샤상체질의학회지
1. of. Consl. Med
Vol. 11. No 2. 1999
太陰人 淸心運子揚이 Hydrogen
Peroxide 어l
鎭傷된 白鼠의 大腦神經細廳에 미치는 影響
조潤榮* . 柳道坤** . 金敬쫓 *
Effects of Taeumin Chungsimyonjatang on the Cerebral neurons
injured by Hydrogen Pero 성de
Ok fun-young*, R.까, Do-gon**, Kim Kyung-yo*
* [ 농뼈rtment of Sasang Constitutional Medicine
** [ 농partment of Physiology, College of Oriental Medicine, Wonk 、¥ang University, Iksan, Korea
I. 뻐π)()se .
까Ie purpose of this study was to detennine the effects of Chungsimyonjatang on the cerebral
neurons 1매m 빼 by hy,ψ-ogen 야ro 잉d어H2).
2. Methods :
I obse πed cell viability in mouse cerebral neurons exposed to hydrogen 야ro 잉de by NR assay
and tvπT assay and determined lipid peroxidation and amounts of LDH release in mouse
cerebral neurons exposed to hydrogen 야roxide.
After adrni 띠stration of Chungsimyonjatang water extracts, I observed significant changes of c히l
viability, lipid peroxidation 뻐d amounts of LDH release in mouse cerebral neurons exposed to
hydrogen 야roxide.
. 圓光大짧校 햄뽑科太헬 四象짧學敎室
.. 1fiIJ\:;
太쩔校 輪醫科太헬 生理장tqX 室
- 사상체질의학회지 제 11 권 제2호 1999 -
3. Results :
Hydrogen 야roxide showed neurotoxicity.
Cell viability in mouse cerebral neurons exposed to hydrogen peroxide decreased in NR assay
and MTI assay.
Lipid peroxidation and amounts of LDH re 뼈se in mouse cerebral neurons exposed to hydrogen
peroxide incrl 않sed.
Chungsimyeunjatang was ve η effective in blocking hydrogen peroxide-induced neurotoxicity.
Ke 깨ords : Chungsimyeunjatang, hydrogen peroxide, 않II viability
x 료로,
1. 연구목적
본 실험은 청심연자탕이 대뇌신경세포의 산화적 손상에 대한 효능을 밝히기 위한 것이다.
2. 연구방법
신생 생쥐에서 분리 배양한 대뇌신경세포에 여러 농도의 hydrogen peroxide 가 포항된 배양액에서6시간
동안 처리하여 hydrogen peroxide7} 배양 대뇌신경세포에 미치는 영향을 조사하였으며 hydrogen
peroxide 의 독성효과에 대한 청심연자당의 영향플 조사하였다
3. 결과 및 결론
산소자유기인 hydrogen peroxide 는 NR assay9.\- MTT assay 에 의한 세포생존율을 감소시켰고 lipid
peroxidation 의 증가 및 LDH 양의 증가에 의하여 생쥐의 배양 대뇌신경세포에 독성을 나타냈다.
i춤ι、連子場은 hydrogen peroxide 의 산화적 손상에 대한 신경독성에 대하여 lipid peroxidation 의 감소에 유의한 효과를 보였다 . i ι、運子場은 hydrogen peroxide 의 산화적 손상에 의한 신경독성에 대하여 LDH 양 의 감소에 유의한 효과를 보였다.
이상의 결과로 보아 hydrogen peroxide 는 생쥐에서 분리한 대뇌신경세포에 산화적 손상에 의한 신경독성 을 나타냈으며 i버 ,L, 、運子場。1 hydrogen peroxide 와 같은 산소자유기의 산화적 손상에 대한 방어에 효과적인 것으로 사료된다 .
*훌훌§名 生훌名 ‘ÍÆ3(g)
連子I최 Semen Nelumbinis 8.0
rlJ€Z Rhizoma Dioscoreae 8.0
天門4 Radix Asparagi 4.0
ÊÓr Radix Ophiopogonis 4.0
遠志 Radix Polygalae 4.0
石홈浦 Rhizoma Acori Graminei 4.0
RÌ>t: Semen Zizyphi Spinosae 4.0
Ÿ•IIJI€‰ Arillus Longnae 4.0
채子仁 Semen Biotae 4.0
-.'.t.:'?¶ ’ Radix Scutellariae 4.0
X홉1험子 Semen Raphani 4.0
U ÉÜj Flos Chrysanthemi 2.0
Total amount 54.0
- 太陰 A; 뿜心훌子漫이 Hydrogen Peroxide 에 챔傷된 면鼠의 大腦神經細뼈에 미치는 影웰 -
I. 績 를률빼A
現代醫學의 빠른 發展에도 불구하고 여러 가지 難 治病들은 아직도 未解決의 과제로 남아있으며 그 한 계점이 드러나고 있다. 이로 인해 흉病을 새로운 각 도와 시각에서 바라보고 이에 입각한 새로운 治濟方 法을 모색하고자 하는 흐름이 나타나고 있다.
李濟馬0837-1900) 에 의해 창시된 四象醫學은
기존의 뿜遍的 病理와는 달리 각 짧質의 特採性에 따른 接近을 시도하고 있어서 現代에 이르러 그 가 치가 새롭게 평가되고 있으며 특히 여러 難治病의 새로운 治擔方法으로 주목을 받고 있다.
李濟馬는 r東짧훌훌世保元 뼈服論』에서 太陰A은 빠大뼈小한 特徵을 가지며 5뀔腦는 뽑tit. 좀. 耳. 皮
毛 등과 더불어 Em之黨에 속한다1-2)
고 하였으므로 , 太陰A에 있어서 頭腦 역시 1}f 大빠小한 영향을 받는 다 더욱이 최근 金 등3-1)
이 임상 연구 보고에서 太 陰A의 중풍 발병율이 가장 높다고 지적한 것처럼 太陰A은 타 체질에 비해 頭腦의 질병에 걸리기 쉬 운 밟質的 素因을 가지고 있다고 볼 수 있다 때문 에 『東醫옳世保元」중 太陰A 훌病證에 대표적으로 사용되고 있는 淸心連子楊이 원문에는 비록 頭腦에 대한 主治證이나 治뚫例의 언급은 없지만 1}f 大Em') 、 한 체질적인 a훌I!JIf 의 偏差를 교정하는 작용이 있으므 로 頭腦의 병증에 사용될 수 있으리라 판단되어 본 실험을 실시하게 되었다 .
il ι、運子場의 적웅증에 대하여 元 5)
은 虛勞. 쫓i빠
無않 . A찾痛. 빠i행. 좀卷 , 中風. 食쐐;. 뼈題痛 등을.
洪 6)
은 心鐵病. 빼
*쪼性! 뿔‘ , ↑止↑tp. 健忘 , 虛勞. 高血
壓 , 中風 등을. 李7) 는 心뼈病 , 氣病 , 消化햄病 등을 치료한다고 하였다 그리고 청심연자탕에 대한 실험 적인 보고로 金
8)
은 폐心훨子楊。l 心被虛血에 마치 는 영향을. 金9) 은 면역반응과 抗알러지 효과를, 그
리고 洪10>
등은 抗스트레스 효과를 보고한 바 있지 만 대뇌신경세포에 대한 실험보고는 없었다.
이에 저자는 해心運子場이 뇌신경세포에 대해 구 체적으로 어떠한 작용을 하는지에 대한 실험적 연구 가 필요하다는 인식 하에 , 이를 究明하기 위한 연구 의 일환으로 淸心運子場。1 hydrogen peroxide
(H202. Sigma) 에 노출되어 손상된 뇌신경세포에
미치는 방어효과를 관찰하여 유의한 결과를 얻었기 에 보고하는 바이다 .
II. 實驗까料 및 方法
1. 材 料
1) 動 物
本 實驗에 使用한 동물은 ICR 계통의 생후 3일 된 건강상태가 양호한 생쥐를 使며하였다 .
2) 藥 材
PrescriPtion contents of Chungsimyeunjatang per pack
- 사상체질의학회지 제 11 권 제2호 1999 -
4: 實뚫에 사용한 햇材는 떠IX; 大웰校 韓方病院에 서 購入한 후 嚴i탤하여 使用하였고 , 處方은 李II
에 準하였으며 , 그 內容 및 1貼 分量은 다음과 같다 .
2. 方 法
1 ) 檢波의 調웰l
i허ι、運子場 3貼 半 分뀔인 189g 을 증류수와 함께 환저플라스크에 넣고 冷최1짧를 附홈하여 2시간 동안 핸場한 후 3,OOOrpm 에서 20 분간 원심분리하고 회 전진공 농축기로 감압 농축한 후 i 혔훌乾操器에서 i 훌 結乾操하여 각각 45.57g 의 분말 시료를 얻었다 .
2) 藥홈l 製造
;$: 實옳에 사용한 약제로는 hydrogen peroxide
(H202. Sigma) 로서 각각 100 10. 1
의 저장액을 만들어 냉암소에 보관한 후 寶驗 당일 적당한 양으로 회석 사용하거나 필요한 양을 직접
t흩養浪에 첩가하여 사용하였다 .
3) 細뼈培養
大8빠縣펌왜8밍의 분리는 Michikawa 등11) 의 방법에 따라 시행하였다 . 즉 생후 1-3 일된 생쥐에서 적출한
뇌 조직을 0.25% trypsin 이 포함된 phosphate
buffered saline(PBS) 으로 처리한 후 36'C. 5%
COJ95% air 로 조절된 항온기 내에서 띔養하였다.
염養 완료 후 10% fetal bovine serum(FBS,
Gibco) 이 포함된 Eagle's minimum essential
medium(EMEM. Gibc 이으로 3회 세척 후 Pasteur
피햇으로 세포를 분리시켰다. 분리된 세포들은
Poly-L-lysine{Sigma) 으로 전처리된 96-multiwell
에 3 x 1Q6cells/well 의 밀도로 세포를 분주하였다 . 분
주된 세포는 3일 간격으로 새로운 t 픔養波으로 교환하
여 주었으며 7일 동안 펌養 後 本 활용옹에사용하였다 .
4) 醒素自由基 처리
홈X素엄 dJJ 훌가 생쥐의 大腦해經細댐에 미치는 影뿔
을 調3훌하기 위하여 일정시간 !g 養한 i 빼經細뼈를
0.6%-0 glucose 가 합유된 MEM 으로 3회 세척 한
다음 5-40 μM hydrogen peroxide 가 포함된 땀
養浪에서 2-12 시간 동안 처리 후 分析하였다 .
5) 細뻔毒性 및 防쩔效果 檢定
(1) 細8힘生存率 分析
<D NR 定量
Neutral red (NR, Sinma) 의 定뚫은
Borenfreud 와 Puerner(984) 12) 의 방법에 따랐다 .
즉 여러 빼度의 hydrogen peroxide(H202) 를 처리 한 t흩養 神經細뼈를 phosphate buffered
saline(PBS) 으로 3회 세척 후 전날 제조한
5mg!ml 의 NR을 well 당 최종i훌度로 회석해 넣은
다음 3시간 동안 37'C, 5% CO2 로 조절된 정온기에 서 !g 養하였다. 펌養 완료 후 PBS 로 3회 세척 후
1 % formalin 으로 고정하고 1 % glacial acetic
acid 로 처 리한 다음 spectrophotometer 로 540nm
에서 홉광도를 측정하여 대조군과 比較 調흉하였다.
(2)MTT 호뚫
MTI- 3- (4, 5-dimethyl thiazol-2-yl) -2. 5-diph
-enyltetraz 이ium bromide (Sigma) 定量은
Mosmann 13) 의 방법에 의하였다 옳素엄由基나 항
산화제를 처리한 t 흩養 神經細뼈를 PBS 로 3회 세척 한 후 전날 제조한 50mg/ml 의 MTI 를 well 당 최 종滾度로 희석하여 넣어 37'C. 5% C02 로 조절된 정온기에서 t흩養하였다. 땀훌 완료 후 dimethyl-
sulfoxide(DMSO. Merk) 를 처리한 다음 spectro-
photometer 로 503nm 에서 홉광도를 측정 후 대조
MTT Decrease of cell
H202( J1 M )
a bsorbance(570nm) viabÕ<ty(%)
0 l.35:t0.18
5 1.19:t 0.15 11.9
10 1.06:t 0.09 21.5
20 0.75:t 0.07 * 44.4
40 0.36:t 0.04
** 73.3
- 大陰 A; 홉心훌子場 01 Hydrogen Peroxide 에 ’홉%된 8M 의 大腦神經細 EJ 에 미치는 影벌 -
군과 比較 해호하였다.
Q) LDH )E 옮
LDH 활성의 측정은 변형된 Takahashi 등
( 1987) 의 방법에 의하여 행하였다 즉. LDH
kit(Atron lab. Japan) 의 효소기질액 l.Oml 를 직
경 10cm 인 튜브에 넣은 후 여기에 검체인 t곰養냈 을 넣어 잘 혼합한 다음 37t 에서 10 분간 반응시켰 다 . 10 분 후 희석반웅 정지액 3.0ml 를 넣어 혼합한
후 570nm 에서 홉광도를 측정하여 대조군과 比較
뼈흉하였다 .
@ Lipid peroxidation 定量
Lipid peroxidation 은 hydrogen peroxideY-
消心運子楊 抽出物을 일정시간 동안 처리한 大腦j 때 經細뼈의 상층액과 세포용해액 내의 TBARS
(thiobarbituric acid reactive substances) 를 측
정한 것으로. 위액에 12NHzS04 와 10% phos-
photungstic acid 를 각각 2.0ml 와 0.3ml 를 넣고
10 분 동안 반응시켰다. 반응 완료 후 TBA 를
l.Oml 를 가한 후 90 도에서 1시간 동안 가열한 다
음 냉각 후 n-butanol 로 처리하였다 . n-butanol
처리완료 후 원침하여 이를 제거한 다음 553nm 에 서 형광측정법에 의해 측정하였다 .
6) 統計 處理
實驗 結果에 대한 유의성의 검정은 ANOVA 후 에 Tukey-Kramer multiple comparison test 에 의하였으며 p 값이 0.05 이하인 것만 유의한 것으로 하였다 .
III. 實 驗 成 績 1. 嚴累림由基의 毒性效果
1 ) 細뼈生存率 分析
(1) MTI 定量
嚴素엄 m 基가 t 흩훌 大腦빼經細뼈에 미치는 影짧을
鋼흉하기 위하여 hydrogen peroxide(HzOz) 가 5
에서 40 μM 까지의 각각의 ill 度로 포함된 培養波 에서 3시간 동안 培養한 후 hydrogen peroxide 의 毒性效果를 MTT assay 법에 의하여 調흉한 結果 5
μM hydrogen peroxide 처리에서는 세포의 생존
율이 대조군000%) 에 비하여 88.1% 로 나타났다.
그러나 10 μM 의 처리에서는 78.5% 로 이보다 다 소 낮게 나타났다. 또한 20 과 40 μM hydrogen
peroxide 를 처리한 경우 이의 생존율은 각각
55.6(p(0.05) 과 26.7%(p(0.0l) 로 대조군에 비하
여 모두 유의하게 낮게 나타났다 (Table 1).
Table 1. Absorbance(% of controD at
570nm wavelength for the MTI
assay on hydrogen peroxide(H202)
in cultured mouse cerebral neurons
Cultured mouse cerebral neurons were treated with
various concentrations of hydrogen peroxide for 3
hours. The values are the mean:!SE for 6
experiments. Significant differences from the control
are marked with asterisks. 'p(0.05: "p(O.OI
!-I;Q MTI absorbance(570nm)
(¼M) Ihr 2hr 3hr 4hr
0 1.62 :1:0.17 1.56 :1:0.13 1.51:1: 0.12 1.58:1: 0.14
20 1.29:1:0.15 1.11 :1:0.12 0.85:1:0.08* 0.66:1: 0.04**
NR Decrease of cell
Hi)z(¼M)
absorbance(540nm) viability(% )
0 1.57:1:0.16
10 1.18:1: 0.12 24.8
20 1.0?:!: 0.11 31.8
40 0.80:1: 0.07 . 49.0
80 0.49:1: 0.03
** 68.8
- 사상체질의학회지 제 11 권 저12 호 1999 -
Hydrogen peroxide 가 시간에 따라 i 끔養 大腦빼
원細뼈에 미치는 앙뿔을 따l흉하기 위하여 MCV
(midpoint Cytotoxicity value) 값인 20 μM
hydrogen peroxide 농도의 t 암養if 에서 大腦빼<"(;j:';: 細
ij 를 각각 1-4 시간 동안 띔養한 후 세포의 생존율
을 MTT assay 법에 의하여 대조군과 比較 쩨호한
結果 l 시간 t공養에서는 대조군 ( 100%) 에 비하여
79.6% 의 細맨生存率을 보였다 . 또한 2시간 培養에
있어서는 71.2% 로 대조군에 비하여 다소 낮은 생
존율을 나타냈으며 3시간 염養에서는 대조군에 비하
여 56.3%(P(0.05) 의 생존율을 . 4시간 培養에 있
어서는 41.8%(p(0.on 의 생존율을 각각 나타냈다
(Table 2)
Table 2. Time-response relationship of
hydrogen peroxide(HzOz) by MTT
assay in cultured mouse cerebral
neurons
Cultured mouse cerebral neurons were treated with
20 μM hydrogen peroxide for various time intervals
The values are the meaniSE for 6 experiments
Significant differences from the control are marked
with asterisks. .p(0.05: "p(O.Ol
2) NR 定量
t흡養 中인 大腦神經細뼈를 2+Ca2+ . Mg free 인
Hank ’s balanced salt solution (HBSS,
Gibco) 으로 3회 세척한 후 hydrogen peroxide
(H202) 가 10 에서 80 μM 의 없많로 각각 포함된
t픔養i& 에서 3시간 tg 養한 다음 이의 彩쩔을 해흉한
結뽕 10 μM 의 처리에서 세포의 생존율은 대조군
000%) 에 비하여 75.2% 로 나타났으며 20 μM 의
처리에서는 68.2% 로 나타났다 또한 40 μM
hydrogen peroxide 에서는 51.0%(p(0.05) 로 , 80
μM hydrogen peroxide 에서는 31.2% (p(
0.0l) 로 나타났다(Table 3).
Table 3. Absorbance(% of control) at
540nm wavelength for the NR
assay on hydrogen peroxide
(HzOz) in cultured mouse
cerebral neurons
Cultured mouse cerebral neurons were grown in
media containing various concentrations of hydrogen
peroxide for 3 hours. The values represent the mean
iSE for 6 experiments. Significant differences from
the control are marked with asterisks. .p(0.05:
"p(O.Ol
Hydrogen peroxide 가 t 흩養時間에 따라 大腦神
經細뼈에 미치는 影響을 調훌하기 위하여 MCV
(midpoint cytotoxicity value) 값인 40 μM
hydrogen peroxide 업度에서 1-4 시간 동안 培
養한 후 각 시간별로 세포의 생존율을 뼈3훌한 U' 果 1시간 및 2시간 t 끔養에서는 대조군000% )에 비하
여 각각 87.5. 76.8% 로 나타났으며 3시간과 4시
간에는 각각 58.5(p(0.on. 31.5% (p(0.05) 로
나타났다(Table 4).
NR absorbance(54Onm)
}¿¼M)
1hr 강u 3hr 4hr
0 1.84:t 0..18 1.8H 0..13 1.76:tD.15 1.78:t 0..12
40. 1.61 :t 0..14 1.39:t 0..16 1m :tDW 0.56 :tD.IE"
H2(J1 M ) 0 10. 15 3D 60
amounts of 16.4 :t 18.2 :t 22.6 :t 25.2:t 35.0. :t
LDH Release 1.5 2.0. 2.8** 3.1** 3.6**
amounts of LDH Release
H( μM) concentration of Chungsimyeunjatang( μg/ml)
0 15 3D 60. 120.
0 14.7:t 1.8 13.2:t1.5 14.6:t 1.3 13.7:t 1.9 15.2:t 1.6
30 38.8:t 2.5 32.4:t 2.0. 3D.2:t 1.7 25.5:t 1.6 24.9:t 1.4*
- 大陰 A.i 뿜心훌子場이 Hydrogen Peroxide 에 慣傷된 BrK 의 大腦神經細뼈에 미치는 影헬 -
Table 4. Time-response relationship of
hydrogen peroxide(H202) by NR
assay in cultured mouse cerebral
neurons
Cultured mouse cerebral neurons were incubated
with 40. μM hydrogen peroxide for various time
intervals. The values represent the mean:tSE for 6
experiments. Significant differences from the control
are marked with asterisks. 'p(DD5: "p(D.D1
2. 쫓抽出物의 效果
1) DH 定量
(1) hydrogen peroxide(H202) 의 影響
Hydgen peroxide 빼度에 따른 LDH 활성도를
정하기 위하여 hydrogen peroxide 가 10-60M 까 지의 i훌度로 각각 포함된 t 흩養 에서 大腦꽤원細뼈 를 3시간 동안 처리한 후 세포t 흠養浪내로 유출된
LDH 양을 대조군과 比較 허히흉하였다. 그 원果 10 μ
M hydrogen peroxide 처리에서는 대조군 100%
06.4:.\: 1.5) 에 비하여 111.0% 08.2:.\:2.0) 로 나
타났다 . 또한 15. 30. 60 μM hydrogen
peroxide 처리에서는 각각 대조군에 비하여 137.8
(22.6:.\:2.8). 153.7(25.2 土3.1). 213.4%(35.0
:.\:3.6)(p(0.01) 로 나타났다. LDH 활성도의 MCV
값은 30 μM hydrogen peroxide 의 처리에서 나타
났다 (Table 5).
Table 5. Dose-dependency of hydrogen
peroxide(H202) on LDH activity in
cultured mouse cerebral neurons.
Cultures were exposed to 10., 15, 3D and 60. μM
hydrogen peroxide for 3 hours. respectively. Amount
of LDH release was represented as % of control. and
measured at wavelength of 57Dnm. The results
indicate the mean:tSE(n=6). "p(D.D1
Table 6. Dose-response relationship of Chungsimyeunjatang for its neuroprotective effect
on hydrogen peroxide (H202) in LDH release.
Cultured mouse cerebral neurons were treated with Chungsimyeul1iatang. Cultures were preincubated with
15, 3D, 60. and 120. μg/ml Chungsimyeur\iatang for 3 hours, respectively. After then. cultures were exposed
to 3D μM hydrogen peroxide for 3 hours. LDH release was measured at wavelength of 57Dnm. The values
are the mean :!:SE for 6 experiments. Asterisks indicate the significant differences between groups. 'p(D.D5
Hz02( μM) TSARS Decrease of cell (pmo1/106 cells) viability(%)
0 23.4:!: 3.4
10 25.8:!:3.7 10.3
E 33.1 :!:4.2*" 41.5
% 36.7:t4.9*" 56.8
100 56.7:t 5.6*" 142.3
- 사상체질의학효|지 제 11 권 제2 호 1999 -
(2) 淸心훌子場의 效果
t흩養 大腦i\i매원細뼈에 대 한 hydrogen peroxide
(H202) 의 산화적 손상에 있어서 바心運子場의 效果
를 LDH 활성도측면에서 허히흉하기 위하여 hyd-
rogen peroxide 의 MCV 값인 30 μM hydrogen
peroxide 溫않에서 3시간 동안 노출시키기 3시간 전
에 15-120 μg/ml i힘心運子場이 각각 포함된 !g: 養
波에서 전처리한 후 이의 防뿔效果를 짧훌하였다.
그 結果 30 μM hydrogen peroxide 만을 처리 한
경우 대조군 14.7:!: 1.8 에 비하여 38.8:!:2.5 로 나 타났다 . 그러나 15 μg/ml i허心運子場 처리에서는
대조군 13.2:!: 1.5 에 비하여 32.4:!:2.0 으로 나타났
다. 또한 30 μg/ml 淸心運子場 처리에 있어서는 대
조군 14.6:!: 1.3 에 비하여 30.2 :!: 1.7 로 나타났으
며. 60 μg/ml 淸心運子場의 처리에서는 대조군
13.7:!:1.9 에 비하여 25.5:!:1.6 으로 나타났으며 특
히 120 μg/ml 淸心連子場의 처리에서는 대조군
15.2:!: 1.6 에 비뼈 24.9:!: 1.4(P(0.05) 로 hyd-
rogen peroxide 만의 처 리 에 비하여 유의하게 減少
하였다(Table 6),
3) Lipid peroxidation 定量
(1) hydrogen peroxide(H202) 의 影훌
Hydrogen peroxide 題홉에 따른 lipid
peroxidation 을 측정하기 위하여 hydrogen per-
oxide 가 10-100 μM 까지의 漫度로 각각 포항된 t끔
養波에서 大R옮빼웰細뼈를 3시간 동안 처리한 후 세포 의 생존율을 대조군과 比較 調흉하였다. 그 結果
hydrogen peroxide 를 처리하지 않은 군( 대조군) 에
서는 TBARS 가 23.4:!: 3 .4pmo!/l 06 cells 로 나타났
다. 그러나 10 μM hydrogen peroxide 를 처리한
경우 TEARS 가 25.8:!:3.7 pmo!/106cells 로 나타
나 細뼈생존율 減少는 대조군에 비하여 10.3% 로
나타났다 또한 25. 50 및 100 μM hydrogen
peroxide 처리의 경우 TBARS 가 각각 33.1 :!:4.2.
36.7:!:4.9. 56.7:!:5.6pmo!/106cells (p(O.OU 로
나타났다 . 이에 대한 細뼈生存率 減少는 41.5.
56.8. 142.3% 로 각각 나타났으며 細뼈生存率 ;밟L、
의 MCV 값은 50 μM hydrogen peroxide 처리에서 나타났다 (Table 7).
Table 7. Dose-response relationship of
hydrogen peroxide(H202) on lipid
peroxidation in cultured mouse
cerebral neurons.
Cultured mouse cerebral neurons were exposed to
various concentrations of hydrogen peroxide for 3
hours. Thiobarbituric acid(TBA) fluorometric assay
was adopted to analyse lipid peroxidation and TBA
reactive substance (TBARS) were represented as
pmol/106 cells. The values are the mean:tSE for 6
experiments. Significant differences from the control
are marked with asterisks. "p(O.Ol
(2) 淸心運子場의 效果
t흠養 大腦神經細뼈에 대한 hydrogen peroxide
(H202) 의 산화적 손상에 있어서 消心運子場의 效
果를 lipid peroxidation 측연에서 調3 용하기 위하여
hydrogen peroxide 의 MCV 값인 50 μM hyd-
rogen peroxide 없않에서 3 시간 동안 노출시키기 3
시간 전에 10-100 μg/ml if![ι、運子楊이 각각 포함 된 t 끔養뼈에서 전처리한 후 이의 방어效果를 調훌하
TBARS(pmol/10b cells)
H202( 11 M) concentration of Chungsimyeunjatang( μg/ml)
0 10 25 50 100
0 22.8:!: 3.7 23.7:t 3.1 23.6:!: 3.5 ®E.4::': 3.7 23.1 :!: 3.4
50 79.4:!: 5.2 71.1 :!: 4.6 62.5:!: 4.1 48.2:!: 3.7** 45.8:t 3.2**
- 太陰Ai 홉心훌子場이 Hydrogen Peroxide 어|
볍傷된 모鼠의 大腦神經細뼈에 미치는 影훌 -
Table 8. Dose-response relationship of Chungsimyeunjatang for its neuroprotective
effect on hydrogen peroxide in lipid peroxidation.
Cultured mouse cerebral neurons were treated with Chungsimyeu!\iatang. Cultures were preincubated with
10. 25. 50 and 10011g/ml Chungsimyeu!\iatang for 3 hours. respectively. After then. cultures were exposed
to 50 μM hydrogen peroxide for 3 hours. TBA reactive substance(TBARS) were represented as pmol/106 cells.
The results represent the mean:tSE for 6 experiments. Asterisks indicate the significant differences between
groups. "p(O.Ol
였다 . 그 結果 50 μM hydrogen peroxide 만을
처리한 경우 TBARS 는 대조군 22.8:!::3.7 에 비하
여 79.4:!:: 5.2pmol/106cells 로 나타났다 그러나
10 μg/ml 淸心運子場의 처리에서는 대조군 23.7:!::
3.1 에 벼하여 71.1 :!::4.6pmoI/106cells 로 나타났
으며 25 μg/ml 해心運子楊 처리에서는 대조군
23.6:!::3.5 에 비하여 62.5:!::4.1pmoI/106cells 로
나타났다 . 또한 50 과 100 μg/ml i하心運子場 처 리 에 있어서는 대조군 22.4:!::3. 7. 23.1 :!::3.4 에 비하
여 48.213.7 과 45.8:!:: 3. 2pmol/106cells (p(
O.OU 로 나타나 이는 hydrogen peroxide 만의 처 리에 비하여 매우 유의하게 減少하였다 (Table 8),
IV. 考 察
李濟馬는 F
東醫홉-!it 保元』의 r辯證論11J 에서 ..太少
陰陽A을 현 시대의 안목으로 한 고을의 인구를 만 명으로 잡고 대략 논한다연 , 太陰A이 5천명이고 少 陽A이 3천명이고 少陰 AO] 2천명이다 太陽A의 수 는 매우 적어 한 고을에 서너 명에서 열 명 정도밖 에 되지 않는다 ..라고 하였고 또한 “少陰A해과 少陽
A詢에서는 이미 이들의 병증에 대해서 상세히 밝혔
으나 太陰A論과 太陽A論에서는 이들의 병증에 대 해 겨우 그 대강만을 밝혔다”라고하였다.
이것을 가지고 볼 때 太陰A은 인구상으로는 가장 다수를 차지하는 체질이면서도 그 病理와 病證에 대 해서는 자세히 밝혀져 있지 않다. 그러나 李濟馬가 이전 의학에서 미진하였던 太陰A 病끊의 일단을 밝 히기 시작하면서 太陰A 病證에 대한 많은 임상적 연구가 이루어졌고 이를 통해 太陰A의 生理 , 病理 的 특성이 점차 체계화되어 가고 있다.
太陰A은 퓨大師小한 $ 훌服的 特↑훈을 가지므로 府 과 빠의 病證이 잘 발생하는데 .JJf 과 뼈는 氣浪을 호홉하는 門戶라 하여 牌뿜이 水뤘을 出納하는 창고 라고 한 것과 대비되는 개념이다. 이는 少陰A. 少 陽A의 병리는 水뤘病理인 반면 太陰 A. 太陽A의 병리는 氣i뾰病理를 특정으로 함을 말한 것이다
,2)
며象醫學에서는 體質에 따른 病證을 表病과 훌훌病 으로 나누어 설명하였다. 太陰A의 §를質病證 역시 크게 볍院受寒表寒病과 JJf1': 熱짧熱病으로 구분된다 . 뿜院웃寒表寒病은 太陰A의 Hili/] 、한 특정이 심화되어 나타나는 것으로 그 服인 룹院이 氣波陽溫한 기운을
of 散하는 작용이 부족하여 오는 것이 특징이다 즉 太陰A이 빠大빠小하여 빠가 뽑院의 기능을 충분히
- 사상체질의학회지 제 11 권 제2호 1999 -
Jlh치해주지 못하고 볍院의 J;j 溫한 기운은 부족하며 역시 J;ji 닮한 기운을 Of 散시키는 작용 역시 부진하여 表局에 寒끊이 형성되는 것이다. 이와 같이 볍院1t
寒表寒病이 Of 散之氣 不足에서 비롯된 병증이라고 한다연 )ff 웃熱짧熱病은 吸取之氣 過쨌j 에서 비릇된 병증이라고 할 수 있다. 吸取之氣가 과다하면 안으 로 끌어 모으고 홉수하여 누적시키기만 하고 정상적 으로 배설이 되지 못하므로 짧內에
*훌熱이 생겨나는 병증이라 할 수 있다 . 吸取와 Of 散은 서로 상반된 작용이므로 吸取하는 기운이 왕성해질수록 Of 散에는 장애가 발생하게 마련이고 빠은 웹熱이 누적되어 熱 해지고 쩨는 氣波이 부족되어 像해지게 된다. 이처 럼 府은 熱해지고 빠는 操해진 결과 )ff 熱빠操를 특 정으로 하는 操熱病이 생기게 된다2)
李濟馬는 四뚫라는 관점에서 인체의 생리 현상을 파악하였는데. 이것을 r職뼈論J에서는 빠之黨. 牌之
黨 .)ff 之’옳. 뽑之黨이라는 개념으로 요약하였다. 그 중 뼈之薰에 대해 살펴보면 「束짧찮世保:n:; ιr職뼈論J 에서는 ‘ 수곡의i닮氣는 볍院에서 i훨을 생성한다 . 이 많들은 혀 밑으로 들어가 많海를 이룬다 . 律海란 速 이 모이는 곳이다. 律海의 iM氣가 귀로 나와서 神이 되고 頭腦로 들어가 빠海가 된다 . fut 海란 빼이 모이 는 곳이다. 服海의 /]IW' 중 맑은 부분은 안으로 빠 로 들어가고 홉홉는 밖으로 皮毛로 돌아간다. 그런 까닭에 뽑院 , 좀. 耳. 頭腦 , 皮毛는 다 빠의 黨에 해
당된다2.6)"
고 하였다 .
頭腦는 뼈之’짧의하나로 太陰A은 타 체질에 비해 그에 관련된 풋愚들이 많을 것이라 추정할 수 있는 데 근래에 이르러 해心運子場은 太陰A의 腦쭈中의 회복기나 각종 腦j때經 계통의 용에 광범위하게 응 용되고 있는 실정이다 .
iM ι、運子場은 李濟馬 J) 의 l"* 홍용꿇1!!:f 몽 7C 에 나오 는 太陰A 新定方 중의 하나이다 이 處方은 運子
肉. 山헛. Ar9. 찢門킹, 遠X.\:..“ 石흡淸. 훌찾짧仁.
Im"R 肉. 해子仁. 黃좌 , 隨폼子. . 훨 등으로 構成되
어 있다
이 廣方에 대한 소治證에 대해서 7 년
)
은 虛勞 , 夢 j世無!표. 뼈痛. i뱉i앓. 좀卷 , 中風.ft 游. 뼈服痛 등 에 , 후
7)
는 心뼈病. 氣病. 消化햄病에. 洪6) 은 心빼
病. ; 뼈經↑#흉‘변 , ↑l↑뿌, 健忘.fJii 勞 , 高血壓, 中風에
「四象뺨웰2).J 에서는 虛勞. 흉i 빠無gr . ft 밝. 폐뼈痛.
JIi 痛. i世i형. 中風줌卷 등에 사용한다고 하였다.
이상의 문헌을 볼 때 해心運子場은 中風과 같은 뇌혈관 질환이나 각종 빼원챈이나 心身첸의 증상.
心血管系의 질환 , 소화기계의 일부 질환에 이용될 수 있음을 알 수 있다. 이 중에서도 中風 , 健忘. 頭
痛 및 신경성 질환들은 모두 돼腦 및 뇌신경 계통과 밀접한 관련을 가지고 있다 .
최근 한방의 각종 처방들이 가지는 생화학적. 약 리학적 작용을 究明하기 위한 연구가 다양하게 이루 어지고 있으며 때心運子場에 대한 연구 역시 지속적 으로 이루어지고 있다. 해心運子場에 관한 각종 실 험적 연구를 살펴보연 金8)
은 해心運子楊이 ι、ijJj 虛 血에 미치는 影響에 대해 연구한 결과 淸,(, 、運子場은
혈소판 증가. fibrinogen 양 증가. prothrombin
time 감소 등의 작용이 있어 虛血性 ,(, 淚惠에 적용 될 수 있음을 보고하였고 , 金
9)
은 免훔反應과 抗알레 르기 效果에 관한 實옳하j 인 f# 究를 통하여 해心運子 場이 免훨反應을 t 홈彈시킨다고 보고한 바 있으며 , 洪10) 은 j 힘心連子場의 抗스트레스 효과에 대한 論文 에서 스트레스에 따른 心身흉恩에 대해 淸心運子楊
의 &끓
*
的 가치를 제시하였다. 이러한 실험들을 통해 i허心連子場의 心血짤系 훌思 및 心身짜 . 神원츄 등에 대한 임상적 효과가 뒷받침되고 있으나 각종 뇌 병변에 대한 패心運子場의 약리적 작용 연구는 아직 미진한 실정이다. 따라서 뇌 병변에 대한 해心
