)

tablet. / = fexofenadine peak.

at 1 . 5 hr after oral administration of 1 2 0 mg fexofenadine hydrochloride

염산펙소페나^의 생 물 혹 쩍 강 191

1

I

q

I

co

0.6

0.7

0.0

0.5 0.4 0.3

0.2

0.1

0.0 0.8

0.7

0.6

05

0.4

(U

0.2

OJ 0.7

0.6

O.S 0.4

0.3

02